Mercodia Lp(a) ELISA Bruksanvisning 10-1106-01 REAGENSER FÖR 96 BESTÄMNINGAR För in vitro diagnostiskt bruk Tillverkad av Mercodia AB, Sylveniusgatan 8A, SE-754 50 Uppsala, Sverige
FÖRKLARING AV SYMBOLERNA SOM ANVÄNDS PÅ ETIKETTERNA Reagenser för 96 bestämningar = 96 Utgångsdatum Förvara vid 2 8 C Lotnr. För in vitro diagnostiskt bruk Mercodia 2009-2015
AVSEDD ANVÄNDNING Mercodia Lp(a) ELISA är ett test för kvanitativ bestämning av humant Lp(a) i serum eller plasma. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTET Apolipoprotein(a), Apo(a), är ett glykoprotein som är bundet till apolipoprotein B i Lp(a)-partikeln genom disulfidbryggor. Apo(a) bildas av tre olika strukturella domäner. En av domänerna, kringla 4, typ 2, finns i flera kopior och antalet varierar och bestäms genetiskt, vilket ger upphov till olika storlekar av Apo(a) och följdaktligen Lp(a). Beroende på vilken metod som har använts har mellan 6 och 23 isoformer av Apo(a) på cirka 300 till 900 kd identifierats (1,2,15,16). De flesta människor har två Apo(a)-isoformer, men hos vissa personer kan inget Apo(a)-band detekteras vid analys med SDS-gel-elektrofores som följs av immunoblotting (3). Den senaste tiden har Lp(a) fått stor uppmärksamhet eftersom det finns många bevis för att cirkulerande halter av Lp(a) utgör en obeoende riskfaktor för kardiovaskulär sjukdom. Lp(a)- halter har visat sig vara en nedärvd riskfaktor för ischemisk hjärtsjukdom (4 8). Höga Lp(a)- halter har påvisats vid ärftlig hyperkolesterolemi och det kan vara kliniskt betydelsefullt att kunna mäta dessa halter, för att förutsäga riskerna hos dessa patienter (9,10). Resultat har även publicerats som visar att Lp(a) är en stark indikator för cerebrovaskulär sjukdom (11,12). Apo(a) är homolog till proteasproenzymet plasminogen (13,14). Lp(a) hämmar plasminogenaktiveringen och nyligen genomförda studier har visat att Apo(a) konkurrerar med plasminogenet om att binda till plasminogenreceptorn. Dessa egenskaper hos Apo(a) skulle kunna förklara sambandet mellan höga Lp(a)-koncentrationer och hjärtinfarkt. TESTPRINCIP Mercodia Lp(a) ELISA är en fast fas enzym immunoassay. Den baserar sig på sandwich - teknik, med två monoklonala antikroppar riktade mot separata antigena determinanter på Apo(a)-molekylen. Under inkubation reagerar Apo(a) i provet med peroxidaskonjugerade Apo(a)-antikroppar och Apo(a)-antikroppar som är bundna till en mikrotiterbrunn. En enkel tvätt avlägsnar obunden enzymmärkt antikropp. Det bundna konjugatet detekteras genom reaktion med 3,3,5,5 -tetrametylbensidin. Reaktionen avbryts genom att syra tillsätts, för att ge en kolorimetrisk slutpunkt som avläses spektrofotometriskt. 3
VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER För in vitro diagnostiskt bruk. Innehållet i detta kit eller rester därav får inte komma i kontakt med idisslande djur eller svin. Stop Solution i detta kit innehåller 0,5 M H 2 SO 4. Följ rutinmässiga försiktighetsåtgärder för hantering av farliga kemikalier. Alla patientprover ska hanteras som om de vore smittbärande. Varje brunn kan bara användas en gång. Varning: Detta kit innehåller reagenser som kan vara smittsamma! Kitet innehåller reagenser som är framställda av humana blodkomponenter. Källmaterialet har med hjälp av immunanalys testats på förekomst av hepatit B-ytantigen, antikroppar mot hepatit C virus och antikroppar mot HIV virus och funnits vara negativt. Alla försiktighetsåtgärder för hantering av blodderivat ska dock iakttas. Information finns i HHS, publikationsnr. (CDC) 88-8395 eller i motsvarande lokala/nationella riktlinjer för säkerhetsprocedurer på laboratorier. MATERIAL SOM KRÄVS MEN EJ TILLHANDAHÅLLS Pipetter med lämpliga volymer (repeterbara pipetter är att föredra för tillsats av enzyme conjugate 1X lösning, Substrate TMB och Stop Solution) Provrör, bägare och mätglas för beredning av reagens Destillerat vatten Magnetomrörare Vortex mixer Mikrotiterplattläsare (450 nm filter) Plattskak (700-900 varv per minut, orbital rörelse) Tvättutrustning för mikrotiterplattor med overflow-funktion (rekommenderas men inget krav) 4
REAGENSER Varje Mercodia Lp(a) ELISA-kit innehåller reagenser för 96 brunnar som räcker till 43 prover och en kalibratorkurva i duplikat. För större analysserier används sammanslagna reagenser från förpackningar med identiska lotnummer. Utgångsdatum för hela kitet står på ytteretiketten. Rekommenderad förvaringstemperatur är 2 8 C. Coated Plate 1 platta 96 brunnar Färdig att användas Monoklonal mus-anti-apo(a) Strips med 8 brunnar För oanvända mikrotiterstrips, återförslut påsen med tejp. Förvara vid 2 8 C och använd inom 2 månader. Calibrators 1, 2, 3, 4 4 flaskor 500 μl Frystorkat Humant Lp(a) Tillsätt 500 μl destillerat Gul färgmärkning vatten per flaska Koncentrationen anges på flaskans etikett. För rekonstituerade Calibrators som ska förvaras i över 1 vecka rekommenderas en förvaringstemperatur på 20 C. Calibrator 0 1 flaska 500 μl Färdig att användas Gul färgmärkning Enzyme Conjugate 11X 1 flaska 700 μl Späd enligt nedan Peroxidaskonjugerat monoklonal mus-anti-apo(a) Enzyme Conjugate Buffer 1 flaska 7 ml Färdig att användas Blå färgmärkning Pretreatment Solution 1 flaska 5 ml Färdig att användas Sample Buffer 5X 2 flaskor 50 ml Röd färgmärkning Späd ut varje flaska med 200 ml destillerat vatten för att bereda sample buffer 1X lösning. Obs! Fällning kan förekomma när lösningen förvarats vid 2-8 C. Låt Sample Buffer 5X nå rumstemperatur. Mixa tills fällningen har lösts upp. Wash Buffer 21X 1 flaska 50 ml Späd med 1000 ml destillerat vatten för att bereda wash buffer 1X lösning. Förvaring efter spädning: 2-8 C i 2 månader. Substrate TMB 1 flaska 22 ml Färdig att användas Färglös vätska Observera! Ljuskänslig! Stop solution 1 flaska 7 ml Färdig att användas 0.5 M H 2 SO 4 5
Beredning av enzyme conjugate 1X lösning Gör i ordning önskad mängd enzyme conjugat 1X lösning genom att blanda Enzyme Conjugate 11X med Enzyme Conjugate Buffer (1+10) enligt tabellen nedan. Vid beredning av enzyme conjugate 1X lösning till hela plattan, hälls hela innehållet av Enzyme Conjugate Buffer i flaskan med Emzyme Conjugate 11X. Blanda varsamt. Förvaring efter spädning: 2-8 C i 2 veckor. Antal strips Enzyme Enzyme Conjugate Conjugate 11X Buffer 12 strips 1 flaska 1 flaska 6 strips 300 μl 3.0 ml 4 strips 200 μl 2.0 ml PROVTAGNING OCH HANTERING Serum Ta blod genom venpunktion, låt det koagulera och separera serumet genom centrifugering. Prover kan förvaras vid 2-8 C i en vecka. För längre tidsperioder ska proverna förvaras vid -20 C. Undvik upprepad frysning och upptining. Plasma Ta blod genom venpunktion i rör som innehåller EDTA eller heparin som motverkar koagulation och separera plasmadelen genom centrigfugering. Prover kan förvaras vid 2-8 C i en vecka. För längre tidsperioder ska proverna förvaras vid -20 C. Undvik upprepad frysning och upptining. BEREDNING AV PROVER Alla prover måste förbehandlas enligt följande: 1 Prov 25 μl 2 Pretreatment Solution 25 μl 3 Blanda och inkubera i 1 timme vid rumstemperatur 4 Tillsätt sample buffer 1X lösning och blanda 5.0 ml Detta förfarande gör att proverna blir spädda till 1/202. Spädningen är stabil vid 2 8 C i 1 vecka. Om koncentrationen av Lp(a) i provet är >1000 U/L späds det förbehandlade och spädda provet (1/202) ytterligare i provbuffert, 1/4 t.ex. ger en slutlig spädning på 1/808. 6
TESTFÖRFARANDE Bered enzyme conjugat 1X lösning, wash buffer 1X lösning och sample buffer 1X lösning. Utför varje bestämning i duplikat för Calibrators, kontroller och prover. Gör en kalibratorkurva för varje analysomgång. Undvik att pipettera lösningarna på rörväggarna. Tillsätt till anti-apo(a)-brunnar Calibrators Prov 1 Calibrators 25 μl 2 Förbehandlade prover/kontroller 25 μl 3 Enzyme conjugate 1X lösning 50 μl 50μL 4 Inkubera på en plattskak (700-900 rpm) i 1 timme vid rumstemperatur (18 25 C). 5 Tvätta 6 gånger med 700 µl wash buffer 1X lösning per brunn, använd en automatisk microtiterplatt-tvätt med overflow-funktion. Efter den sista tvätten vänds plattan upp och ned och knackas med stadig hand mot ett absorberande papper. Använd inte soakfunktion vid tvättproceduren. Eller manuellt, avlägsna reaktionslösningen genom att vända microtiterplattan upp och ner över en slask. Tillsätt 350 µl wash buffer 1X lösning till varje brunn. Avlägsna wash buffer 1X lösning, knacka plattan bestämt flera gånger på absorberande papper för att ta bort överfödig vätska. Upprepa 5 gånger. Undvik långvarig soak under tvättproceduren. 6 Tillsätt 200 μl Substrate TMB. 7 Inkubera i 15 minuter. 8 Tillsätt 50 μl Stop Solution. Placera plattan på plattskaken i 5 sekunder för att säkerställa att Substrate TMB och Stop Solution har blandats. 9 Mät absorbansen vid 450 nm och utvärdera. Avläs inom 30 minuter. Obs! Var särskilt noga med att inte förorena Substrate TMB med enzyme conjugate 1X lösning. INTERN KVALITETSKONTROLL Interna plasmapooler med låga, medelhöga och höga koncentrationer av Lp(a) bör regelmässigt analyseras som prover och resultaten kartläggas dag för dag. Det tillhör god laboratoriesed att anteckna följande uppgifter vid varje analystillfälle: kitets lotnummer; kitkomponenternas rekonstitueringssdatum samt optiska densitetsvärden för blank och Calibrators. Gällande frekvens av kvalitetskontroller bör laboratorier följa myndighetsregler och ackrediteringskrav. BERÄKNING AV RESULTAT Datorberäkning Kalibreringskurva kan konstrueras genom att använda cubic spline regression med absorbansvärdena för Calibrators, förutom Calibrator 0, mot Lp(a)-koncentrationen. Multiplicera koncentrationen för proverna med spädningsfaktorn (t.ex. 202). 7
Manuell beräkning 1. Märk ut absorbansvärdena som erhålls för Calibrators, förutom Calibrator 0, mot Lp(a)- koncentrationen på ett lin-linpapper och gör en kalibratorkurva. 2. Avläs koncentrationen för prover på kalibratorkurvan. 3. Multiplicera koncentrationen för prover med spädningsfaktorn (t.ex. 202). Exempel på resultat Exempel på resultat Brunnar Värden som Identitet erhållits med ett 8 veckor gammalt A450 kit. 1A B Calibrator 0 0.061/0.064 Brunnar Identitet A450 1C D Calibrator 1 ** 0.194/0.197 Medelvärde konc. U/L * Medelvärde konc. U/l* 1E F 1A B Calibrator Calibrator 20 ** 0.535/0.537 0,061/0,064 1G H 1C D Calibrator 30,31 ** U/l 1.129/1.131 0,194/0,197 62,6 2A B 1E F Calibrator 41,11 ** U/l 1.835/1.837 0,535/0,537 224,2 2C D 1G H Prov Calibrator 1 2,8 U/l 0.286/0.286 1,129/1,131 104.5 565,6 2E F 2A B Prov Calibrator 2 5,6 U/l 0.562/0.563 1,835/1,837 238.4 1131,2 2G H 2C D Prov Control 3 L 1.070/1.073 0,239/0,242 525.4 83,8 2E F Control H 0,515/0,515 215,4 * 2G H Okänd 1 0,286/0,286 104,5 Resultaten har multiplicerats med spädningsfaktorn ( 202). ** Koncentrationen 3A B Okänd anges 2 på flaskans etikett. 0,562/0,563 238,4 3C D Okänd 3 1,070/1,073 525,4 * Resultaten har multiplicerats med spädningsfaktorn ( 202). Kalibratorkurva Nedan Kalibratorkurva visas en representativ kalibratorkurva. Använd inte denna kurva för att bestämma riktiga analysresultat. Nedan visas en representativ kalibratorkurva. Använd inte denna kurva för att bestämma riktiga analysresultat. 2 1.5 OD O.D. 450 450 nm 1 0.5 0 0 1 2 3 4 5 6 U/L U/l 8 PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR I likhet med andra diagnostiska tester ska inte en slutgiltig klinisk diagnos baseras på resultat
PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR I likhet med andra diagnostiska tester ska inte en slutgiltig klinisk diagnos baseras på resultat från ett enstaka test. Diagnos ska ställas av läkare när alla kliniska resultat har utvärderats. Starkt lipemiska, ikteriska eller hemolyserade prover påverkar inte testresultatet. JÄMFÖRELSE MED MERCODIA APO(a) RIA Jämförelsestudier JÄMFÖRELSE mellan MED Mercodia MERCODIA Lp(a) ELISA APO(a) och Mercodia RIA Apo(a) RIA har utförts med 45 prover som analyserades i två replikat vid två tillfällen. Värdena som erhölls visar på en god Jämförelsestudier mellan Mercodia Apo(a) ELISA och Mercodia Apo(a) RIA har utförts med 45 korrelation mellan de två teknikerna, r= 1,00 (se figur). De förväntade värdena för Mercodia prover som analyserades i två replikat vid två tillfällen. Värdena som erhölls visar på en god Apo(a) RIA kan därmed användas även för Mercodia Lp(a) ELISA. korrelation mellan de två teknikerna, r= 1,00 (se figur). De förväntade värdena för Mercodia Apo(a) RIA kan därmed användas även för Mercodia Apo(a) ELISA. 1250 Mercodia Mercodia Lp(a) Apo(a) ELISA ELISA (U/L) ( U/l) 1000 750 500 250 0 0 250 500 750 1000 1250 Mercodia Apo(a) RIA (U/l) (U/L) FÖRVÄNTADE VÄRDEN Det tillhör god laboratoriesed att varje laboratorium fastställer sina egna förväntade värden. Följande resultat som erhållits med Mercodia Apo(a) RIA kan tjäna som en vägledning till dess att laboratoriet har samlat tillräckligt med egna uppgifter. Apolipoprotein(a)-halterna har studerats i tre olika material: A Normala1, n=171, Sverige (kaukasiska) B Normala1, n=203, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena) C Patienter med familjär hyperkolesterolemi (FH), n=113, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena) Normalgrupperna bestod av individer som valts från den allmänna befolkningen och som inte hade någon uppenbar kardiovaskulär och/eller cerebrovaskulär sjukdom. Fördelningen visas i figurerna nedan. De tre grupperna som undersöktes uppvisade inga ålders- eller könsrelaterade skillnader vad gäller halterna av apolipoprotein(a). Det fanns inte någon signifikant skillnad mellan apolipoprotein(a)-halterna hos normalgruppen från Sverige och normalgruppen från Kanada. 9
FÖRVÄNTADE VÄRDEN Det tillhör god laboratoriesed att varje laboratorium fastställer sina egna förväntade värden. Följande resultat som erhållits med Mercodia Apo(a) RIA kan tjäna som en vägledning till dess att laboratoriet har samlat tillräckligt med egna uppgifter. Lp(a)-halterna har studerats i tre olika material: A Normala, n=171, Sverige (kaukasiska) B Normala, n=203, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena) C Patienter med familjär hyperkolesterolemi (FH), n=113, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena) Normalgrupperna bestod av individer som valts från den allmänna befolkningen och som inte hade någon uppenbar kardiovaskulär och/eller cerebrovaskulär sjukdom. Fördelningen visas i figurerna nedan. De tre grupperna som undersöktes uppvisade inga ålders- eller könsrelaterade skillnader vad gäller halterna a Lp(a). Det fanns inte någon signifikant skillnad mellan Lp(a)-halterna hos normalgruppen från Sverige och normalgruppen från Kanada. Gruppen med FH-patienter hade avsevärt högre Lp(a)-halter än normalgruppen från samma region (p<0,001, Wilcoxons rangsummetest). Följande Lp(a)-koncentrationer för median, 75:e, 85:e och 95:e percentilen erhölls för de olika grupperna. Median 75:e perc. 85:e perc. 95:e perc. U/L U/l U/L U/l U/L U/l U/L U/l Normala, Sverige 131 448 612 795 Normala, Kanada 117 379 525 1044 FH, Kanada 294 660 863 1544 Apo(a)-fördelningen Lp(a)- för normala patienter och FH-patienter (Kanada) Cumulative frequency (%) Kumultativ frekvens(%) 100 75 50 25 Normala Normals FH-patienter patients 0 10 100 1000 Lp(a) Apo(a) U/LU/l 10
Fördelningen Distribution för of normals normala (Canada) patienter (Kanada) 40 English Relative frequency (%) 30 20 10 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 U/l Lp(a) U/L 1300 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 Fördelningen Distribution för of normals normala (Sweden) patienter (Sverige) 40 Relative frequency (%) 30 20 10 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 U/l Lp(a) U/L 1200 1300 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 Fördelningen Distribution för of FH FH-patienter patients (Canada) (Kanada) 40 Relative frequency (%) 30 20 10 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 U/l Lp(a)U/L 1200 1300 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 11 13
ANALYTISKA PRESTANDAEGENSKAPER Gräns för påvisbarhet Detektionsförmåga ska ses som en del av metodvalideringen snarare än den lägsta mätbara koncentrationen. Detektionsgränsen är 0,07 U/L enligt den metod som beskrivs i ISO11843- Part 4. Koncentrationen för prover med absorbansvärden som är lägre än Calibrator 1 ska inte beräknas, istället ska de uttryckas som mindre än eller lika med ( ) koncentrationen som anges på Calibrator 1-flaskan. Recovery Recovery vid tillsats är 96 111 % (i genomsnitt 102 %). Hook-effekt Prover med en Lp(a) koncentration på upp till 9600 U/L kan mätas utan att de visar felaktigt låga resultat, om de förbehandlas och späds till 1/202 enligt beskrivningen ovan. Precision Proverna förbehandlades och späddes till 1/202 vid ett tillfälle och förvarades vid 20 C tills analyserna genomfördes. Varje prov analyserades i 4 replikat vid 9 olika tillfällen. Coefficient of variation Prov Erhållet värde U/L inom testet % mellan testet% totalt testet % 1 2 3 83 196 485 3.3 2.9 2.4 4.0 3.6 1.8 5.2 4.7 3.0 Proverna förbehandlades och späddes till 1/202 vid varje testtillfälle. Varje prov analyserades i 5 replikat vid 5 olika tillfällen. Coefficient of variation Prov Erhållet värde U/L inom testet% mellan testet % totalt testet % 1 2 3 103 251 744 3.1 3.6 2.4 4.2 3.7 5.2 5.2 5.2 5.7 12
Specificitet En koncentration på upp till 10 g/l plasminogen ger ingen mätbar korsreaktivitet i analysen. (Den kliniska koncentrationen av plasminogen ligger under 2.1 g/l). Apolipoprotein B har ingen mätbar korsreaktivitet. KALIBRERING Kitet Mercodia Lp(a) ELISA kalibreras mot en mycket ren, validerad, kommersiell Lp(a)-beredning. Koncentrationen av Mercodia Lp(a) ELISA uttrycks i enheter per liter (U/L). GARANTI De uppgifter som presenteras här erhölls med användning av påvisat förfarande. Förändringar eller modifieringar av förfarandet som inte rekommenderas av Mercodia AB kan påverka resultaten. I dessa fall frånsäger sig Mercodia AB allt ansvar, underförstått lagstadgat så väl som säljbarhets-och användbarhetsgaranti. Mercodia AB och deras auktoriserade distributörer skall i dessa fall inte hållas ansvariga för skador som orsakats indirekt eller som en konsekvens. 13
REFERENSER 1 Utermann G. (1989) The mysteries of lipoprotein (a). Science 17 Nov:904 910 2 MBewu AD and Durrington PN (1990) Lipoprotein (a): structure, properties and possible involvement in trombogenesis and atherogenesis. Atherosclerosis 85:1 14 3 Albers JJ, Marcovina SM and Lodge MS (1990) The unique lipoprotein(a): properties and immunochemical measurement. Clin Chem 36: 2019 2026 4 Rosengren A, Wilhelmsen L, Eriksson E, Risberg B and Wendel H (1990) Lipoprotein(a) and coronary heart disease: a prospective case control study in a general population sample of middle aged men. Br Med J 301:1248 1251 5 Rhoads GG, Dahlén G, Berg K, Morton NE and Danneberg AL (1986) Lp(a) Lipoprotein as a risk factor for myocardial infarction. JAMA 256:2540 2544 6 Dahlen GH, Guyton JR, Attar M, Farmer JA, Kautz JA and Gotto AM Jr (1986) Association levels of lipoprotein Lp(a), plasma lipids and other lipoproteins with coronary artery disease documented by angiography. Circulation 74:758 765 7 Dembinski T, Nixon P, Shen G, Mymin D and Choy PC. (2000) Evaluation of a new apolipoprotein(a) isoform-independent assay for serum Lipoprotein(a). Mol Cell Biochem 207:149 155 8 Houlston R and Friedl W (1988) Biochemistry and clinical significance of lipoprotein (a). Ann Clin Biochem 25:499 503 9 Wiklund O, Angelin B, Olofsson SO, Eriksson M, Fager G, Berglund L and Bondjers G(1990) Apolipoprotein (a) and ischaemic heart disease in familial hypercholesterolaemia. Lancet 335:1360 1363 10 Seed M, Hoppichler F, Reaveley D, McCarthy S, Thopmson GR, Boerwinkel E and Utermann G (1990) Relation of serum lipoprotein(a) concentration and apolipoprotein(a) phenotype to coronary heart disease in patients with familial hypercholesterolemia. New En J of Med 322:1494 1499 11 Zenker G, Költringer P, Boné G, Niederkorn K, Pfeiffer K and Jürgens G (1986) Lipoprotein (a) as a strong indicator for cerebrovascular disease. Stroke 17:942 945 12 Murai A, Miyahara T, Fujimoto N, Matsuda M and Kameyama M (1986) Lp(a) lipoprotein as a riskfactor for coronary heart disease and cerebral infarction. Atherosclerosis 59:199 204 13 McLean JW, Tomlinson JE, Kuang WJ, Eaton DL, Chen EY, Fless GM, Scanu AM and Lawn RM (1987) cdna sequence of human apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen. Nature 330: 132 137 14 Eaton DL, Fless GM, Kohr WJ, McLean JW, Xu QT, Miller CG, Lawn RM and Scanu AM (1987) Partial amino acid sequence of apolipoprotein (a) shows that it is homologous to plasminogen Biochemistry 84:3224 3228 15 Lackner C, Boerwinkle E, Leffert CC, Rahmig T and Hobbs HH (1991) Molecular basis of apolipoprotein(a) isoform size heterogenity as revealed by pulsed-field gel electrophoresis. J Clin Invest 87:2153 2161 16 Kamboh MI, Ferrell RE and Kottke BA (1991) Expressed hypervariable polymorphism of apolipoprotein (a). Am J Hum Genet 49:1063 1074 17 Solymoss BC, Marcil M, Wesolowska E, Gilfix BM, Lespérance J and Campeau L (1993) Relation of coronary artery disease in women <60 years of age to the combined elevation of serum lipoprotein(a) and total cholesterol to high-density cholestrolratio. Am J Cardiol 72:1215 19.
Tillsätt Calibrators och förbehandlade kontroller* och prover Tillsätt enzyme conjugate 1X lösning SAMMANFATTNINGSPROTOKOLL Mercodia Lp(a) ELISA 25 μl 50 μl X-O Graf Tryckeri AB Inkubera Tvätta med wash buffer 1X-lösning 1 timme vid 18 25 C på en plattskak 700-900 rpm 700 µl, 6 gånger Tillsätt Substrate TMB 200 μl Inkubera Tillsätt Stop Solution 15 minuter 50 μl Skaka i 5 sekunder för att se till att lösningen blandas Mät vid A 450 Utvärdera resultaten * Medföljer ej För fullständig information se sida 7 31-3104 Version 8.0