BACTEC Diluting Fluid AVSEDD ANVÄNDNING BACTEC Diluting Fluid (spädningsvätska) används vid förfaranden där mykobakterieodlingar späds för inokulation. Produktens huvudsakliga användning är vid BACTEC standardiserad bestämning av läkemedelsresistens mot M. tuberculosis. 1,3-7 I denna metod späds inokulatet 1:100 i kontrollflaskan. Diluting Fluid kan också användas för spädning av odlingar vid andra förfaranden som t.ex. NAP-testen eller andra tester där spädning av testodlingssuspensionen krävs. 2 SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Användning av Diluting Fluid är en del i BACTEC bestämning av läkemedelsresistens mot M. tuberculosis. Diluting Fluid innehåller ett rengöringsmedel, polysorbat 80 (Tween 80), och ett fettsyrafritt albumin. Dessa substanser underlättar uppblandningen av mykobakterier i suspensionen. Albuminet är fettsyrafritt så att det inte skall konkurrera med den 14 C-märkta fettsyran i mediet. Koncentrationen av polysorbat 80 är minimal för att inte interferera vid resistensbestämning, men det underlättar ändå uppblandningen av mykobakterier så att en jämn, homogen suspension erhålls. PRINCIPER FÖR METODEN BACTEC resistensbestämning grundas på en modifierad proportionalitetsmetod. Den kritiska proportionen för resistens fastställs som 1 %, vilket betyder att odlingen skall betraktas som resistent om 1 % eller mer av testens mykobakteriepopulation är resistent. För att bestämma den 1-procentiga resistensproportionen i 12B Mycobacteria Medium späds först det bakteriella inokulatet för kontrollflaskan 1:100 innan det tillsätts till flaskan med mediet. BACTEC Diluting Fluid medföljer för att underlätta spädningen 1:100 av odlingssuspensionen. Fettsyrafritt albumin och polysorbat 80, som finns i Diluting Fluid, är till hjälp vid uppblandning av suspensionen och ger en mer jämn suspension av mykobakterier. REAGENSER BACTEC Diluting Fluid innehåller följande reaktiva beståndsdelar före användning: BACTEC DILUTING FLUID, 9,9 ML VARDERA Mängd som tillsätts per liter behandlat vatten Polysorbat 80...0,2 ml Fettsyrafritt bovint serumalbumin...2,0 g PP117JAA 2007/06 Svenska Varningar och försiktighetsbeaktanden: BACTEC Diluting Fluid är endast avsedd för in vitro-diagnostik. Denna produkt innehåller torrt naturgummi. Patogena mikroorganismer, inklusive hepatitvirus och humant immunbristvirus, kan förekomma i kliniska prover. Allmänna försiktighetsbeaktanden 8-11 och institutionens riktlinjer bör följas vid hantering av alla föremål som kontaminerats med blod eller andra kroppsvätskor. Före användning skall varje flaska undersökas för tecken på skada, försämring eller kontamination såsom grumlighet, buktande eller indraget membran. Flaskor som uppvisar tecken på kontamination FÅR EJ användas. Det kan vara övertryck i en kontaminerad flaska. Flaskkontamination är inte alltid tydligt synlig. Grumliga, kontaminerade eller missfärgade (mörka) flaskor bör inte användas. Flaskor som visar tecken på skada skall kasseras före inokulation. I sällsynta fall kan sprickor ha uppstått i glasflaskan och halsen kan gå sönder när locket dras av eller under hantering. Det kan också i sällsynta fall förekomma att flaskan inte är fullständigt förseglad. I båda fallen kan flaskans innehåll läcka eller spillas ut, speciellt om flaskan vänds upp och ned. Om flaskan har inokulerats skall det utläckta eller spillda materialet hanteras med försiktighet eftersom det kan innehålla patogena organismer/agens. Alla ympade flaskor skall steriliseras i autoklav innan de kasseras. Aseptisk teknik och vedertagna infektionsförebyggande försiktighetsåtgärder mot mikrobiella risker skall alltid användas. Alla förfaranden skall utföras i lämpligt biologiskt säkerhetsskåp i ett rum med fullgott ventilationssystem enligt rekommendationer från CDC. 12 Använd lämplig skyddsrock, munskydd och handskar vid hantering av prover och odlingar med potentiella patogener. Följ rekommendationer från CDC och OSHA. 12 För att minimera risken för läckage vid inokulation skall sprutor med permanent fastsatta nålar eller Luer-Lokspetsar användas.
FÖRVARINGSANVISNINGAR Flaskorna med BACTEC Diluting Fluid skall förvaras vid 2 25 C, på torr plats och skyddade från direkt solljus. PROVTAGNING Se instruktionerna för resistensbestämning (S.I.R.E. Drug Kit förpackningsinlaga, PP-118JAA). FÖRFARANDE Tillhandahållet material: BACTEC Diluting Fluid Material som krävs men ej medföljer: BACTEC 12B Medium BACTEC 460TB Instrument Tuberkulinspruta med permanent fastsatt nål Desinfektionslösning 70-procentig isopropylalkohol Dra av locket på BACTEC Diluting Fluid-flaskan. Flaskans gummimembran skall desinficeras varje gång nålen förs genom membranet. Rengör locket på varje flaska med ett desinfektionsmedel, därefter med 70-procentig alkohol. Tillsätt odlingssuspensionen som skall spädas till flaskan med en spruta med permanent fastssatt nål eller säkert anslutna Luer-Lok-spetsar. När 0,1 ml tillsätts till flaskan erhålls en 1:100 spädning. Blanda noggrant genom att vända flaskan upp och ned minst 10 gånger. Om en annan spädning än 1:100 erfordras, avlägsna en alikvot del från flaskan och späd efter behov. För ytterligare detaljer om resistensbestämning för läkemedel, se förpackningsinlagan till S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) eller BACTEC 460TB Product and Procedure Manual (MA-0029). KVALITETSKONTROLL Odlingsflaskorna FÅR EJ användas efter utgångsdatum. Spruckna eller defekta odlingsflaskor FÅR EJ användas utan skall kasseras på föreskrivet sätt. Före användning bör varje flaska Diluting Fluid undersökas för tecken på försämring. För kvalitetskontroll av bakteriella förfaranden, se förpackningsinlagan till S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) eller BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual (MA-0029). Kvalitetskontrollbevis medföljer varje Diluting Fluid Kit. Kvalitetskontrollbevisen visar de testorganismer som används för denna typ av produkt. Som en del i det dagliga underhållsschemat skall Performance Test Vials (BACTEC Performance Test Kit) testas på BACTEC 460TB-instrumentet. Om låga avläsningar erhålls, trots korrekt testning av prestandatestflaskorna, kan det tyda på möjliga instrumentproblem (se BACTEC PTK förpackningsinlaga PP-046JAA). METODENS BEGRÄNSNINGAR Korrekt iordningställande av en 1:100 spädning erhålls endast när suspensionen som skall spädas har uppblandats ordentligt. Förekomst av stora klumpar, speciellt när det gäller M. tuberculosis, kan resultera i felaktig spädning och därigenom påverka resultaten från resistensbestämningen. Kontamination Försiktighet skall iakttagas så att kontamination under inokulationen på BACTEC-flaskan förhindras. Ett kontaminerat prov kan ge en positiv instrumentavläsning men detta innebär inte att provet är kliniskt relevant. Användaren måste avgöra huruvida provet är kontaminerat eller ej, på grundval av sådana faktorer som typ av påvisad organism, uppträdande av samma organism i flera odlingar, patientens anamnes, lämpliga kontroller av utrustningen etc. Kontamination kan också uppstå från felaktigt underhåll av BACTEC-nålar och slangar, dålig rengöring av membranet eller felfunktion hos BACTEC nålvärmningsenhet (se instrumentets användarhandledning). På grund av de i odlingsmedier ingående biologiska materialens natur och organismernas variabilitet, bör användaren vara medveten om möjligheten för varierande resultat vid påvisning av vissa mikroorganismer. FÖRVÄNTADE VÄRDEN OCH SPECIFIKA FUNKTIONSEGENSKAPER Se förpackningsinlagan till S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) vad gäller detaljer. Avsedd spädning erhålls när en odlingssuspension som t.ex. M. tuberculosis blandas in i Diluting Fluid, efter det att odlingssuspensionen noggrant har blandats till en homogen suspension. Pga. den låga koncentrationen, påverkar förekomst av polysorbat 80 inte resistensmönstret signifikant. 2
REFERENSER 1. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23:934-937, 1986. 2. Laszlo, A. and S.H. Siddiqi. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with r-nitro-a-acetylamino-b-hydroxy-propiophenone. J. Clin. Microbiol. 19:694-695, 1984. 3. Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 4. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18:689-696, 1983. 5. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: 908-912. 6. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: 919-923. 7. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123:402-406, 1981. 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA. 9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 10. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 12. Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2007 BD.