Bestämning av presumtiv Bacillus cereus och sporer. Koloniräkningsteknik.

Relevanta dokument
Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik.

Bestämning av koagulaspositiva stafylokocker. Koloniräkningsteknik.

Bestämning av mikrobernas antal. Koloniräkningstekning med ingjutningsmetoden.

Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik.

Bestämning av bakterien Listeria monocytogenes Koloniräkningsteknik.

Detektion och identifiering av bakterien Listeria monocytogenes

Detektion och identifiering av bakterien Listeria monocytogenes

Salmonella. Detektion i organ- och träckprover av djur, produktionsmiljöprover och livsmedel med MSRV-metoden

Screening för MRSA-stammar med hjälp av anrikning och selektivt fast odlingsmedium

Filtrering av mjölk för analys av Bacillus cereussporer och Clostridium tyrobutyricum-sporer

Kommunala livsmedelstillsynsmyndigheter Livsmedelslaboratorier som godkänts för analys av sådana myndighetsprover, som avses i livsmedelslagen

Upphäver / Ändrar Jord- och skogsbruksministeriets cirkulär nr 199 av den 14 maj 1982 om bakteriologisk undersökning vid köttbesiktning

EKOLOGI MILJÖ OCH GEOVETENSKAP MIKROBIOLOGISK UNDERSÖKNING OCH KEMISKA ANALYSER AV LIVSMEDEL

Provläsningsexemplar / Preview

Undersökning av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden

Säkerhetsaspekter på praktiskt arbete med biologi i skolan. med undantag av genetiskt modifierade organismer (GMM)

UMEÅ UNIVERSITET

Behandling och sammansättning av prover som ingår i programmet för salmonellakontroll

Parameter Metod (Referens) Mätprincip Provtyp Mätområde

Salmonella. Detektion i organ- och träckprover av djur och produktionsmiljöprover med MSRV-metoden

Karin Berg, Malin Lundin och Jessica Petersson. Miljövetarprogrammet Linköpings universitet, Campus Norrköping

Fråga 3 Varje korrekt besvarad delfråga ger 0,4 p. Det är inget avdrag för felaktigt svar. (2p) En organism som bara kan växa i närvaro kallas

Hur ska analyserna genomföras? Stödjande instruktion för Livsmedelsverket och kommuner

Aktuellt på referenslaboratoriefronten (3/2010)

Projekt Bacillus cereus

Provtagningsprojekt på sushiris 2018

Analys av antibiotikakänslighet hos bakterier med diskdiffusionsmetoden

KVALITETSSÄKRA MILJÖANALYSER. Vattenundersökningar, Mikrobiologiska analyser & Svensk Standard

Kontroll av mikrobiologisk kvalitet på mjukglass i Varbergs Kommun, sommaren 2012

Rapport från 2018 års ringtest för kliniska mastiter

Mikrobiologi - Livsmedel

Koll på Kungsbacka Rapport 2:2016 Kebabprojekt Kebabprojekt 2016 Provtagning av kebabkött på pizzerior och restauranger i Kungsbacka kommun

Omentamen 3p mikrobiologi inom biologi 45p,

Rapport från 2015 års ringtest för kliniska mastiter

UMEÅ UNIVERSITET Målsättning Att använda metoder för direkt observation av mikroorganismer.

Rapport från 2019 års ringtest för kliniska mastiter

Detection of Enterococci with three different methods

Optimisation of a method for isolation of Clostridium difficile from. faeces

Västerås Stad Mälardalens högskola Sweco Environment

Omentamen 3p mikrobiologi inom biologi 45p, Fråga 1 (2p) Fråga 2 (2p) Fråga 3 (2p)

Laboratorier AK Lab AB Borås Ackrediteringsnummer 1790 A SS , utg 1 Nej Ja. SS , utg 1 Nej Ja

Resultat av Emma Berndtsson

Dricksvattenkvalitet Vålberg, Edsvalla och Norsbron

PRINCIPER FÖR OCH FÖRKLARING AV METODEN

Minst 1 timme ska ha förflutit sedan måltid, munhygienaktivitet eller tobaksanvändning.

Anvisning om myndighetsåtgärderna som hänför sig till amerikansk yngelröta hos bin

Laboratorier ALcontrol AB Karlstad Ackrediteringsnummer 1006 Karlstad A ten. en Bioluminiscens Sötvatten Ja Nej

Mikrobiologi - Livsmedel

Teknik blad 2. Tillverkning av termofil inhemsk Gårdskultur

PROJEKT. Salladbufféer

Equalis kvalitetssäkringsprogram 2018

Vattenundersökningar Koliforma bakterier, termotoleranta koliforma bakterier och Escherichia coli i vatten Bestämning med membranfiltermetod (MF)

Laboratorier SYNLAB Analytics & Services Sweden AB Umeå Ackrediteringsnummer 1006 Umeå A

Dricksvattenkvalitet Skåre, Hynboholm och Gravaområdet

30. Undersökning av aminosyror i surkål

Tillsynsprojekt 1:2008 Kvalitet på semlor vid caféer och servicestationer

RECIPIENTEN MIKROBIOLOGI INDIKATORORGANISMER PATOGENA BAKTERIER

Provtagning enligt SLVFS 2001:30

Erik Eriksson VMD Enheten för Bakteriologi

Laboratorier Örebro kommun, Tekniska förvaltningen Örebro Ackrediteringsnummer 4420 Verksamhetsstöd VA, Laboratoriet A

Mikrobiologi Livsmedel

Instruktion om hur blanketten för kontroll av egenkontrollen av genetiskt modifierade livsmedel fylls i

Upphäver Jord- och skogsbruksministeriets cirkulär nr 198 av den 14 maj 1982 om påvisande av antibiotika och kemoterapeutika vid köttbesiktning

Rapport provtagningsprojekt 2010 Vagnar & Restauranger. Miljöförvaltningen

Laboratorier ALcontrol AB Malmö Ackrediteringsnummer 1006 Malmö A Livsmedel Ja Nej

Rapport Zoonosynk. Ringtester för Salmonella spp. och Listeria monocytogenes i livsmedel. av Ramiyeh Molaei

Mikrobiologi - Livsmedel

FINLANDS FÖRFATTNINGSSAMLING

Påvisande av salmonella, ISO 6579 metoden, variation

Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin

Faktablad PROVTAGNING ENLIGT FÖRESKRIFTERNA FÖR DRICKSVATTEN (SLVFS 2001:30) Provtagning. Samhällsbyggnadsförvaltningen

Laboratoriemetod för att manuellt rena DNA från ett prov på 0,5 ml

Kompetensprovning. Mikrobiologi - Livsmedel. Oktober Laurence Nachin och Irina Boriak NFA PT

Mikrobiologi Livsmedel

Godkända leverantörer

Användning av autoklav för livsmedel. Christophe Picard, huvudansvarig för centrets utbildningar och lärare på livsmedelskurser

Clostridium difficile diagnostik. Lucía Ortega Klinisk Mikrobiologi Växjö

Mikrobiologi - Livsmedel

Parameter Metod (Referens) Mätprincip Provtyp Mätområde. Ammonium SS EN-ISO 11732:2005 Autoanalyzer III 1:1, 2, 4 0,04 0,2 mg/l

Ringtesten bestod av 6 olika prover med olika mastitpatogener. I år hade vi valt att inrikta oss på grampositiva bakterier.

Miljö- och samhällsbyggnadsförvaltningen

ALLMÄN BAKTERIOLOGI ETT HANTVERK OCH NY TEKNIK. Erik Eriksson

Säkerställande av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden

Mikrobiologi Livsmedel

Provtagning av semlor

Isolering av Bacillus samt utvärdering av dess fettnedbrytande förmåga i avloppsvatten från fettavskiljare vid skolkök

Ackrediteringens omfattning

ALcontrol AB Malmö Ackrediteringsnummer 1006 Malmö A

Laboratorier Norrvatten Järfälla Ackrediteringsnummer 1353 Kommunalförbundet Norrvattens laboratorium A

Detta dokument är endast avsett som dokumentationshjälpmedel och institutionerna ansvarar inte för innehållet

PROJEKTINRIKTAD KONTROLL I NORRBOTTEN Kontroll av salladsbufféer

PX Behandling av frö med väteperoxid. Delrapport i projekt: Mikrobiologisk riskbedömning - grönsakskedjan. Pernilla Arinder.

Harmonisering av metoder för odling av högpatogena bakterier på BSL-3 laboratorium - selektivitet och anrikning vid odling av Bacillus

Tentamen i Cellbiologi:prokaryota fredagen den 13 januari 2012

Molekylärbiologisk diagnostik av tarmparasiter

Vattenverk i Askersund kommun

Transkript:

Ansvarig Tuula Johansson Sida/sidor 1 / 5 Bestämning av presumtiv Bacillus cereus och sporer. Koloniräkningsteknik. 1 Metodreferenser och avvikelser ISO 7932:2004 (Mossel 30 C / 24 48 h, nöt- eller fårblodagar 30 C / 24 48 h) 1) Bestämning av sporer har satts till som en del av metoden utgående från det inledande stycket i referensmetoden. 2 Metodens syfte och tillämpningsområde Metoden lämpar sig för bestämning av presumtiv Bacillus cereus eller dess sporer i livsmedel och organiska gödselmedel med hjälp av koloniräkningsteknik vid 30 C. 3 Definition(er) B. cereus är en stor (cellens tjocklek >0,9 μm), grampositiv, fakultativt anaerob, sporbildande stavbakterie som inte använder mannitol och som i allmänhet producerar lecitinas, fermenterar glukos, reducerar nitrat till nitrit och bildar aceton. Den här metoden särskiljer inte arten B. cereus från bacillusarter som påminner om dem men som påträffas mera sällan (B. anthracis, B. weihenstephanensis, B. thuringiensis och B. mycoides), och därför får man en presumtiv B. cereus-halt med metoden. En hög halt av B. cereus (i allmänhet över 100 000 cfu/g) i livsmedel kan orsaka matförgiftning. Det finns två slag av matförgiftning, nämligen uppkastning och diarré. B. cereus förekommer allmänt i naturen, och kan därför lätt hamna i olika livsmedel. Den förekommer också i små halter (< 100 cfu/g) i råa livsmedel, exempelvis spannmål, ris, kött, grönsaker och mjölkråvara. Bacillus kan också förekomma i mjölkprodukter, eftersom pastörisering inte förstör dess värmetåliga sporer. B. cereus bildar proteas och lecitinas som kan orsaka utfällning och smakfel i mjölkprodukter. 4 Princip Provet hettas upp om man önskar bestämma sporhalten. Det uppvärmda eller ouppvärmda provet ympas som ytodling på ett selektivt substrat, plattorna inkuberas i 1 2 dygn i 30 C. De typiska kolonierna räknas och verifieras genom kontroll av tillväxtens typiskhet på icke-selektiv agarplatta. Utgående från resultatet räknas halten av presumtiv B. cereus-bakterie eller sporer/g eller /ml prov.

Ansvarig Tuula Johansson Sida/sidor 2 / 5 5 Eventuella felkällor Om kolonierna växer tätt på substratet förblir de små och atypiska. Kolonier som är positiva med mannitol kan göra hela substratet gult, och då syns inte B. cereus-koloniernas typiska färg. Lecitinasnegativa och svagt lecitinaspositiva kolonier är svåra att identifiera. 6 Arbetssäkerhet Vid arbete i ett mikrobiologiskt laboratorium iakttas verksamhetsbeskrivning LAB 223. 7 Utrustning och redskap 1) Mikrobiologisk basutrustning 2) Stomacher homogenisator och sterila Stomacher 400 påsar 3) Värmeskåp 30 ± 1 C 8 Substrat och reagenser 1) Peptonsaltlösning, pepton 0,1 %, salt 0,85 % (PEPSU), om inget annat föreskrivs i verksamhetsbeskrivning LAB 728 2) Mossel-agar (MOSSEL) 3) Nötblodagar (NAVERI) eller fårblodagar 9 Kontrollstammar 1) B. cereus EVIRA 594 10 Förbehandling av prov Om sporhalten i ett prov ska bestämmas, upphettas det vätskeformiga provet eller den första spädningen av det fasta provet i vattenbad i 10 min i 80 C som förstör de vegetativa cellerna. Därefter fortsätter man som normalt med att göra utspädningsserien. 11 Utförande Späd ut provet enligt verksamhetsbeskrivning LAB 728. Spädningar som ska odlas väljs ut från fall till fall. Torka plattorna vid behov innan de ympas genom att låta dem stå öppna i laminarskåp i ca 15 minuter.

Ansvarig Tuula Johansson Sida/sidor 3 / 5 Odla lämpliga spädningar som utstryk på Mossel-agar. Odla parallella plattor av spädningarna. Låt provet absorberas på plattorna så bra som möjligt genom att hålla dem med locket uppåt i rumstemperatur i ca 15 minuter före inkuberingen. Om man vill öka metodens känslighet, kan man i stället för vanliga petriskålar (Ø 9 cm) använda stora skålar (Ø 14 cm), på vilka 1 ml prov ympas som ytstryk. Man kan också använda tre vanliga plattor, och odla sammanlagt 1 ml på dem. Odla parallella plattor. Inkubera plattorna vid 30 ± 1 C / 18 24 h. Om kolonierna inte syns tydligt därefter, fortsätt inkuberingen i ytterligare 18 24 h. 11.1 Räkning av kolonier Räkna kolonierna på plattor med mindre än 150 kolonier, helst i två spädningar efter varandra. 11.2 Val av kolonier för kontrollprov 11.2.1 Mossel B. cereus växer på Mossel-plattor i form av stora, ljust röda kolonier som i allmänhet omges av en grumlig zon. Plattans och koloniernas ljust röda färg påvisar att bakterien inte använder mannitol. Om det växer rikligt med organismer som använder mannitol på plattan, som då de producerar syra ändrar substratets färg till gul, kan den för B. cereus typiska ljust röda färgen försvagas eller försvinna helt. Den grumliga zonen orsakas av uppkomsten av lecitinas. Ibland producerar stammar av B. cereus mycket litet lecitinas eller inte alls. Typiska lecitinasnegativa och lecitinaspositiva kolonier kontrolleras. 12 Kontrollprover, blodagar Kontrollera 5 kolonier på varje platta som du har räknat. Om mindre än 5 typiska/misstänkliga kolonier växer på plattan, kontrollera alla kolonier. Kontrollen görs genom att odla de kolonier som ska kontrolleras på nöt- eller fårblodagar. Inkubera odlingarna vid 30 ± 1 C / 24 ± 2 h. Odla vid behov som positiv kontroll stammen B. cereus EVIRA 594. B. cereus växer på blodagar i form av stora, oregelbundna, gröngrå kolonier med matt yta, som i allmänhet omges av en stor hemolyszon. Hemolyszonens storlek kan variera, även icke-hemolytiska stammar förekommer.

Ansvarig Tuula Johansson Sida/sidor 4 / 5 12.1 Sammandrag av kontrollproverna/-testerna Agar Mossel-agar Blodagar Kontroll av presumtiv B. cereus Ljust röda kolonier som omges av en grumlig zon Kolonierna är stora, oregelbundna, gröngrå med matt yta. I allmänhet en stor hemolyszon kring kolonin (hemolyszonens storlek kan variera eller hemolys kan saknas) 13 Resultat 13.1 Uträkning av resultaten Resultatet räknas enligt verksamhetsbeskrivning LAB 703 på basis av procentandelen kontrollerade kolonier. 13.2 Rapportering av resultaten Resultatet anges enligt verksamhetsbeskrivning LAB 703 i form av antalet presumtiva B. cereus-bakterier eller om provet är upphettat, antalet presumtiva B. cereus-sporer per cfu/g eller cfu/ml prov. 14 Validering av metoden Resultaten av valideringarna av metoden (Schulten etc. 1998) presenteras i referensmetoden. 15 Metodens status Standardmetod Metoden ingår i en internationell metodsamling Officiell metod Referensmetod Intern metod 16 Metoder för kvalitetssäkring Jämförande undersökningar mellan laboratorierna Metodjämförelser Användning av referensstammar/kontrollstammar vid behov Ympade prover Parallellbestämningar

Ansvarig Tuula Johansson Sida/sidor 5 / 5 17 Referenser ISO 7932: 2004. Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the enumeration of Bacillus cereus - Colony count technique at 30 C. Parry, J. M., Turnbull, P. C. B. and Gibson, J. R. (1983). A colour atlas of Bacillus species. Schulten, S.M., Van de Lustgraaf, B.E.B., Nagelkerke, N.J.D & in t Veld, P.H. Validation of Microbiological Methods, Enumeration of Bacillus cereus according to ISO 7932 (second edition). Report No. 286555001, National Institute of Public Health and Environment, Bilthoven, the Netherlands, 1998. *Bilaga till den ursprungliga metodbeskrivningen i rum B214. 18 Ändringar sedan den tidigare versionen 13.10.2015 Den gamla kontrollstammen EELA 21 har bytts ut mot stam Evira 594 som nu används. Det gamla numreringssystemet har ändrats till att motsvara nuvarande praxis. Anvisningen uppdaterades av: Tuula Johansson