PLATELIA ASPERGILLUS EIA 96 TESTER 62796

PLATELIA ASPERGILLUS EIA 96 TESTER 62796 PLATELIA ASPERGILLUS EIA ÄR EN IMMUNOENZYMATISK SANDWICH-MIKROPLATTANALYS FÖR DETEKTERING AV ASPERGILLUS GALACTOMANNAN-ANTIGEN I SERUM.

1- AVSEDD ANVÄNDNING Platelia Aspergillus EIA är en immunoenzymatisk sandwich-mikroplattanalys för detektering av Aspergillus galactomannan-antigen i serumprover. 2- ANVÄNDNINGSANVISNINGAR Platelia Aspergillus EIA är en test som, när den används tillsammans med andra diagnostikmetoder såsom mikrobiologisk odling, histologisk undersökning av biopsier och radiografisk dokumentation kan hjälpa till att diagnostisera invasiv Aspergillus-infektion. 3- SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Aspergillus-infektioner uppträder vanligen efter inandning av Aspergillus-sporer som förekommer i omgivningen. De invasiva formerna, som har blivit allt vanligare under de senaste 10 åren, utgör de mest allvarliga infektionerna. De uppträder huvudsakligen hos neutropeniska patienter (efter anticancerbehandling) och hos patienter som behandlas med immunsupprimerande läkemedel (organtransplantationer, i synnerhet benmärgstransplantation) och kortikosteroider 7. Aspergillus isoleras sällan från blododling. Diagnosen baseras ofta på ickespecifik diagnostisk eller radiologisk dokumentation (kliniska symptom, datortomografi, lungröntgen, etc.) För närvarande verkar testen för löslig galactomannan-antigen i serum vara en serologisk metod som kan hjälpa till att diagnostisera invasiv Aspergillus-infektion 6, 9, 14, 34, 39. 4- METODPRINCIP 27 Platelia Aspergillus EIA är en enstegs immunoenzymatisk sandwich-mikroplattanalys som detekterar galactomannan i humanserum. Analysen använder monoklonala EBA-2 råttantikroppar, som riktas mot Aspergillus galactomannan, och har beskrivits i tidigare studier 16, 28. De monoklonala antikropparna används, (1) för att belägga brunnarna i mikroplattan och binda antigenet, och (2) för att detektera det antigen som binds till den sensiterade mikroplattan (konjugatreagens: peroxidaslänkade monoklonala antikroppar). Serumprover värmebehandlas i närvaro av EDTA för att dissociera immunkomplex och för att fälla ut serumproteiner som skulle kunna störa testen 15. De behandlade serumproverna och konjugat tillsätts i brunnarna belagda med de monoklonala antikropparna, och inkuberas. Ett monoklonal antikropp - galactomannan - monoklonal antikropp / peroxidaskomplex bildas i närvaro av galactomannan-antiget. Remsorna tvättas för att avlägsna allt obundet material. Sedan tillsätts substratlösningen, som reagerar med komplexen bundna till brunnen och skapar en blå färgreaktion. Enzymreaktionen stoppas genom tillsats av syra, som ändrar den blå färgen till gul. Absorbansen (Optisk densitet) hos prover och kontroller bestäms med en spektrofotometer inställd på våglängderna 450 och 620 nm. 5- REAGENSER Platelia Aspergillus EIA: Produkt-nr 62796 (96 Tester) Förvara kiten vid 2-8 C. Låt alla reagenser uppnå rumstemperatur (18-25 C) före användning. Låt alla reagenser, utom kontroller, återgå till 2-8 C omedelbart efter användning. Efter rekonstitution, måste oanvänd Negativ Kontroll, Cut-off-kontroll, och Positiv Kontroll frysas till -20 C. Återför oavända remsor/plattor till påsen och återförslut denna. Avlägsna inte torkmedlet. Remsor skall användas inom 5 veckor efter öppning och återförslutning av påsen. Efter spädning håller sig tvättlösning i 14 dagar vid 2-8 C. Alla andra reagenser är stabila till sista användningsdatum efter öppning. Reagenser levereras i tillräcklig mängd för genomförande av 96 tester i maximalt 9 loter. 112

R1 R2 R3 R4 R5 Komponent Innehåll Mängd Microwell Strip Plate Concentrated Washing Solution Negative Control Serum Cut-off Control Serum Positive Control Serum Mikroplatta : - 96 brunnar (12 remsor med 8 brunnar vardera) belagda med anti-galactomannan monoklonala antikroppar Koncentrerad tvättlösning (10X): - Tris-NaCl-buffert - 1% Tween 20-0,01% thimerosal Negativt Kontrollserum: - Frystorkat humanserum negativt för galactomannan - Negativt för anti-hiv-1-, anti-hiv-2-, anti-hcvantikroppar och HBs-antigen Cut-off-kontrollserum: - Frystorkat humanserum innehållande galactomannan - Negativt för anti-hiv-1-, anti-hiv-2-, anti-hcvantikroppar och HBs-antigen Positivt Kontrollserum: - Frystorkat humanserum innehållande galactomannan - Negativ för anti-hiv-1-, anti-hiv-2-, anti-hcvantikroppar och HBs-antigen R6 Conjugate Konjugat (användningsklart): - Monoklonal anti-galactomannan-antikropp / peroxidas- märkt - Konserveringsmedel: 0,01% thimerosal R7 R8 R9 R10 Serum Treatment Solution TMB Substrate Buffer Chromogen: TMB Solution Stopping Solution Serumbehandlingslösning (användningsklar): - EDTA sur lösning TMB Substratbuffert (användningsklar): - Citronsyra och natriumacetatlösning - 0,009% Väteperoxid - 4% Dimetylsulfoxid (DMSO) Kromogen TMB-lösning (koncentrerad): - 90% dimetylsulfoxidlösning (DMSO) innehållande 0,6% tetrametylbenzidin (TMB) Stopplösning (användningsklar): - 1,5 N Svavelsyra (H 2 SO 4 ) 1 Platta / 12 x 8 Brunnar 1 x 100 ml 3 x qs* 1 ml 3 x qs* 1mL 3 x qs* 1 ml 1 x 8 ml 1 x 10,5 ml 1 x 60 ml 1 x 1 ml 1 x 12 ml Plate sealers - Häftfilm för mikroplattor 1 x 8 filmer Anm.: TMB (Tetrametylbenzidin) är en icke-karcinogen och icke-mutagen kromogen för peroxidas. * Anm.: qs: quantum satis 6- VARNINGAR TILL ANVÄNDARE 1. För in vitro-diagnostisk användning. 2. Endast för professionellt bruk. 3. Vi rekommenderar inte att detta testpaket används för andra prov än humant serum. 113

4. Den positiva kontrollen, gränsvärdeskontrollen och den negativa kontrollen är tillverkade av humant serum som har testats och befunnits vara icke-reaktivt på HBsAg och antikroppar mot HIV-1, HIV-2 och HCV med CE-märkta tester. Hantera dock alla reagenser som potentiellt smittfarliga. Alla tester ska utföras enligt OSHA-standarden för blodburna patogener, smittskyddsnivå 2 eller gällande smittskyddsåtgärder. 5. Använd skyddsklädsel som laboratorierock, ögon-/ansiktsskydd och engångshandskar (syntetiska handskar, ej latex, rekommenderas) och tillämpa god laboratoriesed när du hanterar reagenser och patientprover. Tvätta händerna noggrant efter ett test. 6. Pipettera inte med munnen. 7. Rök, drick och ät inte i områden där prov eller reagenser hanteras. 8. Undvik stänk från prover och lösningar. 9. Biologiskt spill som inte innehåller syra ska torkas upp noggrant med ett effektivt desinfektionsmedel. Desinfektionsmedel som kan användas innehåller (inte bara) en lösning av 10 % blekmedel (0,5 % lösning natriumhypoklorit), 70 % etanol eller 0,5 % Wescodyne Plus. Material som används för att torka upp spill bör hanteras som smittfarligt avfall. VARNING! Placera inte lösningar som innehåller blekmedel i autoklaven. 10. Spill som innehåller syra ska torkas upp eller neutraliseras med natriumbikarbonat och ytan ska sedan sköljas och torkas; om smittfarligt material spillts ut ska ytan rengöras med ett kemiskt desinfektionsmedel. 11. Omhänderta alla prover och allt material som kommit i kontakt med proverna som potentiellt smittsamma. Hantering och avlägsnande av kemiska produkter och smittfarligt material ska genomföras enligt alla tillämpliga avfallshanteringskrav. 12. VARNING! Listan nedan innehåller potentiellt kemiskt riskmaterial som finns i en del komponenter i satsen (se avsnitt 5 - REAGENSER): Stopplösningen 1.5 N med svavelsyra (7.2% H 2 SO 4 ) är frätande och kan orsaka brännskador i ögonen och på huden; den kan vara skadlig vid intagande eller i kontakt med huden; kan orsaka allvarliga ögonskador inklusive permanenta synskador eller blindhet. C-Frätande Förvaras åtskilt från starka baser och reduceringsmedel. R34-41 är frätande. Risk för allvarliga ögonskador. S24/25-26-30-36/37/39-60. Undvik kontakt med ögonen och huden. Vid kontakt med ögonen, spola genast med mycket vatten och kontakta läkare. Häll aldrig vatten på eller i produkten. Använd skyddskläder, handskar och ögon-/ansiktsskydd. Detta material och dess behållare ska tas om hand som farligt avfall. Avfall från detta material är riskfyllt syraavfall. Om alla tillämpliga avfallshanteringskrav tillåter det kan det neutraliseras till ph 6-9 för riskfritt avfall, om personalen är utbildad för detta och utrustning finns tillgänglig. 0,01 % thimerosal (natriummertiolat), ett organisk kvicksilverbiocidkonserveringsmedel som angriper det centrala nervsystemet (CNS), är ett reproduktivt toxin och en signifikant sensibilisator; långvarig eller upprepad exponering kan hos känsliga personer leda till allergiska reaktioner; det finns flera fall av sensibilisering vid exponering av utspädda thimerosallösningar. Undvik utsläpp i miljön, risk för följdeffekter. Använda kvicksilverlösningar med en koncentration som överskrider 0,2 ppm måste hanteras som riskfyllt avfall enligt US Federal RCRA (D009). Hantera dock allt avfall enligt lokala, regionala och nationella bestämmelser. (Obs! kvicksilver (Hg) utgör 49,55 % av thimerosalmolekylen, en komponent med 0,01 % thimerosal innehåller ~0,005 % (~50 ppm) kvicksilver vikt/volym). Vid kontakt med huden, tvätta genast med mycket vatten. Varning! I Kalifornien har man fastställt att Thimerosal kan orsaka reproduktiv toxicitet. 13. Ett informationsblad om materialets säkerhet kan fås på begäran. 114

7- FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER FÖR ANVÄNDARE 1. FRUSNA SERUMPROVER LAGRADE I OKÄNDA FÖRHÅLLANDEN KAN GE FELAKTIGT POSITIVA RESULTAT TILL FÖLJD AV KONTAMINERING MED SVAMPAR OCH/ELLER BAKTERIER. 2. Använd inte kit eller kitreagenser efter angivet sista användningsdatum. 3. Med undantag av Koncentrerad Tvättlösning (R2) och Stopplösning (R10), ska reagenser inte blandas mellan kit med olika kitnummer. 4. Låt alla reagenser uppnå rumstemperatur minst 15 minuter före användning. 5. Blanda omsorgsfullt vid rekonstitution av reagenser, och se till att undvika mikrobisk kontaminering. 6. Utför inga test i närvaro av reaktiva ångor (syror, alkalier, aldehyder) eller damm som kan förändra konjugatets enzymaktivitet. 7. Använd rena, polypropylenplastbehållare av engångstyp för att preparera den Substrat- Kromogenreaktionslösningen. Om glasvara måste användas, skall den först tvättas i 1N saltsyra, sköljas med destillerat vatten och torkas. 8. För manuell pipettering av kontroller och prover, använd individuella pipettspetsar för att förhindra överföring mellan prover. 9. För att säkerställa att brunnarna tvättas ordentlig, att det rekommenderade antalet tvättcykler utförs och att se till att alla brunnarna fylls helt och sedan töms helt. Tvättning ska inte utföras manuellt med en klämflaska. 10. Låt inte mikroplattan torka mellan slutet av tvättcykeln och tillsatsen av reagens. 11. Använd inte samma behållare för konjugat- och substratlösningarna. 12. Låt inte Konjugat- eller Substrat-Kromogenreaktionslösningar komma i kontakt med metaller eller metalljoner. 13. Undvika att exponera Kromogen TMB-lösning eller Substrat-Kromogenreaktionslösning för starkt ljus vid förvaring eller inkubation. Låt inte de kromogenlösningarna komma i kontakt med en oxiderande substans. 14. Se till att Stopplösningen inte kommer i kontakt med någon oxiderande substans. Låt inte Stopplösningen komma i kontakt med metaller eller metalljoner. 15. Använd rena, dammfria materiel (rör, spetsar, behållare, etc.) för att minimera risken för kontaminering med Aspergillus-sporer från omgivningen. Eftersom galactomannan är värmestabil, garanterar inte sterilisering av material frånvaro av kontaminerande antigen. Pyrogenfria material är optimala, men standardmaterial kan användas med lämpliga försiktighetsåtgärder. 16. Begränsa exponering av lösningar (sera, serumbehandlingslösning, konjugat) eller öppna behållare (plattor, rör, pipetter) för luft. 17. Häll inte tillbaka oanvänt konjugat i originalbehållaren. 18. Substrat-Kromogenreaktionslösningen måste vara färglös. Förekomsten av en blå färg efter spädning indikerar att reagensen är kontaminerad och inte bör användas. Avyttra och iordningställ färsk reagens. 8- BEREDNING OCH FÖRVARING AV REAGENS Mikroplatta (R1) Efter öppning av plattpåsen, är mikrobrunnremsor stabila i 5 veckor när de lagras i +2-8 C i sin noggrant tillslutna originalpåse i närvaro av det bifogade torkmedlet. Tvättlösning (R2) Bered tvättlösning efter behov genom att tillsätta en del Koncentrerad tvättlösning till 9 delar sterilt, avjoniserat eller destillerat vatten. Tvättlösningen kan förvaras i 14 dagar vid 2-8 C. Bered tillräcklig mängd tvättlösning för att fullborda körningen (80 ml för en remsa: 8 ml R2 + 72 ml destillerat vatten). Efter öppning, håller sig Koncentrerad tvättlösning, förvarad vid +2-25 C i frånvaro av kontamination, stabil tills det sista användningsdatum som anges på etiketten. 115

Negativt kontrollserum (R3) Rekonstitutera innehållet i en kontrollflaska med 1000 µl (1 ml) sterilt, renat vatten (helst pyrogenfritt vatten). Serumet måste rehydreras just innan testen genomförs. Blanda ordentligt efter att ha låtit serumet rehydreras i 2-3 minuter. Portionera 300 µl i vart och ett av 3 polypropylenmikrocentrifugrör. Frys omedelbart vid -20 C alla kvarvarande polypropylencentrifugrör som inte kommer att användas efter rehydrering. Anm.: De kontrollsera som tidigare rehydrerats och omedelbart frusits ner till -20 C kan tinas upp och användas utan ytterligare rehydrering. Frusna, rehydrerade kontroller kan förvaras vid -20 C i upp till fem veckor. Hantera kontrollseruma på samma sätt som patientprover (300 µl serum + 100 µl Serumbehandlingslösning, etc...). Cut-off-kontrollserum (R4) och Positivt Kontrollserum (R5) Bered så som beskrivs för Negativt Kontrollserum ovan. Substrat-Kromogenreaktionslösning (R8 + R9) Bered Substrat-Kromogenreaktionslösningen genom att tillsätta en del Koncentrerad Kromogen TMB-lösning, R9, till 50 delar TMB Substratbuffert, R8. Bered 2 ml Substrat- Kromogenreaktionslösningen per remsa: 40 µl R9 + 2 ml R8. Lösningen är stabil i 6 timmar om den förvaras i mörker vid rumstemperatur (+18-25 C). Efter öppning, håller sig R8- och R9-reagenserna förvarade vid +2-8 C, i frånvaro av kontamination, stabila tills det sista användningsdatum som anges på etiketten. Konjugat (R6), Serumbehandlingslösning (R7) och Stopplösning (R10) Efter öppning, håller sig R6-, R7- och R10-reagenserna förvarade vid +2-8 C, i frånvaro av kontamination, stabila tills det sista användningsdatum som anges på etiketten. 9- PROVTAGNING Ta blodprover enligt standardiserade laboratoriemetoder. Testen utförs på serum. Serumprover får inte vara kontaminerade med svampsporer och/eller bakterier. Transportera och förvara prover i förslutna rör, oexponerade för luft. Oöppnade prover kan förvaras vid 2-8 C i upp till 5 dagar före testning. Efter att ha öppnats initialt, kan prover förvaras vid 2-8 C i 48 timmar före testning. För längre tids förvaring, förvara serumet vid -70 C. Serumprover kan utsättas för maximalt 4 nedfrysnings/upptiningscykler. Tidigare frysta prover skall blandas ordentligt efter upptining före testning. Resultaten påverkas inte av prover som innehåller 20 mg/l av bilirubin, lipemiska prover som innehåller motsvarande 2 g/l av triolein (triglycerid) eller hemolyserade prover innehållande 165 mg/l hemoglobin. Interferens beroende på albuminöverskott har inte undersökts. Dekomplementera inte sera. 10- ARBETSMOMENT Tillhandahållet materiel Se avsnittet om REAGENSER. Materiel som krävs men inte ingår 1. Sterilt destillerat eller avjoniserat vatten, för spädning av Koncentrerad tvättlösning. 2. Sterilt renat vatten för rekonstitution av kontrollserum. 3. Absorberande papper. 4. Engångshandskar. 5. Skyddsglasögon. 6. Natriumhypoklorit (blekmedel) och natriumbikarbonat. 7. Pipetter eller multipipetter, inställbara eller fasta, för att mäta och portionera 50 µl, 100 µl, 300 µl, och 1000 µl. 8. 1,5 ml polypropylenmikrocentrifugrör med lufttät förslutning, som tål värme upp till 120 C (värmeblock) eller 100 C (kokande vattenbad). 116

a. Skruvförslutningsrör: 1,5 ml Koniska Rör, Bio-Rad Cat. # 224-0100 eller motsvarande. b. Snäppförslutningsrör: EZ Mikroteströr, 1,5 ml, Bio-Rad Cat. # 223-9480 eller motsvarande. 9. Mikrorörförslutningslås (VWR Cat. # 6054001 eller motsvarande). Dessa lås tätar ordentligt snäppförslutningsrören genom att hindra att förslutningarna öppnas vid temperatur- och tryckändringar och gör också att rören är lätta att lyfta ut ur värmeblock eller kokande vattenbad. 10. Laboratoriebänkscentrifugen för 1,5 ml polypropylenrör som kan prestera 10 000 g. 11. Runt, flytande mikrocentrifugrack för en 1 L-bägare. 12. Vortexblandare. 13. Värmeblock. Följande värmeblocksmodeller rekommenderas: a. 1 blockmodell: Grant Cat. # QBD1 (VWR Cat. # 460-0074) b. 2 blockmodell: Grant Cat. # QBD2 (VWR Cat. # 460-0076) 14. Block för värmeblock: båda värmeblocken måste användas med Grant block Cat. # QB-E1 (VWR Cat. # 460-8517) 15. Kokande vattenbad vid 100 C 16. Mikroplattsinkubator vid 37 ± 1 C. 17. Halvautomatisk eller automatisk mikroplattstvätt. 18. Mikroplattsläsare utrustad med 450 nm- och 620 nm-filter. Kommentarer rörande tillvägagångssätt Negativa- och Positiva- samt Cut-off-kontroller måste testas på varje körning för att validera testresultaten. Behandling av serumen Alla kontrollsera: Negativt (R3), cut-off (R4) och positivt (R5) måste bearbetas samtidigt som testproverna: 1. Pipettera 300 µl av varje testserum och kontroll i individuella 1,5 ml polypropylenrör. 2. Tillsätt 100 µl Serumbehandlingslösning (R7) till varje rör. 3. Blanda rören ordentligt genom kraftig blandning eller vortexning för att blanda grundligt. Tillslut röret tätt för att förhindra att det öppnas då det värms, för snäppförslutningsrör: använd ett förslutningslås. Gör inte hål i förslutningen. 4. Värmeblock: Värm rören i ett värmeblock i 6 minuter vid 120 C. Rör får sättas in i blocket först när föreskriven temperatur nåtts (*) ELLER Vattenbad: Vid användning av kokande vattenbad: värm rör i 3 minuter vid 100 C. (*) 5. Avlägsna försiktigt varma rör från värmeblocket eller det kokande vattenbadet och placera i en centrifug. Centrifugera rör vid 10,000 x g i 10 minuter. 6. Supernatanten används för detektering av galactomannan-antigenet. 7. Testa supernatanterna med följande metod: Efter beredning kan supernatanten avlägsnas och förvaras vid 2-8 C i upp till 48 timmar före testning. Om analys av resultaten indikerar att omtestning krävs, måste en annan delmängd av serumet behandlas för testning. (*) Att strikt följa den föreskrivna temperaturen och den föreskrivna procedurtiden liksom användning av rekommenderad materiel är avgörande för om testet är framgångsrikt. Lita inte på den temperatur som visas på apparaten, kontrollera att temperaturen överensstämmer med specifikationerna genom att använda en kalibrerad termometer som skall sättas in i ett rör innehållande mineralolja: 120 C måste nås inuti röret i ett värmeblock och 100 C i ett kokande vattenbad. EIA-procedur Följ det föreslagna protokollet strikt. Följ God Laboratoriesed (GLP) 1. Låt alla reagenser uppnå rumstemperatur (18 25 C) minst 15 minuter före användning. 2. Preparera Tvättlösning, Substrat-Kromogenreaktionslösningen och Negativ-, Positiv- samt Cutoff-kontroll. 117

3. Preparera en tabell för identifiering av testsera och kontroller i mikroplattan. Använd en brunn för det Negativa Kontrollserumet (R3), två brunnar för Cut-off-kontrollserumet (R4), och en brunn för det Positiva Kontrollserumet (R5). 4. Avlägsna platthållaren och mikrobrunnsremsorna (R1) från plattpåsen. Sätt tillbaka alla remsor som inte skall användas i påsen, med torkmedlet och återförslut påsen. 5. Blanda innehållet i Konjugatflaskan (R6) genom vändning före användning. Tillsätt 50 µl Konjugat (R6) till varje brunn. Tillsätt sedan 50 µl av supernatanten från behandlat serum till varje brunn, så som beskrivs ovan. Tillsätt inte serumprover till brunnarna före konjugatet. 6. Täck plattan med plattförsegling, eller på annat sätt för att förhindra avdunstning, och se därvid till att hela ytan täcks och är vattentät. 7. Inkubera mikroplattan i en torr mikroplattsinkubator i 90 ± 5 minuter vid 37 C (± 1 C). 8. Avlägsna plattförseglingen. Aspirera innehållet i alla brunnar till en avfallsbehållare (innehållande natriumhypoklorit). Tvätta plattan 5 gånger, med användning av minst 370 µl tvättlösning. Efter den sista tvättningen, invertera mikroplattan och knacka den försiktigt mot absorberande papper för att avlägsna kvarvarande vätska. 9. Tillsätt snabbt 200 µl Substrat-Kromogenreaktionslösning (R8 + R9) till varje brunn. Undvik exponering för skarpt ljus. 10. Inkubera mikroplattan i mörker vid rumstemperatur (18 till 25 C) i 30 ± 5 minuter. Använd inte vidhäftande film under denna inkubation. 11. Tillsätt 100 µl Stopplösning (R10) till varje brunn, i samma ordningsföljd som Substrat-Kromogen - reaktionslösningen tillsattes. Blanda väl. 12. Torka noga av bottnarna på varje platta. 13. Läs av den optiska densiteten i varje brunn vid 450 nm (referensfilter för 620 nm). Mikroplattorna måste läsas av inom 30 minuter efter tillsats av Stopplösning. 11- KVALITETSKONTROLL (VALIDERINGSKRITERIER) Cut-off-kontroll : O.D. för varje Cut-off-kontrollserum måste vara 0,300 och 0,800. Positiv kontroll : Indexet för det Positiva Kontrollserumet måste vara större än 2,00. I = OD Positiv Kontroll (R5) > 2,00 Genomsnittlig Cut-off-kontroll-OD Negativ kontroll : Indexet för det Negativa Kontrollserumet måste vara mindre än 0,40. I = OD Negativ Kontroll (R3) < 0,40 Genomsnittlig Cut-off-kontroll-OD Om någon av kontrollerna inte uppfyller de valideringskriterier som beskrivs ovan blir analysen ogiltig, och patientprovresultaten skall inte rapporteras. Operatören kan besluta att upprepa analysen, efter granskning av proceduren, eller kontakta tillverkaren för att få hjälp. Om analysen upprepas, skall en ny delmängd av samma prov användas för den upprepade analysen. Beräkningsexempel : 118 Prov Absorbans (OD) Negativ kontroll (R3) OD 0,117 Cut-off-kontroll (R4) OD 0,596 0,576 Positiv kontroll (R5) OD 2,602 Beräkningar Genomsnittligt värde för Cut-off-kontroll För att beräkna genomsnittlig Cut-off-kontroll (R4) OD, addera OD-värdena för Cut-offkontrollreplikaten och dividera resultatet med 2: (0,596 + 0,576) 2 = 0,586

Index för Negativt Kontroll För att beräkna index för den Negativa Kontrollen, dividera OD för den Negativa Kontrollen med det genomsnittliga värdet för Cut-off-kontroll OD: I = 0,117 = 0,20 0,586 Index för Positivt Kontroll För att beräkna index för den Positiva Kontrollen, dividera OD för den Positiva Kontrollen med det genomsnittliga värdet för Cut-off-kontroll OD: Giltighet I exemplet ovan: I = 2,602 = 4,44 0,586 Varje Cut-off-kontroll OD är 0,300 och 0,800, vilket indikerar att Cut-off-kontrollen är giltig. Indexet för den Negativa Kontrollen är < 0,40, vilket anger att den Negativa kontrollen är giltig. Indexet för den Positiva Kontrollen är > 2,00, vilket anger att den Positiva kontrollen är giltig. Testkörningen i detta exempel betraktas som giltig eftersom resultaten uppfyller valideringskriteriet för varje kontroll. 12- TOLKNING AV RESULTAT Närvaron eller frånvaron av galactomannan-antigen i testproverna bestäms genom beräkning av ett index för varje patientprov. Indexet (I), är OD-värdet för provet dividerat med den genomsnittliga optiska densiteten för brunnar innehållande Cut-off-kontrollsera. Beräkning av Cut-off-kontrollernas genomsnittliga optiska densitet: Addera de optiska densiteterna för de två brunnarna som innehåller Cut-off-kontrollsera (R4) och dividera totalvärdet med 2. Beräkning av ett index (I) för varje testserum: Beräkna följande kvot för varje testserum: I = OD-Prov Genomsnittlig Cut-off-kontroll-OD Sera med ett index < 0,50 betraktas som negativt för galactomannan antigen. Anm.: Ett negativt resultat kan ange att patientens resultat ligger under den detekterbara nivån för analysen: Anm.: Negativa resultat utesluter inte diagnosen invasiv Aspergillus-infektion. Upprepad provning rekommenderas om resultatet är negativt, men sjukdomen misstänks föreligga. Sera med ett index 0,50 betraktas som positivt för galactomannan-antigen. För alla positiva patienter rekommenderar vi att en ny alikvot av samma prov upprepas samt att ett nytt prov tas på patienten för uppföljande test. Obs! Ett lägre uppsugningsvärde än 0,000 kan indikera ett metod- eller instrumentfel som bör utvärderas. Ett sådant resultat är ogiltigt och provet måste köras igen. Regelbunden kontroll (två gånger i veckan) av högriskpatienter rekommenderas för att öka testets känslighet och tidiga positiva reaktion. Obs! Platelia Aspergillus EIA är avsedd att användas som ett hjälpmedel vid diagnos av invasiv aspergillusinfektion. Positiva resultat som fastställs med Platelia Aspergillus EIA ska betraktas i samband med andra diagnosmetoder som mikrobiologisk kultur, histologisk undersökning av biopsiprov och radiografiska bevis. 119

Beräkningsexempel : Prov Absorbans (OD) Negativ kontroll (R3) OD 0,117 Cut-off-kontroll (R4) OD 0,596 0,576 Positiv kontroll (R5) OD 2,602 Patientprov #1 0,134 Patientprov #2 0,436 Patientprov #3 1,196 Beräkningar Se avsnittet om Kvalitetskontroll (Valideringskriterier) för ett exempel på beräkningar för att bestämma analyskontrollers giltighet. Genomsnittligt värde för Cut-off-kontroll För att beräkna genomsnittlig Cut-off-kontroll (R4) OD, addera OD-värdena för Cut-offkontrollreplikaten och dividera resultatet med 2: (0,596 + 0,576) 2 = 0,586 Patientprov #1 För att beräkna index på Patientprov #1, dividera OD för Patientprov #1 med genomsnittlig Cutoff-kontroll-OD: I = 0,134 = 0,23 0,586 I detta exempel, är Patientprov #1 negativt, eftersom Indexet 0,23 är < 0,50. Patientprov #2 För att beräkna index på Patientprov #2, dividera OD för Patientprov #2 med genomsnittlig Cutoff-kontroll-OD: I = 0,436 = 0,74 0,586 I detta exempel är Patientprov #2 positivt, eftersom Indexet 0,74 är 0,50. Patientprov #3 För att beräkna index på Patientprov #3, dividera OD för Patientprov #3 med genomsnittlig Cutoff-kontroll-OD: I = 1,196 = 2,04 0,586 I detta exempel, är Patientprov #3 positivt, eftersom Indexet 2,04 är 0,50. 13- METODENS BEGRÄNSNINGAR 1. Negativa resultat kan inte utesluta diagnosen invasiv Aspergillus-infektion. Patienter med risk för invasiv Aspergillus-infektion skall testas två gånger i veckan. 2. Platelia Aspergillus-proceduren och tolkningen av resultaten måste följas vid testning av prover för förekomsten av galactomannan-antigen. Användaren av kiten tillråds att noggrant läsa igenom förpackningsbilagan innen testen genomförs. I synnerhet måste testförfarandet följas noggrant för prov- och reagenspipettering, plattvättning och tidpassning av inkubationsstegen. 3. Om prover eller reagens inte tillsätts enligt proceduranvisningarna kan man få ett felaktigt negativt testresultat. Upprepad testning av ytterligare prover skall övervägas när det föreligger klinisk misstanke om invasiv Aspergillus-infektion eller procedurfel. 120

4. Kontaminering av negativa patientprovbrunnar från positiva kontroll-/patientprovbrunnar är möjlig om innehållen i en brunn spiller över i en annan brunn på grund av ovarsam hantering av mikroplattan eller bristande pipetteringsteknik vid tillsats av reagenser. 5. Prestandan hos Platelia Aspergillus EIA har inte utvärderats med neonatala eller pediatriska serumprover. 6. Platelia Aspergillus EIA kan uppvisa minskad detektering av galactomannan hos patienter med kronisk granulomatös sjukdom (CGD) och Jobs syndrom 36, 37. 7. Samtidig användning av antifungalterapi riktad mot mögelsvamp kan hos vissa patienter med invasiv Aspergillus-infektion resultera i minskad sensitivitet för Platelia Aspergillus EIA 20. 8. Platelia Aspergillus EIA har inte utvärderats för användning med plasma eller andra provtyper såsom urin, BAL, eller CSF. 9. Prestandan hos Platelia Aspergillus EIA har inte fastställts för manuell avläsning och/eller visuell resultatbestämning. 10. Andra svampgenus som Penicillium, Alternaria, Paecilomyces, Geotrichum och Histoplasma har kunnat påvisas hos råttor, EBA-2 monoklonala antikroppar har använts i analysen av Aspergillus galactomannan. Histoplasmos kan finnas i endemiska områden samt delar av USA 23, 32, 38. 11. Positiva reaktioner utan några kliniska tecken: Med tanke på den tidiga detektionen av galactomannan-antigen detekteras det i sera till och med innan kliniska och/eller radiologiska tecken uppträder vilket gör att positiva reaktioner utan kliniska tecken ofta iaktas. De motsvarar verkligt positiva" tester hos patienter för villka diagnosen påvisad eller sannolik invasiv Aspergillus-infektion ställs senare. I vissa fall bör dock en del faktorer tas i beaktande vid tolkning av testen: a. Positiva reaktioner utan några kliniska tecken har rapporterats, i synnerhet hos yngre barn 26. Även om vissa av dessa fall kan kopplas till en verklig cirkulation av Aspergillusantigener 5, kan de flesta betraktas som felakigt positiva. b. Galaktofuranos har demonstrerats i olika livsmedel, i synnerhet sädesslag, sädesprodukter och gräddefterrätter 1, 17. Till skillnad från human mjölk, innehåller humaniserad mjölk ofta höga koncentrationer av galactomannan 10. Dietfaktorn måste därför tas i beaktande vid tolkningen av antigenemi hos yngre barn, och mer generellt hos alla patienter med en förändrad tarmbarriär 4, 10. Alla fall av positiva antigenemier som inte åtföljs av kliniska tecken bör tolkas ännu försiktigare i denna patentpopulation 17. c. Det har rapporterats om positiva galactomannan-testresultat hos patienter som får piperacillin / tazobactam. Det har också rapporterats om vissa satser av piperacillin / tazobactam som har visat sig vara positiva för galactomannan antigen. De positiva testresulten för patienter som får piperacillin / tazobactam bör därför tolkas försiktigt och bekräftas med andra diagnosmetoder. Detektion av galactomannan har också rapporterats i vissa satser av amoxicillin kopplade till klavulansyra i parenterala beredningar. Därför bör halvsyntetiska ß-laktambehandlingar beaktas vid tolkningen av testen 1, 21. Men eftersom Platelia Aspergillus EIA kan detektera galactomannan antigen långt innan kliniska eller radiologiska tecken föreligger, kan förekomsten av invasiv Aspergillus-infektion inte uteslutas. Därfär bör patienter som behandlas med piperacilin/tazobactam med positiva testresultat följas upp noggrant. d. Positiva reaktioner i frånvaro av kliniska symptom kan observeras i patienter som får produkter som innehåller galaktomannan, antingen intravenöst eller oralt (i samband med förändrat tarmskydd). Närvaron av galaktomannan i dessa produkter kan förklaras med att en jäsningsmetod som baseras på svampmikroorganismer används. Ett positivt resultat observeras inte i en patient, om inte serumkoncentrationen av exogent galaktomannan når eller överskrider testets detektionsnivå. Om ett misstänkt positivt resultat fås utan att det finns tydliga symptom rekommenderar vi att produkterna som patienten intar utreds samt deras tillverkningsmetod och råmaterialets ursprung 11, 24, 31. 121

14- FÖRVÄNTADE VÄRDEN Den förväntade förekomsten av invasiv Aspergillus-infektion varierar med patientpopulationen; andelar på 5-20% har rapporterats 7, 13. En klinisk studie genomfördes på totalt 4873 serumprover från 239 episoder (203 patienter) med hematologisk malignitet eller hematopoetisk stamcellstransplantation diagnostiserad med och utan invasiv Aspergillus-infektion, vid två testcenter i Europa för att bestämma prestandan för Platelia Aspergillus EIA. Eftersom en patient kan inkluderas i studien vid mer än ett tillfälle, utfördes analysen enligt behandlingsepisoder. Med episod menas den tid som en klinisk händelse tar (t.ex. Transplantation, GVHD etc.) Därför kan mer än en episod ha iakttagits för en enda patient. Den genomsnittliga förekomstgraden för denna studie var 16% (38/239). Distributionen av indexvärden för dessa populationer representeras i följande diagram: Patienter diagnostiserade utan invasiv Aspergillus-infektion (kontrollpopulation) Totalt 3691 serumprover erhållna från 201 episoder (168 patienter) vid två testcenter i Europa testades med Platelia Aspergillus EIA-testen. Index värdenas spridning visas i följande diagram: Antal serum 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 3240 330 Spridning av Serumindexvärde från Kontrollpatientpopulation N= 3691 54 32 13 4 4 3 0 1 0 0 3 1 0 6 Index Detta spridningsdiagram visar galactomannananalysresultaten för de 3691 serumprover från 201 episoder (168 kontroll - patienter) i denna studie (patienter som undergår immun hämmande terapi för HSCT, eller för att behandla hematologisk malignitet). 2 1,5 1 0,5 0 KONTROLLPOPULATION: INDEXSPRIDNING / EPISOD (N= 201 episoder från 168 patienter) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 Episodnummer Patienter diagnostiserade med invasiv Aspergillus-infektion Detta spridningsdiagram avbildar galactomannananalysresultat för de 1182 serumproverna från 38 episoder (35 patienter) i denna studie diagnostiserad med påvisad eller sannolik invasiv Aspergillus-infektion enligt definition av EORTC/NIAID. 10,0 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 PÅVISAD / SANNOLIK INVASIV ASPERGILLOSIS: SPRIDNING AV INDEX / EPISOD (N=38 episoder från 35 patienter) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 Episodnummer Cut-off 0,5 122

Inte alla serumprov från varje patient förväntas vara positivt. Den förväntade förekomsten av invasiv Aspergillus-infektion varierar med patientpopulation; andelar på 5-20% har rapporterats 7, 13. Förekomstandelen för denna studie var 16%. Följande diagram visar exempel på en patient utan kliniska tecken eller symptom på invasiv Aspergillus-infektion (negativ för Aspergillus) och en patient med påvisad invasiv Aspergillusinfektion (positiv för Aspergillus). Negativ patient : KONTROLLPATIENT Positiv patient : Index 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 10 20 30 40 50 60 Dagar PATIENT MED PÅVISAD INVASIV ASPERGILLOSIS Index 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 10 20 30 40 50 60 Dagar 15. SPECIFIKA PRESTANDAEGENSKAPER A. Reproducerbarhetsstudier Inter-analys- och intra-analyssvariabilitet för Platelia Aspergillus EIA bestämdes i en studie som använde en panel på 6 poolade patientserumprover (ett negativt, ett lågt positivt, två positiva, och två högpositiva) erhållna från tre kliniska försöksplatser i Nordamerika. Var och en av de 6 panelmedlemmarna testades i triplikat (x3) på 3 olika dagar, med en lot, på två platser (totalt antal replikat på varje plats = 9). Var och en av de 6 panelmedlemmarna testades i duplikat (x2) på tre olika dagar, med 1 lot, på en tredje plats (totalt antal replikat på den tredje platsen = 6). En (1) operatör utförde all precisionstestning på varje plats. Data analyserade i enlighet med National Committee for Clinical Laboratory Standards-standarden (NCCLS). Den genomsnittliga optiska densiteten (OD) och genomsnittligt indexvärde, standardavvikelsen (SD), variationskoefficientprocenten (%CV), inomkörningsprecision (intra-analys) och inom-platsprecision (inter-analys) för varje panelmedlem på varje plats illustreras nedan i följande tabeller. 123

Plats 1 Panelmedlem Neg. Låg pos. Pos. #1 Pos. #2 Hög pos. #1 Hög pos. #2 Neg. kontroll CO kontroll Pos. kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index OD Index N 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 3 3 6 6 3 3 Medelvärde 0,052 0,09 0,445 0,74 0,702 1,17 0,931 1,563 1,227 2,06 2,887 4,83 0,046 0,08 0,606 1,00 2,216 3,67 Standardawikelse 0,022 1 inom körning (intraanalys) 0,002 0,00 0,03 0,059 0,09 0,044 0,08 0,051 0,09 0,089 0,17 0,02 0,03 %Variationskoefficient 4,8% Standardawikelse totalt (inter-analys) 2 0,036 0,04 0,051 %Variationskoefficient 4,4% 8,4% 7,6% 4,7% 5,1% 4,2% 4,4% 3,1% 3,6% 0,25 0,058 0,29 0,169 0,58 11,5% 10,4% 10,0% 11,6% 4,7% 15,7% 4,7% 14,3% 5,9% 11,9% 3,7% 3,4% 0,102 0,03 0,317 0,12 16,9% 2,8% 14,3% 3,3% Plats 2 Panelmedlem Neg. Låg pos. Pos. #1 Pos. #2 Hög pos. #1 Hög pos. #2 Neg. kontroll CO kontroll Pos. kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD OD Index OD Index OD Index OD Index N 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 3 3 6 6 3 3 Medelvärde 0,040 0,10 0,280 0,70 0,364 0,89 0,602 1,49 0,801 2,01 1,361 3,43 0,074 0,18 0,415 1,00 1,197 2,97 Standardawikelse inom körning (intraanalys) 0,006 0,01 0,041 0,09 0,023 0,07 0,045 0,11 0,046 0,10 0,047 0,11 1 0,00 0,01 %Variationskoefficient 14,5% 13,0% 6,4% 7,6% 7,5% 7,1% 5,7% 4,8% 3,5% 3,2% Standardawikelse totalt (inter-analys) 2 0,006 0,03 0,058 0,19 0,083 0,18 0,057 0,28 0,042 0,53 0,079 1,00 %Variationskoefficient 20,8% 27,0% 22,7% 19,8% 9,5% 18,7% 5,3% 26,5% 5,8% 29,2% 20,8% 27,0% 22,7% 19,8% 9,5% 1,1% 1,1% 0,094 0,01 0,068 0,54 22,7% 0,9% 5,7% 18,2% Plats 3 Panelmedlem Neg. Låg pos. Pos. #1 Pos. #2 Hög pos. #1 Hög pos. #2 Neg. kontroll CO kontroll Pos. kontroll OD Index OD Index OD Index OD Index OD OD Index OD Index OD Index OD Index N 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 3 3 6 6 3 3 Medelvärde 0,049 0,10 0,388 0,81 0,652 1,36 0,830 1,73 1,158 2,41 2,378 4,96 0,059 0,12 0,480 1,00 1,652 3,45 Standardawikelse inom körning (intraanalys) 0,003 0,01 0,009 1 0,02 0,082 0,17 0,068 0,14 0,094 0,20 0,126 0,25 0,028 0,06 %Variationskoefficient 2,4% 2,4% 12,5% 12,2% 8,2% 8,2% 8,1% 8,2% 5,3% 5,1% Standardawikelse totalt (inter-analys) 2 0,012 0,03 0,078 %Variationskoefficient 0,13 0,068 0,15 0,104 0,25 0,082 0,15 0,111 0,34 10,5% 11,1% 12,5% 14,3% 7,1% 6,2% 4,7% 6,8% 5,8% 5,8% 0,028 0,04 0,056 0,23 5,8% 4,1% 3,4% 6,6% 1 NCCLS EP5-A, Vol 19, Nr 2, Sida 24, Ekvation (C2) 2 NCCLS EP5-A, Vol 19, Nr 2, Sida 25, Ekvation (C3) och Ekvation (C4) 124

B. Korsreaktivitet En studie för att utvärdera inverkan av potentiellt interfererande medicinska tillstånd icke-relatierade till invasiv Aspergillus-infektion utfördes med en lot av Platelia Aspergillus EIA-kiten. Följande serumprover testades med avseende på korsreaktivitet med Platelia Aspergillus EIA. Totalt testades 151 sera. Patologi # Testade prover # Positiva Reumatoid faktor 10 0 ANA Positiv 10 0 IgG Hypergammaglobulinemi 10 0 IgM Hypergammaglobulinemi 10 0 Cancer* 11 0 Icke-viral cirros (primär biliär; alkoholinducerad; droginducerad) 10 0 Multipla Transfusioner 10 0 Flerfödande kvinnor 10 0 HAV 10 0 HCV 10 0 Röda hund 10 0 CMV 10 0 Syfilis (RPR+) 10 0 Toxoplasmos 10 0 Mykoplasma 10 0 * En vardera av urinblåsa, bröst(2), tjocktarm, livmoderslemhinna, lunga, prostata, njure och skivepitel(3). C. Klinisk testning Klinisk testning för utvärdering av sensitivitet, specificitet och prediktivt värde för Platelia Aspergillus EIA genomfördes på två platser i Belgien och i Nederländerna. Studien genomfördes retrospektivt med användning av totalt 4873 serumprover insamlade från 203 patienter från följande populationer*: Patienter utan tecken på invasiv Aspergillus-infektion (kontrollpatienter) Patienter med sannolik invasiv Aspergillus-infektion Patienter med påvisad invasiv Aspergillus-infektion * Samarbetsgruppen för Invasiv svampinfektion (The Invasive Fungal Infection Cooperative Group - IFICG) inom den Europeiska Cancerforskningsorganisationen (European Organization for Research and Treatment of Cancer - EORTC) och Svampstudiegruppen Mycosis Study Group (MSG) of the National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) har definierat kriterier för diagnos av Invasiv Aspergillus-infektion (IA) hos patienter med hematologisk malignitet eller hematopoetisk stamcellstransplantation 2. Påvisad invasiv Aspergillus-infektion definieras genom positiv mikrobiologisk odling erhållen genom steril procedur från det påverkade området, och påvisande av histopatologiskt tillämpliga morfologiska former i en värd med symptom hänförda till svampinfektionen. Sannolik invasiv Aspergillus-infektion definieras som åtminstone ett mikrobiologiskt kriterium och ett eller två mindre kliniska kriterier från ett område överensstämmande med infektion, i en värd med symptom hänförda till svampinfektionen. Möjlig invasiv Aspergillus-infektion definieras som åtminstone ett mikrobiologiskt kriterium eller ett större eller två mindre kliniska kriterier från ett område överensstämmande med infektion, i en värd med symptom hänförda till svampinfektionen. 125

Med tanke på den relativa sällsyntheten av sannolik och påvisad invasiv Aspergillus-infektion, erbjuder vi följande definition av klinisk sensitivitet och specificitet för denna studies syften. SENSITIVITET Resultaten från denna studie har analyserats med avseende på patientsensitivitet. Sensitivitetstestning genomfördes med hjälp av Platelia Aspergillus EIA på två ställen i totalt 38 episoder från 35 benmärgs transplantationer (BMT) och leukemipatienter diagnostiserade med påvisad eller sannolik invasiv Aspergillus-infektion. 1. Påvisad Aspergillus-infektion (enligt definition av IFICG / EORTC ; se ovan) Kombinerade platser N = 19 episoder från 16 patienter Sensitivitet: 100% (19/19). Anm.: Det 95%iga konfidensintervallet kunde inte beräknas på grund av otillräcklig provstorlek. 2. Sannolik Aspergillus-infektion (enligt definition av IFICG / EORTC ; se ovan) Kombinerade platser N = 19 episoder från 19 patienter Sensitivitet: 94,7% (18/19). Anm.: Det 95%iga konfidensintervallet kunde inte beräknas på grund av otillräcklig provstorlek. 3. Kombinerad påvisad och sannolik Aspergillus-infektion (enligt definition av IFICG / EORTC ; se ovan) Kombinerade platser N = 38 episoder från 35 patienter Sensitivitet: 97,4% (37/38). Det 95% konfidensintervallet är 86,2 99,9%. SPECIFICITET Specificitetstestning genomfördes med användning av Platelia Aspergillus EIA på två plaster på ett kombinerat totalvärde på 3691 prover erhållna från 201 episoder (168 patienter) utan tecken på invasiv Aspergillus-infektion (kontrollpatienter). Plats 1: N = 3060 prover från 103 episoder (70 patienter) Specificitet: 92,2% (95/103) Det 95%iga konfidensintervallet är 85,3 96,6%. Plats 2: N = 631 prover från 98 episoder (98 patienter) Specificitet: 88,8% (87/98) Det 95%iga konfidensintervallet är 80,8 94,3%. Kombinerade Platser N = 3691 prover från 201 episoder (168 patienter) Specificitet: 90,5% (182/201) Det 95%iga konfidensintervallet är 85,6 94,2%. PREDIKTIVA VÄRDEN Positiva och negativa prediktiva värden (Positive and Negative Predictive Values (PPV, NPV) har analyserats för patientpopulationen i denna studie, på basis av den verkliga genomsnittliga förekomstgraden på 16% konstaterad i denna studie. PPV: 66,1% (37/56) NPV: 99,4% (182/183) Analys utfördes också beträffande positiva resultat när 2 prover i följd hade ett index på över eller lika med 0,5. 126

Prestanda sammanfattas i följande tabell: Sensitivitet* Specificitet PPV NPV Kombinerade platser beträffande 1 prov 0,5 97,4% (37/38) 90,5% (182/201) 66,1% (37/56) 99,4% (182/183) Kombinerade platser beträffande 2 prover i följd 0,5 92,1% (35/38) 97,5% (196/201) 87,5% (35/40) 98,5% (196/199) *: Sensitivitet beräknades på påvisad och sannolik invasiv Aspergillus-infektion 16- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Alla tillverkade reagenser kontrolleras med vårt kvalitetssystem som börjar vid mottagningen av råmaterialet och fortgår ända till den slutliga försäljningen av produkten. Varje lot undergår kvalitetskontrollbedömningar och släpps ut på marknaden först när den uppfyller fördefinierade godkännandekriterier. Registren rörande produktionen och kontrollen av varje enskild lot finns arkiverade hos Bio-Rad. 17- REFERENSER Se den Engelsk versionen. 127

17- BIBLIOGRAPHY 1. Ansorg, R., R. Van Den Boom, and P. M. Rath. 1997. Detection of Aspergillus galactomannan antigen in foods and antibiotics. Mycoses 40: p. 353-7. 2. Ascioglu, S., J. H. Rex, B. De Pauw, J. E. Bennett, J. Bille, F. Crokaert, D. W. Denning, J. P. Donnelly, J. E. Edwards, Z. Erjavec, D. Fiere, O. Lortholary, J. Maertens, J. F. Meis, T. F. Patterson, J. Ritter, D. Selleslag, P. M. Shah, D. A. Stevens and T. J. Walsh. 2002. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: an international consensus. Clin. Infect. Dis. 34: p. 7-14. 3. Aubry, A., R. Porcher, J. Bottero, S. Touratier, T. Leblanc, B. Brethon, P. Rousselot, E. Raffoux, J. Menotti, F. Derouin, P. Ribaud and A. Sulahian. 2006. Occurrence and kinetics of false-positive Aspergillus galactomannan test results following treatment with beta-lactam antibiotics in patients with hematological disorders. J. Clin. Microbiol. 44 (2): p. 389-94. 4. Blijevens, N. M., J. P. Donnelly, J. F. Meis, P. E. Verweij, and B. E. De Pauw. 2002. Aspergillus galactomannan antigen levels in allogeneic haematopoietic stem cell transplant recipients given total parenteral nutrition. Transpl. Infect. Dis. 4: p. 64-65. 5. Chambon-Pautas, C., J. M. Costa, M. T. Chaumette, C. Cordonnier, and S. Bretagne. 2001. Galactomannan and polymerase chain reaction for the diagnosis of primary digestive aspergillosis in a patient with acute myeloid leukaemia. J. Infect. 43: p. 213-214. 6. De Repentigny, L., L. Kaufman, G. T. Cole, D. Kruse, J. P. Latge, and R. C. Matthews. 1994. Immunodiagnosis of Invasive Fungal Infections. J. Med. Vet. Mycol. 32: p. 239-252. 7. Denning, D. W. 1998. Invasive Aspergillosis. Clin. Infect. Dis. 26: p. 781-803. 8. Dupont, B., M. Richardson, P. E. Verweij, and J. F. G. M. Meis. 2000. Invasive Aspergillosis. Medical Mycology 38: p. 215-224. 9. Erjavec, Z. and P. E. Verweij. 2002. Recent progress in the diagnosis of fungal infections in the immunocompromised host. Drug Resist. Updat. 5: p. 3-10. 10. Gangneux, J. P., D. Lavarde, S. Bretagne, C. Guiguen, and V. Andemer. 2002. Transient Aspergillus antigenaemia: think of milk. Lancet 359: p. 1251. 11. Hage,C. A., J. M. Reynolds, M. Durkin, L. J. Wheat, K. S. Knox. 2007. Plasmalyte as a Cause of false-positive results for Aspergillus galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid. J. Clin. Microbiol. 45: p. 676-677. 12. Herbrecht, R., V. Letscher-Bru, C. Oprea, B. Lioure, J. Waller, F. Campos, O. Villard, K. L. Liu, S. Natarajan-Ame, P. Lutz, P.Dufour, J. P. Bergerat, and E. Candolfi. 2002. Aspergillus galactomannan detection in the diagnosis of Invasive Aspergillosis in cancer patients. J. Clin. Oncol. 20: p.1898-1906. 13. Herbrecht, R., D. Denning, T. Patterson, J. Bennett, R. Greene, J. Oestmann, W. Kern, K. Marr, P. Ribaud, O. Lortholary, R. Sylvester, R. Rubin, J. Wingard, P. Stark, C. Durand, D. Caillot, E. Thiel, P. Chandrasekar, M. Hodges, H. Schlamm, P. Troke, B. DePauw. 2002. Voriconazole Versus Amphotericin B for Primary Therapy of Invasive Aspergillosis. N. Engl. J. Med. 347, 6: p. 408-415. 14. Latge, J. P. 1995. Tools and trends in the detection of Aspergillus fumigatus. Curr. Top. Med. Mycol. 6: p. 245-281. 17

15. Latge, J. P. 1999 Aspergillus fumigatus and Aspergillosis. Clin. Microbiol. Rev. 12[2], 310-50. 16. Latge, J. P., H. Kobayashi, J. P. Debeaupuis, M. Diaquin, J. Sarfati, J. M. Wieruszeski, E. Parra, J. P. Bouchara, and B. Fournet. 1994. Chemical and immunological characterization of the extracellular galactomannan of Aspergillus fumigatus. Infect. Immun. 62: p. 5424-5433. 17. Letscher-Bru, V., A. Cavalier, E. Pernot-Marino, H. Koenig, D. Eyer, J. Waller, and E. Candolfi. 1998. Recherche d'antigène galactomannane aspergillaire circulant par Platelia TM Aspergillus: antigénémies positives persistantes en l'absence d'infection. J. Med. Mycol. 8: p. 112-113. 18. Maertens, J., J. Verhaegen, H. Demuynck, P. Brock, G. Verhoef, P. Vandenberghe, J. Van Eldere, L. Verbist, and M. Boogaerts. 1999. Autopsy-controlled prospective evaluation of serial screening for circulating galactomannan by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for hematological patients at risk for Invasive Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 37: p. 3223-3228. 19. Maertens, J., J. Verhaegen, K. Lagrou, J. Van Eldere, and M. Boogaerts. 2001. Screening for circulating galactomannan as a noninvasive diagnostic tool for Invasive Aspergillosis in prolonged neutropenic patients and stem cell transplantation recipients: a prospective validation. Blood 97: p. 1604-1610. 20. Marr K. A., M. Laverdiere, A. Gugel and W. Leisenring. 2005. Antifungal therapy decreases sensitivity of the Aspergillus galactomannan enzyme immunoassay. Clin. Infect. Dis. 40: p. 1762-9. 21. Mattei, D., D. Rapezzi, N. Mordini, F. Cuda, C. Lo Nigro, M. Musso, A. Arnelli, S. Cagnassi, and A. Gallamini. 2004. False-positive Aspergillus galactomannan enzyme-linked immunosorbent assay results in vivo during amoxicillin-clavulanic acid treatment. J. Clin. Microbiol. 42: p. 5362-5363. 22. Mennink-Kersten M. A. S. H., D. Ruegebrink, R. Klont, A. Warris, H. J. M. Op den Camp and P. Verweij. 2005 Bifidobacterial Lipoglycan as a New Cause for False-Positive Platelia Aspergillus Enzyme Immunoabsorbent Assay Reactivity. J. Clin. Microbiol. 43(8): p. 3925-3931. 23. Nareddy, S., P. H. Chandrasekar. 2008. False-positive Aspergillus galactomannan (GM) assay in histoplasmosis. J. Infection 56: p. 80-81. 24. Racil, Z., I. Kocmanova, M. Lengerova, J. Winterova, J. Mayer. 2007. Intravenous PLASMA- LYTE as a Major Cause of False-Positive Results of Platelia Aspergillus EIA Test for Galactomannan Detection in Serum. J. Clin. Microbiol. 45(2): p. 3141-3142 25. Rimek, D., T. Zimmermann, M. Hartmann, C. Prariyachatigul, and R. Kappe. 1999. Disseminated Penicillium marneffei infection in an HIV-positive female from Thailand in Germany. Mycoses 42: p. 25-8. 26. Siemann, M., M. Koch-Dorfler, and M. Gaude. 1998. False positive results in premature infants with the Platelia TM Aspergillus sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. Mycoses 41: p. 373-7. 27. Stynen, D., A. Goris, J. Sarfati, and J. P. Latge. 1995. A new sensitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect galactofuran in patients with Invasive Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 33: p. 497-500. 28. Stynen, D., J. Sarfati, A. Goris, M. C. Prevost, M. Lesourd, H. Kamphuis, V. Darras, and J. P. Latge. 1992. Rat monoclonal antibodies against Aspergillus galactomannan. Infect. Immun. 60: p. 2237-2245. 18

29. Sulahian, A., F. Boutboul, P. Ribaud, T. Leblanc, C. Lacroix, and F. Derouin. 2001. Value of antigen detection using an enzyme immunoassay in the diagnosis and prediction of Invasive Aspergillosis in two adult and pediatric hematology units during a 4-year prospective study. Cancer 91: p. 311-318. 30. Sulahian, A., M. Tabouret, P. Ribaud, J. Sarfati, E. Gluckman, J. P. Latge, and F. Derouin. 1996. Comparison of an enzyme immunoassay and latex agglutination test for detection of galactomannan in the diagnosis of Invasive Aspergillosis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 15: p. 139-145. 31. Surmont,I., W. Stockman. 2007. Gluconate-containing intravenous solutions: Another cause of false-positive galactomannan assay reactivity. J. Clin. Microbiol. 45: p. 1373. 32. Swanink, C. M., J. F. Meis, A. J. Rijs, J. P. Donnelly, and P. E. Verweij. 1997. Specificity of a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for detecting Aspergillus galactomannan. J. Clin. Microbiol. 35: p. 257-260. 33. Verweij, P. E., E. C. Dompeling, J. P. Donnelly, A. V. Schattenberg, and J. F. Meis. 1997. Serial monitoring of Aspergillus antigen in the early diagnosis of Invasive Aspergillosis. Preliminary investigations with two examples. Infection 25: p. 86-89. 34. Verweij, P. E. and J. F. Meis. 2000. Microbiological diagnosis of Invasive Fungal Infections in transplant recipients. Transpl. Infect. Dis. 2: p. 80-87. 35. Verweij, P. E., D. Stynen, A. J. Rijs, B. E. de Pauw, J. A. Hoogkamp -Korstanje, and J. F. Meis. 1995. Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay compared with Pastorex latex agglutination test for diagnosing Invasive Aspergillosis in immunocompromised patients. J. Clin. Microbiol. 33: p. 1912-1914. 36. Verweij, P. E., C. M. Weemaes, J. H. Curfs, S. Bretagne, J. F. Meis. 2000. Failure to detect circulating Aspergillus markers in a patient with chronic granulomatous disease and Invasive Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 38: p. 3900-3901. 37. Walsh T. J., R.L. Schaufele, T. Sein, J. Gea-Banacloche, M. Bishop, N. Young, R. Childs, J. Barrett, H. L. Malech, and S.M. Holland. 2002. Reduced expression of galactomannan antigenemia in patients with Invasive Aspergillosis and chronic granulomatous disease or Job s syndrome. Abstracts of the 40th Annual Meeting of the Infectious Diseases Society of America. Arlington, VA. P. 105 ; Abstr. 345. 38. Wheat, L. J., E. Hackett, M. Durkin, P. Connolly, R. Petraitiene, T. J. Walsh, K. Knox, C. Hage. 2007. Histoplasmosis-associated cross-reactivity in the Bio-Rad Platelia Aspergillus enzyme immunoassay. Clin. Vaccine Immunol. 14 (5): p. 638-40. 39. Yeo, S. F. and B. Wong. 2002. Current Status of Nonculture Methods for Diagnosis of Invasive Fungal Infections. Clin. Microbiol. Rev. 15: p. 465-484. 19