Kod K4008 Följande material, som är tillräckligt för 150 vävnadssnitt, baserat på 100 µl per snitt, inkluderas i denna sats:

Transkript

1 Dako EnVision + System HRP (AEC) For Use With Rabbit Primary Antibodies Kod K4008 Kod K4009 Ready-to-use Avsedd användning För in vitro-diagnostik. Dessa instruktioner gäller Dako EnVision + System, Peroxidase (Dako EnVision+ System, HRP). Denna sats är avsedd för användning med primära antikroppar från kanin, som tillhandahållits av användaren för kvalitativ identifiering av antigener genom ljusmikroskopi i normala och patologiska paraffininbäddade vävnader, kryostatvävnader eller cellpreparat. Vävnader som behandlats i flera olika fixativ inklusive etanol, B-5, Bouins, zinkformalin, och neutralbuffrat formalin kan användas. Sammanfattning och förklaring Dako EnVision+ System, HRP är en IHC-färgningsteknik i två steg. Detta system är baserat på en HRP-märkt polymer som är konjugerad med sekundära antikroppar. Den märkta polymeren innehåller inte avidin eller biotin. Följaktligen elimineras eller reduceras signifikant icke-specifik färgning som resulterar från endogen avidin-biotinaktivitet i lever, njure, lymfvävnader och kryostatsnitt. Alla reagenser i Dako EnVision+ System, HRP med AEC+ substrat är bruksfärdiga. Detta system är en högkänslig metod och detta gör att optimala spädningar av den primära antikroppen är upp till 20 gånger högre än spädningar som används för den traditionella PAP-tekniken, och flera gånger högre än spädningar som används för de traditionella ABC- eller LSAB-metoderna. Detta protokoll ger ett förstärkt signalgenererande system för detektion av antigener som är närvarande i låga koncentrationer eller för primära antikroppar med låg titer. Primära antikroppar, som framställts i kanin, reagerar väl med den märkta polymeren. Tolkningen av all positiv färgning eller frånvaro av färgning, måste kompletteras med morfologiska och histologiska undersökningar och korrekta kontroller. Procedurprincip Medföljande reagenser Släck all eventuell endogen peroxidasaktivitet genom att inkubera provet i fem minuter med Dakos Peroxidase Block. Provet inkuberas sedan med en lämpligt karakteriserad och utspädd primär antikropp från kanin, följt av inkubering med den märkta polymeren med användning av två sekventiella 30-minuters inkuberingar. Observera att för antikroppar som kräver enzymdigerering eller målåtervinning, kan det vara nödvändigt att öka inkuberingsstiderna för den primära antikroppen och den märkta polymeren med 5 till 10 minuter. Färgningen fullbordas genom en 5 30 minuters inkubering med 3-amino-9-etylkarbazol (AEC)+ substrat-kromogen, som resulterar i ett rödfärgat precipitat vid antigenplatsen. (AEC är en potentiell carcinogen; se avsnittet om Försiktighetsåtgärder.) Kod K4008 Följande material, som är tillräckligt för 150 vävnadssnitt, baserat på 100 µl per snitt, inkluderas i denna sats: Kvantitet Beskrivning 1 x 15 ml Peroxidasblock 0,03 % väteperoxid innehållande natriumazid. 1 x 15 ml Märkt polymer Peroxidasmärkt polymer, som konjugerats till get-anti-kaninimmunoglobuliner i Tris-HClbuffert innehållande stabiliserande protein och antimikrobiellt medel. 1 x 15 ml AEC+ substrat-kromogen 3-amino-9-etylkarbazol, innehållande väteperoxid, stabilisatorer, förstärkare och ett antimikrobiellt medel. Förvaras vid 2 8 C. ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 1/7

2 Kod K4009 Följande material, som är tillräckligt för 1100 vävnadssnitt, baserat på 100 µl per snitt, inkluderas i denna sats: Kvantitet Beskrivning 1 x 110 ml Peroxidasblock 0,03 % väteperoxid innehållande natriumazid. 1 x 110 ml Märkt polymer Peroxidasmärkt polymer, som konjugerats till get-anti-kaninimmunoglobuliner i Tris-HClbuffert innehållande stabiliserande protein och antimikrobiellt medel. 1 x 110 ml AEC+ substrat-kromogen 3-amino-9-etylkarbazol, innehållande väteperoxid, stabilisatorer, förstärkare och ett antimikrobiellt medel. Förvaras vid 2 8 C. Material som behövs, men inte ingår Absorberande savetter Kontrollvävnad, positiv och negativ Motfärg; vattenbaserad, såsom Mayer s Hematoxylin eller Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin (kod S3309) Täckglas Destillerat vatten Etanol, absolut och 95 % Ljusmikroskop (20x 800x) Monteringsmedel såsom Glycergel Mounting Medium (kod C0563) eller Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-use (kod S3025) eller icke vattenhaltigt permanent monteringsmedium, Ultramount (kod S1964) Primärantikroppar och negativt kontrollreagens Objektglas, poly-l-lysinbelagda eller Silanized Slides (kod S3003) färgningskärl eller bad Tidtagarur (som kan mäta 3 40 minuters intervall) Tvättflaskor Tvättbuffertlösning Xylen, toluen eller xylensubstitut Valfria material Ammoniumhydroxid, 15 mol/l spädd till 0,037 mol/l PAP Pen (kod S2002) Försiktighetsåtgärder 1. För yrkesanvändning. 2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN 3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan NaN 3, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ackumuleras i avloppet. 1,2 3. AEC+ Substrate-Chromogen är känsligt för kontamination från flera olika oxidationsmedel, såsom metaller, bakterier, damm och allmänt använt laboratorieglas. För att undvika kontamination och för tidig utgång av tidsperiod, utsätt inte AEC+ lösningen för någon potentiell kontaminationskälla och pipettera aldrig direkt från flaskan. Häll ut erfordrad mängd i en ren behållare och pipettera från denna. Häll inte tillbaka överflödig AEC+ lösning i den primära förvaringsbehållaren. 4. Använd inte reagenserna efter utgångsdatumet för föreskriven förvaringsmetod. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som anges i produktbladet. 5. Substituera inte reagenser från andra partinummer eller från satser från andra tillverkare. 6. Enzymer och substrat-kromogener kan påverkas negativt om de utsätts för alltför höga ljusnivåer. Förvara inte satskomponenter och utför inte färgningen i starkt ljus, t.ex. direkt solljus. 7. Andra inkubationstider eller temperaturer än dem som specificeras kan ge felaktiga resultat. Användaren måste validera alla sådana ändringar. 8. Liksom med alla produkter av biologiskt ursprung måste korrekta procedurer användas vid hanteringen. 9. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud. 10. Oanvänd lösning ska kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter. 11. Datablad för materialsäkerhet finns tillgängliga för professionella användare på begäran. ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 2/7

3 Fara AEC+ Substrate Chromogen: 5-10% Polyethylene glycol, 1-5% N-Methyl-2-pyrrolidone, 0.1-1% Acetic acid, 0.1-1% 3-amino-9-ethyl carbazole H320 Orsakar ögonirritation. H350 Kan orsaka cancer. P201 Inhämta särskilda instruktioner före användning. P202 Använd inte produkten innan du har läst och förstått säkerhetsanvisningarna. P281 Använd föreskriven personlig skyddsutrustning. P280 Använd ögon- eller ansiktsskydd. P264 Tvätta händerna grundligt efter användning. P308 + P313 Vid exponering eller misstanke om exponering: Sök läkarvård. P305 + P351 + P338 VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. P337 + P313 Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. P405 P501 Förvaras inlåst. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. Förvaring Reagenserna i Dako EnVision+ System, HRP måste förvaras vid 2 8 C. Får ej frysas. Får ej användas efter det utgångsdatum som finns tryckt på reagensflaskorna och satsens etikett. Förändring av utseendet av någon reagens, såsom utfällning, kan indikera instabilitet eller försämring. I sådana fall får reagensen (reagenserna) inte användas. AEC+ Substrate-Chromogen-lösningen är instabil vid högre temperaturer än 8 C. Förvara AEC+ Substrate- Chromogen lösningen inom det rekommenderade 2 8 C temperaturintervallet. Denna lösning kan använ das direkt efter att den tagits ut ur kylskåp. Efter användning måste den återföras till förvaring vid 2 8 C så snart som möjligt. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos dessa produkter. Därför bör positiva och negativa kontroller testas samtidigt med patientprover. Kontakta Dako Teknisk Support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara problem med denna sats. Reagensberedning Följande reagenser bereds lämpligen före färgningen. Tvättbuffertlösning TBST, 0,05 mol/l Tris Buffered Saline with Tween (kod S3006) rekommenderas som tvättbuffert för automatiserad och manuell IHC-detektion. TBST, 0,05 mol/l Tris Buffered Saline (kod S1968) och PBS, 0,02 mol/l Phosphate Buffered Saline (kod S3024) är också lämpliga som tvättbuffertlösningar för manuell färgning. Tvättbuffertlösningar innehållande natriumazid rekommenderas ej. Natriumazid inaktiverar pepparotsperoxidas (HRP), vilket resulterar i negativ färgning. Kassera bufferten om den ser grumlig ut. Destillerat vatten kan användas för att skölja peroxidasblocket, substratet och motfärgen. Primärantikropp NP-Series Plus bruksfärdiga antikroppar är optimerade och rekommenderas för användning med Dako Plus högkänsliga detektionssystem. Koncentrerade antikroppar är också tillgängliga från Dako. Slutanvändaren måste optimera koncentrerade antikroppar. Spädningar bör beredas med användning av Antibody Diluent (kod S0809), eller ett spädningsmedel innehållande 0,05 mol/l Tris-HCl-buffert med 1 % bovint serumalbumin (BSA). Dako bruksfärdiga antikroppar i N-Serien är inte optimerade för användning med Dako Plus detektionssystem. Negativ kontrollreagens Vid användning av Dako NP-Series Plus bruksfärdiga antikroppar, rekommenderas universell (universella) negativ (negativa) kontroll (kontroller) som negativ kontrollreagens. Dessa kontroller är optimerade för användning med bruksfärdiga antikroppar i NP-Series Plus från antingen mus (kod NP015) eller kanin (kod NP001). Motfärgning Den färgade slutprodukten av färgningsreaktionen är löslig i alkohol och bör endast användas med vattenbaserade motfärger såsom Mayer s Hematoxylin eller Lillie s Modified Hematoxylin (kod S3309). Följ motfärgningen av hematoxylinet med en noggrann sköljning i destillerat vatten och nedsänk sedan objektglasen med vävnadspreparat i ett bad med 0,037 mol/l ammoniak eller liknande blåningsmedel. 0,037 mol/l ammoniakvatten bereds genom att blanda 2,5 ml 15 mol/l (koncentrerad) ammoniumhydroxid med 1 liter vatten. Oanvänd 0,037 mol/l ammoniak kan förvaras vid rumstemperatur (20 25 C) i en tätt försluten flaska upp till 12 månader. ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 3/7

4 Se tillverkarens riktlinjer för alternativa motfärgningsprocedurer. Monteringsmedia Glycergel Mounting Medium (kod C0563) eller Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-use (kod S3025) rekommenderas för vattenhaltig montering. Glycergel måste uppvärmas till minst 50 C preci s före användning. Icke-vattenhaltigt permanent monteringsmedium (Ultramount, kod S1964) kan också användas. Provpreparation Färgningsprocedur Före IHC-färgning måste vävnaderna fixeras och behandlas. Fixering förhindrar autolys och förruttnelse av utskuren vävnad, konserverar antigeniciteten, förstärker vävnadens brytningsindex och ökar de cellulära elementens motstånd mot vävnadsbehandling. Vävnadsbehandling inkluderar dehydrering, borttagning av dehydreringsämnen, infiltration av inbäddningsmedia, inbäddning och snittning av vävnaden. De vanligaste fixativen för IHC vävnadspreparat diskuteras i Allmänna instruktioner för immunhistokemi. Detta är endast riktlinjer. Optimala procedurer måste bestämmas och verifieras av användaren. Anm. om proceduren Användaren bör läsa dessa anvisningar noggrant och bekanta sig med satsinnehållet före användning. Reagenserna och anvisningarna, som medföljer denna sats, har utformats för att ge optimal prestanda. Ytterligare spädning av satsreagenserna eller förändring av inkuberingstider eller temperaturer kan ge felaktiga resultat. Peroxidasblock och märkt polymer skall anta jämvikt vid rumstemperatur (20 25 C) före immunfärgning. Likaså skall alla inkuberingar utföras vid rumstemperatur. För enkelhetens skull kan AEC+ substratet användas omedelbart efter att det tagits ur kylskåpet och behöver inte bringas till rumstemperatur före användning. Efter användning skall det återföras till förvaring vid 2 8 C. Förvaringstemperatur över 8 C påverka r AEC+ substrat-kromogenets stabilitet. Låt inte vävnadssnitten torka under färgningsproceduren. Torkade vävnadssnitt kan uppvisa ökad icke-specifik färgning. Täck objektglas som utsätts för drag. Om långvariga inkuberingar används skall vävnaderna placeras i fuktig miljö. Känsligheten hos Dako EnVision+ System, HRP kan ökas ytterligare genom att förlänga inkuberingstiderna enligt steg 2 och 3 i 5 10 minuter. Färgningsprotokoll STEG 1 PEROXIDASBLOCK Slå bort överskottsbuffert. Använd en luddfri duk (t.ex. Kimwipe eller gasväv) och torka försiktigt runt provet för att avlägsna all återstående vätska och för att hålla reagenserna inom det föreskrivna området. Applicera tillräckligt med Peroxidasblock för att täcka provet. Inkubera i 5 (±1) minuter. Skölj varsamt med destillerat vatten eller buffertlösning från en tvättflaska (rikta inte strålen direkt på vävnaden) och placera i färskt buffertbad. STEG 2 STEG 3 STEG 4 PRIMÄR ANTIKROPP ELLER NEGATIV KONTROLLREAGENS Slå bort överskottsbuffert och torka av objektglasen som tidigare. Tillsätt tillräckligt med optimalt spädd primär antikropp eller negativ kontrollreagens för att täcka provet. Inkubera i 30 (±1) minuter. Skölj varsamt med buffertlösning från en tvättflaska (rikta inte strålen direkt på vävnaden) och placera i färskt buffertbad. Om färgningsproceduren måste avbrytas kan objektglasen hållas i ett buffertbad efter inkubering av primärantikroppen (Steg 2) i upp till en timme vid rumstemperatur (20 25 C) utan att påverka färgningsproceduren. PEROXIDASMÄRKT POLYMER Slå bort överskottsbuffert och torka av objektglasen som tidigare. Applicera tillräckligt med märkt polymer för att täcka provet. Inkubera i 30 (±1) minuter. Skölj objektglasen som i steg 2. SUBSTRAT-KROMOGEN Torka objektglaset enligt ovan. Tillsätt tillräckligt av bruksfärdig AEC+ substrat-kromogenlösningen för att täcka provet. Inkubera i 5 30 minuter. Skölj varsamt med destillerat vatten från en tvättflaska (rikta inte strålen direkt på vävnaden). Samla avfall av substrat-kromogen i en behållare för riskavfall för korrekt kassering. ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 4/7

5 STEG 5 STEG 6 HEMATOXYLIN MOTFÄRGNING (valfritt) Nedsänk objektglasen i ett bad av vattenhaltigt hematoxylin (kod S3309). Inkuberingstiden är beroende av styrkan hos det hematoxylin som används. Skölj varsamt i ett destillerat vattenbad. Doppa objektglasen 10 gånger i ett bad med 0,037 mol/l ammoniak eller liknande blåningsmedel. Skölj objektglasen i ett bad av destillerat eller avjoniserat vatten i 2 5 minuter. MONTERING Prover kan monteras och förses med täckglas med ett vattenbaserat monteringsmedium såsom Glycergel Mounting Medium (kod C0563) eller Faramount (kod S3025) eller icke vattenhaltigt permanent monteringsmedium, Ultramount (kod S1964). OBS: AEC reaktionsprodukten är löslig i organiska lösningsmedel är därför inte kompatibel med toluen- eller xylenbaserade permanenta monteringsmedia. OBS: Objektglasen kan avläsas vid lämpligt tillfälle. Viss blekning kan dock ske om objektglasen utsätts för starkt ljus under en period på en vecka. Förvara objektglasen mörkt i rumstemperatur (20 25 C) för at t minimera blekningen. Kvalitetskontroll Skillnader i vävnadsbearbetning och tekniska procedurer i användarens laboratorium kan ge upphov till väsentliga variationer i resultaten, vilket gör det nödvändigt att utföra regelbundna egna kontroller utöver följande procedurer. Se riktlinjerna för kvalitetskontroll från College of American Pathologists (CAP) Certification Program for Immunohistochemistry samt referenser 3 till 5 för ytterligare information. Se produktbladet för varje primärantikropp som används, för detaljer angående sensitivitet och immunreaktivitet. Se "Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning" för ytterligare information om positiva och negativa kontroller. Tolkning av färgningen Allmänna begränsningar Produktspecifika begränsningar Se "Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning" för riktlinjer för tolkning. Se "Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning" för allmänna begränsningar. Vävnadsfärgning är beroende av korrekt hantering och bearbetning av vävnaden före färgning. Felaktig fixering, frysning, upptining, tvättning, torkning, uppvärmning, snittning eller kontaminering med andra vävnader eller vätskor kan ge artefakter, antikroppsinfångning eller falskt negativa resultat. Användning av gamla eller obuffrade fixativ, eller exponering av vävnaderna för hög värme (högre än 60 C) under behandlingen, k an resultera i minskad färgningskänslighet. Endogen peroxidas- eller pseudoperoxidasaktivitet kan påträffas i hemoproteiner såsom hemoglobulin, myoglobin, cytokrom, och katalas såväl som i eosinofiler. 6,7 Denna aktivitet kan hämmas genom att inkubera proverna med peroxidasblock från Dako EnVision+ System, HRP i fem minuter, före tillsats av den primära antikroppen. Blod- och benmärgsutstryk och frusna vävnader kan också behandlas med denna reagens. Denna procedur avlägsnar emellertid inte hemoproteinernas rödbruna pigment. Alternativt kan en lösning av metanol-väteperoxid användas. Vissa antigener kan denatureras med denna procedur. Vävnader från personer infekterade med hepatit B-virus och med hepatit B-ytantigen (HBsAg) kan uppvisa icke-specifik färgning med pepparrotsperoxidas. 8 Normala/icke-immuna sera från samma djurkälla som det sekundära antisera, som användes i blockningsstegen, kan orsaka falskt negativa eller falskt positiva resultat på grund av auto-antikroppar eller naturliga antikroppar. Reagenserna, som tillhandahålls i detta kit, har spätts optimalt. Ytterligare spädning kan resultera i minskad antigenfärgning. ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 5/7

6 Felsökning Problem Trolig orsak Föreslagen åtgärd 1. Ingen färgning av objektglasen 1a. Reagenserna har inte använts i korrekt ordning. 1a. Gå igenom appliceringen av reagenserna. 2. Svag färgning av objektglasen 3. Alltför kraftig bakgrundsfärg ning på objektglas 1b. Natriumazid i buffertbad. 1b. Använd färsk, azidfri buffert. 2a. Snitten bibehåller för mycket 2a. Slå försiktigt bort överskottslösning lösning efter tvättbad. innan du torkar runt snittet. 2b. Objektglasen har inte inkuberats tillräckligt länge med antikroppar eller substrat. 3a. Prover innehåller hög endogen peroxidasaktivitet. 3b. Paraffinet har inte avlägsnats fullständigt. 3c. Objektglasen har inte sköljts ordentligt. 3d. Snabbare än normal substratreaktion på grund av för hög rumstemperatur. 3e. Snitten torkade under färgningsproceduren. 2b. Gå igenom de rekommenderade inkuberingstiderna. 3a. Använd längre inkuberingstider för peroxidasblock. 3b. Använd färska xylen- eller toluenbad. Om flera objektglas färgas samtidigt, bör det andra xylenbadet innehålla färskt xylen. 3c. Använd färska lösningar i buffertbad och tvättflaskor. Använd TBST som tvättbuffert 3d. Använd kortare inkuberingstider med substrat-kromogenlösning. 3e. Använd fuktkammare. Torka endast tre till fyra objektglas åt gången före tillsats av reagens. 3f. Icke-specifik bindning av 3f. Tillsätt en blockningslösning reagenser till vävnadssnitt. innehållande ett irrelevant protein. 3g. Antikroppen är för koncentrerad. 3g. Använd högre spädning av den primära antikroppen. OBS: Om problemet inte härrör från någon av ovanstående orsaker eller om den föreslagna åtgärden inte löser problemet, kontakta Dako Teknisk Support för ytterligare hjälp. Ytterligare information om färgningstekniker och provberedning finns i Handbook -Immunochemical Staining Methods 9 (tillgänglig från Dako), Atlas of Immunohistology 10 ochimmunoperoxidase Techniques, A Practical Approach to Tumor Diagnosis. 11 Referenser 1. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides. DHHS (NIOSH) Publ. No , Current 13. August 16, Centers for Disease Control Manual Guide - Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts. April 30, Elias JM, et al. Special report: Quality control in immunohistochemistry. Amer J Clin Pathol 1989; 92: National Committee for Clinical Laboratory Standards. Internal quality control testing: principles and definitions; approved guideline. Villanova, PA 1991; Order code C24-A:4 5. Herman GE and Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: The new era of quality control. Biotech & Histochem 1991; 66: Escribano LM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. J Histochem Cytochem 1987; 35: Elias JM. Immunohistopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: Amer Soc of Clin Pathol Press 1990:46 8. Omata M, et al. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: A possible source of error in immunohistochemistry. Amer J Pathol 1980; 73: Naish SJ (ed). Handbook - immunochemical staining methods. Carpinteria: DAKO Corporation Tubbs RR, et al. Atlas of immunohistology. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press Nadji M and Morales AR. Immunoperoxidase techniques, a practical approach to tumor diagnosis. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press 1986 Ytterligare referenser Cartun RW. Immunohistochemistry of infectious diseases. J Histotechnol 1995; 18(3):195 Heras A, et al. Enhanced labelled-polymer system for immunohistochemistry. XVth Eur Cong Pathol. Copenhagen, Denmark 1995; Sept 3-8 Bisgaard K and Pluzek K-P. Use of polymer conjugates in immunohistochemistry: A comparative study of a traditional staining method to a staining method utilizing polymer conjugates. Abstract. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Pileri SA, et al. EnVision Plus: A new powerful tool for diagnosis and research. Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Bisgaard K. EnVision Plus - Introduction to a new technology. Abstract. DAKO Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 6/7

7 Edition 07/15 ( ) P04046SE_01_K4008_K4009/ s. 7/7