EnVision FLEX, High ph, (Link)

Transkript

1 EnVision FLEX, High ph, (Link) Kod K8000 femte utgåvan Detta kit innehåller tillräckligt med reagens för tester. För Autostainer Link-instrument. Valfria reagenser Kod Produktnamn Tester K8004 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) K8005 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) K8006 EnVision FLEX Antibody Diluent K8007 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) K8008 EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) K8009 EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER), (Link) K8021 EnVision FLEX+ Mouse (LINKER), (Link) Andra alternativ K8020 FLEX IHC objektglas för mikroskop 500 ( ) P04113SE_01_K8000/ p.1/11

2 Innehåll Sid. _Toc Avsedd användning... 3 Sammanfattning och förklaring... 3 Reagenser... 4 A. Medföljande material... 4 B. Nödvändigt material som inte medföljer... 4 C. Valfria reagenser... 5 Försiktighetsåtgärder... 5 Förvaring... 7 Reagensberedning... 7 Provtagning och preparation... 8 Procedur... 8 A. Förbehandlingsprocedur... 8 B. Färgningsprocedur Kvalitetskontroll Resultattolkning Begränsningar Förklaring av symboler ( ) P04113SE_01_K8000/ p.2/11

3 SVENSKA Avsedd användning För in vitro-diagnostik. Dako EnVision FLEX detektionssystem är avsett för användning i immunhistokemi tillsammans med Autostainer Link-instrument. Systemet detekterar primära mus- och kaninantikroppar och reaktionen visualiseras genom EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Vid användning med EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kod K8009) eller EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kod K8021) kan signalamplifiering av primära kaninantikroppar respektive primära musantikroppar uppnås. EnVision FLEX-reagenser är avsedda för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Sammanfattning och förklaring Dako EnVision FLEX detektionssystem har utformats för att vara ett flexibelt system och ge en optimal färgning på Autostainer Link-instrument, vid användning av protokollen som rekommenderas i detta produktblad. Före färgning skall formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt utsättas för avparaffinering och hydrering följt av värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) med användning av den målåtervinningsmetod som specificerats i produktbladet för den primära antikroppen. Se även avsnittet om proceduren för 3-i-1 provberedning. Kod K8000 innefattar EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM828). Alternativt rekommenderas EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kod K8004) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kod K8005). Vissa primära antikroppar kräver enzymatisk förbehandling av vävnad för optimal färgning i stället för HIER. Endogen peroxidas skall blockeras med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (SM801), som inkluderas i detta kit. P.g.a. en effektiv tvättningsprocedur och närvaron av stabiliserande proteiner i Dako-reagenserna, är extra blockningssteg för att reducera icke-specifik bakgrundsfärgning inte nödvändigt. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831), som medföljer satsen eller som finns tillgänglig som valfri reagens (kod K8007), rekommenderas. Primära antikroppar medföljer inte kitet. Vi rekommenderar användning av Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller Dako concentrated Primary Antibodies. EnVision FLEX Antibody Diluent (kod K8006) rekommenderas för spädningen av Dako concentrated Primary Antibodies. EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kod K8009) kan appliceras för en valfri signalamplifiering av primära kaninantikroppar. För signalamplifiering vid användning av primära musantikroppar, kan EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kod K8021 eller inkluderat i kod K8002) användas. Som en riktlinje: EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) ger 2 3-faldig signalamplifiering och EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) ger 4 5-faldig signalamplifiering. Dako EnVision FLEX/HRP detektionsreagens (SM802) i kitet består av en dextranryggrad, till vilken ett stort antal peroxidas- (HRP) molekyler och sekundära antikroppsmolekyler har kopplats. En unik kemi används för kopplingsreaktionen, vilken medger bindning av upp till 100 HRP-molekyler och upp till 20 antikroppsmolekyler per ryggrad. Substratsystemet i kitet består av två komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827), en koncentrerad diaminobensidin- (DAB) lösning och EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803) innehållande väteperoxid. Före användning måste EnVision FLEX DAB+ Chromogen spädas i EnVision FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet producerar en skarpt brun slutprodukt vid målantigenplatsen. EnVision FLEX Hematoxylin (kod K8008) rekommenderas för motfärgning. Reagenset ger en klarblå nukleär färgning. De färgade vävnadssnitten kan monteras med antingen vattenhaltigt monteringsmedium eller monteringsmedium baserat på organiskt lösningsmedel. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.3/11

4 Reagenser A. Medföljande material SM801 SM802 DM827 SM803 DM828 DM831 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent 3 x 40 ml, bruksfärdig fosfatbuffert innehållande väteperoxid, 15 mmol/l NaN 3 och tvättmedel. EnVision FLEX/HRP 3 x 40 ml, bruksfärdig dextran kopplad till peroxidasmolekyler och sekundära antikroppsmolekyler från get mot kanin- och musimmunoglobuliner. I buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och konserveringsmedel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen 3 x 3 ml 3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid i organiskt lösningsmedel. Reagensfärgen kan variera från starkt lila till färglös, utan att påverka kitets prestanda. EnVision FLEX Substrate Buffer 12 x 20 ml buffrad lösning innehållande väteperoxid och konserveringsmedel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 9 x 30 ml, 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 4 x 1 L, 20x koncentrerad Tris-buffrad saltlösning innehållande Tween 20, ph 7,6 (±0,1). B. Nödvändigt material som inte medföljer Autostainer Link-instrument Dako PT Link Dako Proteinase K, bruksfärdig (vid behov) Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller lämpligt utspädda koncentrerade primära kanineller musantikroppar från Dako Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit eller Mouse Universal Negative Control eller lämpligt negativt kontrollreagens för den primära antikroppen Dako instrumenteringsmaterial Objektglas för mikroskop, t.ex. FLEX IHC objektglas för mikroskop Allmänna laboratoriereagenser för avparaffinering av paraffininbäddade vävnadssnitt Monteringsmedium (vattenhaltigt eller baserat på organiskt lösningsmedel) och täckglas ( ) P04113SE_01_K8000/ p.4/11

5 C. Valfria reagenser K8004 DM828 K8005 DM829 K8006 DM830 K8007 DM831 K8008 SM806 K8009 SM805 K8021 SM804 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentrerad citratbuffert, ph 6,1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 ml, bruksfärdig Tris-buffert, ph 7,2, innehållande 15 mmol/l NaN 3 samt protein. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1 L, 20x koncentrerad Tris-buffrad saltlösning innehållande Tween 20, ph 7,6 (±0,1). EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 ml, bruksfärdig vattenhaltig lösning av hematoxylin. EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) 40 ml, bruksfärdig buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel. Innehåller tillräckligt med reagens för tester baserat på användningen av µl per test. EnVision FLEX+, Mouse (LINKER) 40 ml, bruksfärdig buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel. Innehåller tillräckligt med reagens för tester baserat på användningen av µl per test. Försiktighetsåtgärder 1. För yrkesmässigt bruk. 2. EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) och EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) innehåller material av djurursprung och man kan inte utesluta att spår av humant material kan vara närvarande beroende på tillverkningsprocedurer. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 3. Utsätt inte EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen, EnVision FLEX Substrate Working Solution eller EnVision FLEX Hematoxylin för starkt ljus under proceduren. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.5/11

6 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) och EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) innehåller 5-<10% Nonoxinol: H319 H411 P280 P273 P264 Varning P305 + P351 + P338 P337 + P313 P501 Orsakar allvarlig ögonirritation. Giftigt för vattenlevande organismer med långtidseffekter. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Undvik utsläpp till miljön. Tvätta händerna grundligt efter användning. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 5. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) innehåller 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3- diol hydrochloride: H319 H315 P280 P264 Varning P302 + P352 + P P363 P332 + P313 P305 + P351 + P338 P337 + P313 Orsakar allvarlig ögonirritation. Irriterar huden. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Tvätta händerna grundligt efter användning. VID HUDKONTAKT: Tvätta med mycket tvål och vatten. Ta av nedstänkta kläder. Nedstänkta kläder ska tvättas innan de används igen. Vid hudirritation: Sök läkarhjälp. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. 6. För EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, kan datablad för materialsäkerhet beställas för yrkesanvändare. 7. EnVision FLEX DAB+ Chromogen innehåller 1 5 % 3,3 -diaminobensidintetrahydroklorid, och är märkt med: H350 H341 P201 P202 Fara Kan orsaka cancer. Misstänks kunna orsaka genetiska defekter. Inhämta särskilda instruktioner före användning. Använd inte produkten innan du har läst och förstått säkerhetsanvisningarna. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.6/11

7 P280 P308 + P313 P405 P501 Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Vid exponering eller misstanke om exponering: Sök läkarvård. Förvaras inlåst. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 8. EnVision FLEX Antibody Diluent (kod K8006) innehåller natriumazid (NaN 3 ), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet. 9. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden. 10. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter. Förvaring Förvara EnVision FLEX och EnVision FLEX+ reagenser vid 2 8 C. Förvara EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP och EnVision FLEX Substrate Buffer i mörker vid 2 8 C. Förvara EnVision FLEX Hematoxylin (kod K8008) i mörker vid rumstemperatur. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på flaskorna. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Den beredda Substrate Working Solution skall förvaras i mörker vid 2 8 C och användas ino m fem dagar. Kontakta Dako Tekniska Support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara problem med produkten. Reagensberedning A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM828, kod K8004) Späd en tillräcklig mängd av EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 1:50 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Om Dako PT Link används för förbehandling, kan spädning utföras genom att tömma innehållet i flaskan med Target Retrieval Solution (50x) i Dako PT Link-tanken och tillsätta destillerat eller avjoniserat vatten till den markerade linjen (Fyllningslinjen). Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Kassera lösningen om den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. A.2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM829, kod K8005) Späd en tillräcklig mängd av EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 1:50 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Om Dako PT Link används för förbehandling, kan spädning utföras genom att tömma innehållet i flaskan med Target Retrieval Solution (50x) i Dako PT Link-tanken och tillsätta destillerat eller avjoniserat vatten till den markerade linjen (Fyllningslinjen). Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Kassera lösningen om den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. A.3 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, kod K8007) Späd en tillräcklig mängd av EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1:20 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Späd genom att tillsätta den koncentrerade Wash Buffer till en föruppmätt mängd destillerat eller avjoniserat vatten för att minimera skumbildning. Rör försiktigt tills den spädda lösningen verkar homogen. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Kassera lösningen o m den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.7/11

8 A.4 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution innehållande DAB, bereds genom att noggrant blanda 1 droppe EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827) per 1 ml EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803). Använd EnVision FLEX Substrate Working Solution inom 5 dagar (förvaras i mörker vid 2 8 C). Provtagning och preparation Proverna skall vara formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Fixeringstiden beror på fixativet och vävnadens typ/tjocklek. Exempelvis bör vävnadsblock med en tjocklek på 3 4 mm fixeras i neutralbuffrat formalin i timmar. Den optimala tjockleken för paraffininbäddade snitt är ca 4 µm. Proverna skall monteras på objektglas för mikroskop, t.ex. FLEX IHC objektglas för mikroskop (kod K8020). Snitten skall monteras på objektglasen så platta och släta som möjligt. Alltför många veck kommer att påverka färgningsresultaten. OBS! Objektglasen för mikroskop måste ha en bredd som är lämplig för Autostainer Link-instrumentet. Se användarhandboken för det individuella Dako-instrumentet för en definition av användbara objektglas. Paraffinsnitt skall monteras från ett förvärmt vattenbad innehållande destillerat eller avjoniserat vatten. Vattenbadet får inte innehålla tillsatser (såsom gelatin, poly-l-lysin etc.). Snitten skall torkas genom uppvärmning, vanligen vid en temperatur på högst 60 C, i minst 60 minuter. För att tillförsäkra lämplig vidhäftning av snitten vid objektglasen är det viktigt att tappa ut vattnet under snitten före ugnstorkningsprocessen. Procedur Autostainer Link-instrument använder tekniker som baserats på olika principer för att erhålla ett optimalt färgningsresultat. Innan protokollen körs på ditt Autostainer Link-instrument, läs noggrant användarhandboken för det angivna Dako-instrumentet. För att fastställa reproducerbar epitopåtervinning rekommenderas att objektglashållaren alltid laddas full med objektglas. Detta säkerställer en identisk uppvärmning av snitt i varje körning. A. Förbehandlingsprocedur Rekommenderad 3-i-1 provberedningsprocedur med PT Link: Avparaffinering, rehydrering och värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) kan utföras på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med användning av 3-i-1 provberedningsproceduren: 1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) koncentrat 1:50 i destillerat eller avjoniserat vatten. 2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten. 3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 C. 4. Sänk ned de monterade, formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) i PT Link-tankar och inkubera i 20 minuter vid 97 C. 5. Låt snitten svalna i PT Link till 65 C. 6. Ta bort varje Autostainer objektglasställ med objektglas från PT Link-tanken och sänk med en gång ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 7. Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer (20x), i 1 5 minuter. 8. Placera objektglasen på ett Autostainer Link-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. 9. Efter färgning rekommenderas att man utför dehydrering, sköljning och permanent montering. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.8/11

9 OBS! När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. HIER-procedur med PT Link: Efter avparaffinering och hydrering till buffert (vatten), måste vävnadssnitten utsättas för värmeinducerad epitopåtervinning (HIER): 1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) koncentrat 1:50 i destillerat eller avjoniserat vatten. 2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten. 3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 C. 4. Avparaffinera och rehydrera vävnadssnitten som monterats på objektglasen manuellt. 5. Sänk ned de rumstempererade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) och inkubera i 20 minuter vid 97 C. 6. Låt snitten svalna i PT Link till 65 C. 7. Ta bort varje objektglasställ från PT Link-tanken och sänk med en gång ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 8. Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer (20x), i 1 5 minuter. 9. Placera objektglasen på ett Autostainer Link-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. 10. Efter färgning skall objektglasen monteras med ett vattenbaserat eller permanent monteringsmedium. OBS! När den används i PT Link för HIER-proceduren kan den spädda Target Retrieval Solution och utspädda Wash Buffer användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. HIER-procedur med Coplin-kärl: Efter avparaffinering och hydrering till buffert (vatten), måste vävnadssnitten utsättas för värmeinducerad epitopåtervinning (HIER): 1. Placera färgningskärlen med utspädd EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) i vattenbad. 2. Värm upp vattenbadet och kärlen fyllda med EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösning) till C. Täck kärlen med lock för att stabilisera temperaturen och undvika förångning. 3. Sänk ned de rumstempererade snitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösning) i färgningskärlen. 4. Återställ temperaturen på vattenbadet och EnVision FLEX Target Retrieval Solution till C. Inkubera i 20 (±1) minuter vid C. 5. Avlägsna hela kärlet med objektglas från vattenbadet. Låt objektglasen svalna i EnVision FLEX Target Retrieval Solution i 20 (±1) minuter vid rumstemperatur. 6. Dekantera EnVision FLEX Target Retrieval Solution och skölj snitten med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i 1 5 minuter. 7. Placera stället med de sköljda snitten på ett Autostainer Link-instrument. Börja omedelbart den förprogrammerade färgningskörningen. OBS! När de används i Coplin-kärl för HIER-procedur kan den spädda Target Retrieval Solution och den spädda Wash Buffer endast användas en (1) gång (engångsbruk). Vissa epitoper tolererar inte HIER och vissa kräver enzymatisk förbehandling. Se produktbladet för den individuella Dako primära antikroppen. Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020). ( ) P04113SE_01_K8000/ p.9/11

10 B. Färgningsprocedur Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies kan användas med Dako EnVision FLEX-detektionssystem, applicerat på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. En spädningsriktlinje för Dako koncentrerade primära antikroppar finns i produktbladet för den koncentrerade primära antikroppen. De koncentrerade primära antikropparna bör spädas i EnVision FLEX Antibody Diluent (DM830, kod K8006). Färgningsstegen och de rekommenderade inkuberingstiderna är förprogrammerade i Autostainer Linkprogrammet som följande visualiseringssystemprotokoll: FLEX och FLEX 2x5 DAB (FLEX-protokoll) FLEX+ Mouse och FLEX+ Mouse 2x5 DAB (FLEX+ Mouse (LINKER) protokoll) FLEX+ Rabbit och FLEX+ Rabbit 2x5 DAB (FLEX+ Rabbit (LINKER) protokoll) Den rekommenderade volymen för reagensapplikation är 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per objektglas. Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Autostainer Link-instrumentet som används. Optimala inkuberingstider för primär antikropp och EnVision FLEX/HRP beror på den applicerade primära antikroppen. Se produktbladet för den individuella Dako primära antikroppen. Användaren måste verifiera det applicerade protokollet. När färgningsproceduren är fullbordad måste proverna monteras. Dehydrering, sköljning och permanent montering rekommenderas när objektglasen har behandlats med 3-i-1-proceduren för provberedning. Objektglas behandlade med HIER-proceduren kan monteras med vattenbaserat eller permanent monteringsmedium. För vattenhaltig montering rekommenderas monteringsmedia såsom Dako Glycergel Mounting Medium, kod C0563 eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kod S3025. Kvalitetskontroll Varje färgningskörning skall innefatta ett känt positivt kontrollprov för att säkerställa korrekt prestanda för alla använda reagenser. Om de positiva kontrollproverna inte uppvisar lämplig positiv färgning, skall märkningen av testproven anses ogiltiga. Ett negativt kontrollreagens skall användas med varje prov för att identifiera eventuell icke-specifik färgning. Om icke-specifik färgning inte tydligt kan differentieras från den specifika färgningen, skall märkningen av testproven anses ogiltig. Resultattolkning Substrate Working Solution innehållande diaminobensidin, ger en brun färg vid målantigenplatsen, som känns igen av den primära antikroppen. Den bruna färgen skall vara närvarande på det positiva kontrollprovet vid den förväntade lokaliseringen av målantigenen. Om icke-specifik färgning är närvarande, kommer detta att observeras som en diffus, brunfärgning på objektglasen som behandlats med det negativa kontrollreagenset. Kärnor kommer att färgas blåa av hematoxylin-motfärgen. Begränsningar 1. Endast för automatisk användning med Autostainer Link-instrument. Vid utförande av manuella färgningar måste den optimala proceduren fastställas och verifieras av användaren, om detta inte specificerats i produktbladet för den specifika Dako primära antikroppen 2. Endast för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Vid användning av frysta snitt eller cellutstryk, måste den optimala proceduren fastställas och verifieras av användaren, om detta inte specificerats i produktbladet för den specifika Dako primära antikroppen. Ändringar av proceduren kan ha påverkat antalet tester som medföljer satsen. ( ) P04113SE_01_K8000/ p.10/11

11 Förklaring av symboler Ka talog nummer Temp eraturbegränsning Ba tchkod Faropiktog ram enligt GHS (se avsnitte t för försiktighetsåtgärde r) In vitro diagnostisk medicinsk app arat Förva ras i mörker An vänd före Faropiktog ram enligt GHS (se avsnitte t för försiktighetsåtgärde r) Läs bruksanvisn ingen Inn ehåller tillräckligt för <n> tester Tillverkare Dako EnVision Systems täcks av amerikanskt patent 5,543,332 och europeiskt patent 594,772. Tillverkat av: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax ( ) P04113SE_01_K8000/ p.11/11