Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800)

Transkript

1 Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Kursens namn: BMLVA II 22,5 högskolepoäng Kurskod: BL1004 Kursansvarig: Rolf Pettersson, Charlotte Sahlberg Bang Datum: 18/ Skrivtid: 240 min Totalpoäng: Poängfördelning: Birgitta Olsén: Charlotte Sahlberg Bang: Gunilla Lundberg: 15p 16 p p Godkänd Väl godkänd 60 % av totala poängen 85 % av totala poängen Ange svaren till respektive lärare på separata skrivningspapper Skriv kodnr på varje ark du lämnar in Redovisa alla beräkningar av uppgifter Skriv endast på ena sidan av arket Frågeformuläret får behållas av studenten Tentamensåterlämning: sker den 8/4-11 p269, därefter via studerandeexpeditionen.

2 Charlotte S Bang Fråga 1. Nedan följer en beskrivning från Diagnostisk analys av influensavirus - isolering på vävnadskultur Indikation Misstanke om influensainfektion och/eller uppodling av virus för stamförrådshållning och karaktärisering av svenska stammar. SMI:s roll som referenslaboratorium och WHO:s nationella influensacentrum kräver att influensaisolering görs. Provmaterial Nasopharyngsutsug (NPH) svalgsköljningsvätska, svalgprov, bronkeoalveolar-lavage BAL, liquor eller cellkulturer från annat laboratorium. Analysmetod Isolering sker på den för influensavirus känsliga cellinjen MDCK (hundnjure). Vid växt av influensavirus angrips cellerna och s.k. cytopatogen effekt (CPE) uppstår, vilken kan ses i ljusmikroskop.verifikation och typning av influensavirus sker med immunofluorescens (IF) hemagglutination (HA) och hemagglutinationsinhibition (HAI). Arbetet utförs aseptiskt för att undvika kontaminationer med bakterier och svamp. Till cellodlingsrör/flaskor med konfluerande cellmatta sättes provmaterial och inkuberas vid C. CPE syns ofta inom 1 vecka. HA göres på rörens/ flaskornas odlingsmedium vid CPE eller misstanke på CPE. Med utgång från beskrivningen besvara följande frågor: a) Redogör för vad som avses med CPE, och hur man kan upptäcka CPE, ge även exempel på vad det kan innebära 2p b) Redogör för hur influensavirus kan detekteras mha immunofluorsecens, rita gärna. 2p c) Beskriv vad som avses med hemagglutination 2p

3 Fråga 2. Nedan följer en beskrivning från Sjukdomsinformation om meticillinresistenta gula stafylokocker (MRSA) Gula stafylokocker (Staphylococcus aureus) är bland våra vanligaste omgivningsbakterier. De flesta barn och vuxna är periodvis bärare av dessa bakterier, vanligen i näsan, men även på andra slemhinnor och på huden. Risken för bärarskap på huden är störst om den är skadad t.ex. av eksem eller småsår. Bärarskap är också vanligare hos sjukvårdspersonal, injektionsmissbrukare, diabetiker och dialyspatienter. De gula stafylokockerna är den vanligaste orsaken till variga sårinfektioner. Inkapslade bakterier ger upphov till bölder eller varhärdar. Ett speciellt problem är sådana infektioner i vårdmiljö, t.ex. sårinfektioner efter operation eller infektion av främmande material inne i kroppen (proteser m.m.). Infektioner med bakterieväxt i blodet och på hjärtklaffar är mycket allvarliga och förknippade med hög dödlighet. Gula stafylokocker kan också orsaka lunginflammation, hjärnhinneinflammation och infektion i skelett och leder. Meticillinresistenta gula stafylokocker (MRSA) är stammar av gula stafylockocker som är resistenta mot flertalet antibiotika framförallt av betalaktamtyp. Infektioner med MRSA-stammar kan göra att ovanstående sjukdomstillstånd som gula stafylokocker kan orsaka blir svåra att behandla. Historiskt sett har MRSA varit ett utpräglat vårdrelaterat problem, därav den gamla benämningen sjukhussjuka. Under de senaste åren har denna bild dock förändrats och infektioner med MRSA associeras i allt högre grad med smitta ute i samhället. Orsakande mikroorganism, smittvägar och smittspridning Meticillinresistenta gula stafylokocker (MRSA) har utvecklat resistens (motståndskraft) mot de penicilliner och penicillinliknande antibiotika (betalaktamantibiotika) som vanligen används mot stafylokockinfektioner. Redogör för hur du på laboratoriet kan bestämma att en bakteriestam är en Staphylococcus aureus genom att redogöra för följande metoders bakgrund, utförande med inkubering, avläsning samt tolkning av dessa utifrån frågeställningen. a) Gramfärgning 2p b) Katalastest 2p c) Koagulastest 2p d) DNastest 2p e) Vilken metod använder du för att screena meticillinresistens hos S.aureus? 1p f) Vilken metod använder du för att konfirmera meticillinresistens hos S.aureus? 1p

4 Birgitta Olsen Fråga 3 Several cell-surface proteins anchor to the pneumococcal cell wall by interactions with phosphoryl choline residues on teichoic and lipoteichoic acids. These cholinebinding proteins include the autolysins LytA, LytB and LytC, which are enzymes that decompose the peptidoglycan and are thought to be important during cell wall growth and turnover.lyta is the major pneumococcal autolysin responsible for the spontaneously lysis that occurs when pneumococci reach the stationary phase of growth. Texten är hämtad från: Skovbjerg S, Inflammatory mediator response to Gram-positive and Gram-negative bacteria in vitro and in middle ear infections. Avhandling, Göteborgs universitet, a) Om du vill odla ett prov där du misstänker att det kan finnas pneumokocker, vilket medium väljer du att odla provet på? Varför? (3 p) b) Pneumokocker kan vara svåra att skilja från normalflore-streptokocker. Beskriv en metod som kan användas för att skilja dem åt. (3 p) c) Hur ser bakteriekolonierna ut då pneumokockernas autolysin har påverkat bakteriecellerna? (1 p) d) Teikonsyra och lipoteikonsyra är virulensfaktorer hos Grampositiva bakterier. De är alltså immunogena. Beskriv en tänkbar metod som kan användas för att påvisa framför allt invasiv infektion orsakad av Grampositiva bakterier, då infektionen inte kan vetrifieras med odling. (3 p) Fråga 4 STREPTOCOCCAL GROUPING KIT A latex agglutination test for the identification of streptococcal groups A, B, C, D, F and G. Introduction Lancefield showed that the majority of pathogenic streptococci possess specific carbohydrate antigens, which permit the classification of streptococci into groups. These streptococcal group antigens can be extracted from the cells and their presence demonstrated with latex particles previously coated with group-specific antibodies. These latex particles will agglutinate in the presence of homologous antigen, but will remain in smooth suspension in the absence of such antigen. The Oxoid Streptococcal Grouping Kit is such a latex agglutination test for the identification of the streptococcal group and reagents are provided for groups A, B, C, D, F and G. The use of an enzymatic extraction procedure considerably shortens the time required for antigen extraction and much improves the antigen yield, partially for Group D streptococci. Texten är hämtad från: Oxoid Diagnostic Reagents, Streptococcal grouping kit, Beskriv metodiken för latexagglutination. (3 p)

5 Fråga 5 När du på laborationen bestämde halten transferrin i plasma så använde du en sk coating antibody (infångningsantikropp) som enligt beskrivningen var en G/α-Human Transferrin antibody (G=goat, α=anti) och en detektionsantikropp G/α-Human Transferrin HRP conjugated antibody (G=goat, α=anti). a) Beskriv skillnaden mellan dessa och hur de användes. b) Vad innebär det att en antikropp betecknas som goat-anti-human? (2 p)

6 BMLV A: II TENTAMENSFRÅGOR 15 poäng Gunilla A. Lundberg 6. Redogör för vad som menas med hemoglobin A (HbA), HbA2 och HbF (3p) 7. a. Vilket grundämne behövs unikt för sköldkörtelns tillverkning av sina hormoner? b. Vid Graves sjukdom, bildas specifikt riktade auto-antikroppar, vilket leder till att sköldkörteln tror att den är stimulerad från hypofysen och därmed utvecklas en överfunktion av sköldkörteln och resultatet blir en hög ämnesomsättning. Vad är auto-antikroppen specifikt riktad mot? Fullständigt namn och förkortning skall anges! 8. a. Triglycerider bestäms oftas enzymatiskt i serum. Redogör för hur. (2p) b. Ett alternativ till att mäta totalkolesterol, HDL-kolesterol samt beräkna LDL-kolesterol är att mäta apoa-1 och apob. Kvoten apob/apoa1 identifierar bättre än tidigare mätningar risken att drabbas av hjärtinfarkt. Ange vilka de två lipoproteiner är som apoa-1 respektive apob återspeglar koncentrationen av. 9. a. Förklara varför vi idag analyserar för CK-MB och inte total CK som en markör för AMI. (2p)

7 b. Ange vilken av kurvorna A,B,C och D, i figuren till vänster, som motsvarar TnT respektive CK-MB. 10. a. Vilket akutfasprotein analyseras i princip alltid för i ett tidigt skede vid trauma, infektion och inflammation? b. Vi talar om akutfasproteiner som positiva alternativt negativa, då vi mäter dem i plasma/serum. Vad menar vi då? (2p) c. Namnge två negativa akutfasproteiner.