Glattmuskel laboration

Relevanta dokument
Laborationsrapport Glattmuskulatur. BASGRUPP 8 Caroline Johansson Jenny Sjösten Matilda Lithander Stina Lindberg

Laborationsrapport glattmuskel basgrupp 7

Teoretisk bakgrund. Kurskod: 8LAG20. Laborationen utförd 30/ Inlämnad 10/ Reviderad version inlämnad 17/2 2014

Receptorfarmakologi trombocyter

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Receptorfarmakologi Purinerga receptorer och Trombocyter

Farmakodynamik och Farmakokinetik

Farmakologi. Farmakologin syftar till att besvara. Farmakodynamik

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Farmakokinetik. Farmakokinetik och farmakodynamik Ernst Brodin, Institutionen för Fysiologi och Farmakologi, Karolinska Institutet

Introduktion. Introduktion Farmakodynamiska aspekter Farmakokinetiska aspekter Interaktioner

qwertyuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqw ertyuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqwert yuiopåasdfghjklöäzxcvbnmqwertyui opåasdfghjklöäzxcvbnmqwertyuiop

för erhållande av Apotekarlegitimation 21 augusti 2014

Medicin B, Sjukdomslära med farmakologi, 15hp Tentamen del I, provkod (För studenter registrerade V15) Kurskod: MC1402.

Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära 15 hp, del 1. Kurskod: MC2014. Kursansvarig: Mikael Ivarsson.

Farmakokinetik och Farmakodynamik: traditionella, nya och framtida läkemedel. Magnus Grenegård Professor i Fysiologi Docent i Farmakologi

Den virtuella katten. Karlstads universitet Receptarieprogrammet Farmakologi 15 hp. Namn på student

V - distributionsvolym. Clearance och distributionsvolym; agonister och antagonister = grundläggande farmakologi. V exempel forts.

2. Skriv tydligt och läsvänligt. Oläslig handstil medför att poängbedömning ej sker.

Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära, del % av totala poängen

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Laborationsrapport Receptorfarmakologi glattmuskulatur

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Enzymer Farmaceutisk biokemi. Enzymet pepsin klyver proteiner i magsäcken till mindre peptider

Namn:

Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin

Signaltransduktion och Receptorfarmakologi. Signaltransduktion och Receptorfarmakologi. RTE-Modellen

Medicin A, Medicinsk temakurs 1, 30 högskolepoäng, Tema Respiration-Cirkulation Skriftlig tentamen 24 oktober 2011

2. Skriv tydligt och läsvänligt. Oläslig handstil medför att poängbedömning inte sker.

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Denna produktresumé används även som bipacksedel

Naloxon Nässpray mot opioidöverdos. Utbildning för utbildare i Region Skånes Naloxonprojekt

Bestämning av hastighetskonstant för reaktionen mellan väteperoxid och jodidjon

för erhållande av Apotekarlegitimation 11 december 2013

SVARSMALL Tentamen DSM1.3 Läkemedel Kl

Ordinationslistor för läkemedel och infusioner avd 34

Naloxonutbildning Nässpray mot opioidöverdos

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Institutionen för laboratoriemedicin Bilaga 2 Biomedicinska analytikerprogrammet Analytisk Kemi och Biokemisk metodik Ht 2010, Termin 3

för erhållande av Apotekarlegitimation 25 januari 2014

Ordinarie skriftlig examination Tema RC T1 HT 2013

Examination. Specifik farmakologi (2 hp, provkod 0200)

för erhållande av Receptarielegitimation 25 januari 2014

Lycka till! Kursens namn : Medicin A, Introduktion till medicin. Kurskod: MC1010. Kursansvarig: Eva Funk. Datum: Skrivtid 4 timmar

Bestämning av fluoridhalt i tandkräm

Biologiska membran Kap 10 fig10-1, 15, 18, 19 & med tillhörande beskrivningar. Övrigt är repetition.

5. Transkriptionell reglering OBS! Långsam omställning!

Tentamen. Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära, del 1. Kurskod: MC2014. Prov: Allmän farmakologi (0100) Kursansvarig: Olle Henriksson

Isolering och rening av proteinet tiopurinmetyltransferas

Allmän Kemi 2 (NKEA04 m.fl.)

Energi, katalys och biosyntes (Alberts kap. 3)

Vilken av följande partiklar är det starkaste reduktionsmedlet? b) Båda syralösningarna har samma ph vid ekvivalenspunkten.

Repetition F9. Lunds universitet / Naturvetenskapliga fakulteten / Kemiska institutionen / KEMA00

Allmänmedicin innefattande allmän och speciell farmakologi 15 högskolepoäng

Den virtuella katten -ett simulerat experiment på en nedsövd katt

SJSG(E,F)11 Människan: Biologi och hälsa Allmän farmakologi (Farmakologi) 3.0 hp

Jämviktsuppgifter. 2. Kolmonoxid och vattenånga bildar koldioxid och väte enligt följande reaktionsformel:

4. Kemisk jämvikt när motsatta reaktioner balanserar varandra

Centrala och perifera nervsystemet. Fråga 1 7, 16p. Endokrina, kardiovaskulära och respirationssystemet. Urinorganens fysiologi. Fråga 8 19, 54p.

C) Röntgenkontrastmedel räknas som läkemedel. D) Växtbekämpningsmedel räknas som läkemedel. E) S k "p-sprutor" (preventivmedel) räknas som läkemedel

Citronsyra i sura frukter

OBS! Det är VIKTIGT ATT SVAREN SORTERAS RÄTT. Det kan annars bli FEL VID RÄTTNING och FEL VID SCANNING.

för erhållande av Apotekarlegitimation 3 december 2014

Varför är Ca 2+ -kanalbockerare selektiva? Effekt på hjärtat men inte på muskelceller

Tentamen Medicinsk vetenskap Kurs: M0052H

Övningar Homogena Jämvikter

På samma sätt ges ph för en lösning av en svag bas och dess salt av:

1. Redogör för uppbyggnad och funktion hos överhuden (epidermis). Rita figur!

Alla papper, även kladdpapper lämnas tillbaka.

Premedicinering till barn Anestesikliniken

OMTENTAMEN 2 I LÄKEMEDELSBERÄKNING

dess energi ökar (S blir mer instabilt) TS sker tidigare i reaktionen strukturen på TS blir mer lik S (2p).

Repetitionsuppgifter. gymnasiekemi

Vilket av nedanstående påstående gällande racemat är korrekt?

Datum Skrivtid 240 minuter. Charlotte Sahlberg Bang, 8 poäng. Ulla Ericsson, 6 poäng Karin Franzen, 7 poäng Rolf Pettersson, 6 poäng

EXAMINATION I IDROTTSFYSIOLOGI

Fråga 8 18 besvaras och läggs i ett grönt omslag. Istället för lärarens namn på

Lite basalt om enzymer

Namn:... Använd baksidan av respektive papper om skrivutrymmet inte räcker till. 1. Ange fyra (inte fler) funktioner för nervsystemet.

D E L S K R I V N I N G 1

Atipamezol är en selektiv α2-antagonist och indicerad för reversering av sedativ effekt av medetomidin och dexmedetomidin hos hund och katt.

Träningslära Styrka. Styrka. Hur fungerar en muskel?

Omtentamen Medicinsk vetenskap Kurs: M0052H

Skrivning i termodynamik och jämvikt, KOO081, KOO041,

för erhållande av Receptarielegitimation 3 december 2014

Kromatografimetod. Separation genom olika distribution av molekyler mellan en mobil fas och en stationär fas

Kromatografi. Kromatografi

Isolering av Eugenol

G p l lp 7p Sp 14.Sp Sp

Kursbok: The immune system Peter Parham

Sverigefinal EUSO 2018: Biologi

1 LÄKEMEDLETS NAMN Atrovent, 0,25 mg/ml, lösning för nebulisator, endosbehållare Atrovent, 0,5 mg/ml, lösning för nebulisator, endosbehållare

Övningsuppgifter Syror och baser

VASOBRAL, skårad tablett g/1 g av 100 ml. VASOBRAL, oral lösning i en injektionsflaska

Laboration Enzymer. Labföreläsning. Introduktion, enzymer. Kinetik. Första ordningens kinetik. Michaelis-Menten-kinetik


Ballingmetoden. Jonas Roman. En genomgång av Ballingmetoden i teori och praktik. Utgåva 2.0

1. DET VETERINÄRMEDICINSKA LÄKEMEDLETS NAMN. Revertor vet 5 mg/ml injektionsvätska, lösning för hund och katt

PRODUKTRESUMÉ. Tillse att djurets sväljreflexer är fullt återställda innan det tillåts att äta eller dricka.

NAMN (TEXTA LÄSLIGT!): FÖDELSENUMMER:

Transkript:

Glattmuskel laboration Introduktion: Syftet med laborationen är att ta reda på hur potenta alfa- antagonisterna Prazosin och Yohimbin är genom att tillsätta stigande koncentration av agonisten noradrenalin (NA) till olika koncentrationer av de två antagonisterna. Droger klassificeras olika beroende på om de aktiverar eller inte aktiverar en receptormolekyl som de binder in till. Agonist är en drog som binder in till en receptor och inducerar ett biologiskt svar. En antagonist är ett ämne som binder in till samma receptor som agonisten men utan att inducera ett svar. Förmågan en agonist har att inducera ett fysiologiskt svar i förhållande till dess koncentration benämns som drogens potens och bestäms av både affinitet och efficacy. Affinitet är styrkan av bindningsinteraktionen mellan drog och receptor, och detta begrepp gäller både för agonister och antagonister. Efficacy är hur starkt receptorn aktiveras av att drogen binder in. Efficacy gäller enbart för agonister då antagonister inte inducerar receptorsvar vid inbindning. En antagonist kan vara kompetitiv eller icke- kompetitiv. En kompetitiv antagonist binder in till samma receptor som agonisten samt till samma binding site. Den kompetitiva antagonisten konkurrerar därmed direkt med agonisten om receptormolekylerna. Genom att höja koncentrationen av agonist kan antagonistens inbindning minskas. En icke- kompetitiv antagonist påverkar samma receptor som agonisten men binder in till en annan binding site och ändrar konformationen av receptorn vilket hindrar agonisten från att binda in. Vid närvaro av en icke- kompetitiv antagonist hjälper det inte att höja koncentrationen av agonist för att få ett ökat biologiskt svar, eftersom agonist och antagonist inte tävlar direkt med varandra om samma binding site. Inbindningen av en antagonist till en receptor kan vara reversibel eller icke- reversibel. I en reversibel interaktion binder och släpper drogen från receptorn beroende på molekylernas affinitet till varandra, jämvikt mellan fri och bunden form eftersträvas. Då en irreversibel drog- receptorinteraktion sker binder molekylerna till varandra med kovalenta bindningar vilket gör att de inte kan dissociera spontant. En farmakologisk metod för att studera agonister och antagonister tillsammans är att mäta muskelkontraktion och hur den påverkas vid tillsats av olika läkemedel. I glattmuskulatur runt mesenteriska artärer finns alfa- receptorer som ger muskelkontraktion då en agonist binder in till dem. Om en antagonist till alfa- receptorerna finns närvarande kommer konkurrens om receptorerna uppstå och graden av muskelkontraktion återspeglar potensen hos agonisten och antagonisten. Vi har mätt muskelkontraktion av glattmuskulatur, i artärer från nötkreatur, i närvaro av den endogena alfa- agonisten noradrenalin tillsammans med två olika alfa- antagonister, Prazosin och Yohimbin. En kontrollkurva av noradrenalin har uppmätts och antagonisterna testades i olika koncentrationer med en stigande tillsatts av noradrenalin. Efter alla tillsatser av NA och olika koncentrationer av antagonister, tillsatte vi en kaliumlösning för att få fram den maximala kontraktionen för respektive artärpreparat. Detta för att kunna jämföra de olika preparaten utan att eventuella skillnader i kontraktionsförmåga förvränger våra resultat. Kalium har en förmåga att stimulera glattmuskulatur till maximal kontraktion, dock inte genom samma mekanismer som NA och kan därför inte kallas agonist.

Material och metod Artärpreparat (mesenterialartär från nötkreatur) Krebs bikarbonatbuffert (40 ml stam I + 20 ml stam II + 940 ml destillerat vatten + 1 g glukos, jämviktat med 5% CO 2 och 95% O 2 vid 37 C) Noradrenalin (alfa- och beta- receptoragonist med molmassan 319,3 g/mol) Prazosin (alfa1- receptorantagonist i färdig lösning 10-3 M) Yohimbin (alfa2- receptorantagonist i färdig lösning 10-3 M). Laborationen genomfördes genom att artärpreparaten sänktes ned i 30 ml av Krebs bikarbonatbuffert. Bufferten tillfördes syrgas och koldioxid kontinuerligt: 95 % syrgas och 5 % koldioxid. Detta för att förse muskeln med det syre den behöver för att kontrahera, och för att hjälpa bufferten att hålla ett lämpligt ph. I bufferten fanns även 1 g glukos, som agerade som näring till muskeln under försöken. Preparaten sträcktes upp av trådar, varav en fästes i en tensionsgivare som känner av när muskeln kontraherar, och således drog i upphängningsmekanismen. Denna givare kopplades till en förstärkare, som i sin tur kopplats till en "skrivare", så att resultaten kunde visualiseras. Ett av buffertbaden innehöll endast buffert, medan de övriga (5 st) innehöll en antagonist i någon koncentration: Prazosin i koncentrationerna 3 x 10-8 M, 10-8 M samt 10-9 M och Yohimbin i koncentrationerna 3 x 10-8 M och 10-8 M. Till samtliga bad tillsattes noradrenalin i stigande koncentration. Slutkoncentrationerna av NA blev 10-9, 3x10-9,10-8, 3x10-8, 10-7, 3x10-7, 10-6, 3x10-6, 10-5, 3x10-5, 10-4 M. Den volym av NA- lösning vi tillsatte var 30 mikroliter, vilket innebar att koncentrationen i lösningen blev tusen gånger högre än den slutliga koncentrationen i buffertbadet. Dessa spädningar framställdes genom att sätta 50 mg NA i pulverform till 15,66 ml destillerat vatten, NA- koncentration blev då 3 x 10-3 M. Denna koncentration späddes ut med Krebs buffert i förhållandet 1:100, för att få den första koncentrationen i serien. Därefter späddes 3/10 NA- lösning och 7/10 buffert, ömsom 1/3 lösning och 2/3 buffert för att få de resterande koncentrationerna i vår serie. 30 mikroliter av NA- lösningarna, i stigande ordning från den lägsta till den högsta, tillsattes i samtliga bad och preparatens svar på noradrenalinet observerades. Efter varje dos väntade vi två minuter innan vi tillsatte nästa: detta för att försäkra oss om att allt noradrenalin från föregående dos brutits ned. Preparatens eventuella kontraktioner registrerades av sensorn. För att sedan kunna jämföra våra preparat, som kan vara olika beroende på t.ex. hur djuret slaktats, bytte vi sedan ut bufferten i baden mot en speciell kaliumlösning som orsakar muskelkontraktion via en annan mekanism än de adrenerga receptorerna. Detta gjorde att vi kunde ta reda på hur nära sitt absoluta kontraktionsmaximum varje preparat låg, vilket gjorde att vi kunde kompensera för preparatens eventuella skillnader gentemot varandra. Resultaten sammanställdes sedan i en dos- effekt kurva med logaritmerad koncentrationsskala på x- axeln och kontraktiliteten i procent på y- axeln.

Resultat: Tabell 1: Kontrollkurva för noradrenalin. Kontraktionsmaximum 7,5 g = 100 %. Koncentration (mol/l) Log(koncentration) (gram) 10-9 - 9, 0 0 3 10-9 - 8,52 0 0 10-8 - 8 0 0 3 10-8 - 7,52 0 0 10-7 - 7 0 0 3 10-7 - 6,52 0,2 2,67 10-6 - 6 3,1 41,33 3 10-6 - 5,52 3,8 50,67 10-5 - 5 3,5 46,70 3 10-5 - 4,52 4,5 60 10-4 - 4 5 66,67 Tabell 2: Prazosin antagonist koncentration 10-9 mol/liter. Kontraktionsmaximum 3,0 g = 100 %. Tabellen visar inte koncentrationerna som inte gav någon respons. Noradrenalin koncentration (gram) 3 10-7 0,1 3,33 10-6 0,5 50 3 10-6 2,0 66,67 10-5 1,5 50 3 10-5 2,0 66,67 10-4 2,5 83,33

Tabell 3: Prazosin koncentration 10-8 mol/liter. Kontraktionsmaximum 3,5 g =100 %. Tabellen visar inte koncentrationerna som inte gav någon respons. Noradrenalin koncentration (gram) 10-6 0,1 2,89 3 10-6 2,1 60 10-5 2,2 62,86 3 10-5 3,2 91,43 10-4 3,6 102,86 Tabell 4: Prazosin koncentration 3 10-8. Kontraktionsmaximum 12,0 g = 100 %. Tabellen visar inte koncentrationerna som inte gav någon respons. Noradrenalin koncentration (gram) 10-6 0,1 0,83 3 10-6 0,2 1,67 10-5 3,1 25,83 3 10-5 6,0 50 10-4 8,5 70,83 Tabell 5: Yohimbin koncentration 10-8 mol/liter. Kontraktionsmaximum 9,5 gram = 100 %. Tabellen visar inte koncentrationerna som inte gav någon respons. Noradrenalin koncentration (mol/liter) (gram) 10-7 0,1 1 3 10-7 0,4 4,21 10-6 4 42,11 3 10-6 6 63,16 10-5 5,5 57,89 3 10-5 7 73,68 10-4 7,5 78,95

Tabell 6: Yohimbin koncentration 3 10-8 mol/liter. Kontraktionsmaximum 8,0 g = 100%. Tabellen visar inte koncentrationerna som inte gav någon respons. Noradrenalin koncentration (mol/liter) (gram) 3 10-7 0,2 2,5 10-6 3 37,5 3 10-6 4,8 60 10-5 5,5 68,75 3 10-5 6 75 10-4 6,5 81,25 Diagram 1: Dos respons kurva för agonist och antagonist.

Diskussion och felkällor: Dos- respons kurvan ger möjlighet att göra en bedömning gällande den maximala effekten av ett läkemedel samt vad som krävs för att ge 50 % av maximal effekt, EC50- värde. Både maximal effekt och EC- 50 värdet är användbara för att kunna jämföra olika läkemedel med kvalitativt liknande effekter. Vi har inte tagit fram något EC- 50 värde då kurvorna i diagram 1 aldrig nådde platåvärde. Vi kan därmed inte vara säkra på att den maximala kontraktionen som vi uppmätte verkligen är den sanna maximala kontraktionen. Vid tillsats av noradrenalin 10-4 mol/liter till prazosin 10-8 mol/liter fick vi kontraktilitetssvaret 102,86 %. Kalium, som agerar via ett annat system än de adrenerga receptorerna ska i normalfallet åstadkomma en större kontraktion än de adrenerga receptorerna. Varför detta inte skedde i vårt fall är oklart, den troliga förklaringen är att något fel uppstått på vår utrustning, så att mätsvaren blivit felaktiga. Eftersom noradrenalin är den enda agonisten som testades i laborationen tillsammans med två antagonister, Yohimbin och Prazosin, borde kontrollkurvan för NA ha gett störst kontraktionsmaximum. Vårt försök illustrerar dock inte det och detta kan bero på olika felkällor. Kurvorna för antagonisterna kan trots det jämföras sinsemellan för att illustrera vilken antagonist och i vilken koncentration som är mest potent.