Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces -ökad medvetenhet för provtagningsproblematiken

Transkript

1 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces -ökad medvetenhet för provtagningsproblematiken Åsa Sandin, sjukhuskemist, Karolinska Universitetslaboratoriet

2 Historik Guajakmetoden -var länge spridd och användes i alla tidiga kolorektalcancerscreeningstudier -bygger på reaktion med hemoglobinets peroxidasaktivitet och har visats ge många falskt positiva svar -kräver strikta kostrestriktioner Immunkemiska FIT (fecal immunochemical test) -immunologiskt test utan kostrestriktioner 2 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

3 Många svårigheter vid bestämning av mängden Hb i feces Intermittent blödning Hb ej homogen fördelat i avföringen Hb stabilitet Val av cut-off Frånvaro av standardiserad märkning av detektionsnivå hos olika metoder 3 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

4 Många svårigheter vid bestämning av mängden Hb i feces Intermittent blödning Hb ej homogen fördelat i avföringen Hb stabilitet Val av cut-off Frånvaro av standardiserad märkning av detektionsnivå hos olika metoder Test Koncentration Faktisk Hb koncentration Actim Fecal Blood 5 ng/ml 25-5 ughb/g ANL FOB Analyz 4 ng/ml 2 ughb/g OC Sensor * 5 ng/ml 1 ughb/g * Valbar cut-off 4 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

5 Många svårigheter vid bestämning av mängden Hb i feces Intermittent blödning Hb ej homogen fördelat i avföringen Hb stabilitet Val av cut-off Frånvaro av standardiserad märkning av detektionsnivå hos olika metoder Test Koncentration Faktisk Hb koncentration Actim Fecal Blood 5 ng/ml 25-5 ughb/g ANL FOB Analyz 4 ng/ml 2 ughb/g OC Sensor * 5 ng/ml 1 ughb/g * Valbar cut-off 5 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

6 Många svårigheter vid bestämning av mängden Hb i feces Intermittent blödning Hb ej homogen fördelat i avföringen Hb F-Hb stabilitet (ughb/g feces) = F-Hb (nghb/ml) x ml buffert Val av cut-off mg feces Frånvaro av standardiserad märkning av detektionsnivå hos olika metoder Test Koncentration Faktisk Hb koncentration Actim Fecal Blood 5 ng/ml 25-5 ughb/g ANL FOB Analyz 4 ng/ml 2 ughb/g OC Sensor * 5 ng/ml 1 ughb/g * Valbar cut-off 6 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

7 Många svårigheter vid bestämning av mängden Hb i feces Intermittent blödning Hb ej homogen fördelat i avföringen Hb stabilitet Val av cut-off Frånvaro av standardiserad märkning av detektionsnivå hos olika metoder Det praktiska runt själva provtagningen Antigen-excess Subjektiv avläsning av resultat 7 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

8 Patient tar själv prov i rör innehållande buffert som sedan direkt kan analyseras i instrumentet Mäter kvantitativt Hb i feces med latex agglutionations immuno-turbimetri (7 min i instrumentet) Justerbar cutoff Oc Sensor Diana Mätintervall 1-21 ughb/g feces (5-15 ng/ml) 8 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

9 Oc Sensor DIANA, provhantering Penetrerar aluminiumfolien Provet trycks upp genom filtret Sugs upp av provnålen Resterande mängd går tillbaka ner i röret 9 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

10 Test av instrumentet Avidentifierade feces-prover med höga Kalprotektin-nivåer normal, hård och lös konsistens Homogeniserade mha av träspatel 1 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

11 Korrelationen mellan provtagningsstickan och manuell vägning 11 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

12 Manuellt vägd (ng/ml) Manuellt vägd (ng/ml) Korrelationen mellan provtagningsstickan och manuell vägning var inte god y =,9524x - 89,19 R² =, y =,6367x + 19,886 R² =, OC sticka (ng/ml) OC sticka (ng/ml) 1µg/g = 5 ng/ml 12 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

13 Provtagningsstickan tenderade att ge en högre hemoglobinmängd jämfört med manuell vägning Diff Oc sticka - Vägning Mean of Oc sticka and Vägning Diff +/- 1,96 s Mean bias Partition bias Regr 13 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

14 GMEC* använde av artificiell avföringsmatris och fann att av fyra undersökta provtagningsstickor, tog stickan mer mängd än vad som anges *Evaluation of Quantitative Faecal Immunochemical Tests for Haemoglobin, Date of publication: 2 November 213, Jämförelse gjord på uppdrag av NHS Bowel Cancer Screening Programme (BCSP) i England. 14 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

15 FHb (ng/ml) Tendens till att olika konsistens på feces ger olika upptag av provtagningsstickan Oc Sensor Sticka Manuell vägning OcSensor sticka Hemgjord buffert % 3% 87% 7% 1% löst hårt Prover som gav ett högre Hb mängd med Oc sensor stickan 15 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

16 148 med ej lös konsistens 35 prov med lös konsistens 16 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

17 FHb (ng/ml) Reproducerbarheten var sämre med provstickan jämfört med vägning Oc Sensor Sticka Manuell vägning 2 sticka manuellt 1 sticka 2 manuellt sticka 3 manuellt sticka 4 manuellt medel SD CV 23% 1% 2% 1% 14% 4% 25% 18% 17 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

18 FHb (ng/ml) Reproducerbarheten var sämre med provstickan jämfört med vägning Oc Sensor Sticka Manuell vägning 2 sticka manuellt 1 sticka 2 manuellt sticka 3 manuellt sticka 4 manuellt medel SD CV 23% 1% 2% 1% 14% 4% 25% 18% Provtagningsstickor borde således undvikas, till fördel för vägning av homogeniserad feces 18 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

19 FHb (ng/ml) Reproducerbarheten var sämre med provstickan jämfört med vägning Oc Sensor Sticka Manuell vägning 2 sticka manuellt 1 sticka 2 manuellt sticka 3 manuellt sticka 4 manuellt medel SD CV 23% 1% 2% 1% 14% 4% 25% 18% Provtagningsstickor borde således undvikas, till fördel för vägning av homogeniserad feces MEN 19 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

20 Avidentifierade feces-prover med höga Kalprotektin nivåer Många (3 av 72) prover innehöll ingen mätbar nivå av hemoglobin nedbrytning? 2 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

21 FHb (ng/ml) Hb i råfeces bryts ner väldigt fort Rå-feces Oc sensor Diana sticka R.T. Dag Dag 3 Dag 6 Dag 8 Dag 1 Dag C 12 Råfeces i RT Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

22 FHb (ng/ml) FHb (ng/ml) Hb i råfeces bryts ner väldigt fort men minskas om provet hålls kallt Rå-feces Oc sensor Diana sticka R.T. Dag Dag 3 Dag 6 Dag 8 Dag 1 Dag C 12 Råfeces i RT 12 Råfeces i 4 C Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

23 FHb (ng/ml) Buffert i Oc sensor provrör ökar hållbarhet av Hb Rå-feces Oc sensor Diana sticka R.T. Dag Dag 3 Dag 6 Dag 8 Dag 1 Dag C 12 Feces i OC rör med buffert i RT Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

24 FHb (ng/ml) FHb (ng/ml) Buffert i Oc sensor provrör ökar hållbarhet av Hb och hållbarheten ökas ytterligare vid förvaring i kyla. Rå-feces Oc sensor Diana sticka R.T. Dag Dag 3 Dag 6 Dag 8 Dag 1 Dag C 12 Prov som varit i OC rör med buffert i RT 12 Feces i OC rör med buffert i 4 C Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

25 FHb (ng/ml) FHb (ng/ml) Buffert i Oc sensor provrör ökar hållbarhet av Hb och hållbarheten ökas ytterligare vid förvaring i kyla. Rå-feces Oc sensor Diana sticka R.T. Dag Dag 3 Dag 6 Dag 8 Dag 1 Dag C 12 Prov som varit i OC rör med buffert i RT 12 Feces i OC rör med buffert i 4 C Bufferten i provtagningsröret är nödvändlig för hemoglobinets stabilitet. Förvaring i kyla förlänger provets hållbarhet. 25 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

26 Slutsats Oc Sensor Diana Instrument Plus: Ger kvantitativt svar (slipper den subjektiva bedömningen) Skydd mot Ag-excess Kontrollmaterial Hygienisk för personalen på lab att arbeta med Lättanvänd Minus: Pris/test Osäkerhet i provmängd samlad av patient Mäterintervall 1-21 ughb/g feces (5-15 ng/ml) Lyckades under provuppställningen inte koppla instrumentet till flexlab 26 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

27 Slutsats att mäta hemoglobin i feces -Provtagningsstickan ger ett stort pre-analytiskt fel men är nödvändlig att använda för att provet skall kunna förvaras i en skyddande buffert -Titta ordentligt på detektionsnivån som anges för testet -Skriva noggranna patientanvisningar -Förvaring i kyla förlänger provets hållbarhet 27 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

28 TACK Maria Farm, Medicinskt metodansvarig F-Hb, Karolinska Universitetslaboratoriet Gunilla Dahlfors, sjukhuskemist, Karolinska Universitetslaboratoriet Aleksandra Mandic Havelka, sjukhuskemist, Karolinska Universitetslaboratoriet Soheir Beshara, läkare, Karolinska Universitetslaboratoriet Sero AS, återförsäljare av Oc Sensor Diana 28 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces

29 Rekommendationen från företaget var att provet kunde förvaras i rumstemperatur i 15 dagar innan analys. 29 Utvärdering av metod för att bestämma mängden Hb i feces