Receptorfarmakologi trombocyter

Relevanta dokument
Receptorfarmakologi Purinerga receptorer och Trombocyter

Laborationsrapport Glattmuskulatur. BASGRUPP 8 Caroline Johansson Jenny Sjösten Matilda Lithander Stina Lindberg

Glattmuskel laboration

Laborationsrapport glattmuskel basgrupp 7

qwertyuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqw ertyuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqwert yuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqwertyui opåasdfghjklöäzxcvbnmqwertyuiop

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Farmakodynamik och Farmakokinetik

Farmakologi. Farmakologin syftar till att besvara. Farmakodynamik

Introduktion. Introduktion Farmakodynamiska aspekter Farmakokinetiska aspekter Interaktioner

Examination. Specifik farmakologi (2 hp, provkod 0200)

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Sverigefinal EUSO 2018: Biologi

Den virtuella katten. Karlstads universitet Receptarieprogrammet Farmakologi 15 hp. Namn på student

Farmakokinetik och Farmakodynamik: traditionella, nya och framtida läkemedel. Magnus Grenegård Professor i Fysiologi Docent i Farmakologi

för erhållande av Apotekarlegitimation 21 augusti 2014

SVARSMALL Tentamen DSM1.3 Läkemedel Kl

Naloxonutbildning Nässpray mot opioidöverdos

Naloxon Nässpray mot opioidöverdos. Utbildning för utbildare i Region Skånes Naloxonprojekt

Teoretisk bakgrund. Kurskod: 8LAG20. Laborationen utförd 30/ Inlämnad 10/ Reviderad version inlämnad 17/2 2014

Preparat ur ett populärvetenskapligt perspektiv

Farmakokinetik. Farmakokinetik och farmakodynamik Ernst Brodin, Institutionen för Fysiologi och Farmakologi, Karolinska Institutet

Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin

a) Facit till räkneseminarium 3

Dexametasons effekt på trombocytaggregering och syreradikalproduktion

Institutionen för laboratoriemedicin Bilaga 2 Biomedicinska analytikerprogrammet Analytisk Kemi och Biokemisk metodik Ht 2010, Termin 3

Medicin A, Medicinsk temakurs 1, 30 högskolepoäng, Tema Respiration-Cirkulation Skriftlig tentamen 24 oktober 2011

för erhållande av Apotekarlegitimation 3 december 2014

FORD ST _ST_Range_V2_ MY.indd FC1-FC3 27/06/ :24:01

Tillämpning av olika molekylärbiologiska verktyg för kloning av en gen

Sänkningen av parasitnivåerna i blodet

Bestämning av hastighetskonstant för reaktionen mellan väteperoxid och jodidjon

Cannabis och belöningssystemet

Namn:

för erhållande av Receptarielegitimation 25 januari 2014

Moment Viktiga exempel Övningsuppgifter I

Konsultarbete, Hitta maximal volym fo r en la da

Koncentrationsbestämning med hjälp av spädningsteknik och spektrofotometri

Ett nytt Karo Bio tar form

Metoder för detektering av pittingskador i motorer.

Labbrapport 1 Kemilaboration ämnens uppbyggnad, egenskaper och reaktioner. Naturkunskap B Hösten 2007 Av Tommy Jansson

Dopaminergika dopaminliknande effekter mot WED/RLS

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Kan Blödningstid ersättas med Multiplate? Spec BMA, Med Mag Inger Fagerberg Blixter Koagulationslab, Sahlgrenska Universitetssjukhuset Göteborg

Farmakokinetik - 2-kompartment modell. Farmakokinetik - 2-kompartment modell

Marginell påverkan av LFN-beslut om syrahämmare

RC-kretsar, transienta förlopp

Laboratoriemetod för att manuellt rena DNA från ett prov på 0,5 ml

2. Skriv tydligt och läsvänligt. Oläslig handstil medför att poängbedömning inte sker.

UPPSALA UNIVERSITET Matematiska institutionen Michael Melgaard. Prov i matematik Prog: Datakand., Frist. kurser Derivator o integraler 1MA014

Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära, del % av totala poängen

Kursbok: The immune system Peter Parham

Statistisk undersökning och jämförelser mellan några volumetriska kärl. XXXXXXX

Muskelvävnad som modellsystem i diabetesforskning

Tentamen i Biomedicinsk laboratorievetenskap A, 7,5 hp

NATIONELLT KURSPROV I MATEMATIK KURS C HÖSTEN 2009

Allmänmedicin innefattande allmän och speciell farmakologi, 15 högskolepoäng Provmoment: Ladokkod: 62DA01(version3)

x 2 5x + 4 2x 3 + 3x 2 + 4x + 5. d. lim 2. Kan funktionen f definieras i punkten x = 1 så att f blir kontinuerlig i denna punkt? a.

ANVÄNDARMANUAL MARKUS 10

NAMN (TEXTA LÄSLIGT!): FÖDELSENUMMER:

Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära 15 hp, del 1. Kurskod: MC2014. Kursansvarig: Mikael Ivarsson.

Antikoagulantia. Trombocytaggregationshämmare. Fibrinolytika - trombolytika. Antifibrinolytika. Kap 26. Medel som påverkar blodkoagulationen

DELOMRÅDEN AV EN OFFENTLIG SAMMANFATTNING

Den virtuella katten -ett simulerat experiment på en nedsövd katt

Bestämning av fluoridhalt i tandkräm

2. Skriv tydligt och läsvänligt. Oläslig handstil medför att poängbedömning ej sker.

Tre metoder Ett arbete

EXPERIMENTELLT PROV

Integrerad signaltransduktion

x 2 5x + 4 2x 3 + 3x 2 + 4x + 5. d. lim 2. Kan funktionen f definieras i punkten x = 1 så att f blir kontinuerlig i denna punkt? a.

Artärer de ådror som för syresatt blod från lungorna ut i kroppen.

Laboration 1 Mekanik baskurs

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Rapportskrivningsinstruktioner plus Säkerhetsföreskrifter

x 2 5x + 4 2x 3 + 3x 2 + 4x + 5. d. lim 2. Kan funktionen f definieras i punkten x = 1 så att f blir kontinuerlig i denna punkt? a.

Anatomi -fysiologi. Anatomy & Physiology: Kap. 18 The endocrine system (s ) Dick Delbro. Vt-11


för erhållande av Receptarielegitimation 3 december 2014

ETT EXEMPEL PÅ PROTEINKRISTALLISERING

Västerås Stad Mälardalens högskola Sweco Environment

Laborationsrapport Receptorfarmakologi glattmuskulatur

för erhållande av Apotekarlegitimation 25 januari 2014

nyckeln till intresse och förståelse Kinesiskt ordspråk: Jag hör och jag glömmer, jag ser och jag minns, jag gör och jag förstår.

Allmänmedicin innefattande allmän och speciell farmakologi 15 högskolepoäng

Neuronens Fysiologi 3. Jonkanaler Ligand aktiverade

Finns det över huvud taget anledning att förvänta sig något speciellt? Finns det en generell fördelning som beskriver en mätning?

Cellskada och manipulering av cellers känslighet för stress

INSTALLATIONS- och DRIFTSANVISNING

5. Transkriptionell reglering OBS! Långsam omställning!

4. Bestäm eventuella extrempunkter, inflexionspunkter samt horisontella och vertikala asymptoter till y = 1 x 1 + x, och rita funktionens graf.

OBS! Under rubriken lärares namn på gröna omslaget ange istället skrivningsområde.

Farmakokinetik - 2-kompartment modell. Farmakokinetik - 2-kompartment modell

Namn:... Använd baksidan av respektive papper om skrivutrymmet inte räcker till. 1. Ange fyra (inte fler) funktioner för nervsystemet.

Immun- och inflammationsfarmakologi Tandläkarprogrammet HT Ernst Brodin, Institutionen för Fysiologi och Farmakologi, Karolinska Institutet

Optimala vinkeln av bortklippt cirkelsektor fo r maximal volym pa glasstrut

Branschriktlinjer för fisk och skaldjurs produkter för den svenska marknaden Version I utgiven den BILAGA 1

OBS! Under rubriken lärares namn på gröna omslaget ange istället skrivningsområde, ex Lösningsberedning. Totalt ska ni använda 9 gröna omslag.

Cellodling Laborationskompendium

Laboration 1: Gravitation

Signaltransduktion och Receptorfarmakologi. Signaltransduktion och Receptorfarmakologi. RTE-Modellen

SJSG(E,F)11 Människan: Biologi och hälsa Allmän farmakologi (Farmakologi) 3.0 hp

Transkript:

Receptorfarmakologi trombocyter Bakgrund: Många hormoner och signalsubstanser verkar genom att binda till receptorer för att utöva sin effekt. Kunskapen om detta utnyttjas vid läkemedelsframställning då många läkemedel verkar genom att binda till receptorer för att antigen stimulera eller inhibera. Substanserna som binder till receptorerna kallas för ligander, dessa kan vara agonister (aktiverar receptorn och dess signalväg) eller antagonister (inhiberar receptorn och dess signalväg eller ger motsatt effekt mot agonisten om antagonisten är en invers agonist). Det är känt att receptorer på trombocyter kan stimuleras av ADP, vilket kan leda till aggregation, vilka vi har undersökt i denna laboration. Syftet med laborationen var att undersöka den antikoagulativa effekten av två olika typer av trombocythämmande substanser: Cangrelor och MRS-2179. Dessa substanser verkar som antagonister på olika receptorer på trombocyterna: Cangrelor på receptorn P2Y12 och MRS-2179 på receptorn P2Y1. Dessutom ville vi utreda hur betydande roll de två olika receptortyperna hade i aggregationsprocessen. Metod: För att undersöka trombocyters förmåga till aggregation, användes en metod som baseras på kontinuerlig mätning av ljustransmission genom trombocytprov. Instrumentet som använts för detta kallas för aggregometer. Ökad ljustransmission genom provröret är ett resultat av att trombocyterna aggregerat, klumpat ihop sig och sjunkit till botten. Vi började med att separera blodplasma genom centrifugering. Vi genomförde två centrifugeringar, en för att få fram en trombocytrik (PRP) och en för att få fram trombocytfattig (PPP) blodplasma. PPPprovet använde vi som referensprov, då det medgav maximal ljustransmission pga den låga koncentrationen trombocyter. Kalibrering utfördes med hjälp av PPP och PRP. En spädningsserie gjordes sedan med olika koncentrationer av ADP för att göra en kumulativ tillsats av ADP, dvs vi lade till allt starkare koncentrationer av ADP till trombocytprovet som mätningarna gjordes i. Spädningsserien med ADPlösning bestod av 7 provrör, med koncentrationer som motsvarade 0.03, 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, 10 och 30 μm. Ursprungsvolymen i trombocytprovet var 500μL och vi tog inte hänsyn till vare sig volym- eller koncentrationsändringen som uppstod då föregående ADP-koncentration tillsats. För varje ökad koncentration undersökte vi förändringen av ljustransmissionen i trombocytprovet. Vi gjorde även ett försök där vi tillförde en singeldos av ADP för att se om de små tillsatta doserna i det kumulativa försöket hade en sensitiserande eller desensitiserande effekt, därför valde vi en koncentration som låg mitt i intervallet i den kumulativa studien, dvs 3 μm (se fig 1).

Slutligen blandade vi nya lösningar med antagonister för att undersöka hur trombocytprovet påverkades av en kombination av dessa (Cangrelor respektive MRS-2179) och agonisten ADP. Koncentrationen för antagonisterna var 0.1 och 5 μm för Cangrelor, samt 1 och 20 μm för MRS-2179. För detta behövdes två nya trombocytprov, med en typ av antagonist i varje, samt referensprov. Antagonisterna tillsattes sedan till trombocytproven, därefter tillsattes 10 μm ADP till båda provrören. Förändringen i ljusgenomsläppligheten undersöktes därefter. Resultat och diskussion: Kumulativ tillsättning av ADP Efter fjärde dosen observerades en topp på tid-respons kurvan orsakad av konformationsändring hos trombocyterna (förstoring och bildning av dendritutskott), vilket medförde att ljusgenomsläppligheten blev mindre. Detta tydde på att trombocyterna började aktiveras, när vi sedan lade till den femte dosen fick vi en tydlig aggregation av trombocyterna. Detta kännetecknades av att en ökad ljustransmission genom provröret registrerades. Ytterligare aggregation observerades när resterande doser tillsattes. Orsaken till att ljustransmissionen ökar vid aggregation är att trombocyterna då blir tyngre och sjunker till botten av röret. Fig 1. Grafen visar förändringen av ljustransmissionen vid ökad koncentration ADP (dos 1 7). På y-axeln visas andel aggregerade trombocyter (i procent) och på x-axeln visas tiden. De lodräta topparna som kan observeras i grafen är orsakade av minskat ljusinflöde då pipettspetsen fördes ned i provröret. Ingen sådan topp kan observeras vid dos 7 då en annan typ av pipettspets användes.

Singeldos Fig 2. Här ser vi resultatet av försöket med singeldos (med samma koncentration som dos 5 i det kumulativa försöket). Här konstaterades att effekten av ADP på trombocyternas aktivitet blev mindre än vid samma dos vid det kumulativa försöket. Detta kan förklaras av att de tillförda doserna innan dos 5 i det kumulativa försöket aktiverade trombocyterna vilket också gjorde dem mer excitatoriska vid dos 5.

MRS-2179 (antagonist) Fig 3. De två olika kurvorna i grafen presenterar de två olika doserna av MRS-2179. Den svarta grafen motsvarar 1 μm och den blåa 20 μm ADP. Trots närvaro av antagonister blev trombocytsvaret kraftigt, oberoende av vilken dos som tillsattes. Man kan alltså konstantera att denna receptor troligtvis har en liten betydelse för effekten av ADP på trombocyternas aggregation. I detta test undersökte vi receptorn P2Y1.

Cangrelor (antagonist) Fig 4. Den svarta kurvan motsvarar en dos på 0,1 μm och den blåa 5 μm ADP. I detta fall ser vi att koncentrationen av antagonisten har stor betydelse för ADPs effekt på trombocytaggregationen. Uppnås en tillräckligt hög koncentration av antagonisten (c.a 5 μm Cangrelor), kommer 10 μm ADP-inducerad trombocytaggregation att blockeras helt. Detta tror vi kan bero på att samtliga receptorer inhiberas. En dos på 0,1 μm Cangrelor har i princip ingen blockerande effekt på trombocyterna om man jämför med det kumulativa försöket. I detta test undersöktes receptorn P2Y12. Vi kan konstatera att Cangrelor har en betydligt starkare hämmande effekt än MRS-2179.

Fig 5. I denna dos-responskurva ser vi att vi inte kommer upp i tillräcklig hög dos för att få maxaggregation hos trombocyterna. Därför syns ingen sigmoidal-kurva som planar ut efter aggregationen, vilket den troligen hade gjort om vi hade fortsatt tillsätta ADP. Vi kan dock avläsa ett EC 50 värde då vi har mer än 50% av maxeffekten, enligt kurvan är EC 50 värdet c.a 16 μm ADP. Felkällor: - Felberäkningar av volymer m.m. - Luftbubblor i provrören efter pipettering vilket kan ändra volymen. - Problem med centrifugeringen kan leda till att blodplättarna inte separeras som de ska - Hantering av proven, exempelvis om man råkar skaka om provrören. Temperaturändringar m.m. Dessa faktorer kan påverka blodets egenskaper Källor: George M. Brenner, Craig W Stevens, Pharmacology, Elsevier, 2013, 4:e upplagan