Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen.

Transkript

1

2 Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen. PCR analys för påvisande av resistensgenen ex: mec-genen (MRSA) Sekvenseringen, resistenstypning med pulsfältsgelelektrofores (PFGE). Anmälan till SMI klon?

3 Resistensbestämning tä i Bestämma känsligheten hos bakterier för antibiotika bedöms ha betydelse för infektionsförloppet Allmänodling: Stafylokocker, Streptokocker, Enterokocker, Urin: E coli, Proteus, GBS, Övre luftvägar: Haemophilus, Moraxella, Streptokocker, Pneumnokocker,

4 Diskdiffusion i Plocka 1 eller 5-10 kolonier Slammar i PBS Svabbning med bomullspinne jämt över agarn viktigt med jämn fördelning för ett trovärdigt resultat Filterlappar l impregnerade med antibiotika tik prickas på inokulatet Prediffundering d i och inkubering i ö.n. Avläsning av hämningszonernas diameter, där det inte växer bakterier, med ett skjutmått.

5 Stammens känslighet mot preparaten benämns med: S = sensitive I = indeterminant R = resistent Exempel: S. aureus (Klindamycin) 28/21 S > 28 mm I mm R < 21 mm

6 E-test t för MIC-bestämning Plastremsa med en kontinuerlig gradient av antibiotika som placeras på inokulatet Zonen som bildas anges utifrån den lägsta koncentrationen i mg/l av antibiotika som hämmar bakterietillväxt Mikrokolonier Minst 2 S annars måste en utvidgad bestämning göras

7 Utvidgad d resistensbestämning tä i Finns färdiga prickningsscheman för bakterier, men när hämningszonerna blir för små (endast en S) måste man utvidga bestämningen fler behandlingsmöjligheter

8 Alla fynd av S.aureus undersöks på förekomst av meticillinresistens. Alla fynd av enterokocker som ändå resistensbestäms undersöks på förekomst av vankomycinresistens. Fecesprover tagna i sluten vård för diagnostik av Clostridium difficile undersöks på förekomst av VRE (se VRE-buljong) buljong). Representativt för patienter med längre sjukhusvistelse (kolonisation), mer antibiotikabehandling (selektion) och svårare sjukdomsbild än övriga patienter. Multiresistenta enterobacteriaceae t (fr a E.coli, Klebsiella ll spp men även andra arter) uppvisar ofta förekomst av ESBL Fynd av ESBL ska anmälas som laboratorieanmälan. Klebsiella pneumoniae med karbapenemas (KPC) bör verifieras på referenslaboratorium och föranleda laboratorieanmälan.

9 Rutin: Odling, isolering, resistensbestämning Fynd : multiresistent St. aureus Anmälning till vårdhygien PCR - påvisande av mec och nuc gen PFGE, typning av MRSA

10 BBL CHROMagar MRSA är ett selektivt och differentierande medium för en kvalitativ, direkt diagnostisering av meticillin resistenta Staphylococcus aureus (MRSA) för att förhindra och kontrollera MRSA infektioner I sjukvården. Mediumet är inte tänkt att användas som diagnostiseringsmetod för MRSA infektion. BBL CHROMagar MRSA innehåller cefoxitin för detiektionen av MRSA.

11 MW MW

12 FIGUR 4. Molekylär typning med hjälp av PFGE som visar släktskap mellan olika ESBL producerande E. coli, där isolaten tillhörande Clone 1 respektive 2 är mycket lika och relaterade till lokal spridning. Bilden tagen av Hong Fang, Karolinska Universitetssjukhuset, Huddinge.

13

14

15 ESBL (Extended spektrum betalaktamas) Enterobakteriaceae, E-coli, Klebsiella pneumoniae PCR Laboratoriekriterier för diagnos att påvisa Resistens mot cefalosporiner ESBL produktion eller gen för betalaktamas ESBL bakterie analys: MLSA (multi-lokus sekvens analys) MLVA ( multi-lokus variable number tandem repeats analys) Karakteriserad med avseende på sekvens Korrelera e sannolikhet av överföring ö av ESBL genen e och spridning av bakterie e Mikro array hybridisering teknik

16 VRE (vankomycin resistenta enterokocker) VRE med VanA gen Odling på specifika medier samt selektiv anrikning i i buljong PCR teknik att påvisa Van A, Van B gen E.faecalis och E.faecium som bildar genen

17 VRE-buljong med antibiotika Screen av faecesprover- VRE buljon med vankomycin 32mg/L Skiljer ut VanA och VanB Sekundär odling på esculin platta för enterokock diagnostik Olika resistensbestämning mot ampicillin, aminoglykosid

18 /ds/p oduc e /.asp Qnova - resistensbestämning