Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13 1 Varje fråga ger maximalt 5 p. 2 SKRIV NAMN OCH PERSONNUMMER PÅ ALLA SIDOR! 3 Glöm inte att lämna in KURSUTVÄRDERINGEN! Observera att i kursutvärderingen för laborationskursen lämnas ut separat här. Glöm inte att fylla i den delen om du gick laborationskursen.
Minneslista: Mats kommer och svarar på eventuella frågor under tentan. Tentamen äger rum i Eden 26 (bakom Gamla Kirurgen) onsdagen den 29 maj kl. 8.00-13.00. Ingen akademisk kvart. Ta med tejp och en lapp för att markera på dörren vilken verksamhet som äger rum där. Lägg före tentans början ut tentamensomslag och papper (minst 10/student) på de bänkar där eleverna (ca 16) skall sitta. Ta med papper och tentamensomslag till alla eleverna. Observera att det behövs minst 20 tentamensomslag och ca 400 papper (minst ett per elev och fråga) För en lista (namn och personnummer) på vilka som deltagit i tentamen. Alla som deltagit i tentamen skall lämna in ett ifyllt tentamensomslag, även om de inte svarat på någon fråga. Kontrollera att eleverna har betalt terminsräkning senast när de lämnar in tentan. För en lista på att detta skett. Om detta inte kan ske för att terminsräkningen inte tagits med så skall eleverna komma upp på avdelningen och visa denna vid ett senare tillfälle. Ingen får lämna in sin tenta före 9.00. Ingen får komma och börja tentera sedan någon lämnat in tentan och gått ifrån lokalen. Inga hjälpmedel utöver papper och penna är tillåtna. Ta med extra kursutvärderingar om någon elev glömt sina exemplar. Ta även med kursutvärdering för labkursen. Samla in kursutvärderingar (både för teoridelen och labdelen).
Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13 Varje fråga ger maximalt 5 p. (<25 p = U; 25-32.4 p = 3; 32,5-41,9p = 4; 42-50 p = 5) OBS! Använd ett nytt papper för varje fråga OBS! SKRIV NAMN OCH PERSONNUMMER PÅ ALLA SIDOR! Glöm inte att lämna in KURSUTVÄRDERINGEN! 1 Immunsystemet består av många olika celler, molekyler och lymfatiska organ, som är sammankopplade via blodcirkulationen och det lymfatiska systemet. A) Beskriv hur det lymfatiska systemet är sammankopplat med blodsystemet B) Vilka är de primära och sekundära lymfatiska organen? C) Beskriv kortfattat vad som sker med B och T-celler a) i de primära lymfocytiska organen b) i de sekundära lymfatiska organen 2 Variabilitet är ett viktigt begrepp inom immunologi. I immunförsvaret har vi bland annat tre grupper av molekyler (i) antikroppar, (ii) T cellens receptorer (TCR), och (iii) major histocompatability complex (MHC) klass I och II molekyler, vars funktioner står och faller med detta fenomen. De måste alla specifikt kunna känna igen och binda till sina ligander. Beskriv kortfattat hur dess tre grupper av molekyler har löst detta problem att skapa molekyler med olika specificitet. 3 Lisa har skurit sig i fingret och fått en infektion där. Beskriv aktiveringen av TH-cellerna (CD4+ T celler eller hjälpar-t celler), A) Vilka celler hjälper till att sätta igång TH-cellerna? B) Vilka molekyler är viktiga vid aktiveringen av TH cellerna och var sker aktiveringen? (förklara kortfattat!) 4 Jämför dendritiska cellers (t.ex. Langerhans celler) och follikulära dendritiska cellers (FDC) funktionella egenskaper i relation till regleringen av antikroppsproduktion. 5 Komplementsystemet består av ett antal proteiner som kan verka både inom det ickeinducerade (medfödda immunsystemet) och tillsammans med antikroppar för att skydda individen från t.ex. bakteriella infektioner. A) Ge ett exempel på hur komplement aktiveras i frånvaro av antikroppar för att eliminera en bakterie. B) På vilka sätt (ge två exempel) kan komplement bidra till att en bakterie kan oskadliggöras i frånvaro av antikroppar. C) Hur kan komplement samverka med antikroppar för att eliminera en bakterie (ge två exempel)
6 Din nyanställde kollega Kalle har fått i uppgift att producera ett antiserum i mus mot albumin upprenat från ko. Han immuniserade en mus (subkutan injektion, dvs. injektion av antigen i adjuvant under huden) för första gången för 4 dagar sedan och han har redan nu fått serum innehållande antikroppar från musen. Han har analyserat detta med en ELISA där han A) bundit in ko-albumin i plattan B) satt till spädningar av sitt musserum C) detekterat inbundna antikroppar med enzymmärkta antikroppar riktade mot musantikroppars lätta kedja. Han fann då att musens serum innehöll antikroppar riktade mot ko-albumin. Han försökte sen rena upp sina antikroppar på en kolonn till vilken han bundit in protein G. Detta är ett protein som binder till sig mus-igg men inte andra typer av musantikroppar. Han eluerade inbundna antikroppar från kolonnen med en sur buffert (ph 2.2) (dvs med metodologi som rekommenderades av leverantören). Vid elekrofores kunde han också se att han verkligen hade mycket IgG i sin upprenade preparation. Till sin stora förvåning (och förtvivlan) kunde han dock inte hitta några antikroppar specifika för ko-albumin i sin upprenade preparation av antikroppar. Istället visade det sig att all reaktiviteten återfanns bland de antikroppar som gått rakt igenom kolonnen. (1) Varför band inte antikropparna specifika för ko-albumin in till kolonnen? (2) Vad skulle du rekommendera att Kalle skall göra vid nästa immunisering för att hans musserum då skall innehålla antikroppar som han kan rena upp med hjälp av kromatografi på en kolonn med protein G? 7 Ge ett exempel på hur precipitering av antikroppar kan användas för kvantifiering av proteiner. 8 Du har immuniserat 20 kaniner och 10 getter med en peptid (sekvens: NRKSPYYRDFSGAHA) kopplad till proteinet albumin (se nedan) och fått fram antisera innehållande antikroppar från alla dessa djur. Vid testning visar de sig att alla preparationerna innehåller antikroppar som inte bara binder till din peptid men också till en närbesläktad peptidsekvens (peptid A: NRKSPYYRDFSGGHA) vilket gör att antikropparna inte kan användas för det avsedda analysändamålet. Du har därför också gjort hybridom efter immunisering av möss. Även i detta fallet reagerar de monoklonala antikropparna inte bara med ditt antigen men de har också den oönskade reaktiviteten med det andra antigenet (peptid A). (1) Beskriv kortfattat hur du gick till väga för att göra hybridom som producerar de monoklonala antikropparna. (2) Föreslå ett nytt tillvägagångssätt för att lösa problemet d.v.s. hur skall du kunna utveckla ett antikroppsbaserat reagens som binder specifikt till ditt antigen (NRKSPYYRDFSGAHA) utan att känna igen peptid A. Beskriv principen för detta tillvägagångssätt. (Observera att förklarande bild finns på nästa sida!)
albumin NRKSPYYRDFSGAHA NRKSPYYRDFSGAHA NRKSPYYRDFSGAHA immunogen NRKSPYYRDFSGGHA peptid A Förklaring av förkortningar av aminosyror: N asparagin R arginin K lysin P prolin Y tyrosin D asparaginsyra F fenylalanin S serin G glycin A alanin H histidin 9 På ditt laboratorium finns en nyinköp utrustning avsedd för flödescytometri (FACS). Din kollega Ulrika har aldrig utnyttjat utrustningen och kommer därför till dig med några frågor som hon behöver hjälp med. A) Skriv ner hur du kortfattat skulle förklara hur man kan använda en flödescytometer för analys (d.v.s. inte sortering) av celler. B) Ange 4 olika typer av egenskaper hos en cell som man kan analysera för. C) Vilken av nedanstående cellpopulationer (A, B, C) tror du, vid analys av lymfocyter, motsvaras av B-celler? Motivera ditt svar (krävs för poäng på delfrågan)! C Anti-CD3 B A Anti-MHC class II
10 Allergi är idag stort hälsoproblem som bl.a. involverar antikroppar av IgE-typ. Dessa antikroppar bundna till vissa cellers yta inducerar om de binder antigen de reaktioner som är kopplade till allergi. A) Nämn de två viktiga faktorerna som driver B-cellen till class-switch från IgG till IgE. B) Vilka celler kan binda IgE-ak på sin yta (tre stycken)? C) Nämn två kliniska behandlingar av en allergiker, för att dämpa den allergiska reaktionen. Lycka till!