KOLORIMETRISKT SOCKERASSIMILERINGSTEST FÖR IDENTIFIERING AV MEDICINSKT INTRESSANTA JÄSTARTER

AUXACOLOR TM 2 56513 20 TEST KOLORIMETRISKT SOCKERASSIMILERINGSTEST FÖR IDENTIFIERING AV MEDICINSKT INTRESSANTA JÄSTARTER IVD

1- KLINISK NYTTA Incidensen av svampinfektioner har ökat markant under de senaste 20 åren, och det gäller speciellt jästsvampinfektioner. Samtidigt har karaktären av dessa infektioner, som är kopplad till ökningen av opportunistiska infektioner, förändrats på ett betydande sätt. På grund av variation av infektionsställen samt mångfald av arter har påvisandet av jästsvamp, i patologiska prov från ytliga eller djupa provtagningsställen, blivit allt viktigare. I samband med uppblossandet av dessa infektioner och den mer omfattande användningen av antimykotika har det vidare uppkommit resistenta patogena stammar, vilket är anledningen till att det nu är så väsentligt att identifiera exakt vilken jästart som ligger bakom infektionen. AUXACOLOR 2 uppfyller dessa krav genom att identifiera de vanligast förekommande arterna i klinisk praxis. Det är lätt att använda och tolka och kan enkelt anpassas till rutinerna vid alla laboratorier. 2- METOD AUXACOLOR 2 kit är ett identifieringssystem baserat på principen med sockerassimilation. Tillväxt hos jästkulturen visualiseras genom färgförändring hos en ph-indikator. I kitet ingår även 3 enzymtest, inkluderande ett test för påvisande av fenoloxidasaktiviteten hos Cryptococcus neoformans. 3- ANVÄNDA TESTTYPER I kitet ingår : en negativ kontroll för att underlätta tolkning av sockerassimilationstestet (blå brunn). 13 sockerassimilationstest, som motsvarar följande sockerarter: - glukos (GLU.) : positiv kontroll - maltos (MAL.) - cellobios (CEL.) - sackaros (SAC.) - trehalos (TRE.) - galaktos (GAL.) - adonitol (ADO.) - laktos (LAC.) - melezitos (MEL.) - raffinos (RAF.) - xylos (XYL.) - inositol (INO.) - arabinos (ARA.) 92

Varje sockerart dehydreras i närvaro av en basisk lösning och en phindikator, bromkresolpurpur. Tillväxt hos jästen indikeras av att indikatorns färg slår om från blå till gul, samt grumling av brunnen. Ett enzymatiskt test för att påvisa N-acetyl-galaktosaminidasaktivitet (hexosaminidas: HEX). Positiv reaktion motsvaras av gul färg i brunnen, ett negativt test förblir färglöst. Ett fenoloxidastest (POX) för påvisande av fenoloxidasaktivteten hos Cryptococcus neoformans kopplat till ett test för påvisande av prolinarylamidasaktivitet (PRO). - brun färg i brunnen indikerar positiv fenoloxidasaktivitet (POX). - gul färg indikerar positiv prolinarylamidasaktivitet (PRO). - färglös brunn eller grå färg indikerar negativ reaktion för båda testen. Förekomsten av POX och PRO testen i samma brunn förklaras av att de två testen aldrig är positivia samtidigt. De enda möjliga profilerna är: POX negativ/pro negativ; POX positiv/pro negativ; POX negativ/pro positiv, med den kolorimetriska tolkningen ovan. SKISS ÖVER MIKROTITERPLATTA AUXACOLOR TM 2 C.Neg GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. REF BIO-RAD LOT 93

4- KITETS INNEHÅLL Låda med 20 test, art.nr. 56513, innehållande: 20XR1, individuellt förpackade 16-brunnars mikrotiterplattor 20 st självhäftande filmer 20XR2, färdigberedda suspensionsmedier 1 häfte resultatblad 1 bipacksedel 5- VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER VID ANVÄNDNING Använd ej kitet efter angivet utgångsdatum. Hantera alla prover som potentiellt infektiöst material och tillämpa aseptisk laboratorieteknik vid odlingarna. Kassera kontaminerat material i kärl avsett för laboratorieavfall. 6- FÖRVARING AV REAGENS Reagensen är stabila fram till det utgångsdatum som anges på etiketten om de förvaras oöppnade i sina individuella förpackningar vid en temperatur mellan 2 och 8 C. Sedan förpackningen till en enskild mikrotiterplatta brutits kan den förvaras i rumstemperatur i 10 timmar utan någon funktionsförsämring. 7- UTFÖRANDE Material som ingår Se Kitets innehåll Material som behövs men som ej ingår Opacitetskontroll-kit, art.nr 56499. Öglor för skörd av jästkolonier. Pipetter för mätning och tillsats av 100 µl. Desinfektionskärl eller autoklavpåse för eliminering av kontaminerat material. Eventuellt en densitometer. 94

Steg för steg Låt reagensen anta rumstemperatur innan de används. 1. Ympning av mikrotiterplattan - Förbered ympen från en 24 48 h kultur på Sabouraud-medium (+/- antibiotika) eller kromogent medium (CandiSelect TM 4 kod 63746). Ympa under sterila förhållanden suspensionsmediet (R2) med en tillräcklig mängd (1 5 identiska kolonier) rena stamkolonier (fria från bakterier och andra jästarter), för att mediet ska få en opacitet motsvarande den opacitetskontroll som ingår i kitet art.nr 56499 (1,5 McFarland). För att resultaten ska bli korrekta är det viktigt att man är noga med att opaciteten hos ympsuspensionen blir den rätta. - Vortexa suspensionen. - Använd en pipett för att suga upp och överföra 100 µl ympsuspension till varje brunn på mikrotiterplattan (R1)........... suspensionsmediet (R2) C.Neg GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. - Täck över mikrotiterplattan (R1) med den självhäftande filmen och kontrollera att vidhäftningen är fullkomligt homogen. Inkubera i 48 timmar (vid behov 72 h) vid 30 C (± 2 C). 2. Avläsning Den slutliga avläsningen bör ske efter 48 timmar. Även om avläsningen efter 24 timmar kan ge en korrekt kod och möjliggöra identifieringen av vissa jästsorter, rekommenderar vi att den slutliga tolkningen sker efter 48 timmar. 100 µl 95

96 Om det råder misstankar om kryptokockinfektion, bör den slutliga avläsningen utföras efter 72 timmar pga. dessa mikroorganismers långsamma tillväxt. För att underlätta avläsningen, kan man titta genom mikrotiterplattans undersida eller dra av den självhäftande filmen. Om det skulle bli nödvändigt med ytterligare inkubation måste man dock respektera gängse krav på sterilitet. I så fall sätter man försiktigt tillbaka filmen, läser av resultaten genom att jämföra med tabellen på sidan 99 och antecknar dem på de speciellt utformade resultatbladen. 3. Tolkning av resultat a) Guide för tolkningen av färgreaktionerna Brunn Test Färg/Tolkning Negativ kontroll C. Neg. Negativ kontroll Blå Negativ Positiv GLU Glukos (Positiv kontroll) MAL Maltos SAC Sackaros GAL Galaktos LAC Laktos RAF Raffinos Blå (a) Gul (b) INO Inositol eller eller Grön Färglös CEL Cellobios TRE Trehalos ADO Adonitol MEL Melezitos XYL Xylos ARA Arabinos Detektering av N-acetylgalaktosaminidasaktivitet HEX Färglös Gul (hexosaminidas) Sockerassimilationstest Enzymtest POX/PRO Detektering av fenoloxidasaktivitet av Cryptococcus neoformans (POX) Detektering av prolinarylamidasaktivitet (PRO) Färglös eller Grå (c) Brun Gul (b)

(a) Blågrå och blågrön betraktas som negativa. (b) Ljusgul och gulgrön betraktas som positiva. (c) Vissa stammar av Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp och Cryptococcus laurentii kan orsaka en gråbrun färging av brunnen. I detta fall är reaktionen negativ och vid poängberäkningen bör värdet noll tilldelas denna brunn. b) Poängberäkning För identifiering använder man 16 biokemiska karakteristika, fördelade på 15 brunnar (POX- och PRO-testen är kombinerade i samma brunn). En profil i form av ett femsiffrigt tal tas fram genom att kombinera värdena för följande 15 test i grupper om 3: 1:a siffran Glukos Maltos Sackaros 2:a siffran Galaktos Laktos Raffinos 3:e siffran Inositol Cellobios Trehalos 4:e siffran Adonitol Melezitos Xylos 5:e siffran Arabinos Hexosaminidas Fenoloxidas Alla negativa reaktioner får poängen noll. Brunnar med positiv reaktion poängsätts beroende på vilken plats de har i tripletten: 1 för position 1 2 för position 2 4 för position 3 i tripletten Genom att lägga ihop de tre poängen får man en av siffrorna i den femsiffriga profilen. T.ex.: Glukos + Maltos + Sackaros 1 + 2 + 4 = den första siffran är 7 Prolinarylamidasaktivitet (PRO: POX/PRO-brunnen) poängsätts som + eller beroende på vilken färg som observeras. - gul brunn (ljusgul och gulgrön betraktas som positiva): PRO-testet positivt. - färglös eller grå brunn (en gråbrun färgning betraktas som negativ): PROtestet negativt. 97

Ytterligare två siffror beräknas enligt metoden ovan och kompletterar koden. De representerar följande egenskaper : Pigmentering (PI.) Artrosporer (AR.) Kapsel (CA.) Mycel/pseudomycel (MY. PS MY) Klamydosporer (CHL.) Tillväxt vid 37 C Den slutliga identifieringen baseras på en kombination av de biokemiska testen och kompletterande kriterier (morfologiska och metaboliska) som fastställs under gängse betingelser. Exempel: STAM GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX.POX./PRO. PI. AR. CA. MY./PS-MY. CHL. 37 C Stam nr 1 + + + + - - - - + - - + - + - + - - - + + + Stam nr 2 + - - - - - - - + - - - - - - - - - - - - + Stam nr 3 + + + + - + + - - + + - - - + - - - + - - + Beräkning av motsvarande sifferprofiler och identifiering: Sifferprofil Stam Kompletterande Identifiering Biokemiska test PRO test egenskaper Strain N 1 71442 + 07 C. albicans Strain N 2 10400-04 C. glabrata Strain N 3 75134-44 Cryptococcus neoformans Efter att sifferprofilen har fastställts, söks denna upp i databasen på sida 15. Om erhållen sifferprofil ej finns med i listan (sällsynt profil) gå till tolkningstabellen (sida 99). 98

Tolkningstabell GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. PI. AR. CA. MY. CHL. 37 C ART PS -MY. C. ALBICANS 1 + + + + - - - - + (-) V V + (-) V + (-) - + - - - + + (-) + C. ALBICANS 2 (1) + + - + - - - - V V - V V + - - - - - + + (-) + C. CIFERRII + + + + - + (-) + V + + - + + V - - - - - + - + C. DUBLINIENSIS + + + + - - - - V + (-) - (+) - - + (-) - + - - - + + + C. FAMATA + + + + V + - + + + + (-) V V - - V - - - - - V C. GLABRATA + - - - - (+) - - - + - - - - - - - - - - - - + C. GUILLIERMONDII + + + + - + (-) - + + + (-) + (-) + (-) + - - + - - - + - + C. INCONSPICUA + - - - - - - - - (+) - - - - - - V - - - - - + C. KEFYR + - + + +(-) + - V - (+) - (+) - V V - - - - - - + (-) - + C. KRUSEI + - - - - - - - - - - - - - - - (+) - - - + - + C. LIPOLYTICA + - - - (+) - - - - (+) - - (+) - - - - - + (-) - - - + - V C. LUSITANIAE + + + + (-) - (+) - - + + V + + (-) V - - V - - - + (-) - + C. NORVEGENSIS + - - - - - - + (-) - - - - (+) - - - + - - - + - + C. PARAPSILOSIS + + + + - - - - + (-) V + (-) + (-) + - - V - - - + - + C. RUGOSA + - - + (-) - - - - - V - V - (+) - - V - - - + - + C. SAKE + + + V - - - V + V + V - + (-) - V - - - + - - C. TROPICALIS + + + (-) + - - - V + + (-) + + - - - - (+) - - - + - + C. ZEYLANOIDES + - - - (+) - - - - (+) + (-) V - - - - (+) - + (-) - - - + - - (+) C. ALBIDUS + + + V V V V + V V + + V - - V - - + - - V C. LAURENTII + + + + + + + + + + + + + - - - - - + - - - C. NEOFORMANS + + + + - V + V V V + (-) V V - + (-) - - - + - - + C. UNIGUTTULATUS + + + V - V + - V V + + (-) V - - V - - + - - - G. CANDIDUM + - - + (-) - - - - - V - + - - - (+) - (+) - + - + - - (+) G. CAPITATUM + - - V - - - - - - - - - - - - - + - + - + K. APICULATA + - - - - - - + - - - - - - - - - - - - - - R. GLUTINIS + + + V - V - V + V + V V V - + + - - - - V R. MUCILAGINOSA (RUBRA) + V + V - + - V V V V V V V - + + - - - - V S. CEREVISIAE + + (-) + V - + (-) - - V - V - - - - - - - - - (+) - V T. ASAHII + + V + + - V + V V V V V + (-) - - - + - + - + T. INKIN + + + V + - + (-) + + (-) - + + V + (-) - - - + - + - + T. MUCOIDES + + + + + + + + + + (-) + + + V - - - + - + - + T. SPP + + + (-) + (-) + V V + + (-) V V + (-) + (-) V - - (+) - + - + - V P. WICKERHAMII (2) + - - + (-) V - - - + - - - - - - - - - - - - + 99

TECKENFÖRKLARING (1) C. albicans 2: motsvarar stammar som tidigare klassificerades under arten C. stellatoidea; förekommer sällan. (2) P. wickerhamii: en patogen encellig alg som lätt växer i jästisolat och makroskopiskt påminner om jäst. Vid mikroskopisk undersökning ses runda celler som delar sig genom inre septumbildning. + : Testet positivt för minst 99 % av stammarna - : Testet negativt för minst 99 % av stammarna V : Varierande testresultat +(-) : Testet positivt för minst 95 % av stammarna eller fördröjd testreaktion (48 h eller 72 h) -(+) : Testet negativt för minst 95 % av stammarna PI. : Pigmentering AR. : Artrosporer CA. : Kapsel MY. : Mycel (PCB-medium) PS-MY. : Pseudomycel (PCB-medium) CHL. : Klamydosporer 37 C : Tillväxt vid 37 C 100

c) Kommentarer 1- Identifieringen av jästsvampar baseras både på deras biokemiska karaktäristika, vilka fastställs med AUXACOLOR 2 mikrotiterplatta, och på deras morfologiska egenskaper, vilka lämpligen bestäms på PCBmedium eller eventuellt på RAT-medium. Identifieringen skall baseras på alla dessa data. Tag även i beaktning provets ursprung och det kliniska sammanhanget för att tolka resultaten. 2- Arterna Rhodotorula glutinis och Rhodotorula mucilaginosa finns upptagna i tolkningstabellen, men saknar sifferprofil, då många av deras egenskaper kan variera. Båda dessa arter kännetecknas av laxrosa pigmentering hos kolonierna, vilken ofta uppträder först efter 48 h odling. 3- Jästarter av släktet Cryptococcus bildar en kapsel, som kan vara mycket väl avgränsad. 4- Morfologin hos jästarten Kloeckera apiculata är karakteristisk och gör att den kan särskiljas från andra arter med samma sifferprofil: en mycket liten, avlång jästsvamp med bipolärt placerade knoppar (citronliknande). 5- Det kan vara värdefullt att utföra kompletterande test för att bekräfta identifieringen av vissa jästarter eller för att särskilja två arter med samma sifferprofiler: - kaliumnitratassimilation kan särskilja jästarter som Cryptococcus albidus (positiv) och Cryptococcus laurentii (negativ) eller Rhodotorula mucilaginosa (negativ) och Rhodotorula glutinis (positiv). - testet för ureas på urea-indol-medium bekräftar identifiering av Cryptococcus-släktet. Testet är positivt inom 4 h för Cryptococcus neoformans och inom 24 h för övriga arter. - förmåga att reducera tetrazolium särskiljer Candida tropicalis (positiv) och Candida lusitaniae (negativ). 101

8- TESTETS PRESTANDA AUXACOLOR 2 kit kan identifiera 31 jästarter och en art av encellig alg; Prototheca wickerhamii. I jämförelse med AUXACOLOR kan 7 nya jästarter identifieras med detta kit: Candida ciferrii, Candida dubliniensis, Candida sake, Kloeckera apiculata, Trichosporon asahii, Trichosporon inkin, Trichosporon mucoides. En prospektiv klinisk studie och en retrospektiv studie om 120 stammar, representativa för de arter som identifieras med AUXACOLOR 2 kit, visade: - 92,5 % av de testade stammarna identifierades inom 48 h (59,2 % inom 24 h), tack vare användandet av nya test i kitet (hexosaminidas- och prolinarylamidas-testen), men också tack vare kompletteringar av listan med arternas sifferprofiler. - AUXACOLOR 2 kit kan särskilja alla stammar av Candida dubliniensis (5 stammar testade) och Candida albicans (15 stammar). - Med det kombinerade prolin-arylamidas-testet och fenoloxidastestet läggs ytterligare ett test till mikrotiterplattan för att identifiera stammar av Candida glabrata (9 stammar som särskiljs från Candida zeylanoides) eller särskilja Candida krusei (6 stammar) och Candida lipolytica (4 stammar). - POX-testet gjorde det möjligt att påvisa fenoloxidasaktiviteten hos Cryptococcus neoformans för de 4 testade stammarna. 9- BEGRÄNSNINGAR 1- AUXACOLOR 2 kit tillåter endast identifiering av de jästarter som anges i tolkningstabellen. 2- För de medtagna arterna anger databasen endast de vanligast förekommande sifferprofilerna. En sifferprofil som ej finns med kan motsvara en sällsynt profil för en medtagen art, eller en art som inte finns med. För kompletteringar av informationen i databasen hänvisas till tolkningstabellen. 3- I undantagsfall kan sällsynta arter, ej refererade här, ha sifferprofiler identiska med de medtagna arterna. 102

4- AUXACOLOR 2 mikrotiterplatta skall endast användas med rena stammar. Blandkultur av flera jästarter påvisas i 16 % av proven och kan iakttas i isolerade kolonier. Odling på CandiSelect 4 eller på PCB-medium, parallellt med AUXACOLOR 2 testet, kan avslöja eventuell blandkultur. 5- I flera fall kan isoleringsmediet påverka färgförändringen hos vissa test efter 24 h (xylos, hexosaminidas) utan att störa identifieringen av jästarterna efter 48 h. 6- Fenoloxidas/prolinarylamidas-testet: - sällsynta stammar av Cryptococcus neoformans uppvisar eventuellt ej fenoloxidasegenskapen. - några stammar av Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp och Cryptococcus laurentii kan inducera en kastanjegrå färg i brunnen. I detta fall är reaktionen negativ och vid beräkningen skall brunnen tilldelas värdet noll. - vissa stammar av Prototheca wickerhamii kan uttrycka prolinarylamidasegenskapen. 7- Fall då resultatet går från positivt till negativt, dvs. då färgen av en brunn som först tolkades som positiv övergår till negativ, bör ej beaktas. T.ex., en brunn som är gul efter 24 och 48 timmar och som sedan blir grön eller blå efter 48 eller 72 timmar betraktas som positiv. 8- Däremot, skall en ändring från negativ till positiv under de första 72 timmarna uppmärksammas: berörd brunn skall anses positiv. T.ex., en brunn som är blågrå eller blågrön efter 24 eller 48 timmar och som blir gul vid 48 eller 72 timmar skall betraktas som positiv. 10- KVALITETSKONTROLL AUXACOLOR TM 2 mikrotiterplattor (R1) genomgår kvalitetskontroll med hjälp av en panel av rena stammar med väl definierade biokemiska egenskaper. 103

Kontroll av kitets aktivitet kan utföras på laboratoriet med hjälp av följande referensstammar: STAMMAR NEG. GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. C. NEOFORMANS ATCC 32045 - + + + + - - + V V - V V V - + - T. MUCOIDES BCCM/IHEM 14146 - + + + + + + + + + + + + + + - - C. LIPOLYTICA IP 817.63 - + - - - - - - - - - - - - - - + Egenskaper som observeras efter 48 h inkubation med stammar odlade på Sabouraud-agar. ATCC: American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA. BCCM / IHEM: Belgian Co-ordinated Collections of Micro-organisms / IHEM Culture Collection, Scientific Institute of Public Health - Louis Pasteur, Mycology Section, Rue J. Wytsmanstraat 14, B-1050 Brussels. IP: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris cedex 15, France. 11- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Samtliga reagenser framställda av Bio-Rad bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagning av råmaterialen till slutlig försäljning av produkterna. Varje lot av färdiga produkter genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om den överensstämmer med fastställda acceptanskriterier. Anteckningarna rörande produktionen och kontrollen av varje enskild lot bevaras av Bio-Rad. 1 S 104

Code 10000 -(+) 05 Candida krusei 10000-25 Geotrichum capitatum 10000 +(-) 01 Candida zeylanoides 10000 +(-) 05 Candida lipolytica 10000 + 05 Candida norvegensis 10000 v 04 Candida inconspicua 10010 +(-) 01 Candida zeylanoides 10010 +(-) 05 Candida lipolytica 10040 -(+) 21 Geotrichum candidum 10200-00 Kloeckera apiculata 10200 + 05 Candida norvegensis 10200 +(-) 05 Candida lipolytica 10240 + 05 Candida norvegensis 10400-04 Candida glabrata 10400 +(-) 01 Candida zeylanoides 10402 +(-) 01 Candida zeylanoides 10410 +(-) 01 Candida zeylanoides 10600 +(-) 01 Candida zeylanoides 10610 +(-) 01 Candida zeylanoides 11000-25 Geotrichum capitatum 11000 +(-) 05 Candida lipolytica 11000 v 05 Candida rugosa 11001 v 05 Candida rugosa 11010 +(-) 05 Candida lipolytica 11010 v 05 Candida rugosa 11040 v 05 Candida rugosa 11040 -(+) 21 Geotrichum candidum 11041 v 05 Candida rugosa 11050 v 05 Candida rugosa 11050 -(+) 21 Geotrichum candidum 11400-04 Prototheca wickerhamii 11400 +(-) 01 Candida zeylanoides 11410 +(-) 01 Candida zeylanoides 11600 +(-) 01 Candida zeylanoides 11610 +(-) 01 Candida zeylanoides 12400-04 Candida glabrata 13400-04 Prototheca wickerhamii 31002-07 Candida albicans 2 31042-07 Candida albicans 2 Code 31052-07 Candida albicans 2 31402-07 Candida albicans 2 31442-07 Candida albicans 2 31452-07 Candida albicans 2 31472-07 Candida albicans 2 33242-25 Trichosporon asahii 33243-25 Trichosporon asahii 33262-25 Trichosporon asahii 33263-25 Trichosporon asahii 33342-25 Trichosporon asahii 33343-25 Trichosporon asahii 33362-25 Trichosporon asahii 33363-25 Trichosporon asahii 33642-25 Trichosporon asahii 33643-25 Trichosporon asahii 33662-25 Trichosporon asahii 33663-25 Trichosporon asahii 33742-25 Trichosporon asahii 33743-25 Trichosporon asahii 33762-25 Trichosporon asahii 55000-05 Candida kefyr 55001-05 Candida kefyr 55040-05 Candida kefyr 55041-05 Candida kefyr 57000-05 Candida kefyr 57001-05 Candida kefyr 57010-05 Candida kefyr 57011-05 Candida kefyr 57040-05 Candida kefyr 57041-05 Candida kefyr 57050-05 Candida kefyr 57051-05 Candida kefyr 57200-05 Candida kefyr 57201-05 Candida kefyr 57240-05 Candida kefyr 57241-05 Candida kefyr 57400-05 Candida kefyr 57401-05 Candida kefyr 57440-05 Candida kefyr 57441-05 Candida kefyr 15

Code 57600-05 Candida kefyr 57601-05 Candida kefyr 57640-05 Candida kefyr 57641-05 Candida kefyr 70160 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70161 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70170 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70171 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70400-04 Saccharomyces cerevisiae 70462 v 01 Candida sake 70560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 70620 v 05 Candida lusitaniae 70660 v 40 Cryptococcus albidus 70661 v 40 Cryptococcus albidus 70662 v 01 Candida sake 70670 v 05 Candida lusitaniae 70760 v 40 Cryptococcus albidus 70761 v 40 Cryptococcus albidus 71002 + 07 Candida dubliniensis 71010 + 07 Candida dubliniensis 71012 + 07 Candida dubliniensis 71021 v 05 Candida parapsilosis 71031 v 05 Candida parapsilosis 71042 + 07 Candida albicans1 71052 + 07 Candida albicans 1 71061 v 05 Candida parapsilosis 71071 v 05 Candida parapsilosis 71124-44 Cryptococcus neoformans 71125-44 Cryptococcus neoformans 71134-44 Cryptococcus neoformans 71135-44 Cryptococcus neoformans 71164-44 Cryptococcus neoformans 71165-44 Cryptococcus neoformans 71174-44 Cryptococcus neoformans 71175-44 Cryptococcus neoformans 71324-44 Cryptococcus neoformans Code 71325-44 Cryptococcus neoformans 71334-44 Cryptococcus neoformans 71335-44 Cryptococcus neoformans 71400-04 Saccharomyces cerevisiae 71402 + 07 Candida dubliniensis 71410 + 07 Candida dubliniensis 71411 v 05 Candida parapsilosis 71412 + 07 Candida dubliniensis 71420-04 Saccharomyces cerevisiae 71421 v 05 Candida parapsilosis 71422 v 01 Candida sake 71430 + 07 Candida dubliniensis 71431 v 05 Candida parapsilosis 71432 v 01 Candida sake 71432 + 07 Candida dubliniensis 71440 + 07 Candida albicans 1 71441 + 07 Candida albicans 1 71442 + 07 Candida albicans 1 71443 + 07 Candida albicans 1 71450 + 07 Candida albicans 1 71451 + 07 Candida albicans 1 71451 v 05 Candida parapsilosis 71452 + 07 Candida albicans 1 71453 + 07 Candida albicans 1 71460 -(+) 05 Candida tropicalis 71461 v 05 Candida parapsilosis 71462 v 01 Candida sake 71462 + 07 Candida albicans 1 71470 -(+) 05 Candida tropicalis 71471 v 05 Candida parapsilosis 71472 v 01 Candida sake 71472 + 07 Candida albicans 1 71473 + 07 Candida albicans 1 71524-44 Cryptococcus neoformans 71525-44 Cryptococcus neoformans 71534-44 Cryptococcus neoformans 71535-44 Cryptococcus neoformans 71553-05 Candida ciferrii 71560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 71561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 71564-44 Cryptococcus neoformans 16

Code 71565-44 Cryptococcus neoformans 71570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 71571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 71574-44 Cryptococcus neoformans 71575-44 Cryptococcus neoformans 71620 v 05 Candida lusitaniae 71620 v 40 Cryptococcus albidus 71630 v 05 Candida lusitaniae 71660 -(+) 05 Candida tropicalis 71660 v 05 Candida lusitaniae 71661 v 05 Candida lusitaniae 71662 v 01 Candida sake 71670 -(+) 05 Candida tropicalis 71670 v 05 Candida lusitaniae 71670 v 40 Cryptococcus albidus 71671 + 05 Candida guilliermondii 71671 v 05 Candida lusitaniae 71672 v 01 Candida sake 71724-44 Cryptococcus neoformans 71725-44 Cryptococcus neoformans 71734-44 Cryptococcus neoformans 71735-44 Cryptococcus neoformans 71764-44 Cryptococcus neoformans 71765-44 Cryptococcus neoformans 71774-44 Cryptococcus neoformans 71775-44 Cryptococcus neoformans 72762-25 Trichosporon inkin 72763-25 Trichosporon inkin 73242-25 Trichosporon asahii 73243-25 Trichosporon asahii 73262-25 Trichosporon asahii 73263-25 Trichosporon asahii 73342-25 Trichosporon asahii 73343-25 Trichosporon asahii 73362-25 Trichosporon asahii 73363-25 Trichosporon asahii 73641 -(+) 21 Trichosporon spp 73642 -(+) 25 Trichosporon spp 73643-25 Trichosporon asahii 73651 -(+) 21 Trichosporon spp Code 73653 -(+) 21 Trichosporon spp 73661 -(+) 21 Trichosporon spp 73662 -(+) 25 Trichosporon spp 73663-25 Trichosporon asahii 73670 v 05 Candida lusitaniae 73671 -(+) 21 Trichosporon spp 73673 -(+) 21 Trichosporon spp 73741 -(+) 21 Trichosporon spp 73742-25 Trichosporon asahii 73743-25 Trichosporon asahii 73751 -(+) 21 Trichosporon spp 73753 -(+) 21 Trichosporon spp 73761 -(+) 21 Trichosporon spp 73762 -(+) 25 Trichosporon spp 73763 -(+) 25 Trichosporon spp 73771 -(+) 21 Trichosporon spp 73773 -(+) 21 Trichosporon spp 74000-04 Saccharomyces cerevisiae 74020-04 Saccharomyces cerevisiae 74361 v 40 Cryptococcus albidus 74371 v 40 Cryptococcus albidus 74400-04 Saccharomyces cerevisiae 74420-04 Saccharomyces cerevisiae 74560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 74561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 74570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 74571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 74660 v 40 Cryptococcus albidus 74661 v 40 Cryptococcus albidus 74760 v 40 Cryptococcus albidus 74761 v 40 Cryptococcus albidus 74771 v 40 Cryptococcus albidus 75000-04 Saccharomyces cerevisiae 75020-04 Saccharomyces cerevisiae 75124-44 Cryptococcus neoformans 75125-44 Cryptococcus neoformans 75134-44 Cryptococcus neoformans 75135-44 Cryptococcus neoformans 75164-44 Cryptococcus neoformans 75165-44 Cryptococcus neoformans 17

Code 75174-44 Cryptococcus neoformans 75175-44 Cryptococcus neoformans 75324-44 Cryptococcus neoformans 75325-44 Cryptococcus neoformans 75334-44 Cryptococcus neoformans 75335-44 Cryptococcus neoformans 75361 v 40 Cryptococcus albidus 75371 v 40 Cryptococcus albidus 75400-04 Saccharomyces cerevisiae 75420-04 Saccharomyces cerevisiae 75524-44 Cryptococcus neoformans 75525-44 Cryptococcus neoformans 75534-44 Cryptococcus neoformans 75535-44 Cryptococcus neoformans 75551-05 Candida ciferrii 75553-05 Candida ciferrii 75560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 75561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 75564-44 Cryptococcus neoformans 75565-44 Cryptococcus neoformans 75570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 75571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus 75574-44 Cryptococcus neoformans 75575-44 Cryptococcus neoformans 75630 v 00 Candida famata 75631 + 05 Candida guilliermondii 75631 v 00 Candida famata 75651 v 00 Candida famata 75670 v 00 Candida famata 75671 + 05 Candida guilliermondii 75671 v 00 Candida famata 75724-44 Cryptococcus neoformans 75725-44 Cryptococcus neoformans 75734-44 Cryptococcus neoformans 75735-44 Cryptococcus neoformans 75751-05 Candida ciferrii 75753-05 Candida ciferrii 75761 v 40 Cryptococcus albidus 75764-44 Cryptococcus neoformans 75765-44 Cryptococcus neoformans 75771 v 40 Cryptococcus albidus Code 75774-44 Cryptococcus neoformans 75775-44 Cryptococcus neoformans 76361 v 40 Cryptococcus albidus 76371 v 40 Cryptococcus albidus 76761 v 40 Cryptococcus albidus 76771 v 40 Cryptococcus albidus 77361 v 40 Cryptococcus albidus 77371 v 40 Cryptococcus albidus 77610 v 00 Candida famata 77611 v 00 Candida famata 77630 v 00 Candida famata 77631 v 00 Candida famata 77641 -(+) 21 Trichosporon spp 77643 -(+) 21 Trichosporon spp 77651 -(+) 21 Trichosporon spp 77651 v 00 Candida famata 77653 -(+) 21 Trichosporon spp 77661 -(+) 21 Trichosporon spp 77663 -(+) 21 Trichosporon spp 77670 v 00 Candida famata 77671 -(+) 21 Trichosporon spp 77671 v 00 Candida famata 77673 -(+) 21 Trichosporon spp 77741 -(+) 21 Trichosporon spp 77742 -(+) 21 Trichosporon spp 77743 -(+) 21 Trichosporon spp 77751 -(+) 21 Trichosporon spp 77753 -(+) 21 Trichosporon spp 77761 -(+) 21 Trichosporon spp 77761 v 40 Cryptococcus albidus 77763-25 Trichosporon mucoides 77771-25 Trichosporon mucoides 77771-40 Cryptococcus laurentii 77771 v 40 Cryptococcus albidus 77772 -(+) 21 Trichosporon spp 77773-25 Trichosporon mucoides 18

12- BIBLIOGRAPHY 1. C.P. KURTZMAN, J.W. FELL The Yeasts. A taxonomic study, Fourth Revised and Enlarged Edition. Editions Elsevier 1998. 2. BH COOPER, M. SILVA-HUNTER Yeasts of medical importance. Manual of clinical microbiology. Fourth edition. 1985, p 526-541. 3. H. KOENIG Guide de mycologie médicale. Editions Ellipses 1995, p 31-96. 4. H. FRICKER-HIDALGO, B. LEBEAU, P. KERVROEDAN, O. FAURE, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOT AUXACOLOR TM, a new commercial system for yeast identification: evaluation of 182 strains comparatively with ID 32C. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1995; 53(4): 221-5. 5. H. FRICKER, D. MONGET, B. LEBEAU, M. BABOLAT, P. AMBROISE- THOMAS, R. GRILLOT Rapid identification of Candida albicans: evaluation of Rapidec albicans". Study of 444 yeast strains. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1992; 50(2): 103-6. 6. D. SULLIVAN, D. COLEMAN Candida dubliniensis : characteristics and identification. J. Clin. Microbiol. 1998 ; 36(2) : 329-334. 7. H.S.WANG, R.T. ZEIMIS, G.D. ROBERTS Evaluation of a caffeic acid-ferric citrate test for rapid identification of Cryptococcus neoformans. J. Clin. Microbiol. 1977; 6(5): 445-9.

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 10/2005 Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 880050