Laborationshandledning. Diures. Biomedicinsk vetenskap II för receptarier, Vt-11

Transkript

1 UMEÅ UNIVERSITET Institutionen för molekylärbiologi Laborationshandledning Diures Biomedicinsk vetenskap II för receptarier, Vt-11 Laborationsassistenter: Sofie Ekestubbe Maria Liljeqvist Christopher Andersson

2 Introduktion -Njurarnas viktigaste uppgift är att producera urin. Urinproduktionen regleras fysiologiskt främst av hormonet ADH (antidiuretiskt hormon). ADH, även kallat vasopressin, syntetiseras i hypothalamus och transporteras därefter i granuler via axonerna till nervterminaler i hypofysen. Insöndring av ADH regleras via osmo- och baroreceptorer. -Om insöndringen av hormonet från hypofysen ökar resulterar detta i ökat vattenåtertag i nefronen och urinproduktionen minskar. -En minskad ADH-sekretion medför däremot ett minskat vattenåtertagande i nefronen och urinproduktionen ökar. -Olika substanser som intas av organismen påverkar ADH-sekretionen på skilda vis. Exempelvis ökar nikotin, ADH-insöndringen. Även stress, smärta och känslosvallningar kan ha denna effekt. Alkohol eller en stor volym vatten har dock motsatt effekt, dvs hämning av ADH-sekretionen. Därutöver kan urinens volym och sammansättning påverkas av faktorer oberoende av ADH. -Ett annat viktigt hormon som reglerar urinproduktion är Aldosteron, som syntetiseras i binjurebarken. Blodförlust eller sänkt blodtryck aktiverar syntesen av Aldosteron via reninangiotensinsystemet. Tips: Läs mer i kapitel i er kursbok, Saladin: Anatomy and Physiology. Endocrinology an Integrated Approach. Nussey and Whitehead

3 Material 10 ml-provrör med kork (ca 20 st/fp) Bägare 1000 ml (1 st/fp) Mätglas ml (1 st/fp) Peleusbollar (1st/fp) Engångspipetter i plast 10 ml (1 st/fp) Flamfotometer H 2 0 (drygt 1 l/fp) Saltlösning fys. 0,9% (drygt 1 l/fp) Kaffe (drygt 1 l /fp) Öl (drygt 1 l/fp) Te (svart) (drygt 1 l/fp) Syfte I den här laborationen skall ni undersöka hur olika drycker påverkar urinmängden och joninnehållet. Ni ska tolka data från alla försökspersoner och genom dessa beskriva verkningsmekanismen för de olika dryckerna. Utförande Försöket genomförs vid en tidpunkt då njurfunktionen är nära basalnivå, i detta fall på morgonen efter en lätt frukost utan vätskedrivande drycker. Utse en person i gruppen som försöksperson. För att beräkna mängden vätska som ska intas utgår ni från att en man som väger 75 kg och är 1,85 m lång dricker 1 liter vätska. Volymen vätska som ska intas korreleras till blodvolymen och enligt nedanstående formel är blodvolymen för denna man 5,2 l. Beräkna försökspersonens blodvolym mha nedanstående formel och därefter hur mkt vätska som skall intas. I några fall skall annan volym intas, vilket anges i tabellen på nästa sida. Man: V (l)= 0,3669 x L 3 (m) + 0,03219 x vikt (kg) + 0,6041 Kvinna: V (l)= 0,3561 x L 3 (m) + 0,03308 x vikt (kg) + 0,1833 Exempel: Anna är 1.65 m och väger 50 kg Kvinna: V (l)= 0,3561 x (m) + 0,03308 x 50 (kg) + 0,1833 V(l)= /5.2=0.66 l Följ intruktionerna i tabellen på nästa sida. Vid dagens slut skall ni alltså ha 9 prover som ni mäter volymen och joninnehåll på. Ni behöver bara spara 10 ml prov till Na+ mätning men se till att komma ihåg att mäta och anteckna volymen för varje provtillfälle. Lycka till!

4 Anmärkn. FP 1 FP 2 FP 3 FP 4 FP 5 FP 6 *** *** *** *** *** *** Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn Kväll f. Inget intag av proteinrik kost efter kl. 20. Minst 3 glas H 2 0 skall intas före sänggåendet försök Morgonen Frukosten ska vara lätt, proteinfattig och ej inneh. kaffe/te. Intas minst 1,5 h före försöket. Töm blåsan 30 min. innan vi träffas på morgonen. Försöksstart Blåstömn Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn. Direkt Inget H 2 0 Fys. Kaffe Te (svart) Alkohol efter saltlösning 8 cl för kvinnor 12 cl för män 0,5 h Blåstömn. + H h Blåstömn. + H 2 0 1,5 h Blåstömn. + H h ,5 h h ,5 h h *** Försökspersonen skall vara fullt frisk och ej gå på några mediciner. Vätskeförlusten skall ersättas med samma volym H2 0 Vid dessa tidpunkter skall följande göras: 1) Mät urinvolymen 2) Spara 10 ml urin 3) Mät Na- konc. mha flamfotometern

5 Resultat och redovisning av data Anteckna avgiven urinvolym samt Na-koncentration för varje angiven tidpunkt. Tänk på att värdena som fås från flamfotometern är koncentrationer (mmol/l) och att de ska räknas om till mmol. Då detta är gjort, plotta era data i ett samlat diagram, föreslagsvis som i exemplet nedan. Labrapport Labrapporten skall innehålla följande, Introduktion, material och metod (beskrivning av utförande) samt resultat och diskussion (diskutera era data och koppla ihop dem med njurarnas fysiologi. I varje rapport skall data från samtliga försökspersoner som genomfört laborationen ingå, redovisade i diagram. Tips: När ni skall plotta era resultat i ett diagram så blir det tydligast om ni har värdena för Na+ på en primär axel och volymen på en sekundär axel. Vi inkluderar 2 teoretiska försökspersoner i denna laboration, en försöksperson som intar preparatet Minirin och en annan som intar Furix, fundera över hur resultat för dessa försökpersoner kan tänkas se ut. Diskussionen i er rapport skall innehålla en jämförande diskussion mellan försökspersonerna med avseende till såväl urinvolym samt de olika jonkoncentrationerna. Är de erhållna resultaten förväntade? Fundera över vilka verkningsmekanismer de olika preparaten/dryckerna har. Kan likartade resultat erhållas trots skilda mekanismer? Kan flera olika mekanismer vara involverade i samma behandling? Diksutera vilka resultat ni förväntar er av de teoretiska försökspersonerna som har tagit preparaten minirin och furix?

6 Appendix Handhavande av flamfotometer -Flamfotometern startas av lab.handledaren. Uppvärmningstiden är därefter 15 min. Uppvärmning och körning 1) Slå på centralgasen. 2) Öppna gaskranen. 3) Öppna luftkranen. 4) Spänn fast de båda slangklämmorna på dilutorn. 5) Frigör klämman på slangen till dilutionslösningen. Kör först dh 2 0 i ca 15 min. OBS! Slangarna skall alltid vara i vätskan. Kontrollera att tillräckligt med diluent finns i flaskan. 6) Efter uppvärmning justeras flamfotometern med dh 2 0, dvs värdet ställs till 0,00 med knappen 5. 7) Kalibrera apparaten med kalibreringslösning från Na/K-ampull, vilken sugs in via dilutorn. Ampullösningen innehåller kända koncentrationer av Na (140 mm och K (5 mm).vänta 20 sekunder och justera därefter uppmätt värde till ovanstående värde med (6 och 7). 8) Kör därefter en blank (dvs dh 2 0) som justeras till 0,00. 9) Kör därefter standardlösning en gg till och justera enligt ovan. 10) Kör blank och justera till 0,00 11) Na bestäms först och provet sugs då in direkt från provröret. Vid bestämning av K måste provet först spädas 5 ggr i nytt provrör 12) Kör första provet 13) Kör blank 14) Kör nästa prov 15) Kör blank Vid byte från Na till K (eller vice versa): byt filter och kalibrera med kalibreringslösningen för den nya jonen

7 Flamfotometer

8 Dilutor till flamfotometer