Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. Kod M3653. Avsedd användning

Transkript

1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Kod M3653 Avsedd användning Synonymer för antigen Sammanfattning och förklaring För in vitro-diagnostik. Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, är avsedd för användning vid immunhistokemi. Denna antikropp märker PD-L1 i normal och neoplastisk vävnad. Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester. Den här antikroppen är avsedd att användas efter att en primär diagnos av tumören har gjorts med konventionell histologi med icke-immunohistokemiska färgningsmetoder. Programmerad dödsligand 1 (1). Bindning av PD-1-liganderna PD-L1 och PD-L2 till receptor PD-1 på T-celler inhiberar proliferation av T-celler och cytokinproduktion (2). Uppreglering av PD-1-ligander förekommer i vissa tumörer och signaleringen genom den här reaktionsvägen kan bidra till att inhibera aktiva T-cellers immunövervakning av tumörer (3). Blockering av PD-1-receptorns interaktion med PD-L1 och PD-L2 frigör banmedierad PD-1-inhibiering av immunsvaret, inklusive immunsvar mot tumörer (4). Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning) eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer. Medföljande reagens Immunogen Specificitet Försiktighetsåtgärder Monoklonal musantikropp levererad i flytande form i 0,05 mol/l Tris-HCl, 0,015 mol/l natriumazid, 1 % bovinserumalbumin, ph 7,2. Klon: 22C3 (5). Isotyp: IgG1. Koncentration av mus-igg mg/l: Se etikett på flaskan. Proteinkoncentrationen mellan loter kan variera utan att det påverkar den optimala spädningen. Titern för varje enskild lot jämförs och justeras med avseende på en referenslot för att säkerställa konsekvent prestanda för immunhistokemisk färgning mellan loter. Human extracellulär domän hos PD-L1 (Phe19-Thr239) fuserad till ett humant IgG1-fragment (R&D Systems katalog nr 156-B7-100) (5) I Western blotting av rekombinant humant PD-L1-protein, märker Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, ett band motsvarande ~40 kda (5). 1. För yrkesmässigt bruk. 2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN 3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten när det kastas bort så att inte metallazider ackumuleras i avloppet. 3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud. 5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter. Förvaring Provberedning Färgningsprocedur Förvaras vid 2-8 C. Använd inte efter utgångsdatum et som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt med patientprover. Kontakta Dakos tekniska support om du observerar oväntad färgning som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något fel med antikroppen. Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av paraffininbäddade vävnadssnitt som fixerats i formalin. Vävnadsprover ska snittas i ca 4 µm tjocka snitt. Förbehandling: Se EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kod K8005) för anvisningar om hur du förbehandlar objektglas. Detta är endast riktlinjer. Optimala förhållanden kan variera beroende på typ av prov och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt laboratorium. Prestanda hos denna antikropp bör fastställas av användaren när den används med andra manuella färgningssystem eller automatiska plattformar. Spädning: Den rekommenderade spädningen av Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1,, kod M7313 är 1:50. Späd antikroppen i Dakos Antikroppsspädning med bakgrundsreducerande komponenter (kod S3022). Inkubera de förbehandlade vävnadssnitten vid rumstemperatur i 30 minuter. ( ) P04435SE_01/M3653/ s. 1/4

2 Negativ kontroll: Det rekommenderade negativa kontrollreagenset är Dako Negative Control, Mouse IgG1 (kod X0931), spätt till samma IgG1-koncentration som den primära antikroppen. Om inte den utspädda antikroppens och den negativa kontrollens stabilitet har fastställts i själva färgningsproceduren rekommenderas att dessa reagens späds omedelbart före användning. Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientprover. Visualisering: Det rekommenderade visualiseringssystemet EnVision FLEX HRP använder 30 minuters inkubering vid rumstemperatur. Inkuberingsstiden för EnVision FLEX+ mus (LINKER) (kod K8021/K8022) är 30 minuter vid rumstemperatur. Följ de anvisningar som medföljer valt/valda visualiseringssystem. Obs! Använd EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kod K8005) för HIER. Inkuberingstiden för DAB-förbättrare (S ) är 5 minuter vid rumstemperatur. Kontrastfärgning: Den rekommenderade kontrastfärgen är EnVision FLEX Hematoxylin (kod K8008/K8018). Ett icke-vattenhaltigt, permanent monteringsmedel rekommenderas för bästa resultat. Kontroller: Positiva och negativa kontrollvävnader bör köras samtidigt med patientproverna med samma protokoll. Den positiva kontrollvävnaden ska innehålla tonsill och cellerna/strukturerna ska visa reaktionsmönster i likhet med de som beskrivs för denna vävnad i avsnittet Prestandaegenskaper. Tolkning av färgningen Prestandaegenskaper Det cellulära färgningsmönstret är membranöst. Normala vävnader: Plasmamembranfärgning observerades på immunceller och celler av epiteliskt ursprung. Cytoplasmisk färgning noteras i vissa celltyper men registrerades inte som positiv färgning. Tabell 1 summerar immunreaktiviteten för PD-L1 på den rekommenderade panelen av normal vävnad. Alla vävnader formalinfixerades och paraffininbäddades samt färgades med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, enligt instruktionerna i produktbladet. Inga oväntade resultat observerades i de testade celltyperna eller vävnadstyperna. Den observerade färgningen stämde överens med rapporterad litteratur för PD-L1 IHCuttryck i normala vävnader (1, 2). Tabell 1: Sammanfattning av reaktiviteten i normal vävnad för Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Vävnadstyp Positiva Vävnadstyp Positiva (antal testade) vävnadselement (antal testade) vävnadselement Benmärg (3) 3/3 Megakaryocyt Mesotelceller (2) 0/2 Binjure (3) 0/3 Mjälte (3) 2/3 makrofager Bisköldkörtel (3) 1/3 Körtelepitel Muskel, hjärta (3) 0/3 Bröst (3) 0/3 Muskel, skelett (3) 0/3 Bukspottkörtel (3) 0/3 Nerv, perifer (3) 0/3 Cerebellum (3) 0/3 Njure (3) 1/3 Tubulär epitel Cerebrum (3) 0/3 Prostata (2) 2/2 epitel Cervix (3) 1/3 epitelceller Sköldkörtel (3) 0/3 Esofagus (3) 0/3 Spottkörtel (3) 0/3 Hud (3) 0/3 Testikel (3) 0/3 Hypofys (3) 1/3 Anterior hypofys Tjocktarm (3) 1/3 Lymfocyter 1/3 Posterior hypofys 1/3 makrofager Lever (3) 1/3 makrofager Tonsill (3) 3/3 Kryptepitel 1/3 Hepatocyter 2/3 makrofager Livmoder (3) 0/3 Tunntarm (3) 0/3 Lunga (3) 3/3 makrofager Tymus (3) 3/3 Medulla Mage (3) 2/3 Lymfocyter Äggstock (3) 0/3 1/3 magkörtlar Onormala vävnader: Plasmamembranfärgning observerades på immunceller och celler av epiteliskt ursprung. Cytoplasmisk färgning noteras i vissa celltyper men registrerades inte som positiv färgning. Tabell 2 sammanfattar immunreaktiviteten för PD-L1 på en panel av neoplastisk vävnad. Alla vävnader formalinfixerades och paraffininbäddades samt färgades med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, enligt instruktionerna i produktbladet. Inga oväntade resultat observerades i de testade tumörproverna. Den observerade färgningen stämde överens med rapporterad litteratur för PD-L1 IHC-uttryck i neoplastisk vävnad (1-4). ( ) P04435SE_01/M3653/ s. 2/4

3 Tabell 2: Sammanfattning av reaktivitet i neoplastisk vävnad för Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Tumörtyp Adenokarcinom Placering Appendix Bröst, DCIS 0/2 Bröst, invasiv duktal 0/7 Bröst, invasiv duktal metastasering till lymfkörtlar PD-L1 positiv/total (N=159) Bukspottkörtel 0/2 Bukspottkörtel, duktal 0/3 Cervix, endocervikal typ Esofagus Gallblåsa 1/5 GI, metastasering till lunga Huvud och hals, hårda gommen Kolon 0/5 Livmoder, endometrium 0/3 Livmoder, klarcell Lunga 1/4 Mage, mucinös Magsäck 0/6 Prostata 0/5 Sköldkörtel, follikulär Sköldkörtel, follikulär-papillär Sköldkörtel, papillär 0/3 Spottkörtel/öronspottkörtel 0/2 Tjocktarm, metastasering till lever Tjocktarm, mucinös Tunntarm 0/2 Äggstock Äggstock, endometrioid Äggstock, mucinös Äggstock, serös Ändtarm 0/4 Adrenokortikalt karcinom Binjure Astrocytom Cerebrum 0/3 Basalcellskarcinom Hud Embryonalt karcinom Testikel Ependymom Hjärna Feokromocytom Binjure Glioblastom Hjärna Hepatoblastom Lever Hepatocellulärt karcinom Lever 0/5 Interstitialom Kolon Tunntarm Ändtarm Karcinom Öron, näsa, hals Kondrosarkom Ben Kordom Bäckenhåla Leiomyosarkom Mjuk vävnad, bröstvägg Urinblåsa ( ) P04435SE_01/M3653/ s. 3/4

4 Lymfom Anaplastisk stor cell Lymfkörtel Diffus B-cell Lymfkörtel 0/4 Hodgkin Lymfkörtel 2/2 Non-Hodgkin Lymfkörtel 1/1 Medulloblastom Hjärna Medullärt karcinom Sköldkörtel Melanom Näshåla Ändtarm Meningiom Hjärna 0/2 Mesoteliom Peritoneum Neuroblastom Retroperitoneum Neurofibrom Mjuk vävnad, ländryggen Njurcellskarcinom Klarcell Njure 0/6 Papillär Njure Osteosarkom Ben 0/2 Primitiv neuroektodermal tumör (PNET) Rabdomyosarkom Retroperitoneum Mjuk vävnad, embryonal Prostata Retroperitoneum Seminom Testikel 0/2 Signetringcellskarcinom Skvamöscellskarcinom Kolon Metastatiskt tjocktarmssignetringcellskarcinom till äggstock Cervix 2/5 Esofagus 0/7 Hud 0/2 Huvud och hals 0/2 Livmoder Lunga 1/2 Metastatiskt esofagalt skvamöscellskarcinom till lymfkörtel Småcelligt karcinom Lunga Spermatocytom Testikel 0/2 Synovialsarkom Bäckenhåla Transitionalcellskarcinom Njure Urinblåsa 0/6 Tymom Mediastinum 1/1 Öcellstumör Bukspottkörtel Referenser 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, 2015 ( ) P04435SE_01/M3653/ s. 4/4

5 Utgåva 03/16 ( ) P04435SE_01/M3653/ s. 5/4