KOLORIMETRISKT SOCKERASSIMILERINGSTEST FÖR IDENTIFIERING AV MEDICINSKT INTRESSANTA JÄSTARTER

Transkript

1 AUXACOLOR TM TEST KOLORIMETRISKT SOCKERASSIMILERINGSTEST FÖR IDENTIFIERING AV MEDICINSKT INTRESSANTA JÄSTARTER IVD

2 1- KLINISK NYTTA Incidensen av svampinfektioner har ökat markant under de senaste 20 åren, och det gäller speciellt jästsvampinfektioner. Samtidigt har karaktären av dessa infektioner, som är kopplad till ökningen av opportunistiska infektioner, förändrats på ett betydande sätt. På grund av variation av infektionsställen samt mångfald av arter har påvisandet av jästsvamp, i patologiska prov från ytliga eller djupa provtagningsställen, blivit allt viktigare. I samband med uppblossandet av dessa infektioner och den mer omfattande användningen av antimykotika har det vidare uppkommit resistenta patogena stammar, vilket är anledningen till att det nu är så väsentligt att identifiera exakt vilken jästart som ligger bakom infektionen. AUXACOLOR 2 uppfyller dessa krav genom att identifiera de vanligast förekommande arterna i klinisk praxis. Det är lätt att använda och tolka och kan enkelt anpassas till rutinerna vid alla laboratorier. 2- METOD AUXACOLOR 2 kit är ett identifieringssystem baserat på principen med sockerassimilation. Tillväxt hos jästkulturen visualiseras genom färgförändring hos en ph-indikator. I kitet ingår även 3 enzymtest, inkluderande ett test för påvisande av fenoloxidasaktiviteten hos Cryptococcus neoformans. 3- ANVÄNDA TESTTYPER I kitet ingår : en negativ kontroll för att underlätta tolkning av sockerassimilationstestet (blå brunn). 13 sockerassimilationstest, som motsvarar följande sockerarter: - glukos (GLU.) : positiv kontroll - maltos (MAL.) - cellobios (CEL.) - sackaros (SAC.) - trehalos (TRE.) - galaktos (GAL.) - adonitol (ADO.) - laktos (LAC.) - melezitos (MEL.) - raffinos (RAF.) - xylos (XYL.) - inositol (INO.) - arabinos (ARA.) 92

3 Varje sockerart dehydreras i närvaro av en basisk lösning och en phindikator, bromkresolpurpur. Tillväxt hos jästen indikeras av att indikatorns färg slår om från blå till gul, samt grumling av brunnen. Ett enzymatiskt test för att påvisa N-acetyl-galaktosaminidasaktivitet (hexosaminidas: HEX). Positiv reaktion motsvaras av gul färg i brunnen, ett negativt test förblir färglöst. Ett fenoloxidastest (POX) för påvisande av fenoloxidasaktivteten hos Cryptococcus neoformans kopplat till ett test för påvisande av prolinarylamidasaktivitet (PRO). - brun färg i brunnen indikerar positiv fenoloxidasaktivitet (POX). - gul färg indikerar positiv prolinarylamidasaktivitet (PRO). - färglös brunn eller grå färg indikerar negativ reaktion för båda testen. Förekomsten av POX och PRO testen i samma brunn förklaras av att de två testen aldrig är positivia samtidigt. De enda möjliga profilerna är: POX negativ/pro negativ; POX positiv/pro negativ; POX negativ/pro positiv, med den kolorimetriska tolkningen ovan. SKISS ÖVER MIKROTITERPLATTA AUXACOLOR TM 2 C.Neg GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. REF BIO-RAD LOT 93

4 4- KITETS INNEHÅLL Låda med 20 test, art.nr , innehållande: 20XR1, individuellt förpackade 16-brunnars mikrotiterplattor 20 st självhäftande filmer 20XR2, färdigberedda suspensionsmedier 1 häfte resultatblad 1 bipacksedel 5- VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER VID ANVÄNDNING Använd ej kitet efter angivet utgångsdatum. Hantera alla prover som potentiellt infektiöst material och tillämpa aseptisk laboratorieteknik vid odlingarna. Kassera kontaminerat material i kärl avsett för laboratorieavfall. 6- FÖRVARING AV REAGENS Reagensen är stabila fram till det utgångsdatum som anges på etiketten om de förvaras oöppnade i sina individuella förpackningar vid en temperatur mellan 2 och 8 C. Sedan förpackningen till en enskild mikrotiterplatta brutits kan den förvaras i rumstemperatur i 10 timmar utan någon funktionsförsämring. 7- UTFÖRANDE Material som ingår Se Kitets innehåll Material som behövs men som ej ingår Opacitetskontroll-kit, art.nr Öglor för skörd av jästkolonier. Pipetter för mätning och tillsats av 100 µl. Desinfektionskärl eller autoklavpåse för eliminering av kontaminerat material. Eventuellt en densitometer. 94

5 Steg för steg Låt reagensen anta rumstemperatur innan de används. 1. Ympning av mikrotiterplattan - Förbered ympen från en h kultur på Sabouraud-medium (+/- antibiotika) eller kromogent medium (CandiSelect TM 4 kod 63746). Ympa under sterila förhållanden suspensionsmediet (R2) med en tillräcklig mängd (1 5 identiska kolonier) rena stamkolonier (fria från bakterier och andra jästarter), för att mediet ska få en opacitet motsvarande den opacitetskontroll som ingår i kitet art.nr (1,5 McFarland). För att resultaten ska bli korrekta är det viktigt att man är noga med att opaciteten hos ympsuspensionen blir den rätta. - Vortexa suspensionen. - Använd en pipett för att suga upp och överföra 100 µl ympsuspension till varje brunn på mikrotiterplattan (R1) suspensionsmediet (R2) C.Neg GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. - Täck över mikrotiterplattan (R1) med den självhäftande filmen och kontrollera att vidhäftningen är fullkomligt homogen. Inkubera i 48 timmar (vid behov 72 h) vid 30 C (± 2 C). 2. Avläsning Den slutliga avläsningen bör ske efter 48 timmar. Även om avläsningen efter 24 timmar kan ge en korrekt kod och möjliggöra identifieringen av vissa jästsorter, rekommenderar vi att den slutliga tolkningen sker efter 48 timmar. 100 µl 95

6 96 Om det råder misstankar om kryptokockinfektion, bör den slutliga avläsningen utföras efter 72 timmar pga. dessa mikroorganismers långsamma tillväxt. För att underlätta avläsningen, kan man titta genom mikrotiterplattans undersida eller dra av den självhäftande filmen. Om det skulle bli nödvändigt med ytterligare inkubation måste man dock respektera gängse krav på sterilitet. I så fall sätter man försiktigt tillbaka filmen, läser av resultaten genom att jämföra med tabellen på sidan 99 och antecknar dem på de speciellt utformade resultatbladen. 3. Tolkning av resultat a) Guide för tolkningen av färgreaktionerna Brunn Test Färg/Tolkning Negativ kontroll C. Neg. Negativ kontroll Blå Negativ Positiv GLU Glukos (Positiv kontroll) MAL Maltos SAC Sackaros GAL Galaktos LAC Laktos RAF Raffinos Blå (a) Gul (b) INO Inositol eller eller Grön Färglös CEL Cellobios TRE Trehalos ADO Adonitol MEL Melezitos XYL Xylos ARA Arabinos Detektering av N-acetylgalaktosaminidasaktivitet HEX Färglös Gul (hexosaminidas) Sockerassimilationstest Enzymtest POX/PRO Detektering av fenoloxidasaktivitet av Cryptococcus neoformans (POX) Detektering av prolinarylamidasaktivitet (PRO) Färglös eller Grå (c) Brun Gul (b)

7 (a) Blågrå och blågrön betraktas som negativa. (b) Ljusgul och gulgrön betraktas som positiva. (c) Vissa stammar av Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp och Cryptococcus laurentii kan orsaka en gråbrun färging av brunnen. I detta fall är reaktionen negativ och vid poängberäkningen bör värdet noll tilldelas denna brunn. b) Poängberäkning För identifiering använder man 16 biokemiska karakteristika, fördelade på 15 brunnar (POX- och PRO-testen är kombinerade i samma brunn). En profil i form av ett femsiffrigt tal tas fram genom att kombinera värdena för följande 15 test i grupper om 3: 1:a siffran Glukos Maltos Sackaros 2:a siffran Galaktos Laktos Raffinos 3:e siffran Inositol Cellobios Trehalos 4:e siffran Adonitol Melezitos Xylos 5:e siffran Arabinos Hexosaminidas Fenoloxidas Alla negativa reaktioner får poängen noll. Brunnar med positiv reaktion poängsätts beroende på vilken plats de har i tripletten: 1 för position 1 2 för position 2 4 för position 3 i tripletten Genom att lägga ihop de tre poängen får man en av siffrorna i den femsiffriga profilen. T.ex.: Glukos + Maltos + Sackaros = den första siffran är 7 Prolinarylamidasaktivitet (PRO: POX/PRO-brunnen) poängsätts som + eller beroende på vilken färg som observeras. - gul brunn (ljusgul och gulgrön betraktas som positiva): PRO-testet positivt. - färglös eller grå brunn (en gråbrun färgning betraktas som negativ): PROtestet negativt. 97

8 Ytterligare två siffror beräknas enligt metoden ovan och kompletterar koden. De representerar följande egenskaper : Pigmentering (PI.) Artrosporer (AR.) Kapsel (CA.) Mycel/pseudomycel (MY. PS MY) Klamydosporer (CHL.) Tillväxt vid 37 C Den slutliga identifieringen baseras på en kombination av de biokemiska testen och kompletterande kriterier (morfologiska och metaboliska) som fastställs under gängse betingelser. Exempel: STAM GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX.POX./PRO. PI. AR. CA. MY./PS-MY. CHL. 37 C Stam nr Stam nr Stam nr Beräkning av motsvarande sifferprofiler och identifiering: Sifferprofil Stam Kompletterande Identifiering Biokemiska test PRO test egenskaper Strain N C. albicans Strain N C. glabrata Strain N Cryptococcus neoformans Efter att sifferprofilen har fastställts, söks denna upp i databasen på sida 15. Om erhållen sifferprofil ej finns med i listan (sällsynt profil) gå till tolkningstabellen (sida 99). 98

9 Tolkningstabell GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. PI. AR. CA. MY. CHL. 37 C ART PS -MY. C. ALBICANS (-) V V + (-) V + (-) (-) + C. ALBICANS 2 (1) V V - V V (-) + C. CIFERRII (-) + V V C. DUBLINIENSIS V + (-) - (+) (-) C. FAMATA V (-) V V - - V V C. GLABRATA (+) C. GUILLIERMONDII (-) (-) + (-) + (-) C. INCONSPICUA (+) V C. KEFYR (-) + - V - (+) - (+) - V V (-) - + C. KRUSEI (+) C. LIPOLYTICA (+) (+) - - (+) (-) V C. LUSITANIAE (-) - (+) V + + (-) V - - V (-) - + C. NORVEGENSIS (-) (+) C. PARAPSILOSIS (-) V + (-) + (-) V C. RUGOSA (-) V - V - (+) - - V C. SAKE V V + V + V - + (-) - V C. TROPICALIS (-) V + + (-) (+) C. ZEYLANOIDES (+) (+) + (-) V (+) - + (-) (+) C. ALBIDUS V V V V + V V + + V - - V V C. LAURENTII C. NEOFORMANS V + V V V + (-) V V - + (-) C. UNIGUTTULATUS V - V + - V V + + (-) V - - V G. CANDIDUM (-) V (+) - (+) (+) G. CAPITATUM V K. APICULATA R. GLUTINIS V - V - V + V + V V V V R. MUCILAGINOSA (RUBRA) + V + V V V V V V V V V S. CEREVISIAE + + (-) + V - + (-) - - V - V (+) - V T. ASAHII + + V V + V V V V V + (-) T. INKIN V (-) + + (-) V + (-) T. MUCOIDES (-) V T. SPP (-) + (-) + V V + + (-) V V + (-) + (-) V - - (+) V P. WICKERHAMII (2) (-) V

10 TECKENFÖRKLARING (1) C. albicans 2: motsvarar stammar som tidigare klassificerades under arten C. stellatoidea; förekommer sällan. (2) P. wickerhamii: en patogen encellig alg som lätt växer i jästisolat och makroskopiskt påminner om jäst. Vid mikroskopisk undersökning ses runda celler som delar sig genom inre septumbildning. + : Testet positivt för minst 99 % av stammarna - : Testet negativt för minst 99 % av stammarna V : Varierande testresultat +(-) : Testet positivt för minst 95 % av stammarna eller fördröjd testreaktion (48 h eller 72 h) -(+) : Testet negativt för minst 95 % av stammarna PI. : Pigmentering AR. : Artrosporer CA. : Kapsel MY. : Mycel (PCB-medium) PS-MY. : Pseudomycel (PCB-medium) CHL. : Klamydosporer 37 C : Tillväxt vid 37 C 100

11 c) Kommentarer 1- Identifieringen av jästsvampar baseras både på deras biokemiska karaktäristika, vilka fastställs med AUXACOLOR 2 mikrotiterplatta, och på deras morfologiska egenskaper, vilka lämpligen bestäms på PCBmedium eller eventuellt på RAT-medium. Identifieringen skall baseras på alla dessa data. Tag även i beaktning provets ursprung och det kliniska sammanhanget för att tolka resultaten. 2- Arterna Rhodotorula glutinis och Rhodotorula mucilaginosa finns upptagna i tolkningstabellen, men saknar sifferprofil, då många av deras egenskaper kan variera. Båda dessa arter kännetecknas av laxrosa pigmentering hos kolonierna, vilken ofta uppträder först efter 48 h odling. 3- Jästarter av släktet Cryptococcus bildar en kapsel, som kan vara mycket väl avgränsad. 4- Morfologin hos jästarten Kloeckera apiculata är karakteristisk och gör att den kan särskiljas från andra arter med samma sifferprofil: en mycket liten, avlång jästsvamp med bipolärt placerade knoppar (citronliknande). 5- Det kan vara värdefullt att utföra kompletterande test för att bekräfta identifieringen av vissa jästarter eller för att särskilja två arter med samma sifferprofiler: - kaliumnitratassimilation kan särskilja jästarter som Cryptococcus albidus (positiv) och Cryptococcus laurentii (negativ) eller Rhodotorula mucilaginosa (negativ) och Rhodotorula glutinis (positiv). - testet för ureas på urea-indol-medium bekräftar identifiering av Cryptococcus-släktet. Testet är positivt inom 4 h för Cryptococcus neoformans och inom 24 h för övriga arter. - förmåga att reducera tetrazolium särskiljer Candida tropicalis (positiv) och Candida lusitaniae (negativ). 101

12 8- TESTETS PRESTANDA AUXACOLOR 2 kit kan identifiera 31 jästarter och en art av encellig alg; Prototheca wickerhamii. I jämförelse med AUXACOLOR kan 7 nya jästarter identifieras med detta kit: Candida ciferrii, Candida dubliniensis, Candida sake, Kloeckera apiculata, Trichosporon asahii, Trichosporon inkin, Trichosporon mucoides. En prospektiv klinisk studie och en retrospektiv studie om 120 stammar, representativa för de arter som identifieras med AUXACOLOR 2 kit, visade: - 92,5 % av de testade stammarna identifierades inom 48 h (59,2 % inom 24 h), tack vare användandet av nya test i kitet (hexosaminidas- och prolinarylamidas-testen), men också tack vare kompletteringar av listan med arternas sifferprofiler. - AUXACOLOR 2 kit kan särskilja alla stammar av Candida dubliniensis (5 stammar testade) och Candida albicans (15 stammar). - Med det kombinerade prolin-arylamidas-testet och fenoloxidastestet läggs ytterligare ett test till mikrotiterplattan för att identifiera stammar av Candida glabrata (9 stammar som särskiljs från Candida zeylanoides) eller särskilja Candida krusei (6 stammar) och Candida lipolytica (4 stammar). - POX-testet gjorde det möjligt att påvisa fenoloxidasaktiviteten hos Cryptococcus neoformans för de 4 testade stammarna. 9- BEGRÄNSNINGAR 1- AUXACOLOR 2 kit tillåter endast identifiering av de jästarter som anges i tolkningstabellen. 2- För de medtagna arterna anger databasen endast de vanligast förekommande sifferprofilerna. En sifferprofil som ej finns med kan motsvara en sällsynt profil för en medtagen art, eller en art som inte finns med. För kompletteringar av informationen i databasen hänvisas till tolkningstabellen. 3- I undantagsfall kan sällsynta arter, ej refererade här, ha sifferprofiler identiska med de medtagna arterna. 102

13 4- AUXACOLOR 2 mikrotiterplatta skall endast användas med rena stammar. Blandkultur av flera jästarter påvisas i 16 % av proven och kan iakttas i isolerade kolonier. Odling på CandiSelect 4 eller på PCB-medium, parallellt med AUXACOLOR 2 testet, kan avslöja eventuell blandkultur. 5- I flera fall kan isoleringsmediet påverka färgförändringen hos vissa test efter 24 h (xylos, hexosaminidas) utan att störa identifieringen av jästarterna efter 48 h. 6- Fenoloxidas/prolinarylamidas-testet: - sällsynta stammar av Cryptococcus neoformans uppvisar eventuellt ej fenoloxidasegenskapen. - några stammar av Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp och Cryptococcus laurentii kan inducera en kastanjegrå färg i brunnen. I detta fall är reaktionen negativ och vid beräkningen skall brunnen tilldelas värdet noll. - vissa stammar av Prototheca wickerhamii kan uttrycka prolinarylamidasegenskapen. 7- Fall då resultatet går från positivt till negativt, dvs. då färgen av en brunn som först tolkades som positiv övergår till negativ, bör ej beaktas. T.ex., en brunn som är gul efter 24 och 48 timmar och som sedan blir grön eller blå efter 48 eller 72 timmar betraktas som positiv. 8- Däremot, skall en ändring från negativ till positiv under de första 72 timmarna uppmärksammas: berörd brunn skall anses positiv. T.ex., en brunn som är blågrå eller blågrön efter 24 eller 48 timmar och som blir gul vid 48 eller 72 timmar skall betraktas som positiv. 10- KVALITETSKONTROLL AUXACOLOR TM 2 mikrotiterplattor (R1) genomgår kvalitetskontroll med hjälp av en panel av rena stammar med väl definierade biokemiska egenskaper. 103

14 Kontroll av kitets aktivitet kan utföras på laboratoriet med hjälp av följande referensstammar: STAMMAR NEG. GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./PRO. C. NEOFORMANS ATCC V V - V V V T. MUCOIDES BCCM/IHEM C. LIPOLYTICA IP Egenskaper som observeras efter 48 h inkubation med stammar odlade på Sabouraud-agar. ATCC: American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA. BCCM / IHEM: Belgian Co-ordinated Collections of Micro-organisms / IHEM Culture Collection, Scientific Institute of Public Health - Louis Pasteur, Mycology Section, Rue J. Wytsmanstraat 14, B-1050 Brussels. IP: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, Paris cedex 15, France. 11- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Samtliga reagenser framställda av Bio-Rad bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagning av råmaterialen till slutlig försäljning av produkterna. Varje lot av färdiga produkter genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om den överensstämmer med fastställda acceptanskriterier. Anteckningarna rörande produktionen och kontrollen av varje enskild lot bevaras av Bio-Rad. 1 S 104

15 Code (+) 05 Candida krusei Geotrichum capitatum (-) 01 Candida zeylanoides (-) 05 Candida lipolytica Candida norvegensis v 04 Candida inconspicua (-) 01 Candida zeylanoides (-) 05 Candida lipolytica (+) 21 Geotrichum candidum Kloeckera apiculata Candida norvegensis (-) 05 Candida lipolytica Candida norvegensis Candida glabrata (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides Geotrichum capitatum (-) 05 Candida lipolytica v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa (-) 05 Candida lipolytica v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa (+) 21 Geotrichum candidum v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa (+) 21 Geotrichum candidum Prototheca wickerhamii (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides (-) 01 Candida zeylanoides Candida glabrata Prototheca wickerhamii Candida albicans Candida albicans 2 Code Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr 15

16 Code Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Saccharomyces cerevisiae v 01 Candida sake v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 01 Candida sake v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Candida dubliniensis Candida dubliniensis Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis v 05 Candida parapsilosis Candida albicans Candida albicans v 05 Candida parapsilosis v 05 Candida parapsilosis Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Saccharomyces cerevisiae Candida dubliniensis Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis Candida dubliniensis Saccharomyces cerevisiae v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida dubliniensis Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans v 05 Candida parapsilosis Candida albicans Candida albicans (+) 05 Candida tropicalis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida albicans (+) 05 Candida tropicalis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida albicans Candida albicans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans 16

17 Code Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 05 Candida lusitaniae (+) 05 Candida tropicalis v 05 Candida lusitaniae v 05 Candida lusitaniae v 01 Candida sake (+) 05 Candida tropicalis v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus Candida guilliermondii v 05 Candida lusitaniae v 01 Candida sake Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Trichosporon inkin Trichosporon inkin Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii (+) 21 Trichosporon spp (+) 25 Trichosporon spp Trichosporon asahii (+) 21 Trichosporon spp Code (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 25 Trichosporon spp Trichosporon asahii v 05 Candida lusitaniae (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp Trichosporon asahii Trichosporon asahii (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 25 Trichosporon spp (+) 25 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans 17

18 Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii Candida ciferrii v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 00 Candida famata Candida guilliermondii v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata Candida guilliermondii v 00 Candida famata Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii Candida ciferrii v 40 Cryptococcus albidus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata (+) 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp (+) 21 Trichosporon spp v 40 Cryptococcus albidus Trichosporon mucoides Trichosporon mucoides Cryptococcus laurentii v 40 Cryptococcus albidus (+) 21 Trichosporon spp Trichosporon mucoides 18

19 12- BIBLIOGRAPHY 1. C.P. KURTZMAN, J.W. FELL The Yeasts. A taxonomic study, Fourth Revised and Enlarged Edition. Editions Elsevier BH COOPER, M. SILVA-HUNTER Yeasts of medical importance. Manual of clinical microbiology. Fourth edition. 1985, p H. KOENIG Guide de mycologie médicale. Editions Ellipses 1995, p H. FRICKER-HIDALGO, B. LEBEAU, P. KERVROEDAN, O. FAURE, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOT AUXACOLOR TM, a new commercial system for yeast identification: evaluation of 182 strains comparatively with ID 32C. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1995; 53(4): H. FRICKER, D. MONGET, B. LEBEAU, M. BABOLAT, P. AMBROISE- THOMAS, R. GRILLOT Rapid identification of Candida albicans: evaluation of Rapidec albicans". Study of 444 yeast strains. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1992; 50(2): D. SULLIVAN, D. COLEMAN Candida dubliniensis : characteristics and identification. J. Clin. Microbiol ; 36(2) : H.S.WANG, R.T. ZEIMIS, G.D. ROBERTS Evaluation of a caffeic acid-ferric citrate test for rapid identification of Cryptococcus neoformans. J. Clin. Microbiol. 1977; 6(5):

20

21 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /2005 Fax.: +33 (0) code: