QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA 708790 För In Vitro Diagnostisk användning CLIA Komplexity: Hög

QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA 708790 För In Vitro Diagnostisk användning CLIA Komplexity: Hög Avsedd användning QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA är en semi-kvantitativ enzyme-länkad immunosorbent assay för detektion av IgG anti-ccp IgG (Cyclic Citrullinated Peptide) antikroppar i patient sera. Förekomsten av dessa antikroppar, i samband med kliniska fynd och laboratorieparametrar, är ett hjälpmedel i diagnosen av rheumatoid artrit. Sammanfattning och förklaring till testet Reumatoid Artrit (RA) är en av de vanligaste systemiska autoimmun sjukdomarna. Etiologin för sjukdomen är okänd. Ungefär 0.5 % av världens befolkning är drabbad, och dubbelt så många kvinnor som män får sjukdomen. 1 Diagnos för RA ställs primärt baserat på kliniska manifestationer hos sjukdomen. Helt tills nyligen så var det enda serologiska rutintest som användes bestämning av förekomsten av reumatoid faktor (RF) i serum. RF är antikroppar som riktar sig mot Fc regionen hos immunoglobuliner av IgG klassen. RF kan finnas som IgM, IgG, och IgA immunoglobulin klasser. Förekomsten av IgM RF är ett kännetecken för RA och hittas i ungefär 50%-90% av dessa patienter. 1,2 IgM RF kan också förekomma hos individer med infektioner, andra autoimmuna sjukdomar, och hos vissa friska individer. 1,2 IgG RF är mindre känsligt men mer specifikt för RA än IgM RF. 2 Det är viktigt för hanterandet av sjukdomen att diagnosticera och behandla människor med RA så tidigt som möjligt. 3 Det har varit känt under många år att anti-perinukleära autoantikroppar, också kallat antikeratin, hittas i människor med RA. 4,5 Nyligen upptäcktes också att dessa autoantikroppar känner igen en epitope som innehåller en form av arginine som kallas citrulline. 6 En syntetisk cirkulär peptide innehållande citrulline som kallas CCP IgG (Cyclic Citrullinated Peptide) bevisades ha en bättre förmåga att särskilja RA patienter från andra patienter än både perinukleärt autoantikropps test eller testet för reumatoid faktor. 7-11 I publicerad litteratur, är ungefär 70% av patienter med RA positiva med anti-ccp IgG, medan endast 2% av slumpmässigt utvalda blodgivare och kontroll individer med andra sjukdomar var positiva. En nyligen utförd studie hittade citrullinerade proteiner i lederna hos patienter med RA, men inte i lederna hos patienter med andra former av ledsjukdomar. 12 Dessa resultat ger en teoretisk bas för förekomsten av anti-ccp IgG i RA patienter och en möjlig patogen roll för dessa autoantikroppar. Procedur Antigenet som används i QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA test är en syntetisk cyklisk citrullinerad peptid som har funnits ha hög sensitivitet och specificitet för att upptäcka antikroppar ihos patienter med RA. Detta antigen är bundet till ytan på en brunn i en mikroplatta. Förspädda kontroller och utspädda patient serum tillsätts separate brunnar, vilket tillåter att förekommande CCP IgG antibodies binder till den imobiliderade antigenet. Obundet serum tvättas bort och ett enzym märkt anti-humant IgG konjugat tillsätts varje brunn. En andra inkubation tillåter den enzymmärkta anti-human IgG antikroppen att binda förekommande patient antikroppar som har fast sig i mikrobrunnarna. Efter att obundet enzymmärkt antihuman IgG tvättats bort så mats den återstående enzyme aktiviteten genom tillsats av ett chromogent substrat och mätning av den resulterande färgutvecklingen. Assayen kan utvärderas genom att jämföra färgutvecklingen i patientbrunnarna med kontrollbrunnarna. Reagens 1. Polystyren ELISA microtiterplatta coatad med renat syntetiskt CCP IgG antigen (12-1x8 brunnar), med hållare i folieförpackning med torktillsats 2. ELISA Negativ Kontroll, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant serum utan antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2 ml 3. CCP IgG ELISA Låg Positiv, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 4. CCP IgG ELISA Hög Positiv/Kalibrator A, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 5. CCP IgG ELISA Kalibrator B, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 6. CCP IgG ELISA Kalibrator C, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 7. CCP IgG ELISA Kalibrator D, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 8. CCP IgG ELISA Kalibrator E, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL 9. HRP Provdluent, 1 flaska färgad rosa innehållande Tris-buffrad koksaltlösning, Tween 20, protein stabiliserare och konserveringsmedel, 50mL 10. HRP Tvättlösningskoncentrat, 1 flaska med 40x koncentrat färgad röd innehållande Tris-buffrad koksaltlösning och Tween 20, 25mL. OBS, Se Metod delen för spädningsinstruktioner. 11. HRP IgG Konjugat, (get), anti-human IgG, 1 flaska färgad blå innehållande Tris-buffrad koksaltlösning, protein stabiliserare och konserveringsmedel, 10mL 12. TMB Cromogen, 1 flaska innehållande stabiliserare, 10mL 13. HRP Stop lösning, 0.344M Svavelsyra, 1 flaska färglöst, 10mL 1

Varning 1. VARNING: Den här produkten innehåller kemikalier (0.02% chloramphenicol) i provspädningsbufferten, kontrollerna och konjugatet, som av delstaten California är kända för att orsaka cancer. 2. Allt humant material som använts till förberedning av kontroller för denna produkt har testats och befunnits vara negativt avseende antikroppar mot HIV, HbsAg, och HCV med FDA registrerade metoder. Ingen testmetod kan fullständigt garantera att HIV, HBV, HCV eller andra infektiösa smittbärande substanser inte finns i materialet.därför bör CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll hanteras på samma sätt som potentiellt infektiöst material. 13 3. Sodium Azide används som konserveringsmedel. Sodium Azide är ett gift och kan vara giftigt om det inmundigas eller absorberas genom huden eller ögon. Sodium azide kan reagera med bly och koppar i avloppsledningar och bilda potentiellt explosive metallazider. Spola ur avloppen med stora mängder vatten för att förebygga bildandet av metallazider. 4. HRP konjugatet innehåller en utspädd giftig/korrosiv kemikalie, som kan vara giftig om den inmundigas i stora mängder. För att förebygga kemikalie skador, undvik kontakt via hud och ögon. 5. TMB Cromogenet innehåller en irritant, som kan vara skadlig om den inhaleras, inmundigas eller absorberas via huden. För att undvika skada, undvik inhalation, inmundigande eller kontakt med hud och ögon. 6. HRP Stopplösningen består av en utspädd svavelsyralösning. Undvik exponering för basiska material, metaller eller andra ämnen som kan reagera med syror. Svavelsyra är giftigt och korrosivt och kan vara giftigt om det inmundigas. För att undvika kemikalieskador, undvik kontakt med hud och ögon. 7. Använd lämplig personlig skyddsutrustning när du arbetar med de inkluderade reagenserna. 8. Utspillt reagens bör torkas upp omedelbart. Var vänlig att respektera all applicerbar lagstiftning när ni hanterar kemikalierester. Försiktighetsåtgärder 1. Denna produkt är avsedd för In Vitro Diagnostiskt Bruk. 2. Utbyte av komponenter i detta kit, mot andra än sådana som levererats med reagenskitet kan leda till felaktiga resultat. 3. Ofullständig tvätt eller en ineffektiv tvätt samt otillräcklig aspiration av vätska från mikrobrunnarna kommer att orsaka försämrad precision och/eller hög bakgrund. 4. Anpassning av detta test för användning med automatiserad provhanterare eller andra vätskehanteringssystem kan resultera i skillnader i testresultat, jämfört med den manuella proceduren. Det är varje labs ansvar att validera att deras instrument ger provsvar som är acceptabla. 5. Många olika faktorer kan påverka testets prestanda. Dessa är bland andra start temperatur för reagenserna, omgivningstemperaturen, noggrannheten och reproducerbarhet i pippeteringstekniken, noggrannheten i tvätt och aspiration av vätska från mikrobrunnarna, fotometern som används för att mäta färgutvecklingen, och inkubationstidernas längd under assay proceduren. Noggrann uppmärksamhet är nödvändig för att erhålla korrekta och reproducerbara resultat. 6. Rekommendationen är att följa protokollet i detalj. 7. Dålig förslutning av den zip-lock försedda foliepåsen innehållande mikrobrunnremsor och torkmedel kommer att resultera i antigen degradation och försämrad precision. 8. Oacceptabelt låga absorbanser kan erhållas efter två eller flera användningar av en flaska HRP konjugat efter en tid. Det är viktigt att följa rekommendationer avseende hantering av HRP konjugat för att undvika detta. 9. Kemisk kontamination av HRP konjugatet kan resultera från otillräcklig rengöring eller sköljning av utrustning eller instrument. Rester av vanliga laboratoriekemikalier såsom formalin, blekmedel, etanol eller tvättmedel orsakar nedbrytning av HRP konjugatet över tid. Skölj noggrant all utrustning och alla instrument efter användning av kemiska rengöringsmedel/desinficeringsmedel. Lagringsförhållanden 1. Lagra alla kitreagenser i 2-8 C. Frys inte ner. Reagenserna är stabila tills utgångsdatum om dom lagras och hanteras enligt rekommendation. 2. Oanvända antigen coatade mikrobrunnremsor bör förvaras i den noggrant återförslutna foliepåsen tillsammans med torkningsmedelet och lagras i 2-8 C. 3. Färdigspädd tvättbuffer är stabil i 1 vecka vid lagring i 2-8 C. Provinsamling Denna testprocedur bör utföras med ett serum prov. Tillsatser av azid eller andra konserveringsmedel kan påverka resultaten negativt. Microbiologisk kontaminering, värmebehandling eller prover som innehåller synliga partiklar bör inte användas. Prover med kraftig hemolys, lipemiska serum eller prover bör undvikas. Efter insamling så skall provet separeras från koagel. NCCLS Document H18-A2 rekommenderar följande lagringsförhållanden för porover: 1) Lagra prover vid rumstemperatur i högst 8 timmar. 2) Om testproceduren inte kommer att vara utförd inom 8 timmar förvara provet i kyla vid 2-8 C. 3) Om testproceduren inte kommer att utföras inom 48 timmar, eller om prover skall skickas, frys ner provet och förvara det vid -20 C eller lägre. Frusna prover måste mixas efter de är tinade. 2

Procedur, Inkluderat material 1 CCP IgG ELISA microbrunnplatta (12-1 x 8 brunnar), med hållare 1 1.2mL förspädd ELISA Negativ Kontroll 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Låg Positiv 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Hög Positiv/Kalibrator A 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator B 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator C 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator D 1 1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator E 1 50mL HRP Provdiluent 1 25mL HRP Tvätlösningskoncentrat, 40x koncentrat 1 10mL HRP IgG Konjugat, (get), anti-humant IgG 1 10mL TMB Cromogen 1 10mL HRP Stopplösning, 0.344M Svavelsyra Rekommenderad utrustning som inte ingår Mikropipetter för dispensering av 5, 100, 200-300 och 500µL Engångsspetsar för mikropipett Provrör för spädning av patientprover, 4mL volym Destillerat eller avjoniserat vatten 1L behållare för utspädd HRP Tvättlösning Plattläsare som kan läsa Absorbans vid 450nm (och 620nm för referensvåglängd) Metod, Innan du startar 1. Alla reagens och prover skall ha rumstemperatur (20-26 o C) och mixa dem noga. 2. Späd HRP Tvättkoncentratet 1:40 genom att addera innehållet till en behållare med 975mL destillerat eller avjoniserat vatten. Om hela plattan inte används kan en mindre kvantitet förberedas genom att addera 2.0mL av koncentratet till 78mL destillerat eller avjoniserat vatten per två remsor av mikrobrunnar som används. Den utspädda bufferten är stabil i en vecka vid 2-8 o C. 3. Förbered en 1:101 spädning av varje patientprov genom att addera 5µL patientprov till 500µL HRP provdiluent. Utspädda prover måste användas inom 8 timmar.späd INTE CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll. 4. Bestämning av förekomsten eller frånvaron av anti-ccp IgG antikroppar använder arbiträra enheter och kräver två brunnar för varje av de tre kontrollerna och en eller två brunnar för varje patient prov. Det är rekommenderat att analyserna utför i duplikat. 5. Om så önskas, kan resultaten kvantifieras genom att använda en 5 punkters standard kurva. För punkt A til E i den 5 punkters standardkurven, anvend förspedd CCP IgG Kalibrator A til E direkt från flaskan. Den 5 punkters standardkurven har följande värde: Punkt Units A Förspedd CCP IgG Kalibrator A 250.0 B Förspedd CCP IgG Kalibrator B 125.0 C Förspedd CCP IgG Kalibrator C 62.5 D Förspedd CCP IgG Kalibrator D 31.25 E Förspedd CCP IgG Kalibrator E 15.62 Assay procedur 1. ALLA REAGENS MÅSTE HA RUMSTEMPERATUR (20-26 C) INNAN ASSAYEN PÅBÖRJAS. Placera det erforderliga antalet mikrobrunnar/remsor i hållaren. Stoppa omedelbart in ej använda remsor med mikrobrunnar i foliepåsen tillsammans med torkmedlet och återförslut den för att minimera exponeringen för vattenångor. 2. Addera 100µL av den förspädda CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv (om så önskas Kalibratorer B genom E), och ELISA Negativ Kontroll samt de spädda patientproverna till brunnarna. Täck brunnarna och inkubera i 30 minuter vid rumstemperatur på en jämn yta. Inkubationstiden börjar efter tillsatsen av det sista provet. 3. Tvättsteg: Aspirera noggrant innehållet i varje brunn. Addera 200-300µL av den utspädda HRP Tvättbufferlösningen till alla brunnar, aspirera sedan. Repetera detta två gånger till, totalt tre tvättcykler. Vänd upp och ner på plattan och knacka den mot ett absorberande material för att avlägsna återstående vätska efter den sista tvättcykeln. Det är viktigt att helt tömma varje brunn efter varje tvättsteg. Bibehåll samma sekvens för aspireringen av vätska som användes vid tillsättningen av prover. 4. Addera 100 µl av HRP IgG Konjugatet till varje brunn. Konjugatet skall avlägsnas från flaskorna under renliga förhållanden och enligt god laboratorieteknik. Avlägsna endast den mängd av konjugat som behövs för att utföra assay proceduren. FÖR ATT UNDVIKA POTENTIELL MIKROBIOLOGISK OCH/ELLER KEMISK KONTAMINATION, HÄLL ALDRIG TILLBAKA OANVÄNT KONJUGAT I FLASKAN. Inkubera brunnarna i 30 minuter som i steg 2. 5. Tvätt steg: Repetera steg 3. 6. Addera 100µL av TMB Cromogen till varje brunn och inkubera i mörker i 30 minuter vid rumstemperatur. 7. Addera 100µL av HRP Stopplösning till varje brunn. Upprätthåll samma sekvens och timing som vid tillsättningen av TMB Cromogen. Knacka försiktigt med ett finger på plattan för att mixa reagenserna i brunnarna noggrant. 8. Läs absorbansen (OD) för varje brunn vid 450nm inom en time från det att reaktionen stoppats. 3

Om bikromatiska mätningar önskas kan 620nm användas som referens våglängd. Kvalitetskontroll 1. CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ kontroll bör användas i varje batch av reagenser för att säkerställa att alla reagenser och procedurer har fungerat korrekt. 2. Var uppmärksam på att CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll alla är förspädda och att dom inte kan avslöja utförande fel vid spädning av prover. 3. Ytterligare kontroller kan testas i enlighet med de krav eller guidelines som gäller för det enskilda laboratoriet. Ytterligare lämpliga kontrollsera kan förberedas genom allikvotering av e pool med humant serum som lagras vid <-20 C. 4. För att test resultaten skall anses vara giltiga, måste samtliga nedanstående kriterier uppfyllas. Om något eller några av dessa inte är uppfyllt bör analyssvaret anses vara ogiltigt och analysen bör upprepas. a Absorbansen hos CCP IgG ELISA Hög Positiv måste vara store än absorbansen hos CCP IgG ELISA Låg Positiv, som måste vara större än absorbansen hos ELISA Negativ Kontroll. b. CCP IgG ELISA Hög Positiv måste ha en absorbans högre än 1.0 OD och ELISA Negativ Kontroll får inte ha en absorbans som överstiger 0.2. OD c. CCP IgG ELISA Låg Positiv måste ha en absorbans som är mer än två gånger högre än absorbansen hos ELISA Negativ Kontroll eller överstiga 0.25 OD d. ELISA Negativ Kontroll och CCP IgG ELISA Hög Positiv är avsedda att monitorera risken för substantiella reagens fel. CCP IgG ELISA Hög Positiv säkerställer inte precision vid testets cutoff. e. Användaren bör följa NCCLS Document C24-A för ytterligare vägledning avseende lämpliga QC procedurer. Beräkning av Semikvantitativa resultat - Ratio Metoden Den genomsnittliga absorbansen (OD) för varje set av duplikat bestämmes först. Reaktivoteten för varje prov kan då beräknas genom att dela den genomsnittliga absorbansen med den genomsnittliga absorbansen för CCP IgG ELISA Låg Positiv. Result multipliceras med det antal units som tilldelats CCP IgG ELISA Låg Positiv och kan läsas på etiketten. Sample OD Sample Value = x CCP IgG ELISA Low Positive (units) CCP IgG ELISA Low Positive OD (units) Reaktiviteten är relaterad till kvantiteten av närvarande antikropp på ett icke-linjärt sätt. Även om ökningar och minskningar kommer att reflekteras av en motsvarande ökning och minskning i reaktivitet så är inte förändringen proportionell. (t.ex.en dubblering av antikroppskoncentrationen kommer inte att dubblera reaktiviteten). Alternativ metod för beräkning: Semi-kvantitativa Resultat med hjälp av en standardkurva Beräkning av resultat med standard kurva: 1. Bestäm medelvärdet för alla duplikat. 2. Plotta den genomsnittliga absorbansen (O.D.) för punkterna i standardkurva mot deras värden i Units. Använd Cubic Spline (tredje graden polynom) eller en punkt till punkt kurvanpassning för att rita kurvan. 3. Bestäm den okända CCP IgG koncentrationen i Units från Y axeln genom att läsa den korrespondernade absorbansen på X axieln. Beräkna provets koncentration i Units. 4. VAR VÄNLIG UPPMÄRKSAMMA: Värden som beräknas med RATIO metoden kommer att skilja sig från dessa värden som beräknas från en standard kurva. Höga värden kommer att skilja sig mer än låga värden. CCP IgG Hög Positiv kommer inte att få ett värde på 250 Units med RATIO metoden. Tolkning av Resultat Ett ELISA test är en känslig teknik som kan mäta mycket små skillnader i patient populationer. Värdena som visas här är endast förslag. Varje laboratorium bör etablera sina egna normalvärden som baserar sig på sina egna tekniker, kontroller, utrustning och patientpopulation enligt deras egna etablerade procedurer. Proverna kan sedan klassificeras som negative, svagt positive, positive eller starkt positive i enlighet med nedanstående tabell. Units Negativ <20 Svagt Positiv 20 39 Positiv 40 59 Starkt Positiv >60 1. Ett positivt resultat är en indikation på förekomsten av CCP IgG antikroppar och föreslår möjligheten att patienten kan ha Reumatoid Artrit. 2. Ett negativt resultat indikerat att inga CCP IgG antikroppar finns i provet eller att förekomsten är 4

vid en så låg koncentration att nivån understiger den negativa cut-off som testet har. 3. Det föreslås att följande ordalydelse följer provsvaret vid laboratoriets rapport: Resultaten har erhållits med INOVA QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA. CCP IgG värden erhållna med olika tillverkare assay metoder kan inte jämföras direkt. Storleken av de rapporterade IgG nivåerna kan inte korreleras till en end-point titrering. Begränsningar i Proceduren 1. Förekomsten av immunkomplex eller andra immunoglobulin aggregat i patient provet kan orsaka en ökad nivå av icke-specifik bindning och producera falskt positiva svar i denna assay. 2. Alla RA patienter är inte positiva för CCP IgG antikroppar. 3. Resultaten av denna assay bör användas i kombination med kliniska fynd och andra serologiska tester. 4. Testets prestanda har inte undersökts med andra matrix än serum. 5. Det diagnostiska värdet av anti-ccp IgG i Juvenil Reumatoid Artrit patienter har inte fastslagits. Förväntade värden Förmågan hos QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA att detektera IgG CCP IgG antikroppar utvärderades med en jämförelse med en ELISA som mäter IgG RF så väl som anti-ccp IgG i patienter med en klinisk diagnos av RA eller andra systemiska autoimmuna sjukdomar i två externa kliniska utvärderingar och en stor intern studie. Normal värden Total 216 prover (118 kvinnor och 98 män, medelålder 39) från slumpmässigt utvalda blodgivare testades. Två (1%) av proverna var positive anti-ccp IgG. En var en hög titer anti-ccp IgG positiv och var också starkt positiv för IgG RF, en specifik markör för RA. Den andra svagt positiv med en koncentration av 21 Units. Klinisk Sensitivitet och Specificitet Den följande tabellen summerar fynden från alla våra kliniska studier. RA patienterna diagnostiserades i enlighet med ARA kriterierna 13 och i enlighet med de behandlande reumatologerna bästa förmåga. Summary of Clinical Findings Patient Groups No. CCP IgG ELISA CCP IgG ELISA No. > 20 Units (%) No. > 40 Units (%) Random blood donors 216 2* (1%) 1 (0.5%) Rheumatoid Arthritis 252 193 (76%) 158 (63%) Rheumatoid Arthritis RF+ 183 165 (90%) 142 (78%) Rheumatoid Arthritis RF- 69 28 (40%) 16 (23%) Rheumatic disease 336 29 (9%) 16 (5%) SLE 103 10* (10%) 3 (3%) Scleroderma 86 10* (12%) 7 (8%) Sjögren s Syndrome 38 0 (0%) 0 (0%) Other rheumatic diseases 109 9* (8%) 6 (6%) Cryoglobulinemia 29 2 (7%) 1 (3%) Infectious disease 87 2 (2%) 1 (1%) Other patients 29 1 (3%) 0 (0%) *Några av de prover som var positive för CCP IgG antikroppar var också positiva för IgG RF, en anan antikropps markör för RA. Dessa inkluderade 1 blodgivare, 2 SLE patienter, 4 Scleroderma patienter, och 3 av patienterna med andra reumatiska sjukdomar. Korsreaktivitet För att utvärdera den potentiella korsreaktiviteten hos CCP IgG antigenet med andra autoantikroppar, så utvärderades QUANTA Lite CCP IgG ELISA med 22 prover som alla hade höga nivåer med olika andra autoantikroppar. i denna grupp fanns 2 prover som var reagerade med SS-A, SS-B, Sm, RNP, Scl-70, Jo-1, TPO, Ribo-P, M2, chromatin och DNA. Alla prover var negative för anti-ccp IgG. Ovan nämnda studie visar ingen signifikant korsreaktivitet hos QUANTA Lite CCP IgG ELISA med ett stort urval av andra autoantikroppar. Precision och Reproducerbarhet Mellan-assay spridningen mättes genom att analysera duplikat av negative, lågt positive, positive och starkt positive prover i sex olika körningar på sex olika dagar. Inom-assay spridningen mättes genom att köra 5 prover 9 gånger på samma mikrotiterplatta. Representativa resultat visas nedan. Mellan-körnings spridning Neg.1 Neg.2 Low 1 Low2 Mod.1 Mod.2 High1 High2 Mean 2.5 U 2.1 U 21 U 31 U 42 U 47 U 103 U 168 U SD 0.3 0.1 1.2 1.7 2.6 3.1 5.6 12 CV% 11% 7% 6% 6% 6% 7% 5% 7% 5

Inom-körnings spridning Neg.1 Mod.1 High1 High2 High3 Mean 2 U 52 U 107 U 109 U 175 U SD 25 4.5 5.4 4.2 4.9 CV% 11% 9% 5% 4% 3% När ett lågt positivt prov kördes 45 gånger på en mikrotiterplatta var CV 6%. Referenser 1. Wener MH: Rheumatoid Factors. Manual of Clinical Laboratory Immunology, Rose NR et al, eds, American Society for Microbiology Press, 961-972 (2002). 2. Borretzen M, et al: Rheumatoid Factors. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds, Elsevier Science B.V., 706-715 (1996). 3. Kim JK and MH Weisman: When does rheumatoid arthritis begin and why do we need to know? Arthritis Rheum 43:473-484 (2000). 4. Vincent C, et al: Immunoblotting detection of autoantibodies to human epidermis filaggrin: a new diagnostic test for rheumatoid arthritis. J Rheumatol 25:838-846 (1998). 5. Serre G, et al: Filaggrin (keratin) autoantibodies. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds, Elsevier Science B.V., 271-276 (1996). 6. Van Venrooj WJ: Citrullination: a small change for a protein with great consequences for rheumatoid arthritis. Arthritis Res 2:249-251 (2000). 7. Schellekens GA, et al: The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide. Arthritis Rheum 43:155-163 (2000). 8. van Jaarsveld CHM, et al: The prognostic value of the antiperinuclear factor, anti-citrullinated peptide antibodies and rheumatoid factor in early arthritis. Clin Exp Rheum 17: 1689-1697 (1999). 9. Bizzaro N, et al: Diagnostic accuracy of the anti-citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis. Clin Chem 47:1089-1093 (2001). 10. Kroot E-JJA, et al: The prognostic value of anti-cyclic citrullinated peptide antibody in patients with recent-onset rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 43:1831-1835 (2000). 11. Combe B, et al: Prognostic factors for radiographic damage in early rheumatoid arthritis: a multiparameter prospective study. Arthritis Rheum 44:1736-1743 (2001). 12. Baeten D, et al: Specific presence of intracellular citrullinated proteins in rheumatoid arthritis synovium. Arthritis Rheum 44:2255-2262 (2001). 13. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 1999, Fourth Edition (HHS Pub. #(CDC 93-8395). 14. Arnett FC, et al: The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 31:315-324 (1988). Tillverkad av: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Representant: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com Technical Service 888-545-9495 628790 June 2005 Revision SWE9 6