Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och 0,015 mol/l NaN 3.

Transkript

1 FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Progesterone Receptor Ready-to-Use (Link) Kod IR068 Avsedd användning Synonym för antigen Sammanfattning och förklaring Medföljande reagens För in vitro-diagnostik. FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Progesterone Receptor,, Ready-to-Use, (Link), är avsedd för användning i immunohistokemi tillsammans med EnVision FLEX+, High ph visualiseringssats tillsammans med Autostainer Link-instrument i syfte att semikvantitativt detektera human progesteronreceptor i formalinfixerade, paraffininbäddade humana bröstkarcinom. Den här antikroppen märker progesteronreceptorpositiva celler och är användbar vid bedömning av progesteronreceptorstatus i humana bröstkarcinom. Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester. PR Steroidhormonreceptorernas roll i bröstcancer är väl kända (1,2). Avsaknaden av östrogenreceptor ER och progesteronreceptor PR förutsäger tidigt recidiv och dålig överlevnad för bröstcancerpatienter (3-6). Förekomsten av ER och PR i tumörer förutsäger också att tamoxifen och andra endokrinförknippade behandlingar skulle kunna göra nytta. Mätning av ER och PR kan bestämmas semikvantitativt med användning av IHC, eller kvantitativt med användning av DCC eller EIA. Korrelationen mellan de semikvantitativa och kvantitativa utvärderingarna av PR har legat på 73 % till 91 %, beroende på vilket laboratorium och vilken antikropp som använts (7-9). Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning) eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer för: 1) Tillvägagångssätt för proceduren, 2) Material som behövs men inte medföljer, 3) Förvaring, 4) Provberedning, 5) Färgningsprocedur, 6) Kvalitetskontroll, 7) Felsökning, 8) Tolkning av färgning, 9) Allmänna begränsningar. Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och 0,015 mol/l NaN 3. Klon: PgR 636 (10) Isotyp: IgG1, kappa Immunogen Formalinfixerad rekombinant A-form av human progesteronreceptor i full längd (10) Specificitet Anti-PR, PgR 636 har påvisats reagera med PR-A- och PR-B-formerna av Western blot av hela cellextrakt och reagerar med såväl fri- som hormonbunden PR (10). Epitopen har kartlagts till den aminoterminaldomän som delas av PR-A och PR-B. Försiktighetsåtgärder 1. För in vitro-diagnostik. 2. För yrkesmässigt bruk. 3. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN 3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet. 4. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 5. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud. 6. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter. Förvaring Förvaras vid 2 8 C. Får inte användas efter det ut gångsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt med patientprover. Kontakta Dakos tekniska support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och det misstänks vara något fel med antikroppen. ( ) SE_004 s. 1/5

2 Provberedning inklusive material som behövs men inte medföljer Färgningsprocedur inklusive material som behövs men inte medföljer Tolkning av färgningen Produktspecifika begränsningar Prestandaegenskaper Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt. Vävnadsprover ska snittas i ca 4 µm tjocka snitt. Förbehandling: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt krävs. För bästa resultat ska vävnader förbehandlas med HIER genom att använda utspädd EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kod K8000/K8004). Avparaffinering, rehydrering och epitopåtervinning kan utföras i Dako PT Link (kod PT100/PT101/PT200). Ytterligare information finns i användarhandboken för PT Link. Följande parametrar ska användas för PT Link: Förvärmningstemperatur: 65 C; temperatur och tid för epitopåtervinning: 97 C under 20 (±1) minuter; kyl till 65 C. Ta bort objektglas racket från PT-tanken och doppa omedelbart objektglasen i bägare/behållare (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) innehållande spädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (kod K8007). Lämna objektglasen i Wash Buffer i 1-5 minuter. Låt inte vävnadssnitten torka under förbehandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020). Efter färgning måste snitten dehydreras, klaras och monteras med permanent monteringsmedium. Visualisering: Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High ph (Link) (kod K8002). Program: Färgningsstegen och inkuberingstiderna är förprogrammerade i programvaran för Autostainer Link. Den rekommenderade volymen för reagensapplicering är 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per objektglas. Användarhandboken för Autostainer Link innehåller detaljerade anvisningar för laddning av objektglas och reagens. Kontakta Dakos tekniska service om protokollen inte finns tillgängliga på den Autostainer Link 48-plattform som används. Alla inkuberingssteg ska utföras vid rumstemperatur. Kontrastfärg: Den rekommenderade kontrastfärgen är EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kod K8008). Icke vattenhaltigt, permanent monteringsmedium rekommenderas. Kontroller: Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientproverna och med samma protokoll. De positiva kontrollerna ska helst omfatta en bröstkarcinomvävnad med lågt PR-uttryck. I annat fall kan en benign cervix användas. Cellerna/strukturerna bör visa reaktionsmönster som beskrivs för denna vävnad i "Prestandaegenskaper" i alla positiva prover. Rekommenderat negativt kontrollreagens är FLEX Negative Control, Mouse (Link) (kod IR750). Det cellulära färgningsmönstret är nukleärt. Om cytoplasmatisk märkning observeras ska sådan ses som ickespecifik. Ett positivt resultat definieras som nukleär färgning i 1 % av tumörcellerna vid någon färgningsintensitet. Det här är i linje med ASCO/CAPs rekommenderade gränsvärde på 1 % positiva tumörceller för positiv bedömning (11). 1. Falskt negativa resultat kan orsakas av försämring av antigenet i vävnaderna med tiden. Prover skall färgas inom 2 månader efter montering av vävnaderna på objektglas om de förvaras vid rumstemperatur (12). 2. Lymfocyter och stromala celler kan uppvisa positiv färgning med antikroppen FLEX Monoclonal Mouse Anti- Human PR och ska inte tolkas eller räknas som PR-färgade tumörceller. 3. För optimala och reproducerbara resultat kräver PR-proteinet målåtervinning när vävnaderna är rutinfixerade (neutralbuffrat formalin) och paraffininbäddade. 4. Användning av Dako Anti-PR, på vävnad med andra fixeringsmedel än formalin har inte verifierats. Precision: Seriesnitt från vart och ett av 12 olika formalinfixerade, paraffininbäddade block av bröstkarcinom, som representerar ett dynamiskt intervall av PR-uttryck, uppsamlades för testning. Testningen utfördes enligt följande: Precision mellan körningar: Efter standardprotokollet EnVision FLEX+, High ph färgades tre snitt från varje vävnadsblock med Anti-PR,. Samtidigt färgades ett snitt från varje block med ett negativt kontrollreagens. Precision mellan körningar: Ovanstående procedur med färgning av ett snitt från varje vävnadsblock upprepades fem ej på varandra följande dagar. Samtidigt färgades ett snitt från varje vävnadsblock med ett negativt kontrollreagens. Precision mellan instrument: Ovanstående procedur med färgning av totalt tre snitt från varje vävnadsblock utfördes på tre olika Autostainer-instrument av tre olika operatörer. Samtidigt färgades ett objektglas från varje vävnadsblock med ett negativt kontrollreagens. Precisionsexperiment med Anti-PR, gav konsekventa resultat vid testning mellan körningar, i samma körning och med olika instrument. Konsekventa testförhållanden bibehölls genom hela undersökningen och reagenset förvarades vid 2 8 C mellan testkörn ingarna. Normala vävnader: I tabell 1 ges en översikt av immunreaktiviteten för Anti-PR, på den rekommenderade panelen med normala vävnader. Alla vävnader formalinfixerades och paraffininbäddades samt färgades med Anti- PR, enligt instruktionerna i produktbladet. Cytoplasmatisk färgning observerades med Anti-PR, i flera vävnadselement, inklusive epitel, stroma, interstitiala celler och inflammatoriska celler. Även om cytoplasmatisk färgning observerades ses inte sådan som diagnostisk i enlighet med antikroppens avsedda användning. ( ) SE_004 s. 2/5

3 Tabell 1: Sammanfattning av normal vävnadsreaktivitet för Anti-PR, Vävnadstyp Positiva vävnadselement Vävnadstyp Positiva vävnadselement (antal testade) (antal testade) Binjure (3) 1/3 celler i zona glomerulosa Nerv, perifer (3) 0/3 (50 %), 1/3 celler i zona glomerulosa (50 %), Äggstock (3) 3/3 stromala celler (50 70 %), Benmärg (3) 0/3 Bukspottkörtel (3) 2/3 bukspottkörtel (50 90 %), Bröst (3) 2/3 glandulära epitelceller (50 90 %), Bisköldkörtel (3) 3/3 glandulära epitelceller (1 10 %), Cerebellum (3) 0/3 Hypofys (3) 3/3 hypofysceller (1 40 %), Cerebrum (3) 1/3 meningiala celler (100 %), Prostata (3) 3/3 stromala celler (30 80 %), Cervix (3) 3/3 Epitelceller (50 90 %), Spottkörtel (3) 3/3 glandulära epitelceller (<1 60 %), 3/3 stroma, inklusive Hud (3) 0/3 inflammatoriska celler (50 %), Tjocktarm (3) 1/3 lymfoida/inflammatoriska celler (10 %), Tunntarm (3) 3/3 stromala och inflammatoriska celler (30 50 %), 1/3 lymfoida/inflammatoriska celler Mjälte (3) 0/3 (10 %), Esofagus (3) 1/3 stromala celler (50 %), Mage (3) 1/3 interstitiala celler (20 %), Njure (3) 3/3 interstitiala celler (1 5 %), Testikel (3) 3/3 interstitiala celler (5 80 %), Lever (3) 0/3 Tymus (3) 0/3 Lunga (3) 2/3 interstitiala celler (1 10 %), Sköldkörtel (3) 0/3 2/3 inflammatoriska celler Tonsill (3) 0/3 (1 10 %), Mesotelceller (2) 0/2 Livmoder (2) 2/2 glandulära epitelceller (100 %), Muskel, hjärta (3) 3/3 myocyter (30 %), peri 2/2 myometriala stromala celler (100 %), Muskel, skelett (3) 0/3 Metodjämförelse: Tester med Monoclonal Mouse Anti-Human PR, utfördes med EnVision FLEX+ och bedömdes enligt riktlinjerna från ASCO/CAP ( 1 % som gränsvärde) (11). Tester med Anti-PR (Clone 1294) utfördes med Dako ER/PR pharmdx Kit och bedömdes enligt de Allred-riktlinjer som beskrivs i produktbladet. Metodjämförelsedata presenteras i tabell 2. Med de här riktlinjerna för bedömning var Monoclonal Mouse Anti- Human PR, konkordant med PR-antikroppskomponenten hos Dako ER/PR pharmdx Kit, med värden för total, positiv och negativ överensstämmelse på 94,5 %, 95,8 % respektive 93,1 %. I tabell 3 visas jämförelsen av båda analyserna när de bedöms enligt riktlinjerna från ASCO/CAP. Tabell 2: Överensstämmelse mellan Anti-PR, (ASCO/CAP) och Anti-PR-komponenten hos ER/PR pharmdx Kit (Allred) Anti-PR-komponenten hos ER/PR pharmdx Kit Monoclonal Mouse Anti- Human PR, positivt Negativt Totalt Positiv överensstämmelse = 95,8 % (95 % CI: 91,1 96,8) Negativ överensstämmelse = 93,1 % (95 % CI: 90,5 96,7) Total överensstämmelse = 94,5 % (95 % CI: 90,8 96,8) ( ) SE_004 s. 3/5

4 Tabell 3: Överensstämmelse mellan Anti-PR, (ASCO/CAP) och Anti-PR-komponenten hos ER/PR pharmdx Kit (ASCO/CAP) Anti-PR-komponenten hos ER/PR pharmdx Kit Monoclonal Mouse Anti- Human PR, positivt Negativt Totalt Positiv överensstämmelse = 99,1 % (95 % CI: 93,0 98,0) Negativ överensstämmelse = 93,3 % (95 % CI: 92,8 98,0) Total överensstämmelse = 96,2 % (95 % CI: 93,0 98,0) Reproducerbarhet mellan laboratorier: Reproducerbarhetstester med Anti-PR, utfördes i tre testlaboratorier under fem ej på varandra följande dagar på 21 unika bröstkancerprover, och bedömdes enligt riktlinjerna från ASCO/CAP ( 1 % som gränsvärde) för totalt 315 utvärderingar. I tabellerna 4, 5 och 6 presenteras information om undersökningens reproducerbarhet mellan laboratorier. Medeltalen för positiv, negativ och total överensstämmelse visar på mycket reproducerbara resultat för PR-undersökningar (PgR 636) när de används för att avgöra PR-status i klinisk miljö. Tabell 4: Klinik 1 jämfört med klinik 2, reproducerbarhet mellan laboratorier för Anti-PR, Klinik 2 Klinik 1 positivt Negativt Totalt Medeltal för positiv överensstämmelse = 96,5 % Medeltal för negativ överensstämmelse = 95,8 % Tabell 5: Klinik 1 jämfört med klinik 3, reproducerbarhet mellan laboratorier för Anti-PR, Klinik 3 Klinik 1 positivt Negativt Totalt Medeltal för positiv överensstämmelse = 99,2 % Medeltal för negativ överensstämmelse = 98,9 % Tabell 6: Klinik 2 jämfört med klinik 3, reproducerbarhet mellan laboratorier för Anti-PR, Klinik 3 Klinik 2 positivt Negativt Totalt Medeltal för positiv överensstämmelse = 95,7 % Medeltal för negativ överensstämmelse = 94,7 % ( ) SE_004 s. 4/5

5 Referenser 1. Henderson C.Breast cancer. In: Harrison s principles of internal medicine, 12th edition, Wilson JD, Braunwald E, Isselbacher KJ, Petersdorf RG, Martin JB, Fauci AS, Root RK (eds). McGraw-Hill, Inc. New York, Fuqua SAW. Estrogen and progesterone receptors and breast cancer. Diseases of the Breast, Harris et al, eds. Lippincott-Raven, s McGuire WL, Clark GM. The prognostic role of progesterone receptors in human breast cancer. Sem Oncol 1983;10:2. 4. Clark GM, McGuire WL, Hubay CA, Pearson OH, Marshall JS. Progesterone receptors as prognostic factor in stage II breast cancer. N Engl J Med 1983;39: Ravdin PM, Green S, Dorr TM, McGuire WL, Fabian C, Puch RP, et al. Prognostic significance of progesterone receptor levels in estrogen receptor-positive patients with metastatic breast cancer treated with tamoxifen: Results of a prospective southwest oncology group study. JCO 1992;10: Chevallier B, Heintzmann F, Mosseri V, Dauce JP, Bastit P, Graic Y, Brunelle P, Basuyay JP, Comoz M, Asselain B. Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer: Results of a univariate and multivariate analysis. Cancer 1988; 62: Page DL, Jensen RA, Simpson JF. Routinely available indicators of prognosis in breast cancer. Breast Can Res Treat 1998;51: Allred DC, Harvey JM, Berardo M, Clark GM. Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod Pathol 1998;11: Fitzgibbons PL, Page DL, Weaver D, Thor AD, Allred DC, Clark GM, et al. Prognostic factors in breast cancer. College of American Pathologists consensus statement. Arch Pathol Lab Med 2000;124: Press M, Spaulding B, Groshen S, Kaminsky D, Hagerty M, Sherman L, et al. Comparison of different antibodies for detection of progesterone receptor in breast cancer. Steroids 2002; 67: Hammond MEH, Hayes DF, Dowsett M, Allred C, Hagerty KL, Badve S, et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer. Arch Pathol Lab Med 2010;134: Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Quality assurance for immunocytochemistry; Approved guideline. CLSI document MM4-A ( )- CLSI, 940 West Valley Road, Suite Wayne, PA USA Utgåva 11/15 ( ) SE_004 s. 5/5