Mikroorganism med motsvarande antigener

53-1058-02, Mar-12 Phadebact Streptococcus Tests (A, B, C, G), (A-D, F, G) och (A-D, G) Phadebact Strep Respiratory Test (A, C, G) Phadebact Strep D Tests Bruksanvisning MKL Diagnostics AB Kung Hans Väg 3 SE-192 68 Sollentuna Sweden Stafylokocker med antikroppar Co-agglutination Mikroorganism med motsvarande antigener ANVÄNDNINGSOMRÅDE Phadebact Streptococcus Tests, Strep Respiratory Test, Strep A Test, Strep B Test, Strep D Tests och Strep F Test är avsedda för identifi ering av beta-hemolytiska streptokocker som tillhör grupperna A, B, C, D, F och G. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Differentiering av betahemolytiska streptokocker i Lancefi eldgrupper är viktigt för behandling och prognos av patient (1). Genom att ge läkaren information om serologisk grupp kan rätt behandling ges samtidigt som onödig användning av antibiotika undviks (2). De streptokocker som oftast associeras med humana streptokockinfektioner tillhör grupperna A, B, C, D, F and G (3-9). Det fi nns åtskilliga metoder för identifi kation av streptokocker. Metoder som biokemisk typning och bacitracin test används för preliminär identifi ering. Lancefi eld precipitation, immunoelektrofores och latex agglutination ger slutlig identifi ering. Dessa metoder kräver dock extraktion med gruppspecifi ka antigener. Phadebact Streptococcus är baserat på en s k co-agglutinationsteknik (10) som är en snabb och enkel metod för direkt identifi ering av Streptokocker grupp A, B, C, D, F och G. ANALYSPRINCIP Co-agglutination teknik: Antikroppar från kaniner, som är specifi ka mot streptokockgrupperna A, B, C, D, F and G, är bundna till Protein A på ytan av avdödade stafylokocker. När ett prov innehåller en av streptokockgrupperna och blandas med motsvarande reagens så binds de specifi ka antigenerna som sitter på ytan av streptokockerna till de specifi ka antikropparna. En agglutination synlig för blotta ögat bildas. REAGENS Varje Phadebact kit innehåller tillräckligt med reagens för att utföra följande antal bestämningar (se nedan). Produkt Antal bestämningar Phadebact Streptococcus Test (A, B, C, G) 300 Phadebact Strep A-D,F, G Test 300 Phadebact Strep A-D, G Test 250 Phadebact Strep Respiratory Test (A, C, G) 200 100 100 Phadebact Strep D 100 Test 100 Phadebact Strep D Test 50 50 För att underlätta tolkningen av resultaten är reagensen blå-färgade (metylenblått). Aktiva komponenter Aktiva komponenter för de förtecknade produkterna är följande: Phadebact Streptococcus Test (A, B, C, G) En fl aska av vardera Strep A, B, C och G reagenser. Phadebact Strep A-D, F, G Test En fl aska av vardera Strep A, B, C, D, F och G reagenser. Phadebact Strep A-D, G Test En fl aska av vardera Strep A, B, C, D och G reagenser. Phadebact Strep Respiratory Test (A, C, G) En fl aska av vardera Strep A, C and G reagenser. Strep A Reagens: Strep B Reagens: Phadebact Strep D 100 Test Strep D Reagens: 2 fl askor 2 fl askor

Phadebact Strep D Test Strep D Reagens: Strep F Reagens: Övriga komponenter Dropphattar Engångskort Bruksanvisning Försiktighetsåtgärder Endast tillämpning inom in vitro diagnostik. Varning! Reagensen innehåller konserveringsmedlet natriumazid (NaN 3 ). Natriumazid kan reagera med bly och koppar och bilda mycket explosiva metallazider. Vid kassation, spola rikligt med vatten för att förhindra ackumulering av azid. Förberedelse reagens Reagensen är FÄRDIGA ATT ANVÄNDAS. Utgångsdatum och förvaring Utgångsdatum står på ytteretiketten och på fl asketiketterna. Det rekommenderas att kitet förvaras mellan 2-8 C. Reagens får ej frysas. PROVHANTERING För information och hantering av prov så hänvisas till standardlitteratur. Prov som ska undersökas kan tas från vilken del som helst på kroppen där det fi nns levande organismer. Om provet ska transporteras till ett laboratorium så bör bomullspinnen nedsänkas i ett transportmedium, t ex Stuart s. Bomullspinnen bör nå laboratoriet inom 24-48 timmar. Inga tillsatser och/eller konserveringsmedel behövs under transporten. Prov från patienter som tar antibiotika kan innehålla väldigt få eller inga levande bakterier alls. METOD Tillhandahållet material Se REAGENS. Material som behövs utöver det tillhandahållna materialet Primärkultur Näringsmedium (Todd-Hewitt Broth tillverkat av BBL rekommenderas starkt) behövs endast för referensbuljongmetod Pasteur pipetter Engångsöglor för ympning eller liknande Inkubator 35-37 C (endast om referensbuljongmetod används) Klocka, avläsbar 1 min Metodparametrar Reaktionstemperatur Reaktionstid Reagensvolym rumstemperatur 1 minut en droppe för varje grupp som testas Förberedelse prov För information och hantering av primärkulturer så hänvisas till standardlitteratur. Det fi nns tre alternativa metoder för preparering av prov som ska användas i Phadebact Streptococcus testet. I. Direkt koloni test Välj ut betahemolytiska kolonier från primärplattan. Plocka 1-5 kolonier med hjälp av en engångsögla eller liknande Sprid kolonierna på utvalda cirklar på engångskortet. Dessa kolonier används i testet. II. Extraktion av kolonier Phadebact Extraction Solutions fi nns tillgänglig hos MKL Diagnostics AB och kan vara fördelaktigt i vissa situationer: - Det fi nns otillräckligt provmaterial för att möta kraven i direkta kolonitester (1-5 kolonier per reagens). - Icke-tydbart resultat från direkta kolonitester. OBS! Strep D och Strep F är inte avsedda för extraktion (ympning i buljong rekommenderas). III. Ympning i buljong Välj ut betahemolytiska kolonier från primärplattan. Plocka 1 eller fl er betahemolytiska streptokockkolonier. Inokulera kolonin/kolonierna i 2 ml näringsmedium. Inkubera i 35-37 C över natt eller tills buljongen är grumlig (likvärdigt med Mac-Farland Standard Densitet 2-3). 0.5 ml näringsmedium och ett antal kolonier ger normalt tillräcklig tillväxt efter endast 4 timmars inkubation. Droppar av suspension används i testet. Test protokoll Blanda reagenser grundligt genom att skaka fl askorna innan användning. Reagensen bör stå i rumstemperatur innan användning. Enligt god laboratoriesed och liksom vid andra testmetoder så bör positiva och negativa kontroller användas.

I. Direkt Koloni Test Märk ovaler på kortet som motsvarar de utvalda grupperingsreagens som skall testas. Välj ut 1-5 kolonier från primärplattan och rör ut grundligt och jämnt i det inre cirkulära området på kortet. Fig 1. Placera en droppe av varje utvalt reagens på de utspridda kolonierna i den motsvarande märkta ovalen. Fig. 2. Fig. 1 Fig. 2 Med hjälp av släta applikatpinnar i trä eller engångsöglor i plast, blanda reagensdroppen omedelbart och grundligt med de tidigare utspridda kolonierna. Använd en ny pinne eller ögla för varje oval. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER: - Applikatpinnar i papper kan adsorbera reagens vilket leder till svag eller ingen reaktion alls. - Spridning av reagens över ett större område inom ovalen än de utspridda kolonierna gör reaktionen lättare att tyda. Fig. 3. Fig. 4 Fig. 3 Vicka på kortet fram och tillbaka och läs av resultatet inom 1 minut. Fig. 4. II. Extraktion av Kolonier Från Phadebact Extraction Solutions kitet, blanda 4 droppar av Extraction Solution 1 med 4 droppar av Extraction Solution 2 i ett litet teströr (t ex storlek 8 x 50 mm). Välj ut 1-3 kolonier beta-hemolytiska streptokocker från den primära plattan och lös upp dem i Extraction Solution blandningen. Inkubera i rumstemperatur i 10-15 minuter eller i 100 C i en minut. Med hjälp av en Pasteur pipett, placera en droppe av blandningen med streptokockerna i var och en av de märkta ovalerna på engångskortet. Tillsätt en droppe av varje utvalt Phadebact reagens bredvid de extraherade kolonidropparna i ovalen med motsvarande märkning. Med hjälp av släta applikat pinnar i trä eller engångsöglor i plast, blanda reagensdroppen omedelbart och grundligt med de tidigare utspridda kolonierna. Använd en ny pinne eller ögla för varje oval. Vicka på kortet fram och tillbaka och läs av resultatet inom 1 minut. III. Referens Buljong Test Märk ovaler på kortet som motsvarar utvalda grupperingsreagens som skall testas. Placera en droppe av buljongkulturen i den inre cirkeln av varje oval som är märkt. Tillsätt en droppe av varje utvalt reagens bredvid buljongdroppen i ovalen med motsvarande märkning. Med hjälp av släta applikat pinnar i trä eller engångsöglor i plast, blanda reagensdroppen omedelbart och grundligt med de tidigare utspridda kolonierna. Använd en ny pinne eller ögla för varje oval. Vicka på kortet fram och tillbaka och läs av resultatet inom 1 minut. Stabilitet av slutlig reaktionsblandning Co-agglutinationsreaktionen är stabil men enligt god laboratoriesed skall resultaten avläsas inom 1 minut (observera att det fi nns en risk av uttorkning av reagensen som kan misstolkas som en reaktion). Kalibrering Ingen kalibrering är nödvändig. Kvalitetskontroll Positiv kontroll Ett kit, Phadebact Strep Positive Control, är tillgängligt från MKL Diagnostics AB. Kitet innehåller separata fl askor med antigen av renodlade streptokockkulturer från grupperna A, B, C, D, F och G. Eftersom dessa antigenkontroller är separata och renade, så kan de användas till att testa Phadebact streptokockreagens för specifi citet samt reaktivitet; kontroll med levande organismer är till följd av detta inte nödvändigt. Dessa positiva kontroller testas på samma sätt som oidentifi erade bakterier i en buljongkultur. Alternativt så bör etablerade laboratoriestammar av streptokockgrupper användas, t ex Strep A (ATCC 19615), Strep B (ATCC 12401), Strep C (ATCC 9892), Strep D (ATCC 9812), Strep F (ATCC 12392) och Strep G (ATCC 12395). Negativ kontroll Vid samtidig användning av fl era reagens vid testning av en kontroll eller en oidentifi erad stam så fi nns det en inbyggd negativ kontroll i testet. Om de oidentifi erade bakterierna tillhör Streptokockgrupp A så sker en coagglutination i A reagenset. Reagensen B, C och G visar då negativa resultat (d v s ingen eller betydligt svagare reaktion). Vid testning av endast ett reagenskit, till exempel Phadebact Strep A, Phadebact Strep B, Phadebact Strep D eller Phadebact Strep F så kan en annan streptokockgrupp än den som testas (kontroll eller laboratoriestam) utgöra en negativ kontroll.

Synbild av en reaktion Ingen reaktion Positiv reaktion RESULTAT Positivt resultat Ett positivt resultat med Phadebact Streptococcus Test ger en betydligt starkare samt snabbare reaktion i ett av reagensen i jämförelse med de andra reagensen. Phadebact Control reagens måste användas i de andra testerna. Negativt resultat Ingen reaktion i alla reagens betyder med stor sannolikhet att bakterien som testats inte tillhör grupperna A, B, C, D, F eller G eller att provet inte innehåller tillräckligt med antigen. Se PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR. Icke-tydbart resultat Om co-agglutination förekommer i fl er än ett streptokockreagens och med lika stark intensitet, se PROCEDURENS BEGRÄNSINGAR. PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR Bactus AB odlar sina streptokockstammar till antiseraproduktionen i Todd-Hewitt buljong som tillverkas av Difco. Det rekommenderas därför att inte använda Difco s buljong för odling av prov som skall testas med Phadebact reagens. Om resultat från Direkt Koloni testet (I) inte är övertygande p g a otillräckligt testmaterial så rekommenderar vi att testet upprepas med proceduren Extraktion av kolonier (II). Om resultat från 4 timmars Buljong testet (III) inte är trovärdigt p g a otillräcklig växt så rekommenderar vi att buljongen inkuberas över natt och testas igen på vanligt sätt. Om co-agglutination förekommer i fl er än ett streptokockreagens och med lika stark intensitet och hastighet så rekommenderar vi att testet upprepas med proceduren Extraktion av kolonier. Listeria stammar uttrycker liknande antigena egenskaper som grupp B Streptokocker och kan därför reagera positivt med ett grupp B reagens. Ett katalastest kan genomföras för att skilja mellan Listeria och grupp B streptokocker: streptokocker är katalasnegativa medan Listeria är katalaspositiva. Phadebact Strep D och Phadebact Strep F är inte avsedda för test Extraktion av Kolonier. PRESTANDA Specificitet and sensitivitet I. Koloni test Enligt kliniska studier (11, 12) med utvärdering kolonitest, så blev 263/279 (94.3%) av beta-hemolytiska streptokockstammar som testats med denna metod korrekt identifi erade. II. Buljong test - 4 timmars inkubation Kliniska studier (13, 14, 15) har påvisat att 272/285 (95.4%) av beta-hemolytiska streptokockstammar blev korrekt identifi erade efter 4 timmars inkubation i jämförelse med Lancefi eld tekniken. III. Buljong test - 24 timmars inkubation Kliniska studier (16, 17) har påvisat att 99% av streptokockstammar blev korrekt identifi erade efter en 24 timmars (över natt) inkubation. IV. Streptococcus grupp A Strep A 166/168 Non-strep A 1/56 (beta-hemolytic) Strep D 0/13 S. pneumoniae 1/11 Klebsiella spp. 0/10 H. infl uenzae 0/10 Staphylococcus spp. 0/20 Sensitivitet: 98.8% Precision: 99.1% Specifi citet: 99.4% VI. Streptococcus grupp D som reagerar Bakteriespecies Direkt koloni 4-h buljong Strep D 178/190 226/240 Strep A,B,C,G 0/40 0/40 S. mutans 0/11 0/11 S. sangius 4/19 - S. uberis 0/2 0/2 S. mitis 3/4 0/1 S. milleri 0/11 0/11 Sensitivitet: 93.4% Precision: 93.4% Specifi citet: 92.8% V. Streptococcus grupp B Strep B 128/130 Non-strep B 1/18 (beta-hemolytic) alpha-hemolytic strep. 0/109 non-hemolytic strep. 0/98 Enterococci 0/28 Staphylococci 0/118 Sensitivitet: 98.5% Precision: 99.4% Specifi citet: 99.7% VII. Streptococcus grupp F Strep F 77/81 Strep A 1/26 Strep B 1/24 Strep C 0/21 Strep D 0/7 Strep G 2/19 S. pneumoniae 1/71 Sensitivitet: 95.0% Precision: 96.4% Specifi citet: 97.0% OBS! Felaktiga resultat kan förekomma om andra bakterier än beta-hemolytiska streptokocker testas. Till exempel så kan stammar av Streptococcus faecalis ge svag reaktion i C reagenset. Streptococcus pneumoniae (Diplococcus pneumoniae) kan reagera med grupp C reagens, vilket överensstämmer med redan kända likheter mellan antigen från S. pneumoniae och grupp C streptokocker. Reproducerbarhet Reagensen som används i denna test blir regelbundet kontrollerade med kända stammar för att försäkra reproducerbarhet.

GARANTI De data som presenteras här har erhållits genom användning av den angivna metoden. Ändringar eller modifi eringar av metoden som inte har rekommenderats av MKL Diagnostics AB kan påverka resultaten av analysen. MKL Diagnostics AB kan då inte längre ge den garanti som är uttryckt, implicerad eller lagstadgad. MKL Diagnostics AB och dess auktoriserade distributörer ska i sådana fall inte vara ansvariga för skador som kan uppstå, vare sig de är direkta eller indirekta. Referenser: 1. Moody M D: p 182 in Streptococci and streptococcal diseases. Eds. Wannamaker & Matsen. Academic Press (New York, London) 1972. 2. Wadström T, Nord C-E, Lindberg A & Mollby R: Rapid grouping of streptococci by immunoelectrophoresis. Med Microbiol Immunol 159 (1974), 191-200. 3. Pollock, H M & Dahlgren B J: Distribution of streptococcal groups in clinical specimens with evaluation of bacitracin screening, Appl Microbiol 27 (1974), 141-143. 4. Horn K, Meyer W T, Wyrick B C & Zimmerman R A: Group B streptococcal neonatal infections. JAMA 230 (1974), 1165-1167. 5. Reid T M S: Emergence of group B streptococci in obstetric and perinatal infections. Br J Med (1975:2), 533-536. 6. Feingold D S, Stagg N L & Kunz L J: Extra-respiratory streptococcal infections. New Eng J Med 275 (1966), 356-361. 7. Finnegan P, Fitzgerald M M, Cumming G & Geddes A M: Lancefi eld group C streptococcal endocarditis. Thorax 29 (1974), 245-247. 8. Baker C: Unusual occurence of neonatal septicaemia due to group G streptococcus. J Pediatr 53 (1974), 568-569. 9. Facklam R: Isolation and identifi cation of streptococci, part II. US. HEW/Public Health Service/Center for Disease Control/Atlanta Georgia 30333. 10. Christensen P, Kahlmeter G, Johnson S & Kronvall G: New method for the serological grouping of streptococci with specifi c antibodies absorbed to protein A containing staphylococci. Inf Imm 7 (1973), 881-885. 11. Pillot S, Lebrun L & De Maneville M: Progress in the identifi cation of pathogenic Streptococcus. La Nouvelle Presse Medicale 6 (1977), 1822. 12. Slifkin M, Engwall C, Pouchet G R: Direct-plate serological grouping of beta-hemolytic streptococci from primary isolation plates with the Phadebact Streptococcus Test. J Clin Microbiol 7 (1978), 356-360. 13. Rosner R: Clinical evaluation of a rapid four hour serological grouping of groups A, B, C and G beta-streptococci using the Phadebact Streptococcus Test. J Clin Microbiol 6 (1977), 23-26. 14. Farrel B & Amirak I: Agglutination grouping of streptococci. Lancet (1976:2), 1082. 15. West M E and Jacobs P F: Abstract C 162, presented Annual Meeting American Society for Microbiology, 1979. 16. Arvilommi H: Grouping of beta-hemolytic streptococci by using co-agglutination, precipitin or bacitracin sensitivity. Acta Path Microbiol Scand 84 (1976), 79-84. 17. Finch R G & Philips I: Serological grouping of streptococci by a slide co-agglutination method. J Clin Pathol 30 (1977), 23-26. 18. Manual Guide-Safety Management, No CDC-22, 4/30/76. PRODUKTER Phadebact COA System Phadebact Streptococcus Tests Phadebact Streptococcus Respiratory Test Phadebact Strep D Test Phadebact Strep Positive Controls Phadebact Pneumococcus Test Phadebact Haemophilus Test Phadebact GC Positive Controls Phadebact CSF Test Phadebact CSF Positive Controls Phadebact Extraction Solutions Phadebact Monoclonal GC Test Phadebact ETEC-LT Test Phadebact Salmonella Test Phadebact Staph Aureus Test Near Patient Testing Phadirect Strep A Phadirect Rapid CRP Test På andra språk: www.mkldiagnostics.com For other languages: www.mkldiagnostics.com Für andere Sprachen: www.mkldiagnostics.com Para otros idiomas: www.mkldiagnostics.com Per altre lingue: www.mkldiagnostics.com Pour d'autres langues: www.mkldiagnostics.com Andre sprog, se venligst: www.mkldiagnostics.com Гια άλλες γλώσσες: www.mkldiagnostics.com