EnVision FLEX Mini Kit, High ph (Dako Omnis)

EnVision FLEX Mini Kit, High ph (Dako Omnis) Code GV823 Utgåva 2 Satsen innehåller reagens som räcker till 150 tester. För Dako Omnis-instrument. Valfritt reagens: Kod Produktnamn Tester GV804 GV805 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) 225 225 GC807 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) GC808 Hematoxylin (Dako Omnis) 600 GV809 EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 75 GV821 EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 75 GV825 EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) 150 Andra alternativ: K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500 (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 1/11

Innehållsförteckning Sida Avsedd användning... 3 Sammanfattning och förklaring... 3 Reagens... 4 A. Medföljande material... 4 B. Nödvändigt material som inte medföljer... 4 C. Valfritt reagens... 5 Försiktighetsåtgärder... 6 Förvaring... 7 Reagensförberedning... 7 Provtagning och preparation... 8 Procedur... 8 Färgningsprocedur... 8 Kvalitetskontroll... 9 Resultattolkning... 10 Begränsningar... 10 Symbolförklaringar... 11 (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 2/11

Avsedd användning För in vitro-diagnostik. EnVision FLEX Mini Kit, High ph (Dako Omnis) visualiseringssystem är avsett för användning vid immunhistokemi tillsammans med Dako Omnis-instrumentet. Systemet detekterar primära mus- och kaninantikroppar och reaktionen visualiseras genom EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Vid användning med EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kod GV809) eller EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kod GV821) kan signalförstärkning av primära kaninantikroppar respektive primära musantikroppar uppnås. EnVision FLEX-reagens är avsedda för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Sammanfattning och förklaring EnVision FLEX visualiseringssystem är ett flexibelt system som ger optimal färgning på Dako Omnisinstrument, vid användning av protokollen som rekommenderas i detta produktblad. Före färgning utsätts formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt för avparaffinering och hydrering i instrumentet följt av värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) med användning av det målåtervinningsreagens som specificerats i produktbladet för den primära antikroppen. Den här satsen inkluderar EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848). Alternativt rekommenderas EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kod GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kod GV805). Vissa primära antikroppar kräver enzymatisk förbehandling av vävnad för optimal färgning i stället för HIER. Endogen peroxidas skall blockeras med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM841), som inkluderas i satsen. P.g.a. en effektiv tvättningsprocedur och närvaron av stabiliserande proteiner i Dako-reagenset är extra blockningssteg för att reducera icke-specifik bakgrundsfärgning inte nödvändigt. Wash Buffer (20x) (GC807) som finns tillgängligt som valfritt reagens rekommenderas. Primära antikroppar medföljer inte satsen. Vi rekommenderar användning av Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller Dako concentrated Primary Antibodies (se respektive produktblad för riktlinjer). EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kod GV809) kan användas för valfri signalförstärkning av primära kaninantikroppar. För signalförstärkning vid användning av primära antikroppar kan EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kod GV821) användas. Som en riktlinje: EnVision FLEX+ Rabbit LINKER ger 2 3- faldig signalförstärkning och EnVision FLEX+ Mouse LINKER ger 4 5-faldig signalförstärkning. Dako EnVision FLEX/HRP-reagens (DM842) i satsen består av en dextranryggrad, till vilken ett stort antal pepparrotsperoxidas- (HRP) molekyler och sekundära antikroppsmolekyler har kopplats. En unik kemi används för kopplingsreaktionen, vilken medger bindning av upp till 100 HRP-molekyler och upp till 20 antikroppsmolekyler per ryggrad. Substratsystemet i satsen består av två komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847), en koncentrerad diaminobensidin- (DAB) lösning och EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843) innehållande väteperoxid. Före användning måste EnVision FLEX DAB+ Chromogen spädas i EnVision FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet producerar en skarpt brun slutprodukt vid målantigenplatsen. Blandning av kromogen och buffert utförs automatiskt i rätt tid inuti Dako Omnisinstrumentet. Hematoxylin (kod GC808) rekommenderas för kontrastfärgning. Reagenset ger en klarblå nukleär färgning. De färgade vävnadssnitten skall monteras med monteringsmedium baserat på organiskt lösningsmedel. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 3/11

Reagens A. Medföljande material DM841 DM842 DM847 DM843 DM848 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (Dako Omnis) 2 x 22,5 ml, bruksfärdig fosfatbuffert innehållande väteperoxid, 15 mmol/l NaN 3 och tvättmedel. EnVision FLEX /HRP (Dako Omnis) 2 x 22,5 ml, bruksfärdig dextran kopplad till peroxidasmolekyler och sekundära antikroppsmolekyler från get mot kanin- och musimmunoglobuliner. I buffrad lösning innehållande stabiliseringsprotein och konserveringsmedel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 2 x 1 ml 3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid i organiskt lösningsmedel. Reagensfärgen kan variera från starkt lila till färglös, utan att påverka satsens prestanda. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 4 x 26 ml buffrad lösning innehållande väteperoxid och konserveringsmedel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 B. Nödvändigt material som inte medföljer Spädningsmedel för antikropp, t.ex. Dako Antibody Diluent (kod S0809) Clearify klargöringsmedel (kod GC810) Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller lämpligt utspädda koncentrerade primära kanineller musantikroppar från Dako Dako Omnis-instrument Dako Omnis instrumenttillbehör Dako Proteinase K, Ready-to-Use (vid behov) (kod S3020) FLEX Universal Negative Control, Rabbit, Ready-to-Use (kod GA600), FLEX Universal Negative Control, Mouse, Ready-to-Use (kod GA750), eller lämpligt negativt kontrollreagens för den primära antikroppen Hematoxylin (Dako Omnis) (kod GC808) eller passande hematoxylinreagens för kontrastfärgning Objektglas för mikroskop, t.ex. Dako FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020) Monteringsmedium (baserat på organiskt lösningsmedel) och täckglas Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) (kod GC807) 0.3 M Sulfuric Acid (kod GC203) (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 4/11

C. Valfritt reagens GV804 DM848 GV805 DM849 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50x koncentrerad citratbuffert, ph 6,1 GC807 DM851 GC808 DM846 GV809 DM845 GV821 DM844 GV825 DM847 + DM843 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) 20 x 175 ml, 20x koncentrerad Tris-buffrad saltlösning innehållande Tween 20, ph 7,6 (±0,1). Hematoxylin (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, bruksfärdig vattenhaltig lösning av hematoxylin. EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, bruksfärdig buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel. EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, bruksfärdig buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel. EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 2 x 1 ml 3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid i organiskt lösningsmedel. Reagensfärgen kan variera från starkt lila till färglös, utan att påverka satsens prestanda. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 4 x 26 ml buffrad lösning innehållande väteperoxid och konserveringsmedel. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 5/11

Försiktighetsåtgärder 1. För yrkesmässigt bruk. 2. EnVision FLEX /HRP innehåller material av djurursprung och man kan inte utesluta att spår av humant material kan vara närvarande beroende på tillverkningsprocedurer. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 3. Utsätt inte EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen eller EnVision FLEX Substrate Working Solution för starkt ljus. 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) innehåller 5-10% trometamol, 1-5% nonylfenol, etoxylat och 1-5% acetic acid, (ethylenedinitrilo)tetra-, disodium salt, dihydrate. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) är märkt: H319 H411 P280 Varning P273 P264 P305 + P351 + P338 P337 + P313 P501 Orsakar allvarlig ögonirritation. Giftigt för vattenlevande organismer med långtidseffekter. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Undvik utsläpp till miljön. Tvätta händerna grundligt efter användning. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 5. För EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, kan datablad för materialsäkerhet beställas för yrkesanvändare. 6. EnVision FLEX DAB+ Chromogen innehåller 1-5% bifenyl-3,3',4,4'- tetrayltetraammoniumtetraklorid och är märkt med: H350 H341 P201 P202 P280 Fara P308 + P313 P405 P501 Kan orsaka cancer. Misstänks kunna orsaka genetiska defekter. Inhämta särskilda instruktioner före användning. Använd inte produkten innan du har läst och förstått säkerhetsanvisningarna. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Vid exponering eller misstanke om exponering: Sök läkarvård. Förvaras inlåst. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. Som huvudregel får personer under 18 år inte arbeta med denna produkt. Användare måste vara ordentligt utbildade i lämplig arbetsprocedur, produktens farliga egenskaper samt nödvändiga säkerhetsinstruktioner. Ytterligare information finns i säkerhetsdatabladet. 7. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud. 8. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 6/11

Förvaring Förvara EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) vid 2 8 C. Förvara EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen och EnVision FLEX Substrate Buffer i mörker vid 2 8 C. Locket skall vara stängt under förvaring. EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen och EnVision FLEX Substrate Buffer förblir stabila i instrumentet i 75 timmar. Utspädd EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph och Low ph förblir stabila i instrumentet i 7 dagar. Kvarstående tid för produktens stabilitet i instrumentet kontrolleras av Dako Omnis-programvaran. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på flaskorna. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Kontakta Dakos tekniska support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och det misstänks vara något fel med produkten. Reagensförberedning A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848, kod GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM849, kod GV805) Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x), High ph (50x) eller Low ph (50x) koncentrat 1:50 i destillerat eller avjoniserat vatten. Följande procedur rekommenderas: 1. Fyll en Dako Omnis bulkflaska till fyllningslinjen med destillerat eller avjoniserat vatten (3,325 L). Se till att placera bulkflaskan på en horisontell yta före fyllning. 2. Töm en koncentratflaska med 68 ml EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) eller Low ph (50x) (Dako Omnis) i bulkflaskan. 3. Ta bort den avtagbara etiketten från koncentratflaskan och fäst den på bulkflaskan. 4. Sätt fast locket och vänd försiktigt flaskan upp och ner 2 3 gånger. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Den utspädda lösningen kan användas inom 7 dagar när den förvaras inuti Dako Omnis-instrumentet. Kassera lösningen om den är grumlig. A.2 Wash Buffer (20x) (DM851, kod GC807) Förbered en arbetslösning genom spädning av Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) koncentrat 1:20 i Dako Omnis bulkflaska med hjälp av destillerat eller avjoniserat vatten. Följande procedur rekommenderas för att minimera skumbildning: 1. Fyll en Dako Omnis bulkflaska till fyllningslinjen med destillerat eller avjoniserat vatten (3,325 L). Se till att placera bulkflaskan på en horisontell yta före fyllning. 2. Töm en 175 ml Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) koncentratflaska i bulkflaskan. 3. Ta bort den avtagbara etiketten från koncentratflaskan och fäst den på bulkflaskan. 4. Sätt fast locket och vänd försiktigt flaskan upp och ner 2 3 gånger. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Den utspädda lösningen kan användas inom 7 dagar när den förvaras inuti Dako Omnis-instrumentet. Kvarstående tid för produktens stabilitet i instrumentet kontrolleras av Dako Omnis-programvaran. Kassera lösningen om den är grumlig. A.3 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution innehållande DAB förbereds inuti Dako Omnisinstrumentet. Den automatiska processen blandar en del EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847) med 50 delar EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843). Substrate Working Solution kommer alltid att förberedas för ett rack (innehållande 1-5 objektglas) åt gången. De tillhandahållna volymerna är tillräckliga för att ladda 50 rack. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 7/11

Provtagning och preparation Proverna skall vara formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Fixeringstiden beror på fixativet och vävnadens typ/tjocklek. Exempelvis bör vävnadsblock med en tjocklek på 3 4 mm fixeras i neutralbuffrat formalin i 18 24 timmar. Den optimala tjockleken för paraffininbäddade snitt är 4 µm. Proven skall monteras på objektglas för mikroskop. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020). Snitten skall monteras på objektglasen så platta och släta som möjligt. Alltför många veck påverkar färgningsresultaten. OBS! Objektglasen för mikroskop måste ha en bredd som är lämplig för Dako Omnis-instrumentet. Se den grundläggande bruksanvisningen för Dako Omnis för en definition av användbara objektglas. Paraffinsnitt skall monteras från ett förvärmt vattenbad innehållande destillerat eller avjoniserat vatten. Vattenbadet får inte innehålla tillsatser (såsom gelatin, poly-l-lysin etc.). Snitten skall torkas genom uppvärmning, vanligen vid en temperatur på högst 60 C, i minst 60 minuter. För att tillförsäkra lämplig vidhäftning av snitten vid objektglasen är det viktigt att tappa ut vattnet under snitten före ugnstorkningsprocessen. Procedur EnVision FLEX visualiseringssystem har utvecklats för användning på Dako Omnis-instrumentet i kombination med Dako primära antikroppar. Den automatiska proceduren på Dako Omnis inkluderar avparaffinering av vävnadssnitt, värmeinducerad epitopåtervinning, immunhistokemisk färgning och kontrastfärgning av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Protokollstegen för de automatiska procedurerna kan visas, skrivas ut och redigeras i enlighet med den grundläggande och den avancerade bruksanvisningen för Dako Omnis. Förbehandlingsproceduren och färgningsprotokollet beror på antikroppen. Se produktbladet för den individuella Dako primära antikroppen. Läs noggrant den grundläggande bruksanvisningen för Dako Omnis innan du kör protokoll på ditt Dako Omnis-instrument. EnVision FLEX-protokollet är förprogrammerat i Dako Omnis-programvaran. Se den grundläggande bruksanvisningen för Dako Omnis för detaljerade instruktioner om att förbereda instrumentet för färgning och den avancerade bruksanvisningen för Dako Omnis för detaljerade instruktioner om protokoll. Färgningsprocedur När du använder FLEX RTU Primary Antibodies för Dako Omnis är det optimala färgningsprotokollet programmerat i Dako Omnis-programvaran. Se produktbladet för den individuella FLEX RTU Primary Antibody eller Dako concentrated Primary Antibody för optimal förbehandlingsmetod och optimala inkubationstider. För enkel inställning av nya protokoll rekommenderas användning av en av protokollmallarna som beskrivs nedan. Från Dako Omnis Workstation väljer du en av tre protokollmallar som innehåller de rekommenderade färgningsstegen och inkubationstiderna för EnVision FLEX visualiseringssystem (se tabell 2 för översikt): FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Protokollmallarna kan användas för att skapa anpassade protokoll för specifika primära antikroppar. Följande protokollsteg kan anpassas: Målåtervinningsreagenset (för värmeinducerad epitopåtervinning), temperatur och inkubationstid Primär antikropp och inkubationstid (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 8/11

Märkt polymerinkubationstid (endast reduktion) Kontrastfärgningsreagens och inkubationstid Användaren måste verifiera det applicerade protokollet. Kontakta Dakos tekniska service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Omnis-systemet. Tabell 2: Översikt över EnVision FLEX/FLEX+ protokollmallar. Fas Steg Reagens Färgningsprotokollmall FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Dewax Clearify klargöringsmedel ja ja ja Dewax Målåtervinning Färgning Kontrastfärgning Målåtervinning EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph eller Anpassat reagens 97±2 C* 30 min* 97±2 C* 30 min* 97±2 C* 30 min* Primär antikropp 20 min* 20 min* 20 min* 20 min* Endogen EnVision FLEX Peroxidase- 3 min 3 min 3 min enzymblockering Blocking Reagent Sekundärt EnVision FLEX+ Mouse eller - Mouse LINKER Rabbit LINKER reagens Rabbit LINKER 10 min 10 min Tvätt Wash Buffer (Dako Omnis) - tvätt tvätt Märkt polymer EnVision FLEX/HRP 20 min* 20 min* 20 min* Substrate Chromogen EnVision FLEX Substrate Working Solution 5 min 5 min 5 min Kontrastfärg Hematoxylin (Dako Omnis)* 3 min* 3 min* 3 min* Tvätt Avjoniserat vatten tvätt tvätt tvätt * Anpassning är möjlig. Efterfärgningsprocedur 1. När körningen är klar tar du bort objektglasracket från Unloading Station (Uttagningsstationen) och överför racken till färskt avjoniserat vatten. 2. Dehydrera, klargör och montera med permanent monteringsmedium. Kvalitetskontroll Alla färgningskörningar ska innefatta ett känt positivt kontrollprov för att säkerställa korrekta prestanda för allt använt reagens. Om de positiva kontrollproverna inte uppvisar lämplig positiv färgning, skall märkningen av testproven anses ogiltiga. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 9/11

Ett negativt kontrollreagens skall användas med varje prov för att identifiera eventuell icke-specifik färgning. Om icke-specifik färgning inte tydligt kan differentieras från den specifika färgningen, skall märkningen av testproven anses ogiltig. Resultattolkning Substrate Working Solution innehållande diaminobensidin, ger en brun färg vid målantigenplatsen, som känns igen av den primära antikroppen. Den bruna färgen skall vara närvarande på det positiva kontrollprovet vid den förväntade lokaliseringen av målantigenen. Om icke-specifik färgning är närvarande, kommer detta att observeras som en diffus, brunfärgning på objektglasen som behandlats med det negativa kontrollreagenset. Kärnor färgas blå av hematoxylin-kontrastfärgen. Begränsningar 1. Endast för automatisk användning på Dako Omnis-instrument. När du utför färgning med hjälp av Dako koncentrerade primära antikroppar måste den optimala proceduren bestämmas och verifieras av användaren. 2. Endast för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Vid användning av frysta snitt eller cellutstryk, måste den optimala proceduren fastställas och verifieras av användaren, om detta inte specificerats i produktbladet för den specifika Dako primära antikroppen. Ändringar av proceduren kan ha påverkat antalet tester som medföljer satsen. (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 10/11

Symbolförklaringar Katalognummer Temperaturbegränsning Batchkod Faropiktogram enligt GHS (se avsnittet för försiktighetsåtgärder) Medicinsk enhet för in vitro-diagnostik Ska förvaras i mörker Använd före Faropiktogram enligt GHS (se avsnittet för försiktighetsåtgärder)) Läs bruksanvisningen Innehåller tillräckligt för <n> tester Tillverkare Dako EnVision Systems täcks av amerikanskt patent 5,543,332 och europeiskt patent 594,772. Tillverkat av: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Danmark Tel. +45 44 85 95 00 Fax +45 44 85 95 95 www.dako.com (128745-001) P04123SE_001_GV823/2015.05 p. 11/11