EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link)

Transkript

1 EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) Kod SK110 Utgåva 06/15 Denna sats innehåller tillräckligt med reagens för tester. För Autostainer Link-instrument. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 1/11

2 Innehåll Sida Avsedd användning... 3 Sammanfattning och förklaring... 3 Reagenser... 3 Försiktighetsåtgärder... 5 Förvaring... 7 Reagensberedning... 7 Provtagning och preparation... 8 Procedur... 8 Kvalitetskontroll Resultattolkning Referenser ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 2/11

3 Avsedd användning För in vitro-diagnostik. Dako EnVision DuoFLEX Doublestain System är avsett för användning i immunhistokemi tillsammans med Dako Autostainer Link-instrument. Systemet är utformat för samtidig detektering av flera olika antigener med ett prov. Systemet detekterar primära mus- och kaninantikroppar och reaktionen visualiseras genom EnVision DuoFLEX DAB+ och EnVision DuoFLEX Permanent Red-kromogener. EnVision DuoFLEX-reagenser är avsedda för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Sammanfattning och förklaring Dako EnVision DuoFLEX Doublestain System är utformat för optimal färgning på Dako Autostainer Link-instrument med användning av de protokoll som rekommenderas i det här produktbladet. Systemet är användbart för samtidig detektion av flera antigener i låga eller höga koncentrationer i ett prov. Visualiseringen är baserad på peroxidas (HRP) med DAB+ som kromogen och alkaliskt fosfatas (AP) med permanent röd som kromogen. Detta system är biotinfritt, vilket sålunda signifikant reducerar icke-specifik färgning som uppkommer från endogen avidin-biotinaktivitet. Proceduren är en samtidig dubbel färgning där två antigener visualiseras med hjälp av HRP/DAB+ respektive AP/Permanent röd. EnVision DuoFLEX Dual Endogenous Enzyme Block hämmar endogen alkalisk fosfatas, peroxidas och pseudoperoxidasaktivitet som finns i vissa vävnader. Efter endogen enzymblockering utgörs det första momentet av inkubation av provet med en optimal spädd primär blandning av mus- och kaninantikroppar, följt av inkubation med EnVision DuoFLEX/HRP-reagenset och sedan EnVision DuoFLEX/AP. Reaktionen visualiseras av EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen för musantikropp och EnVision DuoFLEX Permanent Red för kaninantikropp. Alla specificerade reagenser, förutom de primära antikropparna, ingår i satsen. Vi rekommenderar användning av Dako DuoFLEX Ready-to-Use Cocktailed Antibodies eller Dako koncentrerade primära antikroppar. EnVision FLEX Antibody Diluent (K8006) rekommenderas för spädningen av Dako koncentrerade antikroppar. OBS! Reagenserna i denna sats har utfomats att fungera i ett system och ska användas enligt beskrivning i av snittet Procedur. I synnerhet ska alla reagenser före applicering av kromogenlösningar användas enligt instruktionerna, även om endast en kromogen ska appliceras. Underlåtenhet att följa det specificerade protokollet kan resultera i olämpliga färgningsresultat, inklusive möjligheten att ingen färgning kan observeras. Reagenser A: Material som medföljer Kod SK110 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX Dual Endogenous Enzyme Block Bruksfärdigt Endogen enzymblockeringslösning ph 2, innehållande 1-<5 % väteperoxid, tvättmedel, enzymhämmare och konserveringsmedel. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 3/11

4 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX/HRP Bruksfärdigt Pepparrotsperoxidas och affinitetsisolerade immunoglobuliner i form av dextranpolymer konjuga. Levereras i Tris/HCl-buffert innehållande stabiliserande protein och konserveringsmedel. 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX/AP Bruksfärdigt Alkalisk fosfatas och affinitetsisolerade immunoglobuliner i form av dextranpolymer konjugat. Levereras i buffert innehållande stabiliserande protein och konserveringsmedel. 2 x 36 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Substrate Buffer Substratbuffertlösning, ph 7,5, innehållande < 0,1 % väteperoxid, stabilisatorer, förstärkare och antimikrobiellt medel. 1 x 2,16 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen 3,3 -diaminobensidintetrahydroklorid-kromogenlösning. 2 x 36 ml EnVision DuoFLEX Permanent Red Substrate Buffer Substratbuffrad lösning. 1 x 0,72 ml EnVision DuoFLEX Permanent Red Chromogen Permanent röd kromogenlösning. 3 x 30 ml EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 1 x 1 L EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 20x koncentrerad Tris-buffrad koksaltlösning innehållande Tween 20, ph 7,6 (±0,1). ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 4/11

5 3 x 12 ml Påfyllningsbar reagensflaska, 12 ml kapacitet Flaskorna ska användas för blandning och förvaring av DAB+ Working Solution och Permanent Red Working Solution (se även avsnittet Reagensberedning). B. Nödvändigt material som inte medföljer Autostainer Link-instrument Dako PT Link Dako Proteinase K, Ready-to-Use (vid behov) Dako DuoFLEX Ready-to-Use Cocktailed Antibodies eller lämpligt utspädda koncentrerade primära kanin- eller musantikroppar från Dako Dako instrumenttillbehör Objektglas för mikroskop Allmänna laboratoriereagenser för avparaffinering av paraffininbäddade vävnadssnitt Monteringsmedium (vattenhaltigt eller baserat på organiskt lösningsmedel) och täckglas C. Valfria reagenser K8004 K8005 K8006 K8007 K8008 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentrerad Tris/EDTA-buffert, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentrerad citratbuffert, ph 6,1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 ml, bruksfärdigt Tris-buffert, ph 7,2, innehållande 15 mmol/l NaN3 samt protein EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1 x 1 L, 20x koncentrerad Tris-buffrad koksaltlösning innehållande Tween 20, ph 7,6 (±0,1) EnVision FLEX Hematoxylin Försiktighetsåtgärder 1. För yrkesmässigt bruk. 2. EnVision DuoFLEX/HRP och DuoFLEX/AP innehåller material av djurursprung. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 3. Utsätt inte EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen eller EnVision DuoFLEX Permanent Red Chromogen eller den förberedda DAB+ Working Solution eller Permanent Red Working Solution för starkt ljus. 4. EnVision DuoFLEX endogent enzymblock innehåller < 0,1 % 3(2H)-Isothiazolone, 5-kloro- 2-metyl-, blandat med 2-metyl-3(2H)- isothiazolone och är märkt: Fara H314 Orsakar allvarliga frätskador på hud och ögon. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 5/11

6 H317 P280 P261 P264 P272 P304 + P340 + P310 P301 + P310 + P330 + P331 P303 + P361 + P353 + P363 + P310 P302 + P352 P333 + P313 P305 + P351 + P338 + P310 P405 P501 Kan orsaka allergisk hudreaktion. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Undvik att inandas ångor. Tvätta händerna grundligt efter användning. Nedstänkta arbetskläder får inte avlägsnas från arbetsplatsen. VID INANDNING: Flytta personen till frisk luft och se till att han eller hon vilar i en ställning som underlättar andningen. Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN eller en läkare. VID FÖRTÄRING: Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN eller en läkare. Skölj munnen. Framkalla INTE kräkning. VID HUDKONTAKT (även håret): Ta omedelbart av alla nedstänkta kläder. Skölj huden med vatten eller duscha. Nedstänkta kläder ska tvättas innan de används igen. Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN eller en läkare. VID HUDKONTAKT: Tvätta med mycket vatten/ Vid hudirritation eller utslag: Sök läkarhjälp. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN eller en läkare. Förvaras inlåst. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 5. EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen, innehåller 1 5 % bifenyl-3,3',4,4'- tetrayltetraammonium tetraklorid, och är märkt: H350 H341 P201 P202 P280 Fara P308 + P313 P405 P501 Kan orsaka cancer. Misstänks kunna orsaka genetiska defekter. Inhämta särskilda instruktioner före användning. Använd inte produkten innan du har läst och förstått säkerhetsanvisningarna. Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder. Vid exponering eller misstanke om exponering: Sök läkarvård. Förvaras inlåst. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 6. Varning. Denna produkt innehåller en substans som ännu inte har testats fullständigt. Ett säkerhetsdatablad för professionella användare finns tillgängligt på begäran. 7. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) innehåller 5-10 % trometamol, 1-5 % nonylfenol, etoxylerad, och 1-5 % ättiksyra, (etylendinitrilo)tetra-, dinatriumsalt, dihydrat. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) är märkt: Varning H319 Orsakar allvarlig ögonirritation. H411 Giftigt för vattenlevande organismer med långtidseffekter. P280 Använd ögon- eller ansiktsskydd. P273 Undvik utsläpp till miljön. P264 Tvätta händerna grundligt efter användning. P305 + P351+ P338 VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 6/11

7 P337 + P313 P501 Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter. 8. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) innehåller % 2-amino-2-(hydroximetyl)propan- 1,3-diol-hvdroklorid, och är märkt: Varning H319 Orsakar allvarlig ögonirritation. H315 Irriterar huden. P280 Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. P264 Tvätta händerna grundligt efter användning. P302 + P352 + VID HUDKONTAKT: Tvätta med mycket tvål och vatten. Ta av nedstänkta P P363 kläder. Nedstänkta kläder ska tvättas innan de används igen. P332 + P313 Vid hudirritation: Sök läkarhjälp. P305 + P351 + VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. P338 Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja. P337 + P313 Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp. 9. Det valfria reagenset EnVision FLEX Antibody Diluent (kod K8006) innehåller natriumazid (NaN 3 ), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering, så att inte metallazider ansamlas i avloppet. 10. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud. 11. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga lagar. Förvaring Förvara EnVision DuoFLEX- och EnVision FLEX-reagenser vid 2 8 C. Förvara EnVision FLEX Hematoxylin (kod K8008) i rumstemperatur. Använd inte efter det utgångsdatum som anges på förpackningen. Byt inte ut satsens komponenter med komponenter från andra partier. Användaren måste verifiera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Kontakta vår Tekniska Support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara problem med produkten. Reagensberedning 1. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph Späd en tillräcklig mängd av EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph med destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Kassera lösningen o m den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. 2. EnVision FLEX Wash Buffer Späd en tillräcklig mängd av EnVision FLEX Wash Buffer med destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2 8 C i en månad. Kassera lösningen om den är grumlig. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 7/11

8 3. DAB+ Working Solution DAB+ Working Solution förbereds genom omsorgsfull blandning av 1 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Substrate Buffer med 1 droppe (25-30 µl) DAB+ Chromogen. Bered endast den volym som krävs för det antal objektglas som ska färgas. Preparerad DAB+ Working Solution är stabil i cirka 5 dagar vid förvaring i 2 8 C. Lösningen ska blandas noga före användning. Eventuell fällning som utvecklas i lösningen inom 5 dagar påverkar inte färgningskvaliteten. DAB+ Working Solution ska beredas i en Autostainer Link-reagensflaska när den används på Dako Autostainer Link-instrumentet. 4. Permanent Red Working Solution Permanent Red Working Solution bereds genom omsorgsfull blandning av 100 delar Permanent Red Substrate Buffer med 1 del Permanent Red Chromogen, dvs. blanda 1 ml Permanent Red Substrate Buffer med 10 µl Permanent Red Chromogen. Bered endast den volym som krävs för det antal objektglas som ska färgas. Använd lösningen inom 30 minuter. Permanent Red Working Solution ska beredas i en Autostainer Link-reagensflaska när den används på Dako Autostainer Link-instrumentet. 5. Riktlinjer för optimal spädning av primära antikroppar EnVision DuoFLEX Doublestain System är kompatibelt med Dako DuoFLEX Ready-to-Use Cocktailed Antibodies. Optimal spädning ska bestämmas av användaren för andra blandade antikroppar från koncentrat. Provtagning och preparation Proverna kan vara formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. En mängd olika fixativ kan användas för konservering av proverna. Prover ska inte fixeras i neutralbuffrat formalin i mer än 24 timmar och företrädesvis under en kortare tid. Den optimala tjockleken för paraffininbäddade snitt är ca 4 µm. Proven skall monteras på objektglas för mikroskop. Snitten skall monteras på objektglasen så platta och släta som möjligt. Alltför många veck påverkar färgningsresultaten. Obs! Objektglasen för mikroskop måste ha en bredd som är lämplig för Dako Autostainer Linkinstrumentet. Se användarhandboken för det individuella Dako-instrumentet för en definition av objektglas som kan användas. Paraffinsnitt skall monteras från ett förvärmt vattenbad innehållande destillerat eller avjoniserat vatten. Vattenbadet får inte innehålla tillsatser (såsom gelatin, poly-l-lysin o.dyl.). Snitten ska torkas genom uppvärmning, vanligen vid en temperatur på högst 60 C, i minst 60 minuter (t.ex. över natten). Tillförsäkra lämplig vidhäftning av snitten vid objektglasen genom att tappa ut vattnet under snitten före ugnstorkningsprocessen. Procedur Dako Autostainer-instrument använder tekniker som baserats på olika principer för att erhålla ett optimalt färgningsresultat. Innan protokollen körs på Dako Autostainer Link-instrumentet ska du läsa användarhandboken för det aktuella Dako-instrumentet. Vi rekommenderar att objektglashållaren alltid laddas helt med objektglas för att säkerställa reproducerbar epitopåtervinning. Detta säkerställer en identisk uppvärmning av snitt i varje körning. Alla reagenser i satsen levereras i Autostainer Link-reagensflaskor. DAB+ Working Solution och Permanent Red Working Solution ska båda beredas i Autostainer Link-reagensflaskor när de används på Dako Autostainer Link-instrumentet. Alla reagenser bör anta jämvikt vid rumstemperatur (20 25 C) före immunfärgning. Likaså ska alla inkuberingar utföras vid rumstemperatur. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 8/11

9 Följande förbehandlingsmoment bör utföras före användning av EnVision DuoFLEX Doublestain System på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Proverna måste avparaffineras och hydratiseras. Avsnitt A.5 och produktbladet för de individuella blandningarna av Dakos primära antikroppar innehåller specifik information om provberedning. Rekommenderad 3-i-1 provberedningsprocedur med PT Link: 1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solutionkoncentrat i destillerat eller avjoniserat vatten. 2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten. 3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 C. 4. Sänk ned de monterade, formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) och inkubera i minuter vid 97 C. Den optimala inkubationstiden ska avgöra s av användaren. 5. Låt snitten svalna i PT Link till 65 C. 6. Ta bort objektglasställen från PT Link-tanken och sänk omedelbart ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer, kod K Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer, kod K8007, i 1 5 minuter. 8. Placera objektglasen på ett Dako Autostainer Link-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. Torkade prover kan uppvisa ökad icke-specifik färgning. När den används i PT Link för HIER-proceduren kan den spädda Target Retrieval Solution och utspädda Wash Buffer användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur. HIER-procedur med PT Link: Efter avparaffinering och hydrering till buffert (vatten) måste de flesta vävnadssnitt utsättas för värmeinducerad epitopåtervinning (HIER). 1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solutionkoncentrat i destillerat eller avjoniserat vatten. 2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten. 3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 C. 4. Sänk ned de rumstempererade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) och inkubera i minuter vid 97 C. Den optimala inkubationstiden ska avgöras av användaren. 5. Låt snitten svalna i PT Link till 65 C. 6. Ta bort objektglasställen från PT Link-tanken och sänk omedelbart ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad Dako EnVision FLEX Wash Buffer, kod K Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer, kod K8007, i 1 5 minuter. 8. Placera objektglasen på ett Dako Autostainer Link-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. Torkade prover kan uppvisa ökad icke-specifik färgning. 9. Nedsänk objektglasen i ett bad med hematoxylin för hematoxylinfärgning offline. Inkubationstiden är beroende av styrkan hos det använda hematoxylinet. Följ hematoxylinkontrastfärgning med en noggrann sköljning i destillerat eller avjoniserat vatten. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 9/11

10 För Coplin-kärl: 1. Placera färgningskärlen med EnVision FLEX Target Retrieval Solution i vattenbad. 2. Värm upp vattenbadet och kärlen fyllda med EnVision FLEX Target Retrieval Solution till C. Täck kärlen med lock för att stabilisera temperaturen och undvika förångning. 3. Sänk ned de rumstempererade snitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution i färgningskärlen. 4. Återställ temperaturen på vattenbadet och EnVision FLEX Target Retrieval Solution till C. 5. Avlägsna hela kärlet med objektglas från vattenbadet. Låt objektglasen svalna i EnVision FLEX Target Retrieval Solution i 20 (± 1) minuter vid rumstemperatur. 6. Dekantera EnVision FLEX Target Retrieval Solution och skölj snitten med EnVision FLEX Wash Buffer. 7. Placera stället med de sköljda snitten i ett Dako Autostainer Link-instrument. Börja omedelbart den förprogrammerade färgningskörningen. Obs! När de används i Coplin-kärl för HIER-procedur kan den spädda EnVision FLEX Target Retrieval Solution och den spädda EnVision FLEX Wash Buffer endast användas en (1) gång (engångsbruk). Vissa epitoper tolererar inte HIER och vissa kräver enzymatisk förbehandling. Se produktbladet för den individuella blandningen av Dako primära antikroppar. Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av Dako FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020). Inkubering med en blandning av primära antikroppar: Dako DuoFLEX Ready-to-Use Primary Antibodies kan användas med Dako EnVision DuoFLEX Doublestain System applicerat på formalinfixerade, paraffininbäddade snitt. Färgningsstegen och inkubationstiderna är förprogrammerade i programvaran för Autostainer Link som protokollet DuoFLEX. Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Autostainer Link-instrumentet som används. Optimala inkuberingstider för blandningen av de primära antikropparna EnVision DuoFLEX/HRP och EnVision DuoFLEX/AP beror på den använda blandningen av primära antikroppar. Se produktbladet för den individuella blandningen av Dako primära antikroppar. Användaren måste verifiera det applicerade protokollet. Objektglasen ska monteras efter färgningen. För vattenhaltig montering rekommenderas monteringsmedia som Dako Glycergel Mounting Medium, kod C0563, eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kod S3025.För icke-vattenhaltig permanent montering rekommenderas Dako Permanent Mounting Media, kod S3026, sedan objektglasen har lufttorkat helt i rumstemperatur eller lufttorkat i 1 timme vid 60 C och sedan inkuberats i xylen eller en xylenersättning i 5 minuter. Observera att i en del fall kan små avbrutna artefakter observeras på objektglasen som utsatts för lufttorkning före applicering av täckglas. Detta kan åtgärdas genom att behandla objektglasen i enlighet med en av följande procedurer: Alternativ 1: Direkt överföring av vävnadsobjektglas från Autostainer-instrumentet till alkohol, som kan vara antingen a) 99 % alkohol med inkubation i högst 2 minuter, eller b) Tre på varandra följande 100 % alkoholbad, 10 doppningar i varje. ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 10/11

11 Objektglasen ska sedan doppas 10 gånger i vardera av två på varandra följande xylenbad följt av permanent montering Alternativ 2: Direkt överföring av vävnadsobjektglasen från Autostainer-instrumentet till en graderad alkoholserie, men endast i 30 sekunder i varje steg och utan xylenexponering, följt av permanent montering. Längre alkohol- och/eller xylenexponeringar kan leda till kromogenextraktion och därför sämre färgning. Observera att dessa procedurer inte har testats på varje primär antikropp och därför endast bör tolkas som riktlinjer. Följaktligen måste verkställandet av det justerade dehydreringsprotokollet följt av permanent montering verifieras för att se till att det fortfarande är giltigt med avseende på den primära antikroppen i fråga. Varje primär antikropp som används ska evalueras med det justerade dehydreringsprotokollet för att bekräfta att färgningsmönstret är identiskt med det färgningsmönster som beskrivs i Prestandaegenskaper för den primära antikroppen. Kvalitetskontroll Alla färgningskörningar ska innefatta ett känt positivt kontrollprov för att säkerställa korrekt prestanda för alla använda reagenser. Om de positiva kontrollproverna inte uppvisar lämplig positiv färgning, ska märkningen av testproverna anses ogiltig. Resultattolkning Den antigen som påvisas av musantikroppar färgas brun med DAB+-kromogen. Den antigen som påvisas av kaninantikroppar färgas röd med permanent röd kromogen. Båda färgerna medger visualisering mot en hematoxylin-kontrastfärgning. Om icke-specifik färgning förekommer påvisas den som en diffus brun eller röd färg. Kärnor färgas blå av hematoxylin-kontrastfärgen. Vid mindre körningar i Autostainer Link (nio objektglas eller färre) kan det förekomma bakgrundsfärgning som förknippas med vissa vävnader. Du kan åtgärda bakgrundsfärgningen genom att öka antalet sköljningar i färgningsprotokollet. Om du behöver assistans kan du kontakta Dakos tekniska support. Referenser 1. Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and practice of histotechnology. St. Louis: CV Mosby Company; 1980 Tillverkat av: Dako North America, Inc Via Real Carpinteria, CAS 93013, USA ( ) P04070SE_01/SK110/ s. 11/11