Likvorhantering Celler i likvor Mariann Wall Neurokemi SU/Mölndal 2013-09-26
Lumbalpunktion (LP) Stickblödning kasta första portionen likvor, vilket noteras på remissen. Icke-absorberande provrör (polypropen) används. Standardiserad volym (10-12 ml) likvor tappas 2
Ventrikellikvor Tappas via shunt: Under operation eller post-operativt För behandling med cytostatika intrathekalt Hydrocephalus, behandling med shunt för att leda överskottsvätska från likvorrummet till buken 3
Koncentrationsgradient för proteiner i likvor 4
Koncentrationsgradient för monoaminmetaboliter i likvor 220 Percent of first portion 200 180 160 140 120 100 HVA 5-HIAA HMPG 0-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 ml CSF tapped 5
Påverkas biomarkörer i likvor av olika material i provröret? Studie design: 140 Likvor samlat i polyetenrör Överfört till rör av: polypropylene polystyrene glas Alla rör analyseras samtidigt Procentavursprunglig nivå 120 100 80 60 40 20 Polypropylene Polystyrene Glass 0 NSE tau Aβ42 6
POLYPROPENE RÖR FRÅN PROVTAGNING INFRYSNING Kryorör PP POLYPROPENE (PP) Provtagningsrör PP POLYSTYRENE (PS) Ellermanrör PS Engångskyvett PS 7
Tidsperspektiv vid provtagning Remiss med anamnes skrivs och blodprover tas innan LP Likvor ska alltid lämnas till laboratoriet, i rumstemperatur, direkt efter provtagning. Provtagningstid anges på remissen Spektrofotometri, centrifugeras inom 30 min Cellräkning inom 1 tim Cytologi prepareras inom 4 tim 8
Tidsperspektiv icke akuta analyser Fraktionerade proteiner: Hållbart i kyla 1 vecka. Transporteras i rumstemperatur, vadderat kuvert med posten Markörproteiner: Anländer provet till Neurokemi inom 24 tim räcker det att skicka enl. ovan Om provet ej kommer till Neurokemi inom 24 tim, fryses provet i 4 x 0,5mL i kryorör och skickas på kolsyreis 9
Csv-Celler Sp-Celler ska räknas inom 1 timme efter provtagning. Blanda likvor väl. Släng aldrig en likvor för att den är för gammal, ange tid för räkning som kommentar till svaret. 10
Leukocyter poly/mono mono 11
Poly eller mono? Granulocyt Aktiverade monocyter 12
Automatiserad cellräkning ADVIA 2120i (flödescytometri) 13
ADVIA 2120i Cerebrospinal fluid 14
Cellräkning ADVIA 2120i Monocyter Storlek Neutrofila granulocyter Lymfocyter Erytrocyter Komplexitet 15
Patientjämförelse Csv-Erytrocyter 10000 96000, 93300 8000 6000 Advia 4000 2000 0 0 2000 4000 6000 8000 10000 Manual count 16
160 Patientjämförelse Csv-Leukocyter 900, 1406 60 Patientjämförelse Csv-Leukocyter 140 50 Advia 120 100 80 460, 222 Advia 40 30 60 40 20 0 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Manual count Csv-Erytrocyter <250 Csv-Erytrocyter >250 Punkter utanför grafen 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 Manual count Vita under 60, bara med röda <250 17
ADVIA 2120i mätområde Mätområde: Erytrocyter 5-50000 x 10 6 /L Leukocyter 3-2000 x 10 6 /L Vid högre celltal späds likvor med fys NaCl 1:10 Om Csv-Erytrocyter > 500 räknas Csv-Leukocyter manuellt (Poly och Mono) Erytrocytmolnet kan ge ökat antal lymfocyter och neutrofila Även när Csv-Erytrocyter < 500 måste plotten granskas noga Erytrocytmolnet kan ge ökat antal lymfocyter 18
Sfäringstiden har stor betydelse även vid lågt erytrocytantal Sfäringstid 4 min Sfäringstid 15 min 19
Referensvärden Manuell cellräkning Csv-Erytrocyter <1 x 10 6 /L Csv-Leukocyter poly <1 x 10 6 /L Csv-Leukocyter mono <5 x 10 6 /L Advia 2120i Csv-Erytrocyter <5 x 10 6 /L Csv-Lymfocyter <3 x 10 6 /L Csv-Monocyter <3 x 10 6 /L Csv-Neutrofila <3 x 10 6 /L 20
Likvorcytologi Celler anrikas med hjälp av en cytocentrifug på ett objektglas och färgas med May Grünewald-Giemsa Cytologi ska prepareras inom 4 h efter provtagning 21
Morfologisk granskning med hjälp av Mikroskop Digitalt mikroskop (DM96) 22
Cellavision DM96 23
Cellklasserna Neutrofila Eosinofila Lymfocyter Plasmocytära celler Makrofager Monocyter Övriga WBC Basofila granulocyter, omogna myeloiska celler m m. Icke hematopoetiska maligna celler, Meningeal carcinomatos Blaster, ALL, lymfom Övriga celler, Ependymceller, kärnförande röda Trasiga celler Artefakter 24
Celltäthet < ca. 5000 leukocyter / prep < ca. 500 000 erytrocyter / prep Är preparatet för tätt kan inte DM96 särskilja cellerna Splittra cellerna 25
Borrelia Bakteriell meningit Medullaoblastom Meningeal Carcinomatos Bröst cancer 26
Blödning Siderofag Erytrofag 27
Blodtillblandning i cytologin 1 leukocyt per 1000 erytrocyter vid blodtillblandad likvor under förutsättning att patienten har en normal blodbild. Beakta alltid blodbilden vid bedömning av en cytologi från leukemipatienter med blodtillblandad likvor. 28
Referenser Color Atlas of Body Fluids, CAP Hematology and Clinical Microscopy Resource Committee, K A.Galagna et al. Body Fluid Analysis for cellular Composition; Approved Guideline Clinical and Laboratory Standards Institute 29
Tre blodiga rör 1 2 3 Räkna erytrocyter på alla tre rören. Räkna leukocyter på det rör med minst antal erytrocyter Cytologi och Abs415 görs på det rör som har minst antal erytrocyter. Om liten provmängd, och lika många röda i alla rören häll ihop rören efter cellräkning. 30
Frågeställning subarachnoidalblödning 1 2 3 Räkna erytrocyter på alla tre rören. Om det är tillräckligt med likvor i det sista röret, används detta till alla analyser, kassera de två första rören. Om rör 3 inte räcker, gör cytologi och Abs 415 i första hand på rör 3 31
Ingen blodtillblandning, ej subarachnoidalfrågeställning. 1 2 3 Makroskopiskt klar och färglös likvor. Vid liten provmängd i alla rören, häll ihop rören och analysera 32
Tack för att ni lyssnade! 33