best. 200 best. 2 x 55 ml < 2 x 150 kbq

Transkript

1 ft4-ctk SPART för kvantitativ bestämning av fri tyroxin (FT 4 ) i humanserum (system med belagda rör) bestämningar 200 bestämningar Via Crescentino snc Saluggia (VC) Italien Kundservice Tel.: Fax: Bruksanvisning ft4-ctk Datum: Tidigare daterade bruksanvisningar är ogiltiga. Innehåller ändringar i förhållande till tidigare version P.3: Hållbarhet och förvaringsvillkor 2 8 C Reagenssatsens innehåll best. 200 best. A 1 x 55 ml < 1 x 150 kbq 2 x 55 ml < 2 x 150 kbq Spårämne, 125 l-märkt anti-t 4 -antikropp (monoklonal, mus), rödfärgat, brukfärdigt. C 2 x 50 4 x 50 Belagda rör (teströr) överdragna med tyroxin, brukfärdiga. W 1 x 11 ml 2 x 11 ml Tvättlösning, koncentrat. S0 S6 7 x 0,5 ml 7 x 0,5 ml FT 4 -standarder (humanserum), bruksfärdiga, koncentrationer se produktresumén. K1 K3 3 x 0,5 ml 3 x 0,5 ml FT 4 Kontrollserum K1, K2 och K3 (humanserum), brukfärdigt, koncentrationer se produktresumén. ft4-ctk Bruksanvisning (version 03 sv) Sida 1 av 4

2 Introduktion FT4-CTK för kvantitativ bestämning av fritt tyroxin (FT 4 ) i humanserum är en immunoradiometrisk konkurrensanalys i heterogen fas som använder tekniken med belagda rör (enstegsmetod). FT 4 i humanserum eller standarder konkurrerar med tyroxin som immobiliserats vid rörväggen om bindningsställena med högspecifika monoklonala anti-t 4 -antikroppar som àr märkta med Jod 125 (spårämne). En ökad koncentration av tyroxin i proverna leder till försämrad bindning av den markerade antikroppen till det immobiliserade tyroxinet, dvs. radioaktiviteten vid rörväggen är omvänt proportionell mot koncentrationen av tyroxinet i patientprovet. Viktiga anvisningar Reagenssatsen innehåller material (t ex serum) av humant ursprung. För tillverkningen används endast material som har testats och funnits negativa för HBsAg liksom HIV I/II- och HCV-antikroppar. Eftersom det ändå inte kan uteslutas att reagenser och patientprov kan utgöra en eventuell smittorisk, måste allmänt erkända försiktighetsåtgärder och laboratorieteknik följas vid hanteringen av dessa. Följande reagenser i utrustningen innehåller konserveringsmedlet natriumazid i koncentrationer på < 0,1 viktprocent: Spårämne, standarder och kontroller. Dessa reagenser får inte sväljas eller komma i beröring med hud eller slemhinnor. Produkten innehåller nuklidet 125 I som öppet radioaktivt ämne. Joniserande strålning emitteras som fotonstrålning med en energi på ca 30 kev. Halveringstiden uppgår till 60 dagar. Produkten skall förvaras skyddat och säkras mot läckage. Avfallshanteras som radioaktivt avfall. Efter reaktionsslut skiljs den icke bundna spårämnesfraktionen från fraktionen som är bunden vid röret genom enkel utsugning resp. dekantering av den flytande fasen. Rörets radioaktivitet mäts. Med hjälp av de medförda standarderna (kända koncentrationer av omärkt antigen) är det möjligt att upprätta en profil över radioaktivitetskoncentrationen (standardkurva). Ur patientseras radioaktivitetsvärden kan man direkt avläsa deras antigenkoncentration. För att garantera ett adekvat strålskydd skall man framför allt undvika upptag av radioaktiva ämnen i kroppen. Ventilera arbetslokaler. Det är förbjudet att äta, dricka och röka. Vid bearbetningen skall arbetsrockar och skyddshandskar bäras. Undvik onödigt uppehåll i närheten av strålkällor. Det rekommenderas att persondoser fastställs med lämpliga mätanordningar, t ex filmdosmätare. Vid mottagning, inköp, förvaring, användning eller transport av radioaktivt material skall lagbestämmelser i det berörda landet iakttagas. Om det finns glasflaskor i reagenssatsen, vill vi uttryckligen varna för en eventuell sprickrisk och därmed sammanhängande skaderisk. Reagenserna och avfall som uppstått genom testansatserna måste hanteras enligt lokala myndighetsföreskrifter för laboratorieavfall. Standardisering och referensområden Eutyreos pmol/l 7,8 19,4 pg/ml Hypotyreos < 8 pmol/l < 6,2 pg/ml Hypertyreos > 30 pmol/l > 23,3 pg/ml Under behandling med levotyroxin särskild vid mycket hög dosering (> 200 µg/dag) hittas emellanåt tydligt övernormala FT 4 -halter. Vid interpretationen av dessa FT 4 -värden måste man ta hänsyn till att medikamenten oftast intags bara få timmar innan blodprovet tas och att resorptionsfasen därmed också registreras. Varje laboratorium rekommenderas med hjälp av representativa patientgrupper upprätta egna referensområden med hjälp av representativa patientgrupper. På det här sättet kan man ta hänsyn till särskilda egenskaper regionalt och allmän förekomst av vissa sköldkörtelsjukdomar eller funktionsstörningar, men även till den metodiska kvaliteten hos ett enskilt laboratorium eller den tillämpade testutrustningen. I det avseendet är nedanstående uppgifter för FT 4 -CTK endast vägledande. Kvalitetskontroll: Iakttag aktuell version av läkarsällskapets riktlinjer för kvalitetssäkring av kvantitativa laboratoriemedicinska undersökningar. Testets korrekthet och precision skall övervakas med hjälp av laboratorieinternt och/eller kommersiellt tillgängligt kontrollmaterial. Så skall t ex de kontroller som utrustningen innehåller tas med vid varje ansats och deras mätresultat ligga inom de områden som har godkänts i bipacksedeln. Vad gäller oacceptabla kontrollvärden rekommenderas att fortsätta enligt laboratoriets standardkontroller för att fastställa orsaker och vidtaga åtgärder för korrigering. Litteratur 1. Nelson, J.C., Wilcox R.B.: Analytical performance of free and total thyroxine assays. Clin.Chem. 42 (1); (1996) 2. Wenzel K.W.: Schilddrüsenfunktionstests und Medikamente. MMW 138 (40); (1996) 3. Stockigt J.R., Lim C.F., Barlow J.W., Topliss D.J.: Drug-induced disturbances of in vitro thyroid testing: Effects of Circulating Competitors for protein binding. Exp. Clin. Endocrinol. 102; (1994) 4. Nelson, J.C., Wilcox R.B.: Protein Bound T4 Dependence: the uncontrolled variable in free T4 assays. Exp. Clin. Endocrinol 102 (1); (1994) 5. Litaka M., Kawasaki S., Sakurai S., Hara Y., Kuriyama R., Yamanaka K., Kitahama S., Miura S., Kawakami Y., Katayama S.: Serum substances that interfere with thyroid hormone assays in patients with chronic renal failure. Clinical Endocrinology 48; (1998) ft4-ctk Bruksanvisning (version 03 sv) Sida 2 av 4

3 Testbeskrivning Inkubationsschema 1. Numrering Teströr (a, b) T osv 2. Pipettering Nollstandard µl 50 Standarder µl 50 Patientserum µl Pipettering Spårämne µl (bruksfärdigt) 4. Inkubering Skakas 2 timmar ± 15 minuter i rumstemperatur (17 27 C) ( varv/min). 5. Utsugning eller dekantering Sug ut eller dekantera tills de är torra och låt rinna av på cellulosa. 6. Pipettering Tvättlösning ml Upprepa steg 5 8. Mätning av radioaktiviteten (rekommenderad mättid: 1 minut) Provbehandling Prov som inte undersöks på en gång kan förvaras tre dagar i 2-8 C eller längre tid i -20 C. Provkärlen måste alltid vara stängda. Undvik upprepad infrysning och upptining. Det rekommenderas att använda serum! Om plasma används kan det beroende på typ och koncentration av koagulationshämmaren som använts, leda till en ökning av mätvärdena, som eventuellt kan leda till ett felaktigt positivt resultat. Om endast plasma står till förfogande som provmaterial, skall ett eget referensområde alltid upprättas. Bilirubin, hemolys och lipemi har ingen inverkan på testresultatet. Anvisningar för utförande av testen Använd inga reagenser vars sista förfallodag överskridits, se datum på etiketten. De olika komponenterna i utrustningen är optimalt anpassade till varandra. Om komponenter av olika satser byts ut eller blandas kan inte längre garantera resultatens tillförlitlighet. Tvättlösningen är däremot en vanlig komponent som är utbytbar mellan utrustningarna T3-CTK, T4-CTK, ft4-ctk, TSH-CTK, Tg- CTK. Vid stora testserier poolas reagenser med samma batchbeteckning. För varje testserie skall en ny arbetskurva göras. Den angivna ordningsföljden på de olika arbetsstegen skall ovillkorligen följas. Patientprover, där det fastställda koncentrationsvärdet ligger över mätområdet, skall värderas som "> högsta standard". Resultatet får inte extrapoleras. Det motsvarande patientprovet skall förtunnas och testas på nytt. Ytterligare information kan du få genom att vända dig till kundservice hos. Hållbarhet och förvaringsvillkor Alla reagenser och belagda rör måste fram till användning förvaras i 2-8 C i utrustningsförpackningen. Iakttag absolut den förfallodag som anges på utrustningsförpackningen och reagenssatsens etiketter. Reagenssatsens hållbarhet beror på spårämnets hållbarhet. Under lagringen av spårningsämnet vid 2-8 C kan eventuellt kristaller bildas i botten på flaskan. Men Testbeskrivning 1. Förberedelser Placera alla utrustningskomponenter och patientprov i rumstemperatur. Blanda alla flytande komponenter även patientproven före användning (undvik skumbildning). Numrera etiketterna följdenligt på de belagda rören (a, b för de rekommenderade dubbelbestämningarna). Använd ej överdragna rör T a, b för mätning av total aktivitet. Framställning av tvättlösning: Fyll på 11 ml koncentrat med destillerat vatten till 550 ml. Vi rekommenderar på det bestämdaste att du rådgör med tillverkaren eller distributören innan du använder andra tvättlösningar. 2. I teströren 0 a, b... 6 a, b pipetteras var 50 µl standard med stigande FT 4 -koncentration, i teströren 7 a, b etc. pipetteras var 50 µl kontrollserum resp. 50 µl patientserum. För att undvika eventuella spridningar av sjukdomar bör en ny pipettspets användas för varje prov. 3. I varje teströr inklusive T a, b pipetteras 500 µl spårämne (brukfärdigt). Teströren T a, b tas ur tills radioaktiviteten i den fortsatta bearbetningen mäts (se punkt 8). 4. Teströren skakas lätt på en vibrationsskakare, täcks med självhäftande folie och inkuberas under 2 timmar ± 15 minuter i rumstemperatur (17-27 C) under omskakning ( varv/min). Viktigt Stativen får inte staplas, för att temperatureffekterna på skakaren skall ha samma verkan på rören. 5. Teströren exklusive T a, b dekanteras eller sugs ur tills de är torra med hjälp av utsugningsanordning. Rören resp. stativet skall sugas ut eller dekanteras i samma ordning som tillsättningen av spårningsämnet gjordes! 6. Teströren utom T a, b blandas med 2 ml tvättlösning. 7. Därefter skall steg 5 upprepas. Totala tvättningar: 1. Anvisning Vid dekantering bör de sista vätskeresterna kunna rinna av. (Låt rören stå upp och ned i minst 5 min så vidhäftande droppar kan sugas upp av cellulosa). 8. Radioaktiviteten i varje teströr inklusive T a, b mäts i en gammaräknare. Rekommenderad mättid: 1 minut. Följ arbetsanvisningarna strikt! Avvikande hantering av reagenserna kan påverka resultaten. I detta fall ansvarar DiaSorin S.p.A. inte för giltigheten av resultat som uppnåtts på detta sätt. Nödvändiga apparater/tillbehör Dispenser (2,0 ml) Mikropipetter (50, 500 µl) Vibrationsblandare Horisontalvibrator Gammaräknare detta ska inte förväntas att påverka analysresultatet negativt, eftersom kristallerna upplöses igen vid rumstemperatur. ft4-ctk Bruksanvisning (version 03 sv) Sida 3 av 4

4 Den utspädda tvättlösningen är användbar i upp till fyra veckor, om förvaringstemperaturen är 2-8 C. Kontaminerad tvättlösning får inte användas. Denna påvisas genom grumlighet eller phvärde lägre än 6. ft4-ctk Bruksanvisning (version 03 sv) Sida 4 av 4

5 Analyskarakteristik Intraanalysprecision Nedanstående patientvärden fastställdes i en analysansats med 20-faldig bestämning. Patient Medelvärde Standardavvikelse Variationskoefficient 1 11,0 0,61 5,5 2 20,6 0,70 3, ,5 3,7 3,6 Interanalysprecision Nedanstående patientvärden har fastställts i dubbelbestämning i 10 analyssatser. Patient Medelvärde Standardavvikelse Variationskoefficient 1 8,0 0,70 8,7 2 17,6 0,90 5,1 3 51,0 1,5 3,0 Utvärdering Vid en datorstödd utvärdering av ft4-ctk skall ett utvärderingsprogram (spline/unsmoothed) väljas som anpassats till den givna dator-mätapparat-kombinationen. Vid en utvärdering av ft4-ctk utan dator sätts medelimpulskvoten för varje provpar (B) i relation till medelimpulskvoten för nollstandarden (B 0 ) och uttrycks i procent: B/B 0 x 100. Vad gäller nollstandarden gäller: B/B 0 = 100 %. På semilogaritmiskt millimeterpapper ritas en standardkurva ur standardens beräknade B/B 0 -procentvärden (ordinata, linjära) och tillhörande FT 4 -koncentrationer (abskissa, logaritmisk skala). Patientseras FT 4 -halt avläses direkt i pmol/l (pg/ml) med hjälp av de respektive procentvärdena B/B 0 över standardkurvan. Sensitivitet Den analytiska sensitiviteten uppgår vid avläsning på optimalkurvan till 1,25 pmol/l. Den fastställdes enligt följande med hjälp av en 40-faldig bestämning av nollstandarden: x -2 SD i. Den funktionella sensitiviteten (20 % variationskoefficient för interanalys) uppgår till 2,6 pmol/l. Korsreaktionsförmåga Substans Korsreaktionsaktivitet i % 3,3, 5 -trijod-l-tyronin 0,6 L-di-jod-tyrosin < 0,001 L-mono-jod-tyrosin 0,003 L-tyronin < 0,001 L-tyrosin < 0,001 3, 5 -dijod-l-tyronin < 0,01 3,5-dijod-L-tyronin 0,008 Etyl 2- (4-klorofenoxy)-2 metylpropionat < 0,001 Anilinonaftalen-sulfonsyra < 0,001 Standardkurva B/B Omräkningsfaktor: pmol/l x 0,777 = pg/ml För att kontrollera FT 4 -antikroppens bindningsförmåga beräknas den procentuella andelen av medelimpulskvoten för nollstandarden (B 0 ) vid totalaktiviteten (T): B 0 medelimpulskvot 0 a, b = x 100 T medelimpulskvot T a, b Under de angivna analysvillkoren bör B 0 /T ligga på %. För teknisk support kan du vända dig till kundservice, distributörer och utesäljare. Beräkningsexempel Teströr (a) (b) (mv) B/B0 Total aktivitet T Nollstandard Standard 1 [1,9 pmol/l] ,3 Standard 2 [4,5 pmol/l] ,9 Standard 3 [10,3 pmol/l] ,2 Standard 4 [24,5 pmol/l] ,3 Standard 5 [71 pmol/l] ,2 Standard 6 [142 pmol/l] ,6 Patient 7 [22,1 pmol/l] , pmol FT FT 4 (pmol/l) 4 /L pg FT FT 4 4 (pg/ml) /ml ft4-ctk Bruksanvisning (version 03 sv) Sida 5 av 4