3 - SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING

Transkript

1 PLATELIA ASPERGILLUS Ag 1 platta Platelia Aspergillus Ag är en immunoenzymatisk sandwich mikroplatt-test för detektering av Aspergillus galactomannan-antigen i serumprover och bronksköljvätskeprover (bronkoalveolärt lavage) (BAL) från vuxna och barn /1 1 AVSEDD ANVÃNDNING Platelia Aspergillus Ag är en immunoenzymatisk sandwich mikroplatt-test för detektering av Aspergillus galactomannanantigen i serumprover och bronksköljvätskeprover (bronkoalveolärt lavage) (BAL) från vuxna och barn. Platelia Aspergillus Ag är en test som, när den används tillsammans med andra diagnosmetoder såsom mikrobiologisk odling, histologisk undersökning av biopsier och radiografiska belägg kan hjälpa till att diagnostisera invasiv aspergillos. 2 - BRUKSANVISNING Platelia Aspergillus Ag är en immunoenzymatisk sandwich mikroplatt-test för detektering av Aspergillus galactomannanantigen i serumprover och bronksköljvätskeprover (bronkoalveolärt lavage) (BAL) från vuxna och barn. Platelia Aspergillus Ag är en test som, när den används tillsammans med andra diagnosmetoder såsom mikrobiologisk odling, histologisk undersökning av biopsier och radiografiska belägg kan hjälpa till att diagnostisera invasiv aspergillos. 3 - SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Aspergillus -infektioner startar vanligen i lungan eftersom den är ingångsporten efter inandning av Aspergillus-sporer som förekommer i omgivningen. Invasiva former, som har visat en ökande förekomst under de senaste 1 åren, utgör de allvarligaste infektionerna. De uppträder huvudsakligen i neutropeniska patienter (efter anti-cancerbehandling) och i patienter som behandlats med immunosuppressanter (organtransplantationer, i synnerhet benmärgstransplantation) och kortikosteroider 1. Aspergillus isoleras sällan från blodkultur. Diagnosen baseras ofta på icke-specifika diagnostiska eller radiologiska belägg (kliniska symptom, CT-scan, bröströntgen, etc.) För närvarande verkar testen för löslig galactomannan-antigen i serum vara en serologisk metod som kan hjälpa till att diagnostisera Invasiv aspergillos 9, 12, 23, 54, 62. Dessutom har för transplantatmottagare av solida organ, detektering av galaktomannan-antigen i bronkoalveolärt lavage (BAL) visat sig underlätta diagnosen invasiv aspergillos i denna population 8,17, TILLVÄGAGÅNGSSÄTT 45 Platelia Aspergillus Ag är en enstegs immunoenzymatisk sandwich mikroplatt-test som detekterar galactomannan i humanserum och BAL-vätska. Testen använder råttans EBA-2 monoklonala antikroppar, som är riktade direkt mot Aspergillus galactomannan och har kännetecknats vid tidigare studier 25, 46. De monoklonala antikropparna används (1) för att belägga provbrunnarna i mikroplattan och binda antigenen och (2) för att detektera antigenbindningen till den sensibiliserade mikroplattan (konjugatreagens: peroxidaslänkade monoklonala antikroppar). Serum- eller BAL-vätskeprover värmebehandlas i närvaro av EDTA för att dissociera immuna komplex och för att lösa ut proteiner som möjligen kan störa testen 24. De behandlade proverna och konjugaten tillsätts i brunnarna belagda med monoklonala antikroppar och inkuberas. En monoklonal antikropp - galactomannan - monoklonal antikropp / peroxidaskomplex bildas i närvaro av galactomannan-antigen. Remsorna tvättas för att avlägsna allt obundet material. Sedan tillsätts substratlösningen, som reagerar med komplexen bundna till brunnen för att bilda en blå färgreaktion. Enzymreaktionen stoppas genom tillsats av syra, som ändrar den blåa färgen till gul. Absorbansen (optisk densitet) hos prover och kontroller bestäms med en spektrofotometer inställd på våglängd 45 och 62/63 nm. 5 - REAGENSER Platelia Aspergillus Ag: produkt nr (96 Tester) Förvara satsen vid 2-8 C. Låt alla reagenser bli rumstempererade (18-25 C) före användning. Återför alla reagenser tilll 2-8 C omedelbart efter användning. Återför oanvända remsor/plattor till påsen och försegla igen. Avlägsna inte torkmedlet. Efter spädning kan arbetstvättlösningen sparas i 14 dagar vid 2-3 C. Alla reagenser skall användas inom 8 veckor efter öppning. Reagenser levereras i tillräcklig mängd för genomförande av 96 tester, maximalt 9 tillfällen. 1

2 R1 R2 R3 R4 R5 Komponent Innehåll Mängd Microwell Strip Plate Concentrated Washing Solution Negative Control Serum Cut-off Control Serum Positive Control Serum Mikroplatta: - 96 brunnar (12 remsor med 8 brunnar vardera) belagda med anti-galaktomannan monoklonala antikroppar - Remsor märkta 85 Koncentrerad tvättlösning (2X): - Tris NaCl buffert (ph 7,4) - 2 % Tween 2 - Konserveringsmedel:,4% ProClin TM 3 Negativt kontrollserum: - Negativt humanserum - Negativt för anti-hiv-1, anti-hiv-2, anti-hcv antikroppar och HBs Ag - Konserveringsmedel:,3% ProClin TM 3 Cut-off-kontrollserum: - Human serum innehållande galactomannan - Negativt för anti-hiv-1, anti-hiv-2, anti-hcv antikroppar och HBs Ag - Konserveringsmedel:,3% ProClin TM 3 Positivt kontrollserum: - Human serum innehållande galactomannan - Negativt för anti-hiv-1, anti-hiv-2, anti-hcv antikroppar och HBs Ag - Konserveringsmedel:,3% ProClin TM 3 R6 Conjugate Konjugat (användningsklart): - Anti-galactomannan monoklonal antikropp/peroxidas-märkt - Konserveringsmedel:,3% ProClin TM 3 R7 Sample Treatment Solution Provbehandlingslösning (användningsklar): - EDTA-syralösning Kromogen TMB-lösning (användningsklar): R9 Chromogen:TMB Solution - 3,3,5,5 -tetramethylbenzidine (<,1%) - H 2 O 2 (<1, %) R1 Stopping Solution Stopplösning (användningsklar): - 1 N svavelsyralösning (H 2 SO 4 ) Anmärkning: TMB (3,3,5,5 -tetramethylbenzidine) är en icke-karcinogen och icke-mutagen kromogen för peroxidas. 1 Platta / 12 x 8 Brunnar 1 x 7 ml 2 x 1,7 ml 2 x 1,7mL 2 x 1,7 ml 1 x 8 ml 1 x 13 ml 1 x 28 ml 1 x 28 ml 6- VARNINGAR FÖR ANVÄNDARE 1. För in vitro-diagnostikanvändning. 2. Endast för yrkesmässigt bruk. 3. Användning av testsatsen med andra prover än humanserum och BAL-vätska rekommenderas inte. 4. Den positiva kontrollen, Cut-off-kontrollen och den negativa kontrollen tillverkas från humant serum som har testats och visat sig vara icke-reaktivt för HBsAg och antikroppar mot HIV-1, HIV-2 och HCV med CE-märkta tester. Alla reagenser skall dock hanteras som om de kunde överföra infektion. Alla tester skall genomföras i enlighet med OSHA-standarden för Blodburna patogener, Biosäkerhetsnivå 2 eller annan lämplig biosäkerhetspraxis. 5. Bär skyddskläder, inklusive laboratorierock, ögon/ansiktskydd och engångshandskar (syntetiska, icke-latex-handskar rekommenderas) och hantera satsens reagenser och patientproven med erforderlig god laboratoriepraxis. Tvätta händerna noggrant efter genomförande av testen. 6. Pipettera inte med munnen. 7. Undvik att röka, dricka eller äta i områden där prover eller satsreagenser hanteras. 8. Undvik stänk av prover eller lösningar 9. Biologiska spill som inte innehåller syra skall noggrant torkas av med ett effektivt desinfektionsmedel. Desinfektionsmedel som kan användas innefattar (men är inte begränsade till) en lösning med 1 % blekmedel (,5 % lösning av natriumhypoklorit), 7 % etanol, eller,5 % Wescodyne Plus. Produkter som använts för att torka upp spill kan kräva hantering som biofarligt medicinskt avfall. OBSERVERA: Placera inte lösningar innehållande blekmedel i autoklaven. 1. Spill som innehåller syra skall absorberas (torkas upp) eller neutraliseras med natriumbikarbonat och området sköljas och torkas torrt; om det innehållit biofarligt material, torka området med ett av de kemiska desinfektionsmedlen. 11. Avfallshantera alla prover och ämnen som använts för att utföra testen som om de innehöll en infekterande substans. Kemiska och biofarliga avfall från laboratoriet måste hanteras och omhändertas enligt alla gällande lokala, regionala och nationella bestämmelser. 2

3 12. Mer information om risk- och försiktighetsinformation för vissa kemiska komponenter i testkitet hittar du på etiketterna och i den information som finns sist i bruksanvisningen. Säkerhetsdatabladet (SDS) finns tillgängligt på Säkerhetsdatablad (MSDB) finns tillgängligt på begäran. 7- FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER FÖR ANVÄNDARE 1. FRUSNA SERUM- ELLER BAL-VÄTSKEPROVER FÖRVARADE I OKÄNDA FÖRHÅLLANDEN KAN GE FELAKTIGA POSITIVA RESULTAT TILL FÖLJD AV KONTAMINERING MED SVAMPAR OCH/ELLER BAKTERIER. 2. Använd inte satser eller satsreagenser efter det angivna sista användningsdatumet. 3. Blanda inte reagenser från andra satser som har olika satsnummer, med undantag av tvättlösningen (R2, identifiering*: 2x grönfärgad), Kromogenen (R9, identifiering*: TMB turkosblå) och stopplösningen (R1, identifiering*: 1N röd), under förutsättning att dessa reagenser är helt ekvivalenta och att samma satsnummer används inom en given testkörning. *på flasketiketten ANMÄRKNING: Tvättlösningen (R2, identifierad* i grönt som 2x) får inte blandas med tvättlösningen (R2, identifierad* i blått som 1X) tillhandahållen i Bio-Rads reagenssatser. * på flasketiketten 4. Låt alla reagenser stå i rumstemperatur i minst 3 minuter före användning. 5. Blanda noggrant varje reagens före användning. 6. Blanda noggrant den koncentrerade tvättlösningen (R2) före preparering av arbetstvättlösningen och se till att undvika mikrobiell kontaminering. 7. Utför ingen test i närvaro av reaktiva ångor (syra-, alkali-, aldehydångor) eller damm som kan förändra konjugatets enzymaktivitet. 8. För manuell pipettering av kontroller och prover, använd individuella pipettspetsar för att förhindra överföring av prover. 9. För att säkerställa ordentlig tvättning av brunnarna, utför det rekommenderade antalet tvättcykler och se till att alla brunnarna fylls helt och sedan töms helt. Tvättning bör inte utföras manuellt. 1. Låt inte mikroplattan torka mellan slutet av tvättcykeln och tillsatsen av reagens. 11. Använd inte samma behållare för konjugat- och substratlösningarna. 12. Låt inte konjugat eller kromogena TMB-lösningar komma i kontakt med metall eller metalljoner. 13. Undvik exponering av kromogen TMB-lösning mot starkt ljus vid förvaring eller inkubation. Låt inte de kromogena lösningarna komma i kontakt med en oxiderande substans. 14. Se till att stopplösningen inte kommer i kontakt med någon oxiderande substans. Låt inte stopplösningen komma i kontakt med metall eller metalljoner. 15. Använd rena, dammfria materiel (rör, spetsar, behållare, etc.) för att minimera risken för kontaminering med Aspergillussporer från omgivningen. Eftersom galaktomannan är värmestabil, garanterar inte sterilisering av material frånvaro av kontaminerande antigen. Pyrogenfria materiel är optimala, men standardmaterial kan användas med lämpliga försiktighetsåtgärder. 16. Begränsa exponering av lösningar (serum, BAL-vätska, provbehandlingslösning, konjugat) eller öppna behållare (plattor, rör, pipetter) mot luft. 17. Häll inte tillbaka oanvänt konjugat i originalbehållaren. 18. Den kromogena TMB-lösningen måste vara färglös. Förekomsten av en blå färg efter spädning indikerar att reagensen är kontaminerad och inte bör användas. Avyttra och iordningställ färsk reagens. 8- REAGENSPREPARERING OCH -FÖRVARING Mikrobrunn remsplatta (R1) Varje ram innehåller 12 remsor och är förpackade i en påse. Klipp upp påsen med sax just under fogen. Öppna påsen och ta ut ramen. Sätt tillbaka ramen som innehåller de oanvända remsorna i originalpåsen igen. Tillslut omsorgsfullt påsen och förvara vid +2-8 C. Efter att den vakuumförpackade påsen har öppnats, förblir remsorna, om de sedan förvaras vid +2-8 C i sin noggrant tillförseglade originalpåse, stabila under 8 veckor. Kontrollera att torkmedlet fortfarande finns på plats. 3

4 Tvättlösning (R2) Preparera arbetstvättlösning efter behov genom att tillsätta en del koncentrerad tvättlösning (R2) till 19 delar sterilt, avjoniserat eller destillerat vatten. Arbetstvättlösningen kan förvaras i 14 dagar vid 2-3 C. Preparera tillräcklig mängd arbetstvättlösning för att fullborda provomgången (8 ml för en remsa: 4 ml R ml destillerat vatten). Efter öppning håller sig den koncentrerade tvättlösningen, förvarad vid +2-3 C i frånvaro av kontaminering, stabil tills det sista användningsdatum som anges på etiketten. Negativt kontrollserum (R3), Cut-off-kontrollserum (R4) och Positivt kontrollserum (R5) Kontrollerna måste värmebehandlas med EDTA-syralösning (R7) som patientprover, för att också övervaka behandlingen. Efter öppning är dessa reagenser, förvarade vid +2-8 C, stabila i 8 veckor, i frånvaro av kontaminering. Konjugat (R6), provbehandlingslösning (R7), kromogen: TMB-lösning (R9) Dessa reagenser är klara för användning. Efter öppning är dessa reagenser förvarade vid +2-8 C, stabila i 8 veckor i frånvaro av kontaminering. Stopplösning (R1) Denna reagens är klar för användning. Efter öppning håller sig denna reagens, förvarad vid +2-8 C. stabil tills det sista användningsdatum som anges på etiketten om det inte förekommer någon kontaminering. 9- PROVINSAMLING Denna test utförs på serum eller BAL-vätska. I. SERUM Samla in blodprover enligt standardiserade laboratoriemetoder. Serumprover måste vara okontaminerade med svampsporer och/eller bakterier. Transportera och förvara prover i tilltäppta rör, oexponerade mot luft. Oöppnade prover kan förvaras vid 2-8 C i upp till 5 dagar före testning. Efter inledande öppning, kan prover förvaras vid 2-8 C i 48 timmar före testning. För längre tids förvaring, förvara serumet vid -7 C. Serumprover kan utsättas för maximalt 4 nedfrysnings-/upptiningscykler. Tidigare frysta prover skall blandas ordentligt efter upptining före testning. Resultaten påverkas inte av prover som innehåller 2 mg/l bilirubin, lipemiska prover som innehåller motsvarande 2 g/l triolein (triglycerid) eller hemolyserade prover innehållande 165 mg/l hemoglobin. Störningar beroende på överskott av äggvitämnen har inte testats. Dekomplementera inte serumen. II. BAL-VÄTSKA Samla in BAL-vätskeprover enligt standardiserade laboratoriemetoder. BAL-vätskeprover måste samlas upp i steril saltlösning och kan testas på rena prover (i befintligt skick) eller supernatanter från centrifugerade prover (1 vpm i 1 min) innan man går vidare med behandling av provet enligt avsnitt 1. BAL-vätskeprover får inte vara kontaminerade med svampsporer och/eller bakterier. Transportera och förvara prover i tilltäppta rör, oexponerade mot luft. Efter den första öppningen, kan proverna förvaras vid 2-8 C i upp till 24 timmar. Vid längre förvaring, förvara BAL-proverna nedfrysta (-2 C eller lägre) i upp till 5 månader. BAL-prover kan utsättas för maximalt 4 nedfrysnings-/upptiningscykler. Tidigare frysta prover skall blandas ordentligt efter upptining före testning. 1 - FÖRFARANDE Tillhandahållet materiel Se REAGENS-avsnitt. Materiel och substanser som krävs men inte ingår 1. Destillerat eller avjoniserat vatten, för spädning av koncentrerad tvättlösning. 2. Läskpapper. 3. Engångshandskar. 4. Skyddsglasögon. 5. Natriumhypoklorit (blekmedel) och natriumbikarbonat. 6. Pipetter eller multipipetter ställbara eller fasta, för mätning och dosering av 5 µl, 1 µl, 3 µl, och 1 µl. 7. 1,5 ml mikrocentrifugrör av polypropylen med lufttäta proppar, som tål värmning upp till 12 C (värmeblock) eller 1 C (kokande vattenbad). - Skruvhattar och rör: 1,5 ml Koniska Rör, ELLER - Snäpphattsrör: EZ Mikroteströr, 1,5 ml, - Mikro-rörhattlås. Dessa lås tätar snäpphattsrören ordentligt så att hattarna inte kan öppnas vid temperatur- och tryckändringar och gör också att rören är lätta att lyfta ut ur värmeblocken eller det kokande vattenbadet. 8. Laboratoriebänkcentrifug för 1,5 ml polypropylenrör som kan uppnå 1 g (Brinkman Cat. # eller VWR Scientific Cat. # eller motsvarande. 4

5 9. Om värmeblock används för behandling av serumet/bal-vätskan: - Värmeblock. Följande värmeblocksmodeller rekommenderas: - Enkelblocksmodell: Grant Cat. # QBD-2L - utanför USA: Grant Cat. # QBD1 distribuerad av VWR under Cat. # 46-74) - Tvåblocksmodell: Grant Cat. # QBD-2L - utanför USA: Grant Cat. # QBD2 distribuerad av VWR under Cat. # 46-76) - Block för värmeblock: båda värmeblocken (QBD-1L, QBD1 and QBD-2L, QBD2) måste användas med Grant block Cat. # QB-E1 distribuerat utanför USA av VWR under Cat. # Om kokande vatten används för behandling av serumet/bal-vätskan: - Runt, flytande mikrocentrifugrack för en 1 l-bägare (i USA: VWR Scientific Cat. # eller Nalgene Cat # eller motsvarande). - Kokande vattenbad vid 1 C. 1. Vortex-omrörare. 11. Mikroplatt-inkubator vid 37 ± 1 C. 12. Halvautomatisk eller automatisk mikroplattstvättare. 13. Mikroplattläsare utrustad med 45 nm- och 62/63 nm-filter. Kommentarer rörande tillvägagångssätt Negativa, positiva kontroller och Cut-off-kontroller måste testas varje provomgång för att bekräfta testresultaten. Behandling av serum/bal-vätska Alla kontrollserum: negativt (R3), cut-off (R4) och positivt (R5) måste bearbetas samtidigt med serum/bal-vätskeprov: 1. Pipett 3 µl i varje testserum/bal-vätska och kontroll i individuella 1,5 ml polypropylenrör. 2. Tillsätt 1 µl av provbehandlingslösning (R7) i varje rör. 3. Blanda om i rören ordentligt genom kraftig omröring eller virvelbildning. Tillslut röret tätt för att förhindra öppning under värmning, 4. Värmeblock Värmerör i 6 minuter i ett värmeblock vid 12 C. Rör får placeras i blocket först när den föreskrivna temperaturen nåtts (*). ELLER Vattenbad Vid användning av kokande vattenbad: värm rör i 3 minuter vid 1 C (*). Rören får sättas ner i vattenbadet först när den föreskrivna temperaturen uppnåtts. 5. Avlägsna försiktigt heta rör från värmeblocket eller det kokande vattenbadet och placera dem i en centrifug. Centrifugera rören vid 1 x g i 1 minuter. Supernatanten används för detektering av galaktomannan-antigenen. 6. Testa supernatanterna med följande metod. Efter preparering kan supernatanten avlägsnas och förvaras vid 2-8 C i upp till 48 timmar före testning. Om analys av resultaten indikerar att omtestning krävs, måste en annan lika stor provmängd prepareras för testning. (*) Strikt kontroll av den föreskrivna temperaturen och den föreskrivna vändningstiden liksom användning av rekommenderat materiel är avgörande för framgången med testen. Lita inte på temperaturvärdet som visas på apparaten, utan kontrollera att temperaturen uppfyller föreskrifterna med hjälp av en kalibrerad termometer som sätts in i ett rör innehållande mineralolja: 12 C måste nås inuti röret i ett värmeblock och 1 C ett kokande vattenbad. EIA-procedur Uppfyll strikt det föreslagna protokollet. Uppfyll God Laboratoriesed 1. Låt alla reagenser stå i rumstemperatur ( C) i minst 3 minuter före användning. 2. Preparera arbetstvättlösningen. 3. Preparera en tabell för identifiering av testserum/bal-vätskeprov och kontroller i mikroplattan. Använd en brunn för det Negativa kontrollserumet (R3), två brunnar för Cut-off-kontrollserumet (R4), och en brunn för det Positiva kontrollserumet (R5) A R5 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R3 S8 E S1 S9 F S2 S1 G S3 S11 H S4 S12 4. Avlägsna platthållaren och mikrobrunnsremsorna (R1) från plattpåsen. Sätt tillbaka alla remsor som inte skall användas i påsen, med torkmedlet och täta påsen igen. 5. Blanda innehållet i konjugatflaskan (R6) genom upp-och-ned-vändning före användning. Tillsätt 5 µl konjugat (R6) i varje brunn. Tillsätt sedan 5 µl av behandlat serum/bal supernatant i varje brunn, så som beskrivs ovan. Tillsätt inte serum/bal-vätskeprover i brunnarna före konjugatet. 5

6 6. Täck platta med plattförseglare, eller på annat sätt för att förhindra förångning, och se därvid till att hela ytan täcks och är vattentät. 7. Inkubera mikroplattan i en torr mikroplattsinkubator i 9 ± 5 minuter vid 37 C (± 1 C). 8. Avlägsna plattförseglaren. Sug upp innehållet i alla brunnar i en avfallsbehållare (innehållande natriumhypoklorit). Tvätta plattan 5 gånger med en mikroplattstvättare (med hjälp av 8 µl arbetstvättlösning). Efter den sista tvättningen, vänd på mikroplattan och knacka försiktigt på läskpapper för att avlägsna kvarvarande vätska. 9. Tillsätt snabbt 2 µl kromogenlösning TMB (R9) i varje brunn och undvik att exponera mot starkt ljus. 1. Inkubera mikroplattan i mörker vid rumstemperatur ( C) i 3 ± 5 minuter. Använd inte vidhäftande film under denna inkubation. 11. Tillsätt 1 µl stopplösning (R1) till varje brunn, med användning av samma ordningsföljd för tillsättning av kromogen TMB-lösning. Blanda väl. 12. Torka noga av bottnarna på varje platta. 13. Läs av den optiska densiteten i varje brunn vid 45 nm (referensfilter på 62/63 nm). Mikroplattorna måste läsas av inom 3 minuter efter tillsats av stopplösning. 11- KVALITETSKONTROLL (GILTIGHETSKRITERIUM) Cut-off-kontroll: O.D. för varje Cut-off-kontrollserum måste vara,3 och,8. Positiv kontroll: Indexet för det positiva kontrollserumet måste vara större än 1,5. OD Positiv kontroll (R5) I = > 1.5 Genomsnittlig Cut-off-kontroll OD Negativ kontroll: Indexet för det negativa kontrollserumet måste vara mindre än,4. OD Negativ kontroll (R3) I = <.4 Genomsnittlig Cut-off-kontroll OD Om någon av kontrollerna inte uppfyller det giltighetskriterium som beskrivs ovan blir testet ogiltigt, och patientprovresultaten skall då inte rapporteras. Operatören kan besluta att upprepa testet, efter granskning av proceduren, eller kontakta tillverkaren för att få hjälp. Om en upprepat test utförs, skall en ny, lika stor mängd av samma prov användas vid det upprepade testet. Beräkningsexempel: Prov Absorbans (OD) Negativ kontroll (R3) OD.116 Cut-off-kontroll (R4) OD Positiv kontroll (R5) OD Beräkningar Genomsnittligt Cut-off-kontrollvärde För att beräkna genomsnittlig Cut-off-kontroll (R4) OD, lägg ihop OD-värdena för Cut-off-kontrollreplikaten och dividera resultatet med 2: ( ) 2 =.523 Negativt Kontrollindex För att beräkna index för den negativa kontrollen, dividera OD för den negativa kontrollen med genomsnittlig Cut-off-kontroll OD:.116 I = = Positivt kontrollindex För att beräkna index för den positiva kontrollen, dividera OD för den positiva kontrollen med genomsnittlig Cut-off-kontroll OD: I = = Giltighet I exemplet ovan: Varje Cut-off-kontroll OD är,3 och,8, som indikerar att Cut-off-kontrollen är giltig. Indexet för den negativa kontrollen är <,4, vilket anger att den negativa kontrollen är giltig. Indexet för den positiva kontrollen är > 1,5, vilket anger att den positiva kontrollen är giltig. Testkörningen i detta exempel betraktas som giltig eftersom resultaten uppfyller giltighetskriteriet för varje kontroll. 6

7 12 - TOLKNING AV RESULTAT Närvaron eller frånvaron av galaktomannan-antigen i testprovet bestäms genom beräkning av ett index för varje patientprov. Indexet (I), är OD-värdet för provet dividerat med den genomsnittliga optiska densiteten i brunnar innehållande Cut-offkontrollserum. Beräkning av Cut-off-kontrollens genomsnittliga optiska densitet: Lägg ihop de optiska densiteterna för de två brunnar som innehåller Cut-off-kontrollserum (R4) och dividera totalvärdet med 2. Beräkning av ett index (I) för varje testprov: Beräkna följande kvot för varje testprov: OD-Prov I = Genomsnittlig Cut-off-kontroll OD Tolkning av serum/bal-vätska med ett index <,5: Serum/BAL-vätska med ett index <,5 betraktas som negativt för galaktomannan-antigen. Anmärkning: Ett negativt resultat kan ange att patientens resultat ligger under den detekterbara nivån för testet: Negativa resultat utesluter inte diagnosen invasiv aspergillosis. Upprepat testrekommenderas om resultatet är negativt, men sjukdomen misstänks föreligga. Tolkning av serum/bal-vätska med ett index,5 Serum/BAL-vätska med ett index,5 betraktas som positiv för galaktomannan-antigen. För alla positiva patienter rekommenderas att testet upprepas med en ny, lika stor mängd av samma prov (serum/bal). Anmärkning: Ett absorbansvärde på mindre än, kan indikera ett metod- eller instrumentfel som bör utvärderas. Det resultatet är ogiltigt och provet måste köras om. Regelbunden screening (två gånger per vecka) av serumprover för hög-risk-patienter rekommenderas för att öka känsligheten och tidig positiv reaktion i testen. Anmärkning: Platelia Aspergillus Ag är avsedd att användas som en hjälp vid diagnosen av Invasiv aspergillosis. Positiva resultat som erhålls med Platelia Aspergillus Ag skall betraktas tillsamman med andra diagnosmetoder såsom mikrobiologisk odling, histologisk undersökning av biopsier och radiografidokumentation. Beräkningsexempel: Prov Absorbans (OD) Negativ kontroll (R3) OD.116 Cut-off-kontroll (R4) OD Positiv kontroll (R5) OD Patientprov #1.134 Patientprov #2.436 Patientprov # Beräkningar Se Kvalitetskontrollavsnittet (Giltighetskriterium) för ett exempel på beräkningar för att bestämma provningskontroller. Genomsnittligt Cut-off-kontrollvärde För att beräkna genomsnittlig Cut-off-kontroll (R4) OD, lägg ihop OD-värdena för Cut-off-kontrollreplikaten och dividera resultatet med 2: ( ) 2 =.523 Patientprov #1 För att beräkna index för Patientprov #1, dividera OD för Patientprov #1 med genomsnittlig Cut-off-kontroll OD:.134 I = = I detta exempel är Patientprov #1 negativt, eftersom indexet,26 är <,5. Patientprov #2 För att beräkna index för Patientprov #2, dividera OD för Patientprov #2 med genomsnittlig Cut-off-kontroll OD:.436 I = = I detta exempel är Patientprov #2 positivt, eftersom Indexet,83 är,5. Patientprov #3 För att beräkna index för Patientprov #3, dividera OD för Patientprov #3 med genomsnittlig Cut-off-kontroll OD: I = = I detta exempel är Patientprov #3 positivt, eftersom Indexet 2,29 är,5. Var god se tolkning av positiva resultat i avsnitt 12. 7

8 13- METODENS BEGRÄNSNINGAR 1. En negativ test av serum och/eller BAL-prover kan inte utesluta diagnosen Invasiv aspergillos. Serumprover från patienter med risk för Invasiv aspergillos skall testas två gånger i veckan. 2. Platelia Aspergillus Ag-metoden och tolkningen av resultaten måste följas upp vid testning av prover avseende förekomsten av galaktomannan-antigen. Användaren av satsen tillråds att noggrant läsa igenom förpackningsbilagan innan testen genomförs. I synnerhet testförfarandet måste följas noggrant för prov- och reagenspipettering, plattvättning och tidfasning av inkubationsstegen. 3. Om prover eller reagens inte tillsätts enligt metodanvisningarna kan man få ett falskt negativt testresultat. Upprepad testning av extraprover skall övervägas när det föreligger klinisk misstanke om Invasiv aspergillosis eller metodfel. 4. Kontaminering av negativa patientprovbrunnar från positiva kontroll-/patientprovbrunnar är möjlig om innehållen i en brunn spiller över i en annan brunn på grund av ovarsam hantering av mikroplattan eller bristfällig pipetteringsteknik vid tillsats av reagenser. 5. Prestanda hos Platelia Aspergillus Ag har inte utvärderats med neonatala prover. Det rapporteras en högre förekomst av falskt positiva galactomannan-resultat i den europeiska litteraturen i prover från neonatal population 13, 15, 33, Platelia Aspergillus Ag kan uppvisa minskad detektering av galaktomannan hos patienter med kronisk granulomatös sjukdom (CGD) och Jobs-syndrom 56, Samtidig användning av mögelaktiv svampinfektionsbehandling hos vissa patienter med Invasiv aspergillos kan resultera i minskad känslighet för Platelia Aspergillus Ag 3, Platelia Aspergillus Ag har inte utvärderats för användning med plasma eller andra provtyper såsom urin eller CSF. 9. Prestanda hos Platelia Aspergillus Ag har inte fastställts för manuell avläsning och/eller visuell resultatbestämning. 1. Andra släkter av svampar, såsom Penicillium, Alternaria Paecilomyces, Geotrichum och Histoplasma har visat reaktivitet med råtta, EBA-2 monoklonala antikroppar som används i testen för detektering av Aspergillus galactomannan. Histoplasmos skall beaktas i endemiska områden inklusive delar av Förenta Staterna 36, 5, Korsreaktivitet i BAL-vätskeprov med Mycoplasma pneumoniae eller bedövningsmedel/smörjmedel som används för att bedöva hals/svalgområdet för aspirationsprocessen har inte utvärderats. 12. Positiva reaktioner utan några kliniska tecken: Följande skall beaktas med avseende på tidig detektering av galactomannan-antigen i serum eller BAL, före uppkomst av kliniska eller radiologiska tecken. Positiva testresultat utan kliniska tecken erhålls vanligen och de har visat sig motsvara "verkligt positiva" tester hos patienter för vilka påvisad eller sannolik diagnos av Invasiv aspergillos har upprättats senare 3. I vissa fall bör dock specifika faktorer tas i beaktande vid tolkning av testen: a. Positiva testresultat utan några kliniska tecken har rapporterats, i synnerhet hos små barn 44. Även om dessa fall kan kopplas till verklig cirkulation av Aspergillus antigener, kan de flesta fall betraktas som falskt positiva 7. b. Galactofuranos har påvisats i olika livsmedel, i synnerhet sädesslag, spannmålsprodukter och krämefterrätter 1, 27. Till skillnad från human bröstmjölk, innehåller bröstmjölksersättningar ofta höga koncentrationer av galactomannan 13. Kostfaktorer måste därför tas i beaktande vid tolkningen av utvecklingen av antigemeni hos små barn och mer allmänt hos patienter med en förändrad tarmbarriär 6, 13. Alla fall av positiv antigenemi som inte åtföljs av kliniska tecken skall tolkas ännu försiktigare i denna patientpopulation. c. Det har rapporterats om positiva galaktomannan-testresultat hos patienter som får piperacillin / tazobactam. Det har också rapporterats om vissa satser av piperacillin / tazobactam som har visat sig vara positiva för galaktomannanantigen. De positiva testresulten för patienter som får piperacillin / tazobactam bör därför tolkas försiktigt och bekräftas med andra diagnosmetoder. Detektering av galaktomannan har också rapporterats i vissa satser av amoxicillin kopplade till klavulaniska sura parenterala beredningar. Semi-syntetiska ß-lactam-behandlingar bör därför beaktas vid tolkning av testen 1, 3, 32. Eftersom Platelia Aspergillus Ag hur som helst kan detektera galactomannan-antigen långt innan kliniska eller radiologiska tecken uppträder, kan förekomst av Invasiv aspergillos inte uteslutas. Därför bör patienter som behandlas med piperacillin/tazobactam med positiva testresultat följas upp noggrant. d. Positiva reaktioner i frånvaro av kliniska tecken kan iakttas hos patienter som fått produkter innehållande galactomannan, antingen parenteralt eller oralt (vid en förändring av tarmbarriären). Förekomsten av galactomannan i dessa produkter kan ofta förklaras genom användning av en jäsningsprocess baserad på svampmikroorganismer. Ett positivt resultat kommer dock inte att observeras hos en patient, om inte serumkoncentrationen av exogen galaktomannan når eller överskrider testens detekteringsgräns. Om man därför får ett misstänkt positivt resultat i frånvaro av andra kliniska tecken, rekommenderar vi undersökning av de produkter som patienten intar och i synnerhet deras produktionsprocesser och de använda råvarornas ursprung 14, 41, Det har rapporterats om positiva reaktioner med avseende på galaktomannan i serum och bronkoalveolärt lavage-vätska i förening med PLASMA-LYTE i flera studier 14, 41. Därför skall varje administrering av PLASMA-LYTE tas i beaktande vid tolkning av resultaten av denna test. 14. Resultaten av Platelia Aspergillus Ag i vätskeprov från bronkoalveolärt lavage (BAL) härrörande från icke-immunnedsatta patienter skall tolkas med försiktighet Resultat nära cut-off-indexvärdet (,5), skall tolkas med försiktighet och bör stödas av andra kliniska, radiologiska eller laboratorietekniska tecken på förekomst av Invasiv aspergillos, eftersom ingen gråzon inkluderas i testens resultattolkning. 16. Dessutom har resultat av Platelia Aspergillus Ag) i vätskeprov från Bronkoalveolärt lavage (BAL) mellan,5-1, index ett lägre positivt resultatvärde än BAL-provresultat > 1, indexvärden; därför bör resultaten mellan,5-1, indexvärden granskas och stödas av andra kliniska, radiologiska eller laboratorietekniska tecken på invasiv aspergillos 8,17. 8

9 14- FÖRVÄNTADE VÄRDEN I. SERUM Den förväntade förekomsten av invasiv aspergillos varierar med patientpopulationen; andelar på 5-2 % har rapporterats 1, 16. Följande resultat har erhållits från kliniska studier genomförda på pediatriska (ålder 21 år) patienter i USA och på vuxna patienter i Nordamerika. A- Pediatri En klinisk studie genomfördes på totalt 1954 serumprover från 129 immunnedsatta pediatripatienter (ålder 21 år) med hög risk för invasiv aspergillos (IA) och patienter diagnostiserade med påvisad och sannolik Invasiv aspergillos vid tre testcenter i USA för att bestämma prestandan hos Platelia Aspergillus Ag. Fördelningen av indexvärden för dessa populationer återges i följande tabeller: Pediatriska patienter diagnostiserade utan Invasiv aspergillos (kontrollpopulation) Totalt 1625* pediatriska serumprover erhållna från 18 immunnedsatta pediatripatienter vid tre testcenter i USA testades för att bestämma prestanda hos Platelia Aspergillus Ag. Indexvärdenas fördelning för dessa prover representeras i följande tabell: Figur 1 Number Antal of serum Sera Fördelning av serum-indexvärden i pediatrisk Distribution of the Serum Index Value from the kontrollpopulation (N=1625) Pediatric Control Population (N=1625) Index >1.5 8 *Anmärkning: 8 prover från 4 kontrollpatienter med positiva resultat för galaktomannan-antigen som sammanföll med behandlingar med piperacillin/tazobactam (Zosyn ) uteslöts. Pediatriska patienter diagnostiserade med Invasiv aspergillos Spridningsdiagrammet visar galaktomannan-provresultat för de 249 serumproverna från 17 patienter i denna studie diagnostiserade med påvisad eller sannolik invasiv aspergillos enligt EORTC/NIAID-definitioner. Inte alla serumprov från varje patient förväntas vara positiva. Den förväntade förekomsten av Invasiv aspergillos varierar med patientpopulationen; andelar på 5-2 % har rapporterats 1, 24. Förekomsten i denna studie var 13,6%. Figur 2 Index > Pediatric Pediatriskt Proven/ påvisad Probable Sannolik Aspergillosis: aspergillos Distribution Indexfördelning of Index/ Pediatrisk Pediatric Patient patient (N=17) Patient Antal patienter Number 9

10 B. Vuxna En klinisk studie genomfördes på totalt 1724 serumprover från 172 benmärgstransplanterade patienter (BMT) och leukemipatienter som diagnostiserats med och utan Invasiv aspergillos, i tre testcenter i Nordamerika för att bestämma prestanda hos Platelia Aspergillus Ag. Fördelningen av indexvärden för dessa populationer återges i följande tabeller: Vuxna patienter diagnostiserade utan invasiv aspergillos (kontrollpopulation) Totalt 1262 serumprover erhållna från 143 benmärgstransplanterade patienter (BMT) och leukemipatienter vid tre testcenter i Nordamerika testades med Platelia Aspergillus Ag-testen. Indexvärdenas spridning visas i följande tabell: Figur 3 Number Antal serum of Sera Fördelning Distribution av serum-indexvärden of the Serum Index Value i vuxen from the kontrollpopulation Adult Control Population (N=1262) (N=1262) Index >1.5 4 Vuxna patienter diagnostiserade med invasiv aspergillos Detta spridningsdiagram visar galaktomannan-provresultat för de 462 serumproverna från 29 patienter i denna studie diagnostiserade med påvisad eller sannolik invasiv aspergillos enligt EORTC/NIAID-definitioner. Inte alla serumprov från varje patient förväntas vara positiva. Den förväntade förekomsten av Invasiv aspergillos varierar med patientpopulationen; andelar på 5-2 % har rapporterats 1, 24. Förekomsten i denna studie var 16,9 %. Figur 4 Index > Adult Vuxna Proven/ påvisad Probable Sannolik Aspergillosis: aspergillos Indexfördelning Distribution of Vuxna Index/ Adult patienter Patient (N=29) Patient Antal Number patienter Följande diagram visar exempel på en patient utan kliniska tecken eller symptom på invasiv aspergillos (negativ med avseende på Aspergillus) respektive en patient med påvisad invasiv aspergillos (positiv Aspergillus). 1

11 Figur 5 Negativ patient Index CONTROL Kontrollpatient PATIENT Dagar Days Figur 6 Positiv patient Index PROVEN INVASIVE Påvisad invasiv ASPERGILLOSIS aspergillospatient PATIENT Dagar Days II. BAL-VÄTSKA Två studier genomfördes på totalt 449 BAL-prover från 178 mottagare av solida organtransplantat (SOT) och lungtransplantat med och utan invasiv aspergillos i USA för att bestämma prestanda för Platelia Aspergillus Ag-sats på vätskeprover från bronkoalveolärt lavage. Av dessa var 43 BAL-prover från 167 mottagare av solida organ- och lungtransplantat utan Invasiv aspergillos. I tillägg utfördes en retrospektiv analys av BAL-prover från 99 bedömda hematologiska högriskpatienter från en studie utanför USA som inkluderade 58 patienter med påvisad eller sannolik invasiv aspergillos. Förväntade värden i BAL-prover från kombinerade SOT- och lungtransplantatmottagare utan invasiv aspergillos visas i tabellen nedan. Resultaten presenteras med prover från transplantatmottagare med och utan mögelkolonisering. Tabell 1 Förväntade värden per prov Kombinerade SOT- och lungtransplantatmottagare utan invasiv aspergillos N =43 BAL-vätskor Diagnos N Positiva (%) Negativa (%) Kontroller utan kolonisering /341 (3.2%) 33/341 (96.8%) Kontroller med kolonisering 62 12/62 (19.4%) 5/62 (8.6%) Kontroll Totalt 43 23/43 (5.7%) 38/43 (94.3%) Förväntade värden i BAL-prover från kombinerade SOT- och lungtransplantatmottagare utan invasiv aspergillos visas i tabellen nedan. 11

12 Tabell 2 Förväntade värden per prov Kombinerade mottagare av SOT och lungtransplantat utan invasiv aspergillos per transplantattyp N =43 BAL-vätskor Transplantattyp N Positiva (%) Negativa (%) Hjärta 28 3/28 (1.7%) 25/28 (89.3%) Njure 25 3/25 (12.%) 22/25 (88.%) Lever 23 1/23 (4.3%) 22/23 (95.7%) Lunga /327 (4.9%) 311/327 (95.1%) Kontroll Totalt 43 23/43 (5.7%) 38/43 (94.3%) Förväntade värden utvärderades även i 41 BAL-vätskeprov från 41 hematologiska sjukdomspatienter utan invasive aspergillos, se tabell 3: Table 3 Förväntade värden per prov Hematologiska patienter utan invasiv aspergillos N =41 BAL-vätskor Diagnos N Positiva (%) Negativa (%) Kontroller 41 8/41 (19.5%) 33/41 (8.5%) 15- SPECIFIKA PRESTANDA A- REPRODUCERBARHET a) Reproducerbarhetsstudier av serum Inter-assay- och Intra-assayvariabilitet för PlateliaTM Aspergillus Ag bestämdes i en studie som använde en panel på 6 poolade patientserumprover (ett negativt, ett lågt positivt, två positiva, och två högpositiva) erhållna från tre kliniska försöksplatser i Nordamerika. Var och en av de 6 panelmedlemmarna testades i triplikat (x3) på 3 olika dagar, på en sats, på två platser (totalt antal replikat på varje plats = 9). Var och en av de 6 panelmedlemmarna testades i duplikat (x2) på tre olika dagar, på 1 sats, på en tredje plats (totalt antal replikat på den tredje platsen = 6). En (1) operatör utförde all precisionstestning på varje plats.. Data analyserades enligt Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) (f.d. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)). Den genomsnittliga optiska densiteten (OD) och genomsnittligt indexvärde, standardavvikelsen (SD), procent variationskoefficient (%CV), inom körning-precision (intra-assay) och inom plats-precision (inter-assay) för varje panelmedlem på varje plats illustreras nedan i följande tabeller. Tabell 4 Plats 1 Panelmedlem Neg Lågt pos Pos #1 Pos #2 Högt Pos#1 Högt Pos #2 Neg Kontroll C-O Kontroll Pos Kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index N Medelvärde Inom körning (intra-assay) N/A N/A.2.3 N/A N/A SD %CV N/A N/A 4.8% 4.4% 8.4% 7.6% 4.7% 5.1% 4.2% 4.4% 3.1% 3.6% N/A N/A 3.7% 3.4% N/A N/A Totalt (interassay) SD N/A N/A %CV N/A N/A 11.5% 1.4% 1.% 11.6% 4.7% 15.7% 4.7% 14.3% 5.9% 11.9% N/A N/A 16.9% 2.8% 14.3% 3.3% Plats 2 Panelmedlem Neg Lågt pos Pos #1 Pos #2 Högt Pos#1 Högt Pos #2 Neg Kontroll C-O Kontroll Pos Kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index N Medelvärde Inom körning (intra-assay) N/A N/A..1 N/A N/A SD %CV N/A N/A 14.5% 13.% 6.4% 7.6% 7.5% 7.1% 5.7% 4.8% 3.5% 3.2% N/A N/A 1.1% 1.1% N/A N/A Totalt (interassay) SD N/A N/A %CV N/A N/A 2.8% 27.% 22.7% 19.8% 9.5% 18.7% 5.3% 26.5% 5.8% 29.2% N/A N/A 22.7%.9% 5.7% 18.2% 12

13 Plats 3 Panelmedlem Neg Lågt pos Pos #1 Pos #2 Högt Pos#1 Högt Pos #2 Neg Kontroll C-O Kontroll Pos Kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index N Medelvärde Inom körning (intra-assay) N/A N/A.28.6 N/A N/A SD %CV N/A N/A 2.4% 2.4% 12.5% 12.2% 8.2% 8.2% 8.1% 8.2% 5.3% 5.1% N/A N/A 5.8% 5.8% N/A N/A Totalt (interassay) SD N/A N/A %CV N/A N/A 2.% 15.8% 1.5% 11.1% 12.5% 14.3% 7.1% 6.2% 4.7% 6.8% N/A N/A 5.8% 4.1% 3.4% 6.6% N/A = ej tillämpligt 1 NCCLS EP5-A, Vol. 19, Nr 2, sida 24, ekvation (C2) 2 NCCLS EP5-A, Vol. 19, Nr 2, sida 25, ekvation (C3) och ekvation (C4) b) Reproducerbarhet i BAL-vätska Inter-assay- och Intra-assay-variabilitet för Platelia Aspergillus Ag bestämdes i en studie som använde en panel på 4 poolade patient BAL-vätskeprov, markerade med renad galactomannan (ett negativt, ett högt positivt, ett lågt positivt, och ett mellanpositivt) vid 3 försöksplatser (två på kliniska försöksplatser i USA och en intern plats). Var och en av de 4 panelmedlemmarna och kontrollerna testades i duplikat (x2) i 2 omgångar per dag, under 5 olika dagar, på en sats (totalt antal replikat på varje plats = 12). Två (2) operatörer utförde all precisionstestning på varje plats. Data analyserades enligt Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) (tidigare kallat National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)). Den genomsnittliga optiska densiteten (OD) och genomsnittligt indexvärde, standardavvikelsen (SD), procent variationskoefficient (%CV), inom körning-precision (intra-assay) och inom plats-precision (inter-assay) för varje panelmedlem illustreras nedan i följande tabell: Tabell 5 Sammanfattning Kombinerade platser Låga Positiv Negativ Negativa Högt negativa Medelpositiva Positiva kontroll kontroll Sammanfattning N = 6 N=6 N=6 N=6 N=6 N=6 OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index Medelvärde Inom körning (Intraassay) Totalt (Inter Assay) SD N/A N/A N/A N/A %CV N/A N/A 7.4% 2.5% 9.3% 8.9% 5.% 5.% 7.% 7.1% N/A N/A SD N/A N/A N/A N/A %CV N/A N/A 19,6% 18.9% 16.2% 13.9% 12.2% 1.2% 12.% 11.8% N/A N/A B- KORSREAKTIVITET En studie för att utvärdera inverkan av potentiellt störande medicinska villkor ej i relation till invasiv aspergillos utfördes med en sats Platelia Aspergillus Ag. Följande serumprover testades med avseende på korsreaktivitet med Platelia Aspergillus Ag. Total 151 serum testades. Tabell 6 Patologi # Testade prover # Positiva Reumatoidfaktor 1 ANA Positiv 1 IgG Hypergammaglobulinemi 1 IgM Hypergammaglobulinemi 1 Cancer * 11 Icke-viral levercirros (primär biliär; alkoholrelaterad; narkotikarelaterad) 1 Multipla Transfusioner 1 Kvinnor som fött flera barn 1 HAV 1 HCV 1 Röda hund 1 CMV 1 Syfilis (RPR+) 1 Toxoplasmos 1 Mykoplasma 1 * En vardera av urinblåsa, bröst (2), tjocktarm, endometrium, lunga, prostata, njure och hudfjäll (3). 13

14 C- Klinisk testning KLINISKA STUDIER I NORDAMERIKA I. SERUMPROVER Kliniska tester för att utvärdera känslighet-, specificitet- och prognosvärden hos Platelia Aspergillus Ag genomfördes på pediatripatienter (ålder 21 år) på tre platser i USA och på vuxna patienter på tre platser i Nordamerika. Studierna genomfördes med användning av totalt 1954 serumprover erhållna från 129 pediatripatienter och totalt 1724 serumprover erhållna från 172 vuxna patienter från följande populationer*: Patienter utan tecken på invasiv aspergillos (kontrollpatienter) Patienter med sannolik invasiv aspergillos Patienter med påvisad invasiv aspergillos * Samarbetsgruppen för invasiv svampinfektion (The Invasive Fungal Infection Cooperative Group (IFICG)) inom den Europeiska cancerforskningsorganisationen European Organization för Research and Treatment och Cancer (EORTC) och svampstudiegruppen Mycosis Studie Group (MSG of the National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) definierade år 22 kriterier för diagnos av invasiv aspergillos (IA) hos patienter med hematologisk malignitet eller hematopoetisk stamcellstransplantation 2 KÄNSLIGHET A. Pediatri Resultaten från denna studie har analyserats med avseende på patientkänslighet. Känslighetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergillus Ag på tre platser på sammanlagt 17 immunnedsatta pediatripatienter som diagnostiserats med påvisad eller sannolik invasiv aspergillos. Tabell 7 Diagnos Antal patienter Känslighet 95% Konfidensintervall Påvisad aspergillos % (4/9) % Sannolik aspergillos % (5/8) % Kombinerad påvisad och sannolik 17* 52.9% (9/17) % aspergillos *Anm.: 8 av de 17 patienterna gav negativa resultat med avseende på Aspergillus galactomannan-antigen. Alla dessa 8 patienter med negativa Aspergillus galactomannan-resultat fick behandling med multipla antifungala substanser. Samtidig användning av mögelaktiv svampinfektionsbehandling hos vissa patienter med invasiv aspergillos kan resultera i minskad känslighet 31.. B. Vuxna Känslighetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergillus Ag på tre platser på sammanlagt 29 vuxna benmärgstransplanterade (BMT) patienter och leukemipatienter diagnostiserade med påvisad eller sannolik invasiv aspergillos. Tabell 8 SPECIFICITET Diagnos Antal patienter Känslighet 95% Konfidensintervall Påvisad aspergillos % (9/11) % Sannolik aspergillos % (14/18) % Kombinerad påvisad och sannolik aspergillos % (23/29) % A. Pediatri Specificitet vid pediatripatienter Specificitetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergillus Ag på tre platser på sammanlagt 18* immunnedsatta pediatripatienter utan tecken på invasiv aspergillos (kontrollpatienter). 14

15 Tabell 9 Plats Antal patienter Specificitet 95% Konfidensintervall % (38/44) % % (51/59) % 3 5 1% (5/5) % Kombinerade platser % (94/18) % *Anm.: 4 patienter med positiva resultat avseende galactomannan-antigen som samtidigt hade behandling med piperacillin/tazobactam uteslöts. Specificitet vid pediatripatienter Specificitetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergilllus Ag på tre platser på sammanlagt 1625* prover erhållna från 18 immunnedsatta pediatripatienter utan tecken på invasiv aspergillos (kontrollpatienter) Tabell 1 Plats Antal prover Specificitet 95% Konfidensintervall % (785/794) % % (715/731) % 3 1 1% (1/1) % Kombinerade platser % (16/1625) % *Anm.: 8 prover från 4 patienter med positiva resultat med avseende på galactomannan-antigen som samtidigt behandlades med piperacillin/tazobactam uteslöts. B. Vuxna Specificitet vid vuxna patienter Specificitetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergillus Ag på tre platser på sammanlagt 143 vuxna benmärgstransplanterade (BMT) patienter och leukemipatienter utan tecken på invasiv aspergillos (kontrollpatienter). Tabell 11 Plats Antal patienter Specificitet 95% Konfidensintervall % (22/28) % % (71/77) % % (34/38) % Kombinerade platser % (127/143) % Specificitet vid prover från vuxna patienter Specificitetstesten genomfördes med användning av Platelia Aspergillus Ag på tre platser på sammanlagt 1262 prover erhållna från 143 vuxna benmärgstransplanterade (BMT) patienter och leukemipatienter utan tecken på invasiv aspergillos (kontrollpatienter). Tabell 12 Plats Antal prover Specificitet 95% Konfidensintervall % (342/349) % % (552/56) % % (349/353) % Kombinerade platser % (1243/1262) % PROGNOSVÄRDE Positiva och negativa prognosvärden har analyserats för patientpopulationen i denna studie. På basis av den verkliga genomsnittliga förekomstkvoten på 13,6 % hos pediatripatienter och 16,9% hos vuxna patienter som iakttagits i denna studie, har positiva och negativa prognosvärden beräknats enligt nedan: 15

16 A. Pediatri Förekomst av sjukdomen 13,6% PPV: 39.1% 95% Konfidensintervall: % NPV: 92.2% 95% Konfidensintervall: % B. Vuxna Förekomst av sjukdomen 16,9% PPV: 59.% 95% Konfidensintervall: % NPV: 95.5% 95% Konfidensintervall: % Den förväntade förekomsten av Invasiv aspergillos varierar med patientpopulationen; andelar på 5-2 % har rapporterats 1, 24. För patientpopulationer vid den undre gränsen av den publicerade förekomsten, har den positiva och negativa förekomsten räknats om med hjälp av en förekomstkvot på 5 %. A. Pediatri Beräknad förekomst 5 % PPV: 17.6% 95% Konfidensintervall: % NPV: 97.2% 95% Konfidensintervall: % B. Vuxna Beräknad förekomst 5 % PPV: 27.2% 95% Konfidensintervall: % NPV: 98.8% 95% Konfidensintervall: % II. BAL-VÄTSKEPROVER- PRESTANDA Känslighet och specificitet hos Platelia Aspergillus Ag med BAL-vätskeprover utvärderades i två studier i USA på 116 prover från 62 mottagare av solida organtransplantat och 333 prover från 116 mottagare av lungtransplantat med och utan invasiv aspergillos samt en studie gjord utanför USA på 99 prov från 99 hematologiska högriskpatienter med och utan invasiv aspergillos. A. KÄNSLIGHET Känsligheten utvärderades hos mottagare av solida organtransplantat och av lungtransplantat som diagnostiserats med invasiv aspergillos enligt EORTC/MSG-kriterier. I. Mottagare av solida organtransplantat med Invasiv aspergillos Av de totala 116 proverna från 62 mottagare av solida organtransplantat i en studie, utvärderades känsligheten hos 5 mottagare diagnostiserade med Invasiv aspergillos så som visas i tabellen nedan. Tabell 13 Känslighet med Bio-Rad Platelia Aspergillus Ag Påvisad eller sannolik invasiv aspergillos i mottagare av solida organtransplantat per patient Diagnos N Index,5 Känslighet 95% Konfidensintervall Påvisad aspergillos 2 2 2/2 (1%) % Sannolik aspergillos 3 3 3/3 (1%) % Kombinerad påvisad och sannolik aspergillos 5 5 5/5 (1%) % Tabell 14 Känslighet med Bio-Rad Platelia Aspergillus Ag Påvisad eller sannolik invasiv aspergillos hos mottagare av solida organtransplantat per transplantattyp Transplantattyp N Index,5 Känslighet 95% Konfidensintervall Hjärta 1 1 1/1 (1%) 2.6-1% Njure 3 3 3/3 (1%) % Lever 1 1 1/1 (1%) 2.6-1% Totalt 5 5 5/5 (1%) % 16

17 II. Mottagare av lungtransplantat med invasiv aspergillos Av de totala 333 proverna från 116 mottagare av lungtransplantat i en annan studie, utvärderades känsligheten hos 6 mottagare som diagnostiserats med invasiv aspergillos, så som visas i tabellen nedan. Tabell 15 Känslighet med Bio-Rad Platelia Aspergillus Ag Påvisad eller sannolik invasiv aspergillosis i lungtransplantatmottagare per patient Diagnos N Index,5 Känslighet 95% Konfidensintervall Påvisad aspergillos 2 1 1/2 (5.%) % Sannolik aspergillos 4 3 3/4 (75.%) % Kombinerad Påvisad och Sannolik Aspergillos III. Hematologiska patienter med invasiv aspergillos Känslighet utvärderades även I en tredje studie med 58 prover från 58 hematologiska patienter diagnosticerade med invasiv aspergillos enligt nedan tabell. I denna studie utfördes retrospektiva analyser på BAL-vätskor från hematologiska högriskpatienter med Platelia Aspergillus EIA. Resultaten från denna studie användes för att etablera prestanda hos Platelia Aspergillus EIA för BAL-vätska 29. Table 16 Påvisad eller sannolik invasiv aspergillos hos hematologiska patienter 6 4 4/6 (66.7%) % Diagnos N Index.5 Känslighet 95% Konfidensintervall Påvisad aspergillos /31 (1%) % Sannolik aspergillos /27 (96.3%) % Kombinerad påvisad och pannolik aspergillos /58 (98.3%) % B. SPECIFICITET Specificiteten utvärderades på totalt 98 BAL-prover från 57 SOT-mottagare och 35 BAL-prover från 11 mottagare av lungtransplantat utan invasiv aspergillos och visas i tabellen nedan. Resultaten presenteras med prover från transplantatmottagare med och utan mögelkolonisering. Tabell 17 Specificitet per prov Kombinerade SOT- och lungtransplantatmottagare utan invasiv aspergillos N =43 BAL-vätskor Index 95% Diagnos N Negativa (%) <.5 Konfidensintervall Kontroller utan kolonisering /341 (96.8%) % Specificitet för BAL-prover från kombinerade mottagare av SOT och lungtransplantat utan invasiv aspergillos visas per transplantattyp i tabell 18 nedan. Tabell 18 Specificitet per prov Kombinerade mottagare av SOT och lungtransplantat utan invasiv aspergillos per transplantattyp N =43 BAL-vätskor Transplantattyp Kontroller med kolonisering /62 (8.6%) % Kontroll Totalt /43 (94.3%) % N Index <.5 Negativa (%) 95% Konfidensintervall Hjärta /28 (89.3%) % Njure /25 (88.%) % Lever /23 (95.7%) % Lunga /327 (95.1%) % Kontroll Totalt /43 (94.3%) % Specificiteten utvärderades även med 41 BAL-prov från 41 hematologiska sjukdomspatienter utan invasiv aspergillos se tabell

18 Table 19 Specificitet per prov Hematologiska sjukdomspatienter utan invasiv aspergillos N= 41 Index 95% Diagnos N Negativa (%) <.5 Konfidensintervall Kontrollpatienter /41 (8.5%) % 16. BIBLIOGRAFI 1. Ansorg, R., R. Van Den Boom, and P.M. Rath Detection of Aspergillus galactomannan antigen in foods and antibiotics. Mycoses 4 : p Ascioglu, S., J. H. Rex, B. De Pauw, J. E. Bennett, J. Bille, F. Crokaert, D. W. Denning, J. P. Donnelly, J. E. Edwards, Z. Erjavec, D. Fiere, O. Lortholary, J. Maertens, J. F. Meis, T. F. Patterson, J. Ritter, D. Selleslag, P. M. Shah, D. A. Stevens and T. J. Walsh. 22. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: an international consensus. Clin.Infect.Dis. 34: p Aubry, A., R. Porcher. J. Bottero, S. Touratier, T. Leblanc, B. Brethon, P. Rousselot, E. Raffoux, J. Menotti, F. Derouin, P. Ribaud and A. Sulahian 26. Occurrence and Kinetics of False-Positive Aspergillus GalactomannanTest Results following Treatment with β-lactam Antibiotics in Patients with Hematological Disorders. J. Clin. Microbiol. 44: p Barnes P. D. and K. A. Marr. 27 Risks, diagnosis and outcomes of invasive fungal infections in haemotopoeitic stem cell transplant recipients. Brit. Journ. Haemotol. 139: p Becker M. J., E. J. Lugtenburg. J. J. Cornelissen, C. V.D. Schee, H. C. Hoogsteden and S. D. Marie. 23 Galactomannan detection in computerized tomography-based broncho-alveolar lavage fluid and serum in haemotological patients at risk for invasive pulmonary aspergillosis. Br. J. Haemotol. 121(3): p Blijevens, N. M., J. P. Donelly, J. F. Meis, P. E. Verweij, and B. E. De Pauw. 22 Aspergillus galactomannan antigen levels in allogeneic haemotopoietic stem cell transplant receipients given total parenteral nutrition. Transpl. Infect. Dis. 4: p Chambon-Pautas, C.,J. M. Costa, M.T. Chaumette, C. Cordonnier, and S. Bretagne. 21 Galactomannan and polymerase chain reaction for the diagnosis of primary digestive aspergillosis in a patient with acute myeloid leukaemia. J. Infect. 43: p Clancy C., R. A. Jaber, H. L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, J. L. Wheat, C. Cline, K. H. Rand, D. Schain, M. Baz and M. H. Nyugen. 27 Bronchoalveolar Lavage Galactomannan in Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis among Solid-Organ Transplant Recipients. J. Clin. Microbiol. 45(6): p de Repentigny, L., L. Kaufman, G. T. Cole, D. Kruse, J. P. Latge, and R. C. Matthews Immunodiagnosis of Invasive Fungal Infections. J Med Vet Mycol 32: p Denning, D. W Invasive Aspergillosis. Clin Infect.Dis. 26: p Desai R, L.A. Ross and J. A. Hoffman Poster The Role of Bronchoalveolar Lavage Galactomannan Assay in the Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Pediatric Populations. AAA Erjavec, Z. and P. E. Verweij. 22. Recent progress in the diagnosis of fungal infections in the immunocompromised host. Drug Resist. Updat. 5: p Gangneux, J., D. Lavarde, S. Bretagne, C. Guiguen and V. Gandemer. 22. Transient aspergillus antigenaemia: think of milk. Lancet. 359(9313): Hage,C. A., J. M. Reynolds, M. Durkin, L. J. Wheat, K. S. Knox. 27. Plasmalyte as a Cause of false-positive results for Aspergillus galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid. J. Clin. Microbiol. 45: p Herbrecht, R., V. Letscher-Bru, C. Oprea, B. Lioure, J. Waller, F. Campos, O. Villard, K. L. Liu, S. Natarajan-Ame, P. Lutz, P.Dufour, J. P. Bergerat, and E. Candolfi. 22. Aspergillus galactomannan detection in the diagnosis of Invasive Aspergillosis in cancer patients. J Clin. Oncol. 2: p Herbrecht, R., D. Denning, T. Patterson, J. Bennett, R. Greene, J. Oestmann, W. Kern, K. Marr, P. Ribaud, O. Lortholary, R. Sylvester,R. Rubin, J. Wingard, P. Stark, C. Durand, D. Caillot, E. Thiel, P. Chandrasekar, M. Hodges, H. Schlamm, P. Troke, B. DePauw. 22. Voriconazole Versus Amphotericin B for Primary Therapy of Invasive Aspergillosis. N Engl J Med. 347, 6: p Hussain S., D.L. Paterson, S. M. Studer, M. Crespo, J. Pilewski, M. Durkin, J.L. Wheat, B. Johnson, L. Mclaughlin, C. Bentsen, K. McCurry and N. Singh. 27 Aspergillus Galactomannan Antigen in the Bronchoalveolar Lavage Fluid for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Lung Transplant Recipients. Transplantation 83(1): p Hussain S., C. J. Clancy, M.H. Nyugen, S. Swartzentruber, H. Leather, A. M. LeMonte, M.M. Durkin, K. S. Knox, C. A. Hage, C. Bentsen, N. Singh, J.R. Wingard and L.J. Wheat. 28. Performance Characteristics of the Platelia Aspergillus Ag for detection of Aspergillus galactomannan antigen in bronchoalveolar lavage fluid. Clin. Vaccine Immunol.15 (12) : p

19 19. Khan ZU, Ahmad S, and Theyyathel AM. 28 Detection of Aspergillus fumigatus-specific DNA, (1-3)-beta-d-glucan and galactomannan in serum and bronchoalveolar lavage specimens of experimentally infected rats. Mycoses; 51: p Klont R.R., M.A.S.H. Mennink-Kersten and P. E. Verweij. 24 Utility of Aspergillus Antigen Detection in Specimens Other than Serum Specimens. Clin. Infect. Diseas. 39: p Knox KS, Rose AS, and Hage CA. 27 Rapid Fungal Diagnosis: The Utility of Bronchoalveolar Lavage for Pneumocystis and Endemic Mycoses. Current Fungal Infection Reports; 1: p Kwak EJ and Nyugen MH. 28 Galactomannan Detection in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Current Fungal Infection Reports; 2: p Latge, J. P Tools and trends in the detection of Aspergillus fumigatus. Curr Top Med Mycol 6: p Latge, J. P Aspergillus fumigatus and Aspergillosis. Clin Microbiol Rev 12[2], Latge, J. P., H. Kobayashi, J. P. Debeaupuis, M. Diaquin, J. Sarfati, J. M. Wieruszeski, E. Parra, J. P. Bouchara, and B. Fournet Chemical and immunological characterization of the extracellular galactomannan of Aspergillus fumigatus. Infect.Immun. 62: p Letscher-Bru, V., A. Cavalier, E. Pernot-Marino, H. Koenig, D. Eyer, J. Waller amd E. Candolfi Recherche d antigene galactomannane aspergillaire circulant par Platelia Aspergillus: antigenemies positives persistantes en l absence d infection. J. Med. Mycol. 8:p Maertens, J., J. Verhaegen, H. Demuynck, P. Brock, G. Verhoef, P. Vandenberghe, J. Van Eldere, L. Verbist, and M. Boogaerts Autopsy-controlled prospective evaluation of serial screening for circulating galactomannan by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for hematological patients at risk for invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 37: p Maertens, J., J. Verhaegen, K. Lagrou, J. Van Eldere, and M. Boogaerts. 21. Screening for circulating galactomannan as a noninvasive diagnostic tool for Invasive Aspergillosis in prolonged neutropenic patients and stem cell transplantation recipients: a prospective validation. Blood 97: p Maertens J., V. Maertens, K. Theunissen, W. Meersseman, P. Meersseman, S. Meers, E.Verbeken, G. Verhoef, J. V. Eldere and K. Lagrou. 29. Bronchoalveolar Lavage Fluid Galactomannan for the Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Patients with Hematologic Diseases. Clin. Infec. Diseas. 49: Marr K. A., M. Laverdiere, A. Gugel and W. Leisenring. 25. Antifungal therapy decreases sensitivity of the Aspergillus galactomannan enzyme immunoassay. Clin. Infect. Dis 4: p Marr K. A., M. Laverdiere, A. Gugel and W. Leisenring. 25. Antifungal therapy decreases sensitivity of the Aspergillus galactomannan enzyme immunoassay. Clin. Infect. Dis 4: p Mattei, D., D. Rapezzi, N. Mordini, F.Cuda, C. Lo Nigro, M. Musso, A. Arnelli, S. Cagnassi, and A. Gallamini. 24. False-positive Aspergillus galactomannan enzyme-linked immunosorbent assay results in vivo during amoxicillin-clavulanic acid treatment. J. Clin. Microbiol. 42: p Mennink-Kersten M. A. S. H., D. Ruegebrink, R. Klont, A. Warris, H. J. M. Op den Camp and P. Verweij. 25 Bifidobacterial Lipoglycan as a New Cause for False-Positive Platelia Aspergillus Enzyme Immunoabsorbent Assay Reactivity. J. Clin. Microbiol. 43(8): Meersseman W., K. Lagrou, J. Maertens, A. Wilmer, G. Hermans, S. Vanderschueren, I. Spriet, E. Verbeken and E. V. Wijngaerden. 28 Galactomannan in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Am. J. Respi. Crit. Care Med 177: p Musher B., D. Fredericks, W. Leisenring, S. A. Balajee, C. Smith and K. Marr. 24 Aspergillus Galactomannan Enzyme Immunoassay and Quantitative PCR for Diagnosis of Invasive Aspergillosis with Bronchoalveolar Lavage Fluid. J. Clin. Microbiol. 42(12): p Nareddy, S., P. H. Chandrasekar. 28. False-positive Aspergillus galactomannan (GM) assay in histoplasmosis. J. Infection 56: p Nguyen MH, R. Jaber, H.L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, L. J. Wheat, C. L. Cline, M. Baz, K.H. Rand and C. J. Clancy. 27 Use of bronchoalveolar lavage to detect galactomannan for diagnosis of pulmonary aspergillosis among nonimmunocompromised hosts. J Clin Microbiol; 45: Patterson D. L. and N. Singh Invasive Aspergillosis in Transplant Recipients. Medicine. 78(2) : p Pauw B.D., Walsh T. J., Donelly J. P., Stevens D.A., Edwards J. E., Calandra T., Pappas P. G., Maertens J., Lortholary O., Kauffman C. A., Denning D.W., Patterson T.F., Maschmeyer G., Bille J., Dismukes W.E., Herbrecht R., Hope W. W., Kibbler C.C., Kulberg B. J., Marr K. A., Munoz P., Odds F. C., Perfect J. R., Restrepo A., Ruhnke M., Segal M., Segal B. H., Sobel J. D., Sorell T.C., Viscoli C., Wingard J.R., Zaoutis T. and J.E. Bennett. 28 Revised Definitions of Invasive Fungal Disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycoses Study Group (EORTC/MSG Consensu Group. Clin. Infectious Disease 46, p Penack O., P. Rempf, B. Graf, I. W. Blau and E. Thiel. 28 Aspergillus galactomannan testing in patients with long-term neutropenia: implications for clinical management. Ann Oncol. 19(5): p , Epub Racil, Z., I. Kocmanova, M. Lengerova, J. Winterova, J. Mayer. 27. Intravenous PLASMA-LYTE as a Major Cause of False-Positive Results of Platelia Aspergillus Test for Galactomannan Detection in Serum. J. Clin. Microbiol. 45(2): p Salonen J., O-P. Lehtonen, M-R Terasjarvi and J. Nikoskelainen. 2. Aspergillus Antigen in Serum, Urine and Bronchoalveolar Lavage Specimens of Neutropenic Patients in Relation to Clinical Outcome. Scand J. Infec. Dis. 32: p

20 43. Sanguinetti M., B. Posteraro, L. Pagano, G. Pagliari, L. Fianchi, L. Mele, M. L. Sorda, A. Franco and G. Fadda. 23.Comparison of Real-Time PCR, Conventional PCR, and Galactomannan Antigen Detection by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay using Bronchoalveolar Lavage Fluid Samples from Hematology Patients for Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 41(8): p Siemann M., M. Koch-Dorfler and M. Gaude False-positive results in premature infants with the Platelia Aspergillus sandwich enzyme-linked immunoabsorbent assay. Mycoses. 41(9-1): Stynen, D., A. Goris, J. Sarfati, and J. P. Latge A new sensitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect galactofuran in patients with Invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 33: p Stynen, D., J. Sarfati, A. Goris, M. C. Prevost, M. Lesourd, H. Kamphuis, V. Darras, and J. P. Latge Rat monoclonal antibodies against Aspergillus galactomannan. Infect.Immun. 6: p Sulahian, A., F. Boutboul, P. Ribaud, T. Leblanc, C. Lacroix, and F. Derouin. 21. Value of antigen detection using an enzyme immunoassay in the diagnosis and prediction of Invasive Aspergillosis in two adult and pediatric hematology units during a 4-year prospective study. Cancer 91: p Sulahian, A., M. Tabouret, P. Ribaud, J. Sarfati, E. Gluckman, J. P. Latge, and F. Derouin Comparison of an enzyme immunoassay and latex agglutination test for detection of galactomannan in the diagnosis of Invasive Aspergillosis. Eur.J Clin. Microbiol. Infect. Dis. 15: p Surmont,I., W. Stockman. 27. Gluconate-containing intravenous solutions: Another cause of false-positive galactomannan assay reactivity. J. Clin. Microbiol. 45: p Swanink, C. M., J. F. Meis, A. J. Rijs, J. P. Donnelly, and P. E. Verweij Specificity of a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for detecting Aspergillus galactomannan. J Clin. Microbiol. 35: p Upton A., A. Gugel, W. Leisenring, A. Limaye, B. Alexander, R. Hayden and K. Marr. 25. Reproducibility of Low Galactomannan Enzyme Immunoassay Index Values Tested in Multiple Laboratories. J. Clin. Microbiol, 43: p Verdaguer V., T. J. Walsh, W. Hope and K. Cortez. 27 Galactomannan antigen detection in the diagnosis of invasive aspergillosis. Expert Rev. Mol. Diagn. 7(1):p Verweij, P. E., E. C. Dompeling, J. P. Donnelly, A. V. Schattenberg, and J. F. Meis Serial monitoring of Aspergillus antigen in the early diagnosis of Invasive Aspergillosis. Preliminary investigations with two examples. Infection 25: p Verweij, P. E. and J. F. Meis. 2. Microbiological diagnosis of Invasive Fungal Infections in transplant recipients. Transpl.Infect.Dis. 2: p Verweij, P. E., D. Stynen, A. J. Rijs, B. E. de Pauw, J. A. Hoogkamp -Korstanje, and J. F. Meis Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay compared with Pastorex latex agglutination test for diagnosing Invasive Aspergillosis in immunocompromised patients. J. Clin. Microbiol. 33: p Verweij, P. E., C. M. Weemaes, J. H. Curfs, S. Bretagne, J. F. Meis. 2. Failure to detect circulating Aspergillus markers in a patient with chronic granulomatous disease and Invasive Aspergillosis. J Clin. Microbiol. 38: p Verweij P., J-P Latge, A. J. J. M. Rijs, W. J. G. Melchers, B. E. D. Pauw, J. A. A. Hoogkamp-Korstanje Comparison of Antigen Detection and PCR Assay Using Bronchoalvealor Lavage Fluid for Diagnosing Invasive Pulmonary Aspergillosis in Patients Receiving Treatment for Hematological Malignancies. J. Clin. Microbiol. 33(12): p Walsh T. J., R.L. Schaufele, T. Sein, J. Gea-Banacloche, M. Bishop, N. Young, R. Childs, J. Barrett, H. L. Malech, and S.M. Holland. 22. Reduced expression of galactomannan antigenemia in patients with Invasive Aspergillosis and chronic granulomatous disease or Job s syndrome. Abstracts of the 4th Annual Meeting of the Infectious Diseases Society of America. Arlington, VA. P. 15 ; Abstr Wheat, L. J., E. Hackett, M. Durkin, P. Connolly, R. Petraitiene, T. J. Walsh, K. Knox, C. Hage. 27. Histoplasmosisassociated cross-reactivity in the Bio-Rad Platelia Aspergillus enzyme immunoassay. Clin. Vaccine Immunol. 14 (5): p Wheat J.L., A. M. Monte, M.M. Durkin, S.L. Swartzentruber, K.K. Knox, C.A. Hage, C. Bentsen, S. Husain, N. Singh, C.J. Clancy, M.H. Nyugen AAA28 Poster Detection of Aspergillus galactomannan in BAL in the Platelia Aspergilllus AG, as performed at MiraVista Diagnostics. Site verified June 9, Wheat J. and T.J. Walsh. 28 Diagnosis of Invasive Aspergillosis by Galactomannan Antigenemia Detection using an enzyme immunoassay. Eur J Clin Microbiol Infect Dis; 27: Yeo, S. F. and B. Wong. 22. Current Status of Nonculture Methods for Diagnosis of Invasive Fungal Infections. Clin.Microbiol.Rev. 15: p

21 21

22 22

23 Distribuerad i USA av: Bio-Rad Laboratories th Avenue NE Redmond, WA 9852 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 9243 Marnes-la-Coquette Frankrike Tfn. : +33 () /1 Fax.: +33 () Kod: För kundbeställningar och teknisk service, tfn: BIO-RAD ( ) 23