EULISA La (SS-B) IgG

Bruksanvisning EULISA La (SS-B) IgG Avsedd användning Enzymimmunoanalys för detektering av autoantikroppar IgG mot La (SS-B) Microtitrering 96 brunnar Förvara kitet vid +2-8 C Endast för in vitro diagnostik Dokument nr E-23-0218-01 SE Januari 2013 EULISA La (SS-B) IgG Svenska 213596 96

Innehåll 1. Introduktion och bakgrund 2. Varningar och försiktighetsåtgärder 3. Testprincip 4. Kitets innehåll 5. Material som krävs men som inte ingår 6. Förvaring av kitet 7. Reagens- och provberedning / provkrav 8. Analysmetod 8.1. Manuell användning 8.2. Dynex DS2 automatiskt ELISA-system 9. Utvärdering och kvalitetskontroll 10. Tolkning av resultat / metodens begränsningar 11. Prestanda 11.1. Standardisering 11.2. Analytisk specificitet 11.3. Detektionsgräns (analytisk sensitivitet) 11.4. Homogenitet i fast fas 11.5. Linjäritet 11.6. Precision 11.7. Frekvensdistribution av La (SS-B)-Ab (IgG) 11.8. Manuell drift jämfört med Dynex DS2 automatiskt ELISA-system 12. Garanti 13. Symboler 14. Referenser 15. Sammanfattande flödesschema Den produkt som beskrivs i detta dokument har tillverkats i enlighet med IVDdirektivet 98/79/EG. 2

1. Introduction and background Sjögrens syndrom (SS) är en kronisk inflammatorisk autoimmunsjukdom som drabbar de exokrina körtlarna. I synnerhet påverkas tår- och salivkörtlar: lymfocytisk infiltration orsakar svullnad och progressiv funktionsnedsättning, ofta i kombination med utveckling av sicca-syndrom (1). Systemisk lupus erythematosus (SLE) är ytterligare en kronisk autoimmun-medierad inflammatorisk sjukdom med varierande klinisk presentation, från lokaliserade hudlesioner till en destruktiv systemisk sjukdom utan kutana förändringar (2). Autoantikroppar som riktas mot de subcellulära ribonukleoproteinpartiklarna (RNP-partiklarna) SS-A/Ro (löslig substans A / patient Robair-antigen) och SS- B/La (löslig substans B / patient Lane-antigen) anses utgöra en specifik serologisk markör för SS (prevalens om cirka 65 % respektive upp till 90 %) (3); samt för systemisk lupus erythematosus (SLE) (prevalens 5-50 %), i synnerhet med högre prevalens för vissa av dess varianter, t.ex. subakut kutan LE, neonatal LE, ANA-negativ SLE (4, 5). SS-B/La-antigenen har identifierats som ett 48 kda fosfoprotein som förefaller bestå av en ATP och en RNA-bindande domän. Flera cellulära funktioner diskuteras, huvudsakligen i kontexten RNA-metabolism, för vilken engagemang i korrekt avslutning av RNA-polymeras III-transkript har bevisats (6). Medan antikroppar mot SS-A/Ro kan uppstå som en enstaka specificitet, socialiseras antikroppar mot SS-B/La oftast med anti-ss-a/ro-antikroppar (7). Den aktuella enzymkopplade immunadsorberande analysen (ELISA) är avsedd för kvantitativ eller kvalitativ bestämning av IgG-antikroppar i humant serum, riktade mot SS-B/La antigen. Detta är en rekombinant, högrenad preparation av humant protein, uttryckt i baculovirus-infekterade celler. Testet är snabbt (inkubationstid 30-30 - 30 minuter) och flexibelt (delbar fast fas, reagenser som är klara att användas). Sex kalibratorer möjliggör kvantitativa mätningar; en negativ och en positiv kontroll kontrollerar analysprestandan. 2. Varningar och försiktighetsåtgärder Testkitet är endast avsett för in vitro diagnostiskt bruk och får inte användas i eller på människor eller djur.använd inte reagenser efter angivet utgångsdatum. Vi rekommenderar starkt att protokollet följs. Provbuffert, kalibratorer och kontroller innehåller natriumazid som konserveringsmedel. Tvättbufferten innehåller bromnitrodioxan och konjugatet 3

innehåller metylisotiazolinon/bromnitrodioxan som konserveringsmedel. Substratet innehåller 3, 3', 5, 5'-tetrametylbenzidin (TMB) och väteperoxid (H2O2). Stopplösningen, 0,5 M svavelsyra (H2SO4), är sur och frätande. Ovan angivna reagenser kan vara giftiga vid förtäring. Iakttag rutinmässiga försiktighetsåtgärder vid hantering av farliga kemikalier. Undvik all kontakt med kroppen, använd handskar och skyddsglasögon. Skölj grundligt med vatten, om någon av reagenserna kommer i kontakt med hud eller slemhinnor. Pipettera aldrig med munnen. Kassera i enlighet med lokala/nationella föreskrifter. Natriumazid kan reagera med bly- och kopparrör och bilda explosiva metallazider. Spola med stora mängder vatten vid kassering för att undvika ansamling av azider. Kalibratorer och kontroller innehåller komponenter med humant ursprung. De har visat negativa resultat vid tester för humant immunbristvirus (HIV)-ag, hepatit B yt-(hbs)-ag, HIV 1/2-ak samt hepatit C-virus (HCV)-ak, i tester som uppfyller FDA:s krav eller kraven i EU:s direktiv 98/79/EG. Det finns emellertid inga kända tester som kan garantera att produkter som härleds ur humant blod är fria från smittämnen. De måste därför hanteras som om de är smittbärande och kasseras på lämpligt sätt. Läs CDC:s (Center of Disease Control, Atlanta, USA) eller andra lokala/nationella riktlinjer beträffande laboratoriesäkerhet och dekontamineringsrutiner. 3. Testprincip Brunnarna i den fasta fasen bestryks med SS-B/La. På denna yta kommer följande immunologiska reaktioner att äga rum: 1:a reaktionen: SS-B/La-specifika antikroppar i provet binder till det immobiliserade antigenet och bildar ett antigen-antikroppskomplex. Därefter tvättas obundna provkomponenter bort från den fasta fasen. 2:a reaktionen: En andra antikropp, riktad mot humana IgG-anti kroppar och konjugerad med HRP (pepparrotsperoxidas) tillsätts. Detta konjugat binds till komplexet. Därefter tvättas överflödigt konjugat bort från den fasta fasen. 3:e reaktionen: Det enzymmärkta komplexet omvandlar det färglösa substratet till en blå produkt. Graden av färgutveckling reflekterar koncentrationen av SS-B/La-antikroppar (IgG) i provet. 4

4. Kitets innehåll a. 1 mikrobrunnsplatta som belagts med SS-B/La och förpackats hermetiskt i en folielaminatpåse tillsammans med en påse med torkmedel. Plattan består av 12 remsor som var och en kan delas upp i 8 enskilda brunnar. b. Provbuffert, 100 ml, klar att användas, orange. Innehåller trisbuffrad koksaltlösning (TBS), bovint serumalbumin (BSA), tween och natriumazid. c. Tvättbuffert, 100 ml, 10x-koncentrat, blå. Innehåller TBS, tween och bromnitrodioxan. d. 6 kalibratorer, 2,0 ml vardera, 0 0,60-2,0 6,0-20 och 60 U SS-B/Laantikroppar (IgG)/ml, klara att använda, gradvis blåfärgade. Innehåller TBS, BSA, tween och natriumazid. e. Negativ och positiv kontroll, 2,0 ml vardera, klara att använda, grön respektive röd. Innehåller TBS, BSA, tween och natriumazid. f. Anti-humant IgG HRP-konjugat, 14 ml, klart att använda, rött. Buffrad lösning som innehåller stabiliseringsprotein, metylisotiazolinon samt bromnitrodioxan. g. Substratlösning, 14 ml, klar att använda, färglös. Innehåller en buffrad lösning av TMB och H2O2 i en flaska som är ogenomtränglig för ljus. 5

h. Stopplösning (0,5 M H2SO4), 14 ml, färglös, klar att användas. Varning: Svavelsyra är frätande. i. Bruksanvisning j. Lot-specifikt analyscertifikat 5. Material som krävs men som inte ingår a. Avjoniserat eller destillerat vatten b. Graderad cylinder, 1 000 ml c. Rör för provspädning (överföringsrör i mikrobrunnsplattans format rekommenderas) d. Pipetter för 10, 100 och 1 000 µl (pipetter med 1 och 8 kanaler rekommenderas) e. Tvätt för mikrobrunnsplatta (tillval) f. Fotometer för mikrobrunnsplatta, försedd med ett 450 nm filter g. ELISA utvärderingsprogram (rekommenderas) 6. Förvaring av kitet Förvara kitet vid 2-8 C. Det är stabilt fram till det utgångsdatum som anges på kartongens etikett. Använd inte kitet efter utgångsdatumet. 7. Reagens- och provberedning / provkrav Komponenter från olika kit får inte bytas ut mot varandra eller slås samman, på grund av eventuella varierande frakt- eller lagringsförhållanden. 6

a. Innan påsen med mikrotiterplattan öppnas måste den ha uppnått rumstemperatur. Ta ut de mikrobrunnar som inte behövs ur ramen och lägg omedelbart tillbaka dem i påsen, tillsammans med påsen med torkmedel. Återförsegla påsen hermetiskt och förvara den i kylen för framtida användning. b. Späd ut tvättbufferten (10x-koncentrat [100 ml, blå]) med 900 ml avjoniserat vatten. Blanda noga. Den utspädda bufferten är stabil i flera veckor vid förvaring i kylskåp (2-8 C). c. Beredning av proverna: Hantera patientproverna som om de kan överföra smittämnen. Förbered sera med vedertagna laboratoriemetoder och späd 1/100, t.ex. 10 µl serum + 990 µl provbuffert. Blanda noga. För snabb dispensering under analysen rekommenderas att kalibratorer, kontroller och prover förbereds i överföringsrör för mikrobrunn. Detta möjliggör användning av en pipett med 8 kanaler under analysen. Om proverna inte analyseras omedelbart ska de förvaras vid 2-8 C och analyseras inom 3 dagar. Vid längre förvaring rekommenderas en temperatur på -20 C eller lägre. Upprepad frysning och upptining av sera bör undvikas. Upptinade prover måste blandas före spädning. Provkrav: Sera med hög fetthalt eller sera som är hemolyserat eller mikrobiellt kontaminerat kan ge felaktiga resultat och bör undvikas. 8. Analysmetod 8.1. Manuell användning Innan analysen påbörjas måste alla komponenter i kitet ha uppnått rumstemperatur (23 ± 3 C). För bästa resultat, d.v.s. maximalt förhållande mellan specifik signal och bakgrundssignal, är noggrann tvätt avgörande (steg a, c och e). Det är av yttersta vikt att tvättlösningen avlägsnas helt och hållet. För detta ändamål torka ordentligt plattan mot flera lager av absorberande papper. Automatiska tvättar måste verifieras mot resultat som uppnås med manuell tvätt. a. Precis före användning ska mikrobrunnarna tvättas en gång: fyll brunnarna med 350 µl tvättbuffert i varje, vänta i cirka 10 sekunder och avlägsna. 7

b. Dispensera kalibratorerna (2,0 ml i varje, klara att användas, gradvis blå), kontrollerna (2,0 ml i varje, klara att användas, gröna och röda) samt de utspädda proverna snabbt i mikrobrunnarna; 100 µl per brunn. Mätningar i duplikat rekommenderas. Inkubera plattan i 30 minuter i rumstemperatur (23 ± 3 C). c. Tvätta brunnarna 4 gånger som i steg a. d. Dispensera konjugatet (14 ml, klart att användas, rött) snabbt (företrädesvis med en pipett med 8 kanaler); 100 µl per brunn. Inkubera plattan som i steg b. e. Upprepa tvättmomentet i steg c. f. Dispensera substratlösningen (14 ml, klar att användas, färglös, svart flaska) snabbt (företrädesvis med en pipett med 8 kanaler); 100 µl per brunn. Inkubera plattan som i steg b. Eftersom substratet är ljuskänsligt bör exponering för intensivt ljus undvikas (t.ex. direkt solljus) under inkubationen. g. Dispensera stopplösningen (14 ml, klar att användas, färglös. Varning: frätande!) snabbt (företrädesvis med en pipett med 8 kanaler); 100 µl per brunn. Använd samma sekvens som för substratet. Färgen ändras från blå till gul. Skaka plattan, företrädesvis på en orbital skakapparat i cirka 10 sekunder. h. Läs omedelbart av absorbansen i mikrobrunnsplattans fotometer vid 450 nm. Förvara kvarstående reagenser i kyl (2-8 C) om de ska användas igen. 8.2 Dynex DS2 automatiskt ELISA-system Denna produkt har validerats för användning med Dynex DS2 automatiskt ELISA-system. En lämplig programfil för genomförande och utvärdering av analys tillhandahålls på begäran. Parametrarna i detta program är endast ett förslag och kan behöva anpassas av användaren till kraven i den faktiska analysen. Vi har generellt försökt att hålla oss så mycket som möjligt till protokollet vid en manuell användning, enligt ovan. Emellertid, på grund av en högre temperatur inuti DS2, inkubationstiden för substratet bör förkortas. Paragraf 11.8. innehåller en prestationsjämförelse mellan manuell analys och DS2 ELISA-systemet. 8

9. Utvärdering och kvalitetskontroll Kvantitativ utvärdering: De data som erhålls utvärderas kvantitativt mot standardkurvan enligt nedan. Den kurva som visas är endast en modell. Den kan inte ersätta mätning av kalibratorer, tillsammans med kontroller och faktiska prov. Kurvan har konstruerats med ett konventionellt ELISA utvärderingsprogram, som använder 4 parameters funktion. Splineapproximering är också lämpligt. 2500 2000 Dynex DS2 --x----x-- manual op. --o----o-- mod 450nm 1500 1000 500 0 0,1 1 10 100 U SS-B/La-Ab/ ml 1311FE00.FED/StdKurveV0401K Om ingen datorstödd utvärdering är möjlig kan standardkurvan ritas för hand. Den möjliggör omvandling av absorbansvärdet i ett prov till dess koncentration, d.v.s. i U SS-B/La-antikroppar (IgG) per ml serum. Kvalitativ utvärdering: Testet kan även utvärderas kvalitativt. Detta kräver mätning av den endast positiva kontrollen. Mätning och undersökning av den negativa kontrollen rekommenderas dock (se nedan: kvalitetskontroll). Vid kvalitativ testutvärdering jämförs absorbansen hos proverna med gränsabsorbansen (= cut-off). Den fastställs enligt följande formel: absorbansgränsvärde = absorbanspositiv kontroll x faktor Faktorn beror på kit-loten och anges i det lotspecifika analyscertifikatet som medföljer varje testkit. Exempel: 9

absorbanspositiv kontroll = 1 250 mod faktor = 0,35 absorbansgränsvärde = 1 250 mod x 0,35 = 438 mod För att få en uppskattning av hur positivt ett visst prov är för SS-B/La-Ab (IgG), kan man beräkna kvoten, enligt följande formel: kvot = absorbansprov / absorbansgränsvärde Exempel: Absorbansgräns = 438 mod absorbansgräns = 1 480 mod kvot = 1 480 mod / 438 mod = 3,4 Kvalitetskontroll: Den positiva och negativa kontrollen kontrollerar analysens prestanda. Deras auktoriserade värden respektive godkända intervall anges i det lotspecifika analyscertifikatet. Kontrollernas värden måste falla inom de angivna intervallen, annars är analysresultaten ogiltiga. 10. Tolkning av resultat / metodens begränsningar Med utgångspunkt från mätning av en blodgivare och ett urval positiva sera (se nedan), föreslår vi för analys av patientsera: kvantitativ utvärdering kvalitative utvärdering U SS-B/La-Ab (IgG) kvot per ml serum normalt (negativt) intervall < 3,2 < 0,82 cut-off 4,0 1,00 obestämbart intervall 3,2 5,0 0,82-1,22 positivt intervall > 5,0 > 1,22 Dessa specifikationer anges endast som en indikation. För att kontrollera exaktheten bör varje analys inkludera parallella prover av normala sera. Ett negativt testresultat anger att patienten inte har förhöjda nivåer av IgGantikroppar mot SS-B/La.. Därför SS inte är särskilt troligt. På grund av den lägre förekomsten av SS-B/La-Ab för SLE (< 50 %) kann denna sjukdom inte 10

uteslutas med liknande tillförsikt. Om SLE misstänks förekomst av t.ex. dsdna eller andra antinukleära autoantikroppar (ANA) bör undersökas. Ett positivt resultat bör tolkas i första hand som indikation på SS eller SLE även om SS-B/La-Ab kan också observeras vid andra autoimmuna sjukdomar (t.ex vasculit, andra collagenopathies). För bekräftelse eller uteslutande bör ytterligare ANA fastställas. Prover som visar resultat mellan ovan angivna gränser bör anses vara obestämbara och rapporteras som sådana. Vi rekommenderar att ytterligare ett prov görs två veckor senare och körs parallellt med det första provet för att dokumentera eventuell förändring i antikroppstitern. I likhet med alla serologiska analyser bör resultaten tolkas mot beaktande av patientens symtom och andra diagnostiska kriterier. 11. Prestanda 11.1. Standardisering Testet är standardiserat med en renad serumberedning som innehåller IgGantikroppar som är specifikt inriktade mot SS-B/La. Denna beredning har kalibrerats mot en uppsättning av gradvis positiva sera, endast reserverad för detta ändamål. Graden av reaktivitet i provet mäts i arbiträra enheter (U/mL) eftersom ingen internationell standard finns tillgänglig. 11.2. Analytisk specificitet Testet medger specifik bestämning av humana IgG-antikroppar, riktade mot SS-B/La. Det har validerats (bland andra parametrar) med hjälp av kommersiellt tillgängliga humana referens serum från "Center of Disease Control" (CDC, Atlanta, USA). Följande resultat är typiska: serum 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CDC- ds- SS-B -- U1- Sm -- SS-A -- Scl- Joresult DNA /La RNP /Ro 70 1 immuno- homo- speck- speck- -- -- nuc- -- centro- -- -- fluorescens gen / led led leolar mere rim ELISA (U/mL) <0,1 >60 >60 <0,1 0,1 2,6 0,2 <0,1 0,3 <0,1 11

11.3. Detektionsgräns (analytisk sensitivitet) Detektionsgränsen definieras som den koncentration av analytet som motsvarar genomsnittlig absorbans av provbuffert plus 3-faldig standardavvikelse (s). Det fastställdes som < 0,2 U SS-B/La-Ab (IgG) per ml serum (n = 24). Rekommenderat mätintervall: 0,5-50 U SS-B/La-Ab (IgG) per ml serum 11.4. Homogenitet i fast fas Mätning av homogenitet i fast fas är en normal del av kvalitetskontrollen av varje produktionslot. Det bestäms genom 288-falding mätning av ett IgG-positivt prov som inte är saturerande på 3 valda plattor. Kriterium för godkännande: mod-variationskoefficient (cv) över plattorna < 8 %. Bilden nedan visar ett typiskt utdrag (fast fas lotnr. 0306G) av en sådan analys. plate early (n/10) late (9n/10) row 1 2 6 7 11 12 1 2 6 7 11 12 mean cv% line a 915 935 899 898 921 929 927 915 903 934 923 926 919 1,4 line b 910 941 929 916 937 924 941 935 939 935 943 939 932 1,1 line c 901 936 924 922 932 922 914 943 940 933 939 944 929 1,4 line d 916 930 931 926 942 914 954 952 948 943 956 946 938 1,5 line e 905 921 947 949 930 915 925 929 922 935 931 946 930 1,4 line f 906 950 947 947 941 916 930 933 943 962 941 944 938 1,6 line g 937 968 962 929 927 926 918 962 970 955 953 947 946 1,9 line h 952 949 948 925 937 929 960 945 970 956 957 971 950 1,5 mean 918 941 936 927 933 922 934 939 942 944 943 945 935 cv% 1,9 1,5 2,1 1,8 0,8 0,7 1,8 1,5 2,4 1,2 1,3 1,3 1,8 line a line b line c line d line e line f line g line h 0 200 400 600 800 1000 mod 450nm 12

U SS-B/La-Ab / ml mod 450nm 1000 800 600 400 200 0 1 2 6 7 11 12 1 2 6 7 11 12 early / late plate, row no. 1311FE00.FED/FphHomV0401K 11.5. Linjäritet För att bedöma testets dos-responsförhållande, mättes positiva sera i seriell 2- faldig spädning. Kriterium för godkännande: linjär regression av fyra spädningar efter varandra måste ge en korrelationsfaktor > 0,98. Ett typiskt resultat visas nedan. 40 30 20 serum 1 serum 2 serum 3 lin.regr.1 lin.regr.2 lin.regr.3 10 0 0 20 40 60 80 100 nl serum / well 1311FE00.FED/LinearV0401K 13

11.6. Precision För att bedöma testets precision fastställdes resultatens variabilitet under följande förhållanden: a. inom 1 analys och mellan 3 analyser, b. mellan 3 operatörer och c. mellan 2 kit-loter. a. Variabilitet inom analys och mellan analyser (n = 24 respektive 72) prov medelvärde variabilitet (cv %) IU/ml inom analys mellan analyser 1 4,8 2,1 6,9 2 9,8 2,4 5,6 3 30 3,1 8,1 b. Variabilitet mellan operatörer (n = 12) prov medelvärde variabilitet IU/ml (cv %) 1 4,3 6,6 2 9,1 4,7 3 31 6,3 b. Variabilitet mellan 2 kit-loter (n = 6) prov medelvärde variabilitet IU/ml (cv %) 1 5,1 3,6 2 10,0 2,0 3 25 2,4 11.7. Frekvensdistribution av SS-B/La-Ab (IgG) Detta analyserades i sera från blodgivare, jämnt fördelat mellan kön och ålder och från sera som befunnits positiva för SS-B/La-autoantikroppar enligt CEgodkänt referens-elisa eller som har definierats klinisk. Sm-antikroppar anses ytterst specifika för SLE. Följande fördelning av analyt observerades: 14

<0,4 0,487-0,593 0,723-0,88 1,07-1,31 1,59-1,94 2,36-2,87 3,5-4,26 5,19-6,32 7,7-9,38 11,4-13,9 17-20,6 25,1-30,6 37,3-45,4 55,3-67,4 82,1-100 relative frequency (% <0,4 0,487-0,593 0,723-0,88 1,07-1,31 1,59-1,94 2,36-2,87 3,5-4,26 5,19-6,32 7,7-9,38 11,4-13,9 17-20,6 25,1-30,6 37,3-45,4 55,3-67,4 82,1-100 relative frequency (% blood donor sera 75 50 cut-off 25 0 U SS-B/La-Ab/mL positive sera 75 50 cut-off 25 0 U SS-B/La-Ab/mL 1311FE00.FED/HäufgPlotV0401K 15

Dynex DS2 (U/mL) blodgivarsera positiva sera n: 160 n: 144 medelvärde: 1,3 IU/ml medelvärde: 560 IU/ml medelvärde + s: 3,5 IU/ml medelvärde - s: 64 IU/ml medelvärde + 2s: 5,7 IU/ml medelvärde - 2s: < 0 IU/ml median: 0,94 IU/ml median: 390 IU/ml 95:e percentilen: 2,3 U/ml 5:e percentilen: 27 IU/ml ROC-analys av dessa data användes för att bestämma gränsvärdet som 4,0 SS-B/La-Ab (IgG)/ml (8). De data som presenteras här visar på en diagnostisk specificitet och sensitivitet hos denna ELISA på cirka 98 respektive nästan 100 %. Dessa värden gäller endast analyserade sera; andra provsamlingar kan ge andra resultat. 11.8. Manuell förfarande jämfört med Dynex DS2 automatiskt ELISA-system Korrelation: 30 20 y = 0,998 x r = 0,994 10 0 0 10 20 30 manual operation (U/mL) 1311FE00.FED/KorrDynexDS2-V0401K 16

Variabilitet: Genom att använda prover från en och samma kit-lot, jämfördes analysresultatens variabilitet mellan manuell användning och Dynex DS2 automatiskt ELISA-system: manuell användning Dynex DS2 variabilitet inom analys medelvärde cv = 4,3 % medelvärde cv = 4,3 % (n = 16) variabilitet mellan analyser medelvärde cv = 4,6 % medelvärde cv = 5,2 % (n = 48) Standardkurva: visas i paragraf 9 12. Garanti Euro Diagnostica AB garanterar att levererad produkt har testats grundligt för att säkerställa att de egenskaper som specificeras här har uppfyllts. Inga ytterligare garantier lämnas. De prestationsdata som presenteras här erhölls med användning av angiven metod. Eventuell modifikation av metoden kan påverka resultaten varvid Euro Diagnostica AB friskriver sig från alla garantier, såväl uttryckliga som underförstådda eller lagstiftade. Euro Diagnostica AB bär inte heller något ansvar för eventuella skador, vare sig direkta, indirekta eller efterföljande som uppstår till följd av felaktig användning eller förvaring av produkten. 13. Symboler Katalognummer Satsnummer 17

Innehåller tillräcklig mängd för <n> tester Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik Conformité Européenne Skyddas från solljus Temperaturgränser Hållbar till Varning Biologiska risker Tillverkare 18

14. Referenser 1. Franco, H. L., et al.: Autoantibodies directed against sicca syndrome antigens in the neonatal lupus syndrome. J Am Acad Dermatol 4 (1981), 67-72 2. Tan, E. M., et al.: The 1982 revised criteria for the classifiction of systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum 25 (1982), 1271-1277 3. Harley, J. B.: Autoantibodies in Sjögren s syndrome. J Autoimmun 2 (1989), 383-394 4. Messinger, M.: Autoantikörper bei systemischen entzündlich-rheumatischen Erkrankungen (Kollagenosen). In: L. Thomas (ed.): Labor und Diagnose (2005), TH-Books-Verlags-Gesellschaft, Frankfurt/Main, 1139-1161 5. Maddison, P. J., et al.: Serological findings in patients with ANA-negative systemic lupus erythematosus. Medicine 60 (1981), 87-94 6. Routsias, J.G., Tzioufas, A. G.: SS-B (La) autoantibodies. In: Shoenfield, Y., et al. (eds.): Autoantibodies (2007), Elsevier Science, Amsterdam, 239-246 7. Steiner, G.: Autoantikörperdiagnostik in der Rheumatologie. In: Thumb, N., et al. (eds.): Praktische Rheumatologie (2001), Springer-Verlag, Wien, 91-104 8. Sommer, R., Eitelberger, F.: Wertigkeit der Gliadin-Antikörper im Serum zur Diagnose der Zöliakie. Wien Klin Wochenschr 104/4 (1992), 86-92 19

15. Sammanfattande flödesschema a. Späd sera i 1/100 i provbuffert (100 ml, klar att användas, orange) och blanda. b. Späd tvättbufferten (10x-koncentrat [100 ml, blå]) med vatten och blanda. c. Tvätta brunnarna en gång med 350 ul tvättbuffert vardera. Dispensera 100 ul av kalibratorerna (2,0 ml i varje, klara att användas, gradvis blå), kontrollerna (2,0 ml i varje, klara att användas, grön och röd) samt de utspädda proverna i den fasta fasens brunnar. Mätningar i duplikat rekommenderas. Inkubera i 30 minuter i rumstemperatur (23 ± 3 C). d. Tvätta brunnarna 4 gånger med 350 ul tvättbuffert vardera. e. Dispensera 100 µl av konjugatet (14 ml, klart att använda, rött) i brunnarna. Inkubera som i steg c. f. Upprepa tvättmomentet i steg d. g. Dispensera 100 µl av substratlösningen (14 ml, klar att använda, svart flaska) per brunn. Inkubera som i steg c och tillsätt därefter 100 µl stopplösning (14 ml, klar att använda, färglös) per brunn och skaka plattan en kort stund. h. Mät omedelbart absorbansen vid 450 nm. i. Kvantitativ utvärdering: Bestäm standardkurvan och omvandla provernas absorbans, med användning av denna kurva, till deras respektive antikroppskoncentration (U SS-B/La-Ab (IgG)/ml). j. Kvalitativ utvärdering: Bestäm gränsabsorbansen genom att multiplicera absorbansen i den positiva kontrollen med den faktor som anges i analyscertifikatet. Beräkna därefter provernas kvot genom att dela deras absorbans med gränsabsorbansen. Internal file id._ver.-no. / date of issue: 1311FE60_1301M.FWD.doc / January 13, 2013 20