1 HÄLSOUNIVERSITETET I LINKÖPING Läkarlinjen T3 Lab. Transfusionsmedicin Rev VT 2012 BLODGRUPPERING och FÖRENLIGHETSPRÖVNING samt DAT (direkt antiglobulintest) UPPGIFT A. Blodgruppera två patienter och en kursdeltagare per grupp. Patienterna heter Märta Mott född 1941 och Patrik Palm född 2001 (MM resp. PP). Kursdeltagarna som ska grupperas numreras (6 resp. 7, 8 osv) B. Utför antikroppsscreening på patienterna och kursdeltagaren. C. Förenlighetspröva de två patienterna mot 6 blodgivare. Blodgivarna utgörs av 5 st utdelade erytrocytsuspensioner (nr 1, 2, 3, 4 och 5) och av provet från kursdeltagaren. D. Utför direkt antiglobulintest på patienterna och kursdeltagaren. FÖRBEREDELSE Tag/låt ta prov för blodgruppering på Dig själv eller någon kurskamrat. 1. Märk remissen och ett EDTA-rör (lila propp) med personnummer samt för- och efternamn. 2. Gör ID-kontroll enligt Socialstyrelsens föreskrifter. 3. Venpunktera och fyll röret. 4. Centrifugera läge HI 2 minut. Glöm ej motviktsrör! Mät tiden (timern är ev ur funktion). 5. Märk EDTA-röret samt två tomma centrifugrör med Ditt/Din kamrats nummer (6,7,8 ) 6. Överför med engångs plastpipett plasman från EDTA-röret till det ena centrifugröret. 7. Överför med samma pipett 1 droppe erytrocyter till det andra centrifugröret. 8. Späd, med lågsaltlösning (Diluent 2), till en 2-3% suspension.
2 A. Blodgruppering (ABO- och RhD-gruppering) ABO-GRUPPERING Antigengruppering (erytrocyter) 1. Viggoplattan är märkt, se nedan. Fyll på med kursdeltagarens nummer. Anti-A AB-serum Anti-B MM PP.(6 resp. 7, 8 osv) 2. Droppa 2 droppar testreagens anti-a i vardera av de tre hålen i raden märkt anti-a. 3. Gör detsamma med AB-serum och anti-b. 4. Droppa 2 dr erytrocytsuspension MM i vardera av de tre hålen i raden märkt MM. 5. Gör detsamma med PP och 6 resp. 7, 8, osv. Antikroppsgruppering (plasma) 1. Viggo-plattan är även märkt enl nedan. Fyll på med kursdeltagagrens nummer: A MM PP.(6 resp. 7, 8 osv) B 2. Överför 2 dr plasma från MM i översta och nedersta hålet i raden märkt MM. 3. Gör detsamma med plasma från PP och 6 resp. 7, 8, osv. 4. Droppa 2 dr kända A erytrocyter i raden märkt A. 5. Droppa 2 dr kända B erytrocyter i raden märkt B. 6. Blanda genom rotation, gärna på rotator, minst 15 minuter. Fortsätt under tiden med RhD-gruppering, se nästa sida.
3 RhD-GRUPPERING 1. 2 Kimble-rör för varje prov är märkta med provets beteckning, det ena dessutom med K. Märk även 2 rör med kursdeltagarens nummer, det ena dessutom med K. 2. Droppa 1 droppe anti-d i de rör som endast har provets beteckning. 3. Droppa 1 dr Rh-hr control i de rör som är märkta med K. 4. Droppa 1 dr erytrocytsuspension i vart och ett av rören enligt märkning. Blanda. 5. Låt stå 3-5 minuter. 6. Centrifugera läge LO 1 minut. 7. Vagga försiktigt upp erytrocyterna från botten, låt rinna längs rörsidan. Inspektera mot ljuslåda på förekomst av agglutination. 7. Inför resultatet i protokoll sid 4. +++ = stark agglutination ++ = tämligen stora agglutinat, måttligt fria celler (ger rödfärgad bakgrund) + = små, men makroskopiskt synliga agglutinat = inga synliga agglutinat AVLÄSNING AV ABO-GRUPPERING 1. Inspektera Viggoplattorna, notera agglutination enl samma gradering som vid RhDgruppering ovan. 2. För in resultatet i protokoll sid 4. 3. Bedöm huruvida reaktionerna på plasmasidan och erytrocytsidan följer Landsteiners regel och uttolka ABO-gruppen.
4 PROTOKOLL ABO-gruppering erytrocyter MM PP. mot anti-a mot AB-serum mot anti-b plasma MM PP. mot kända A 1 mot kända B Uttolkad ABO-grupp RhD-gruppering erytrocyter MM PP. mot anti-d mot Rh-kontroll Uttolkad RhD-grupp KOMMENTAR: ABO-gruppering kan endast bedömas om någon av reaktionerna med anti-a, anti-b eller AB-serum blir negativ. Vid rutingruppering används AB-serum endast om erytrocyterna agglutineras av både anti-a och anti-b (blodgrupp AB). RhD-gruppering kan endast bedömas om negativt kontrollreagens ej agglutinerar erytrocyterna.
5 B. Antikroppsscreening TERMINOLOGI, se sid 7. PRINCIP Antikroppsscreening görs dels vid blodgruppering, dels vid förenlighetsprövning. Plasma från patienten undersöks mot två eller flera testerytrocyter som tillsammans bär antigen mot de flesta av de erytrocytantikroppar som kan orsaka transfusionsreaktion. Ex: C C w c D E e M N S S P 1 K k Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b T19 o o + + + o o + o + + + + o o + o o + T20 + + o + o + + o + + + o + + o o + + o Eftersom antikropparna vanligen är av IgG-typ är IAT metod den mest lämpade. I denna laboration används IAT både till screening och MG-test. ANTIKROPPSSCREENING Gör antikroppsscreening på plasma från MM, PP och kursdeltagaren (6 resp. 7, 8 osv). Använd Micro Typing Card för LISS/Coombs (gröna rutor), två brunnar för varje prov. 1. Två brunnar är märkta med provets beteckning samt de testerytrocyter som skall användas (ex T19, T20). Märk även med kursdeltagarens nummer. T19 T20 T19 T20 T19 T20 M M P P... 2. Överför med automatpipett 50µL 0,8% suspension av testerytrocyterna till resp förmärkt brunn. Stöd pipettspetsen mot brunnens kant, spruta ej ned direkt i gelen! 3. Tillsätt 25 µl plasma till brunnarna enl märkning. 4. Inkubera 15 min i 37 värmeskåp. Forsätt under tiden med förenlighetsprövning (MG-test), se nästa sida.
6 C. Förenlighetsprövning (MG-test) Gör MG-test på plasma från MM och PP mot fem blodgivare 1, 2, 3, 4 och 5 samt mot kursdeltagaren (6 resp 7, 8 osv) som då blir en sjätte blodgivare. Använd Micro Typing Card för LISS/Coombs (gröna rutor), en brunn för varje test. 1. Överför halva mängden av kursdeltagarens 2-3% erytrocytsuspension till ett nytt centrifugrör och arbeta sedan vidare med detta rör enligt nedan. 2. Späd med lågsaltlösning (Diluent 2) kursdeltagarens erytrocytsuspension till 0,8% (samma styrka som givare 1, 2, 3, 4 och 5). 3. Korten är märkta enligt nedan. Fyll på med kursdeltagarens nummer. 1 2 3 4 5. 1 2 3 4 5. M M P P 4. Överför med automatpipett 50 µl 0,8% erytrocytsuspension från vardera givare till brunn märkt med samma nummer. Sätt pipettspetsen mot brunnskanten! 5. Tillsätt 25 µl plasma från patienterna till resp brunnar enl märkning. 6. Lämna de tre korten till handledarna som inkuberar dem 15 min i 37 värmeskåp och därefter centrifugerar dem 10 min vid 85 g i särskild kortcentrifug. Utför Moment D. Direkt antiglobuliontest (DAT) innan rast, se nästa sida. Efter rasten avsluta Moment C. Förenlighetsprövning (MG-test) enligt nedan. AVLÄSNING AV GELKORTEN (gäller både screening och MG-test efter inkubering) 1. Avläs mot ljuslåda. Bedöm agglutinationsgraden enl mall. 2. För in resultaten i protokoll nedan. PROTOKOLL Screening MG-test MM PP. T19 T20 1 2 3 4 5. MM PP
7 D. Direkt antiglobulintest, DAT (tidigare kallad Coombs test) 1. 2 Kimble-rör för varje prov är märkta med provets beteckning, det ena dessutom med K. Märk även 2 rör med kursdeltagarens nummer, det ena dessutom med K. 2. Droppa 1 droppe 2-3% (OBS!!!) erytrocytsuspension i vart och ett av rören enligt märkning. 3. Droppa 1 dr antihumanglobulin i de rör som är märkta med endast provets beteckning. 4. Droppa 1 dr AB-serum i rören märkta K. 5. Blanda. Centrifugera läge LO 1 minut. 6. Skaka försiktigt upp erytrocyterna från botten, låt rinna längs rörsidan. Inspektera mot ljuslåda på förekomst av agglutination. 7. För in resultatet i protokoll nedan. DAT kan endast bedömas om negativt kontrollreagens ej agglutinerar erytrocyterna. PROTOKOLL DAT (direkt antiglobulintest) erytrocyter MM PP. mot AHG mot AB-serum Uttolkning
8 TERMINOLOGI IAT: Indirekt antiglobulinteknik Antikroppsscreening: Immuniseringsundersökning. Avser att upptäcka om patienten har bildat irreguljära antikroppar.. Förenlighetsprövning skall göras före varje transfusion av blodkomponenter som innehåller erytrocyter. Avser att upptäcka blodgruppserologisk oförenlighet mellan givare och mottagare. Prov för förenlighetsprövning: Det prov som tas från patienten vid blodbeställning. Får vara högst 3 dygn gammalt (provtagninsgdagen + 2 dygn) vid förenlighetsprövningen. MG-test (Mottagar-Givar test): Plasma från blodmottagaren prövas mot erytrocyter från varje tilltänkt givare. Förenlighetsprövning i form av MG-test (direkt testning mellan givare och mottagare) utförs om mottagaren vid blodgrupperingstillfället har bildat irreguljära antikroppar. Den innefattar * blodgruppskontroll * antikroppsscreening * MG-test (Mottagar-Givar test) Kallas också BK(S)/MG-test eftersom BlodgruppsKontroll och antikroppsscreening ingår. I författningstexten kallas det endast MG-test. Förenlighetsprövning i form av BAS-test (Blodgruppskontroll/AntikroppsScreening): MG-test kan undvaras om mottagaren vid blodgrupperingstillfället saknar irreguljära antikroppar. BAS-test innefattar således * blodgruppskontroll * antikroppsscreening samt en datoriserad utlämningskontroll av att patientens blodgrupp vid blodgrupperingen och vid förenlighetsundersökningen är densamma.