Ompressning av inplastat vallfoder från rundbal till småbal

Ompressning av inplastat vallfoder från rundbal till småbal Rebaling of wrapped forage from round bale to small bale av Eva Andersson Institutionen för husdjurens utfodring och vård Examensarbete 377 Sveriges lantbruksuniversitet 30 hp A2E-nivå Department of Animal Nutrition and Management Degree project 377 Swedish University of Agricultural Sciences 30 credit A2E-level Uppsala 2012

Ompressning av inplastat vallfoder från rundbal till småbal Rebaling of wrapped forage from round bale to small bale av Eva Andersson Handledare/ Supervisor: Cecilia Müller Examinator/ Examiner: Rolf Spörndly Nyckelord/ Key words Hösilage, ensilage, aerob stabilitet, propionsyra, natriumbenzoat Institutionen för husdjurens utfodring och vård Examensarbete 377 Sveriges lantbruksuniversitet 30 hp A2E-nivå Kurskod EX0552 Department of Animal Nutrition and Management Degree project 377 Swedish University of Agricultural Sciences 30 credit A2E-level Course code EX0552 Uppsala 2012

Innehållsförteckning Sammanfattning... 1 Introduktion... 2 Syfte... 3 Litteraturstudie... 4 Ensileringsprocessen... 4 Inläggningsfas... 4 Aktiv fermentationsfas... 4 Stabil fas... 5 Uttagsfas... 5 Aerob stabilitet... 5 Förtorkning... 7 Tillsatsmedel... 8 Tillsats av mjölksyrabakterier... 8 Tillsats av syror... 9 Tillsats av melass... 10 Mikroorganismer som kan utgöra hygieniska problem i vallfoder... 11 Mögel... 11 Jästsvampar... 14 Bakterier... 15 Hygienisk kvalitet... 16 Egen studie... 17 Material/metoder... 18 Pressning av rundbalar... 18 Tillsats av ensileringsmedel... 19 Ompressning till småbalar... 19 Lagring och balöppning... 19 Temperaturmätning... 20 Mikrobiologisk analys... 20 Kemisk analys... 20 Statistisk analys... 21 Resultat... 21

Kemisk sammansättning för grönmasseprover... 21 Kemisk och mikrobiologisk sammansättning i rundbalshösilage vid ompressning... 22 Kemisk och mikrobiologisk sammansättning i fyrkantbalshösilage vid balöppning... 23 Kemisk och mikrobiologisk sammansättning för kvarvarande rundbalar... 24 Synligt mögel... 26 Temperaturmätningar och aerob stabilitet... 26 Mått och vikter vid balöppningen... 29 Diskussion... 30 Kemiska och mikrobiella analyser... 30 Vid ompressning... 30 Vid balöppning... 31 Jämförelser med andra genomförda studier... 33 Temperatur och aerob stabilitet... 33 Mått och vikter vid balöppningen... 35 Täthet... 36 Slutsats... 36 Abstract... 36 Acknowledgements... 38 Referenser... 38

Sammanfattning Många stall för hästar har bara ett fåtal djur och är ofta inte mekaniserade i samma utsträckning som stall för andra lantbruksdjur. Detta gör att det finns en efterfrågan från hästägare på ensilage eller hösilage i mindre balar, dels för att fodret ska hinna konsumeras av djuren innan det förstörs av den aeroba förskämningen, och dels för att mindre balar är lättare att hantera för hand. Pressningen av småbalar i fält är dock mer väderberoende och mer tidskrävande än att pressa storbalar, varför vissa foderproducenter istället väljer att pressa storbalar vid skörden som efter en tids lagring öppnas och pressas om till mindre balar innan försäljning. Det är dock i dagsläget oklart hur fodrets sammansättning påverkas av ompressningen. Syftet med detta examensarbete var därför att studera vilken effekt ompressning hade på kemisk och mikrobiologisk sammansättning i hösilage, samt att undersöka vilken effekt ett syrabaserat tillsatsmedel hade på konserveringsresultat och aerob lagringsstabilitet. För att undersöka dessa frågeställningar producerades totalt 13 rundbalar från samma vallskörd från en gräsvall beståndende av huvudsakligen timotej och ängsvingel. Grönmassan i sex av rundbalarna behandlades med tillsatsmedlet Addcon Kofa grain ph 5 och i sju av rundbalarna tillsattes inget tillsatsmedel (kontroll). Efter cirka sex månaders lagring pressades tre rundbalar med tillsatsmedlet och tre rundbalar utan tillsatsmedel (kontroll) om. De ompressade och inplastade fyrkantsbalarna lagrades sedan tillsammans med de kvarvarande rundbalarna i stack utomhus i 10 veckor mellan den 17/1 och den 26-27/3 2012. Därefter öppnades nio fyrkantbalar med tillsatsmedel, nio fyrkantbalar i kontrollbehandlingen samt tre rundbalar ur vardera behandlingen för provtagning och mätning av aerob stabilitet. Den aeroba stabiliteten följdes genom att balarnas kärntemperatur mättes dagligen i 14 dagar. Prover för mikrobiologiska och kemiska analyser togs med ensilageborr vid ompressning samt vid balöppning. Grönmasseprover för analyser togs i fält vid skörd av rundbalarna. Resultaten visade att både de ompressade småbalarna och rundbalarna höll en godtagbar hygienisk kvalitet med låga till normala halter av mögel, klostridier och enterobakterier. Dock var jästhalterna högre än önskvärt för både småbalar samt de rundbalar som inte pressades om, utan lagrades tillsammans med fyrkantbalarna. Detta har dock med största sannolikhet ingen negativ effekt på djurhälsan vid utfodring, men kan potentiellt förkorta den aeroba stabiliteten hos fodret. Tillsatsmedlet hade en hämmande effekt på mjölksyrabakterier, och gav ett hösilage med lägre ph, lägre halter laktat, ammoniumkväve och etanol. Tillsatsmedlet gav även lägre halter jästsvampar än kontrollbehandlingen. Den aeroba stabiliteten var godtagbar, det tog 48 timmar för fyrkantbalarna samt 24 timmar för rundbalarna att nå 3 grader över omgivande temperatur när balarnas kärntemperatur jämfördes med omgivande dygnsmedeltemperatur. Ordentlig varmgång skedde endast i endast en småbal i kontrollbehandlingen, varför den aeroba stabiliteten ändå bedöms som relativt god. Slutsatsen av detta försök var att det är möjligt att producera ett hösilage av fullt godtagbar hygienisk kvalitet genom ompressning från storbal till småbal. Syrabaserade tillsatsmedel verkar ha en hämmande effekt på tillväxt av oönskade mikroorganismer i hösilage, varför det 1

kan vara motiverat att använda denna tillsats vid ompressning för att motverka den negativa effekt den extra syreexponeringen vid ompressning kan ha på den hygieniska kvaliteten. Produktionskostnaderna för det ompressade hösilaget är märkbart högre än kostnaderna för hösilage i rundbal som ej pressats om, men detta behöver inte utgöra ett hinder förutsatt att betalningsvilja finns hos konsumenten. Introduktion En god hygienisk kvalitet på grovfodret är av stor vikt för hälsa och välmående hos hästar och idisslare. Detta innebär ett foder som är fritt från oönskade mikroorganismer, såväl de som inte är direkt skadliga för djuren, men kan inverka negativt på fodrets lagringsstabilitet, och från mikroorganismer som kan ha skadliga effekter på djur, till exempel mögel och patogena bakterier (Gleerup, 2000). Generellt skiljer sig besättningsstrukturen mellan hästar och andra lantbruksdjur. Många stall för hästar inhyser bara ett fåtal djur (Enhäll et al., 2012) och är ofta inte heller mekaniserade i samma utsträckning som stallar för andra lantbruksdjur (Holmquist, 2000). Detta kan leda till en del problem vid hantering av grovfoder i storbalar eller plan- eller tornsilo, eftersom dessa utfodringssystem inte är anpassade till små besättningar. Dels kan det vara svårt att hantera dessa fodertyper utan maskiner, vilket som nämnts ovan många mindre häststall saknar. Dessutom kan konsumtionshastigheten bli för låg om besättningsstorleken är liten (Holmquist, 2000). En låg konsumtionshastighet gör att fodret utsätts för en aerob miljö under en tid som i vissa fall är så lång att en förskämningsprocess tar fart. Denna process innebär en tillväxt av oönskade mikroorganismer, till exempel mögel, vilket i värsta fall kan ha en negativ påverkan på djurens hälsa och välbefinnande (Scudamore och Livesey, 1998). Dessa faktorer gör att det finns en efterfrågan på mindre balar, framförallt från hästägare, eftersom dessa balar är lättare att hantera och kan utfodras i sin helhet innan den aeroba förskämningen hunnit förstöra fodret, även om man har ett mindre stall med endast ett fåtal hästar (Holmquist, 2000). Att pressa småbalsensilage har dock sina nackdelar jämfört med storbalsensilering. Småbalspressarna har en lägre skördekapacitet än storbalspressarna (Blank et al., 2009). Detta kan göra en maskinkedja med småbalspress mer väderberoende än en maskinkedja med storbalspress, eftersom man behöver längre tid för att skörda en given areal. Detta gör att pressning av småbalar i fält är mer väderberoende, eftersom det tar längre tid att bärga grönmassan från fältet jämfört med produktion av storbalar. Dessutom är själva ihopsamlingen och transporten av småbalar från fält mindre effektiv än i fallet med storbalar (Sundberg, 1999). Vissa foderproducenter väljer därför att skörda vallen i storbalar och därefter pressa om storbalsensilage till småbalar för försäljning framförallt till hästägare. Studier har visat att rundbalsensilage skiljer sig från ensilage i tornsilo eller plansilo vad gäller ph och mängd mjölksyrabakterier. Eftersom torrsubstans (ts)-halten i balar generellt är högre än i olika typer av silor blir fermentationsprocessen inte lika intensiv, med ett högre slutligt ph-värde som följd (Hendersson et al., 1979). Field och Wilman (1996) visade även 2

att det vid samma ts-halt sker en mindre intensiv fermentation i ensilage som konserverats i balar jämfört med silor, men drar slutsatsen att detta inte nödvändigtvis har en negativ effekt på fodret, utan att rundbalsensilering delvis ska ses som en annan typ av konservering än ett blötare ensilage i silo. I ensilage är det framförallt den anaeroba miljön i kombination med ensileringens fermentationsprodukter (inklusive det lägre ph-värdet) som hämmar tillväxten av oönskade mikroorganismer (McDonald et al., 1991). Hösilage har högre ts-halt och lägre innehåll av fermentationsprodukter, och det är därför viktigt att bibehålla anaeroba förhållanden för att undvika tillväxt av mögel, speciellt vid högre ts-halter (McNamara et al., 2002). Jäst och mögel är mindre känsliga för en låg vattenaktivitet än till exempel bakterier. Detta gör att jäst kan tillväxa även vid höga ts-halter (Pitt et al., 1991). Även mögel kan tillväxa vid höga ts-halter förutsatt att syre finns tillgängligt, eftersom mögel endast kan tillväxa aerobt (McDonald et al., 1991). Bakterier, och då även mjölksyrabakterier, hämmas däremot betydligt mer av en hög ts-halt, vilket ger jäst- och mögelsvamparna en konkurrensfördel i torra ensilage (McDonald et al., 1991). Ensilage med högre halter jäst- och mögelsvampar har generellt en kortare aerob stabilitet än ensilage med låga halter av dessa oönskade mikroorganismer (McDonald et al., 1991). I och med att jäst och mögel gynnas av en hög ts-halt skulle detta kunna innebära att ett rundbalsensilage med en hög ts-halt är känsligare för syreexponering, det vill säga har en kortare aerob stabilitet än ett blötare ensilage, vilket påvisades av Woolford (1990). Hendersson et al. (1979) fann dock i sin studie inga definitiva statistiska samband mellan tshalt och aerob stabilitet. Många hästägare efterfrågar ett ensilage med en hög ts-halt, så kallat hösilage (Jaakkola et al., 2010). Ett sådant foder skulle alltså kunna vara ännu känsligare för syreexponering än ett blötare ensilage, och därmed möjligen även vara mer känsligt för ompressning eftersom syreexponering då är en nödvändighet. Tillsats av mjölksyrabakterier har visat sig ha en mycket begränsad effekt när det gäller att motverka tillväxt av jäst och mögel i ensilage, eftersom mjölksyra har en mycket liten hämmande effekt på svampar (Woolford, 1975). Dock har det visat sig att andra organiska syror, som propionsyra, ättiksyra och myrsyra har en betydligt större hämmande effekt på jäst och mögel (McDonald et al., 1991; Danner et al., 2003), varför tillsats av syrabaserade tillsatsmedel kan vara att föredra, för att undvika tillväxt av dessa oönskade mikroorganismer under lagring och efter öppning av balen eller silon. Andra studier har visat att tillsats av propionat kan öka den aeroba stabiliteten även i ensilage med hög ts-halt (Jaakkola et al., 2010). Tillsats av ett syrabaserat tillsatsmedel skulle alltså potentiellt kunna hämma tillväxten av jäst och mögel, och därmed förlänga den aeroba stabiliteten (Danner et al., 2003). Syfte Målet med detta examensarbete var att undersöka hur mikrobiologisk och kemisk sammansättning i hösilage påverkades av ompressning från stor rundbal till små fyrkantsbalar, samt vilken inverkan ett syrabaserat tillsatsmedel hade vid denna ompressning. Syftet var även att undersöka om den aeroba lagringsstabiliteten hos de ompressade balarna blev kortare jämfört med storbalarna. 3

Litteraturstudie Ensileringsprocessen Inläggningsfas Inläggningsfasen pågår omedelbart efter pressning och inplastning av grönmassan och denna fas i ensileringsprocessen kan fortsätta upp till flera dagar om ensilaget är otillräckligt packat (Kung, 2001). Så länge syre finns tillgängligt fortgår växtcellernas andning och aeroba mikroorganismer kan tillväxa, till exempel olika arter av jäst, mögel och aeroba bakterier. Båda dessa processer förbrukar det syre som finns inuti balen, men en bal som inte är tillräckligt sammanpressad innehåller mer syre, varför dessa aeroba processer kan fortgå en längre tid än i ett mer hårdpressat ensilage. När syrekoncentrationen sjunker minskar växternas cellandning och avtar så småningom helt (Henderson, 1993; Weinberg och Muck, 1996). Syret i silon eller balen förbrukas snabbt; endast 0,5 % av syret återstår 30 minuter efter att silon förseglats (Woolford, 1990). Aktiv fermentationsfas Under den aktiva fermentationsfasen har syrekoncentrationen blivit så låg inuti balen att aeroba mikroorganismer hämmas, och istället börjar fakultativt och obligat anaeroba mikroorganismer tillväxa. Under gynnsamma ensileringsförhållanden domineras den anaeroba mikrobfloran av mjölksyrabakterier. Dessa bildar laktat, vilket sänker ph-värdet och på så sätt hämmar andra anaeroba mikroorganismer, som klostridier och enterobakterier samt inaktiverar växtenzymerna (Weinberg och Muck, 1996). Denna ph-sänkning gynnar mjölksyrabakterierna i och med att de har ett lägre ph-optimum än klostridier och enterobakterier och därför klarar att tillväxa vid ett lägre ph-värde än dessa bakteriesläkten (McDonald et al., 1991). Till slut avstannar ph-sänkningen i ensilaget. Detta sker i ett blötare ensilage framförallt genom att ph-värdet blir så lågt att det hämmar även mjölksyrabakteriernas tillväxt (Kung, 2001). I ett torrare ensilage är det framförallt tillgången på vatten samt i vissa fall lättlösliga kolhydrater (water soluble carbohydrates, WSC) i grönmassan som avgör hur mycket mjölksyrabakterierna kan tillväxa. Då är det istället när mjölksyrabakterierna konsumerat det tillgängliga sockret respektive när vattentillgången inte räcker till för fler mikroorganismer som mjölksyrabakterierna hämmas och fermentationen avstannar (McDonald et al., 1991). Jaakkola et al. (2010) såg i sin studie att WSC-innehållet påverkades mycket lite av ensileringsprocessen i ensilage med hög ts-halt. Detta tyder på att vattenaktiviteten vid riktigt höga ts-halter (64-65%) är så låg att mikroorganismerna hämmas till den grad att ingen uttalad fermentation alls äger rum (Jaakkola et al., 2010). Om ensileringsförhållandena inte är optimala kan istället oönskade mikroorganismer få övertaget, vilket leder till ett felfermenterat foder. Detta kan bero på att ph-sänkningen inte blir tillräckligt stor eller går för långsamt, till exempel om fodret har en hög buffertkapacitet eller om grönmassan har för låg halt av mjölksyrabakterier. Då kan istället enterobakterier och klostridier tillväxa (McDonald et al., 1991). 4

Stabil fas Under den stabila fasen sker, under förutsättning att plasten eller silon behålls lufttät så att inte ensilaget kommer i kontakt med syre, inte speciellt mycket alls med fodret. ph-värdet hålls relativt stabilt och inte heller mycket händer med mängden mjölksyrabakterier, enterobakterier, klostridier, jäst eller mögel (Weinberg och Muck, 1996; Kung, 2001). Dock kan en ändring av artsammansättning ske; för mjölksyrabakterierna sker en övergång från homofermentativa arter, som till exempel Lactobacillus plantarum och L. curvatus till heterofermentativa arter, som till exempel L. buchneri och L. brevis. Vad gäller jästsvampar ändras artsammansättningen från aeroba arter som till exempel Cryptococcus spp. till anaeroba arter som till exempel Candida spp. och Sacharomyces cerevisae (McDonald et al., 1991). Uttagsfas Denna fas pågår mellan att balen eller silon öppnas till dess att fodret konsumerats av djuret. När ensilaget åter utsätts för syre börjar aeroba mikroorganismer tillväxa (Woolford, 1990; Weinberg och Muck, 1996). I normalfallet består denna förskämningsflora till en början framförallt av olika jästarter. Vissa av dessa arter har förmågan att använda laktat som ett näringssubstrat, till exempel Candida spp., vilket gör att ph-värdet ökar. Detta banar i sin tur vägen för andra aeroba mikroorganismer, till exempel olika mögelarter, som ytterligare förändrar fodrets hygieniska kvalitet. Den aeroba nedbrytningen av fodret leder dessutom till en ökad värmeproduktion som orsakar varmgång i fodret, vilket dels kan gynna tillväxten av Bacillus spp. och även i svåra fall ge upphov till Maillardreaktioner (McDonald et al., 1991). Denna typ av reaktioner sker mellan aminosyror och reducerande socker och minskar djurets förmåga till att ta upp fodrets aminosyror (Cheeke och Dierenfeld, 2010). Fodervärdet sänks under denna förskämningsprocess även genom att mikroorganismerna använder WSC som energisubstrat (McDonald et al., 1991). Hur snabbt denna förskämningsprocess går, det vill säga hur länge en ensilagebal kan vara öppen innan fodret är otjänligt, påverkas av en rad faktorer, och benämns aerob stabilitet (Danner et al., 2003). Aerob stabilitet Aerob stabilitet är ett mått på hur länge ensilage kan utsättas för syre innan förskämningsprocessen startar. Ofta mäts detta som den tid en bal eller silo kan vara öppen innan temperaturen i ensilaget börjar öka jämfört med den omgivande temperaturen (Danner et al., 2003). European Food Safety Authority (EFSA) (2011) valde i studier att anse att ett ensilage inte längre är stabilt när fodrets temperatur översteg omgivningens temperatur med mer än 3 C. 5

För att testa effekten av tillsats av L. buchneri till ensilage genomförde EFSA (2011) studier med laboratoriesilor där olika grödor ensilerades, och där man tillsatte en lösning med 1,0x10 8 cfu av L. buchneri per kg foder, och som kontroll tillsatte samma mängd vatten. Man fann att ensilaget som inokulerats med L. buchneri skiljde sig från kontrollensilaget för de flesta variabler, bland annat var den aeroba stabiliteten längre. Därför drog man slutsatsen att L. buchneri kan ha en positiv effekt på aerob stabilitet i ensilage (EFSA, 2011), antagligen på grund av den ökade acetatkoncentrationen, som verkar hämmande på jäst och mögel (Danner et al., 2003). Danner et al. (2003) testade dels vilken effekt inokulering med olika arter av mjölksyrabakterier hade på aerob stabilitet, dels hur den aeroba stabiliteten påverkades av tillsats av olika ämnen till ensilage. De ämnen som testades var buffrad acetat, ren acetat, butyrat, 1,2-propandiol, 1-propanol, mannitol och fruktos. Resultaten visade att heterofermentativa mjölksyrabakterier förlängde den aeroba stabiliteten medan tillsats av homofermentativa mjölksyrabakterier istället producerade ensilage med kortare aerob stabilitet, jämfört med kontrollensilage. Både acetat och butyrat visade sig markant förlänga den aeroba stabiliteten. Dock drog författarna slutsatsen att butyrat i ensilage är en produkt av klostridiefermentation, och därför inte är önskvärt i ensilage. 1,2-propandiol och 1-propanol hade en liten positiv effekt när det gällde att förlänga den aeroba stabiliteten, men endast då de tillsattes i koncentrationer som var högre än vad som normalt påträffats i ensilage (Danner et al., 2003). Danner et al. (2003) satte gränsen för när fodret inte längre var stabilt vid 2 C över omgivande temperatur. Anledningen till att fodrets temperatur ökar är den värme som bildas som en biprodukt av aeroba mikroorganismers metabolism. Den aeroba metabolismen där WSC eller organiska syror bryts ned till koldioxid och vatten genererar mer energi i form av ATP än anaerob metabolism (fermentation) och denna energi avges som värme (McDonald et al., 1991). I den tidiga aeroba förskämningen är det främst jästsvampar som ger upphov till varmgång av fodret. Vissa jästarter, till exempel inom släktet Candida spp. kan använda laktat som ett energisubstrat. Detta innebär att när dessa arter tillväxer minskar laktatkoncentrationen, och därmed höjs ph-värdet. Detta banar i sin tur vägen för andra aeroba organismer, som inte är lika syratoleranta som jästsvampar, till exempel mögel och vid högre temperaturer även Bacillus spp. under aeroba förhållanden. Dessa mikroorganismer bidrar till ytterligare temperaturökning av fodret, nedbrytning av WSC, cellulosa, hemicellulosa och proteiner, vilket sänker fodrets näringsvärde (McDonald et al., 1991). Wyss et al. (1991) undersökte vilken effekt tillfällig aerob stress efter ensilering hade på den hygieniska kvaliteten hos förtorkat gräsensilage. Man fann att kortvarig (1 dygn) syreexponering efter ensilering hade mycket liten effekt på mikrobiell tillväxt eller aerob stabilitet, men att ts-förlusterna ökade vid längre syreexponering i samband med uttag av fodret ur silon. Man fann även att tillsats av natriumsorbat samt inokulering med laktat- och propionatbildande bakterier gav ett ensilage med längre aerob stabilitet (Wyss et al., 1991) Författarna drog slutsatsen att den längre aeroba stabiliteten berodde på den snabbare phminskningen samt det propionat som bildades i det inokulerade ensilaget (Wyss et al., 1991). 6

Umana et al. (1991) har visat att ett välensilerat foder där mjölksyrafermentation dominerat, med högt laktatinnehåll, högt WSC-innehåll, lågt ph-värde och lågt innehåll av ammoniumkväve faktiskt till och med kan ha en kortare aerob stabilitet än mindre välensilerade foder (Umana et al., 1991). I studien av Umana et al. (1991) jämförde man direktskördat och förtorkat ensilage med eller utan tillsats av melass, mjölksyrabakterier, eller både melass och mjölksyrabakterier. Vid mätningarna av aerob stabilitet blandade man de olika ensilagen med mald majs, sojamjöl och drank för att efterlikna ett fullfoder och proverna inkuberades i polystyrenbehållare vid 37 C varvid temperaturen avlästes vid upprepade tillfällen under 72 timmar. Man fann att ensilage med tecken på en mjölksyradominerad fermentation hade en kortare aerob stabilitet än ensilage med tecken på klostridietillväxt (Umana et al., 1991). En orsak till detta är att laktat har en begränsad hämmande effekt på jästsvampar och mögel, och att framförallt jäst klarar att tillväxa även vid låga ph-värden (Woolford, 1975; McDonald et al., 1991). I det direktskördade, mindre välensilerade fodret fanns dessutom förhöjda halter av butyrat, vilket har en starkt hämmande effekt på jäst och mögel (Umana et al., 1991). Studier har visat att andra syror, som acetat och butyrat har betydligt starkare hämmande effekt på jäst och mögel än laktat, och därför även förlänger den aeroba stabiliteten (McDonald et al., 1991; Danner et al., 2003). Klostridier bildar butyrat under sin tillväxt, och klostridiejästa ensilage har ofta en mycket lång aerob stabilitet. Dock är klostridietillväxt oönskad i ensilage dels på grund av de toxiner som vissa arter bildar, samt på grund av de problem som klostridiesporer kan ställa till med vid till exempel osttillverkning (Danner et al., 2003). Effektiviteten av tillsats av mjölksyrabakterier som ensileringsmedel beror på ts-halten i fodret. Om ts-halten är för hög kommer mjölksyrabakterier inte att kunna tillväxa effektivt. I riktigt torra ensilage kommer den låga vattenaktiviteten hämma mjölksyrabakterierna, vilket leder till att fermentationen kommer gå långsamt och endast små mängder metaboliter (acetat och laktat i fallet med L. buchneri) kommer att bildas (McDonald et al., 1991). Vid riktigt höga ts-halter finns tendenser mot en minskad effekt av tillsatta bakteriekulturer (Eriksson, 2005). Förtorkning Förtorkning av grönmassan sker av flera skäl. Blött foder innebär att man får transportera stora mängder vatten från fältet, vilket ökar transportkostnaderna för fodret (McDonald et al., 1991). Det har dessutom visat sig att en ts-halt över 35 % har en starkt hämmande effekt på klostridier, och klostridiefermentation av torrare ensilage är mycket ovanligt (McDonald et al., 1991). Förtorkning ökar även koncentrationen av WSC i fodret, vilket har en positiv effekt på tillväxten av mjölksyrabakterier, speciellt i grödor som har ett lågt WSC-innehåll, till exempel baljväxter och tropiska gräs (McDonald et al., 1991). Ännu en orsak till att förtorka grönmassan innan ensilering är att minska risken för pressvattenavgång. Pressvatten är 7

näringsrikt och kan orsaka övergödning om det tillåts förorena vattendrag och liknande (Tunney et al., 1997), och måste därför tas omhand, vilket kan vara problematiskt, och dessutom förloras vattenlösliga näringsämnen via pressvattnet, vilket sänker fodervärdet (Henderson et al., 1979; McDonald et al., 1991). I balensilage kan det vara svårare att samla upp pressvattnet än i olika typer av silos. Detta tillsammans med ett högre BOD (Biological Oxygen Depletion)-värde för pressvatten från rundbalar än från torn- eller plansilos gör att pressvatten från rundbalar kan ha en negativ effekt på till exempel vattenlevande organismer i närmiljön (Dürr, 2004). Umana et al. (1991) kunde visa att förtorkning hade en positiv effekt på ensileringprocessen av Cynodon dactylon, ett tropiskt gräs. Direktskördat ensilage med en ts-halt på cirka 32 % jämfördes med ett förtorkat ensilage med en ts-halt på cirka 44 %. Grönmassan ensilerades i laboratoriesilos under 114 dagar, och under flera tillfällen under ensileringsprocessen togs foderprover för att mäta ph-värde, laktat-, acetat- och ammoniumkvävekoncentration, aerob stabilitet samt in vitro-smältbarhet. Man fann att det blötare ensilaget hade en snabbare phsänkning och laktatproduktion, men att det förtorkade ensilaget hade ett lägre slutligt phvärde och en högre slutlig laktatkoncentration än det direktskördade ensilaget. Det förtorkade ensilaget hade även lägre innehåll av ammonium-kväve och acetat, och författarna drog slutsatsen att förtorkning producerade ett mer välfermenterat ensilage (Umana et al., 1991). Dock hade det förtorkade ensilaget i studien av Umana et al. (1991) även ett högre innehåll av jäst- och mögelsvampar än det direktskördade ensilaget, och en kortare aerob stabilitet än de direktskördade ensilagen. Att förtorkning kan öka halten jäst och mögel i ensilage är något som även bekräftas av McDonald et al.(1991). Även Jonsson et al. (1990) fann att mängden jästsvampar ökade med stigande ts-halt. Tillsatsmedel Tillsats av mjölksyrabakterier Förutsatt att mängden WSC i grönmassan är tillräckligt hög kan tillsats av mjölksyrabakterier ha en positiv effekt på ensileringsprocessen, om mängden epifytiska mjölksyrabakterier är otillräcklig för att säkerställa en effektiv fermentation där mjölksyrabakterierna dominerar (McDonald et al., 1991). Mjölksyrabakterier räknas till fermentationsstimulerande tillsatsmedel (McDonald et al., 1991). Inokulering med mjölksyrabakterier har visat sig producera ensilage med lägre phvärde, lägre halt ammoniumkväve och högre halt laktat jämfört med obehandlat ensilage (McDonald et al., 1991; Umana et al., 1991; Danner et al., 2002). Om de tillsatta mjölksyrabakterierna är homofermentativa minskar dessutom halten acetat och etanol, medan dessa ämnen istället kan bildas i större omfattning vid tillsats av heterofermentativa mjölksyrabakterier. Detta beror på att heterofermentativa mjölksyrabakterier förutom laktat även producerar etanol och acetat under sin metabolism (McDonald et al., 1991). 8

Tillsats av homofermentativa mjölksyrabakterier kan alltså ge ett välfermenterat ensilage av god hygienisk kvalitet. Det har visat sig att en hög halt av laktat och ett påföljande lågt phvärde har en hämmande effekt på oönskade bakterier, främst enterobakterier och klostridier (McDonald et al., 1991). Därför passar tillsats av mjölksyrabakterier bättre i blötare ensilage där oönskad bakterietillväxt är ett större problem än i torrare hösilage där det istället är svamptillväxt som är huvudproblemet (McDonald et al., 1991). Tillsats av syror är dock det bästa alternativet vad gäller riktigt blöta ensilage, med en ts-halt under 35 %, för att undvika klostridietillväxt, eftersom klostridierna gynnas av låga ts-halter och då kan konkurrera ut mjölksyrabakterierna (McDonald et al., 1991). Heterofermentativa mjölksyrabakterier, till exempel L.buchneri, bildar både laktat och acetat under fermentationsprocessen. Flera studier har visat att inokulering med L. buchneri kan ha en positiv effekt på den aeroba stabiliteten jämfört med obehandlat ensilage eller ensilage behandlat enbart med homofermentativa mjölksyrabakterier (Kleinschmit et al., 2005; Li och Nishino, 2011a; Li och Nishino, 2011b). Detta beror troligen på den hämmande effekt acetat har visat sig ha på jäst och mögel (Danner et al., 2003) då det ofta är jäst som startar den aeroba förskämningsprocessen (McDonald et al., 1991). Samtidigt har studier genomförda av EFSA (2011) inte kunnat påvisa några negativa effekter på djur vid utfodring av foder inokulerat med L. buchneri och EFSA drog därför slutsatsen att L. buchneri är en säker tillsats vid ensilering. Dock har det även visat sig att koldioxid förloras när heterofermentativa mjölksyrabakterier ombildar laktat till acetat, vilket i vissa studier har visat sig leda till ökade ts-förluster (Driehuis et al., 1999), medan andra studier inte kunnat påvisa ökade ts-förluster (Taylor et al., 2002). Tillsats av syror Tillsats av organiska syror tjänar främst till att hämma all mikrobiell tillväxt. Detta ger ett ensilage med lågt ph, låg ammoniumkvävehalt och ett högt innehåll av WSC, men också ett lägre innehåll av mjölksyra eftersom även mjölksyrabakterierna hämmas av det låga phvärdet (McDonald et al., 1991). Det har visat sig att organiska syror, speciellt myrsyra, har en hämmande effekt även på jäst och mögel (McDonald et al., 1991), varför denna tillsats kan vara lämplig för att öka den aeroba stabiliteten. Även acetat (Danner et al., 2003) och propionat (Jaakkola et al., 2010) har visat sig kunna hämma jäst och mögel, men inte i lika hög grad som myrsyra (McDonald et al., 1991). Dock har myrsyra även visat sig kunna gynna tillväxten av mögel i storbalsensilage (Jonsson et al., 1990), samt kunna öka aflatoxinproduktion i spannmål. Därför är inte myrsyra tillåtet som tillsats till fuktig spannmål i Sverige (McDonald et al., 1991). Jaakkola et al. (2010) gjorde ett försök där man testade att tillsätta olika arter av mjölksyrabakterier och olika syror eller konserveringsmedel i olika kombinationer till ensilage. Man hade 5 behandlingar: a) Kontroll, utan tillsats, b) propionat + ammoniumpropionat, c) Lactobacillus plantarum +L. buchneri, d) L. rhamnosus samt e) L. plantarum+ Natriumbenzoat. Dessa behandlingar tillsattes till gräsensilage i rundbalar vid olika ts-halter, 44 %, 56% samt 64 %. Man fann att tillsats av L. buchneri och 9

Natriumbenzoat tillsammans med L. plantarum förlängde den aeroba stabiliteten vid ts-halter upp till 60 %. Propionat visade sig förlänga den aeroba stabiliteten vid alla ts-halter, vilket även L. plantarum + Natriumbenzoat och L. plantarum + L. buchneri gjorde, om än inte lika effektivt. Enbart tillsats av L. rhamnosus var den behandling som gav den kortaste aeroba stabiliteten. Dessutom fann författarna att propionat gav ett ensilage med en lång aerob stabilitet i samtliga balar, medan inokulanterna gav mer variabelt resultat mellan balar (Jaakkola et al., 2010). Tillsats av melass Tillsats av melass och andra källor av WSC har en fermentationsstimulerande effekt och kan vara berättigat om WSC-innehållet i grönmassan är det som begränsar fermentationen, som till exempel i fallet med tropiska gräs eller baljväxter, som generellt har ett lågt WSC-innehåll jämfört med tempererade gräs (McDonald et al., 1991). I och med att tillsatsen av melass ger en mer intensiv fermentation ger detta ett ensilage med lägre ph, lägre halt ammoniumkväve samt högre ts-halt och mjölksyrahalt. Den huvudsakliga nackdelen med melass är dock att det måste tillsättas i relativt stor mängd för att ha full effekt (McDonald, et al., 1991). Umana et al. (1991) testade i sitt försök även tillsats av melass och mjölksyrabakterier till Cynodon dactylon-ensilage. Man fann att tillsats av melass hade en positiv effekt på framförallt det direktskördade ensilaget, och gav en mer uttalad mjölksyrafermentation med lägre ph-värde, högre halt laktat samt lägre butyrat- och ammoniumkvävehalter än kontrollensilaget. Dessutom gav tillsats av både melass och mjölksyrabakterier en additiv effekt på det förtorkade ensilaget; man fann en större positiv effekt på ensileringen med bland annat högre laktathalt, lägre acetathalt samt lägre ph vid tillsats av både melass och mjölksyrabakterier än effekten av de båda enskilda behandlingarna var för sig. Denna additiva effekt kunde dock inte observeras i det direktskördade ensilaget (Umana et al., 1991). Dock gav tillsats av melass till det förtorkade ensilaget en lägre smältbarhet och högre halter av jästoch mögelsvampar än tillsats av mjölksyrabakterier (Umana et al., 1991). I samma studie kom man dock också fram till att de ensilage som hade haft en mer uttalad mjölksyrafermentation med bland annat högre laktatkoncentration, lägre acetathalt och lägre ph, hade en kortare aerob stabilitet än kontrollensilagen (Umana et al., 1991). I en studie av Huisden et al. (2008) jämfördes effekten av tillsats av melass och två olika kommersiella mjölksyrabaserade ensileringsmedel med både heterofermentativa och homofermentativa mjölksyrabakterier till majsensilage. Man fann att tillsats av melass gav ett högre innehåll av WSC och gav en högre etanol- och laktatkoncentration än de andra behandlingarna eller kontrollensilaget, men att en tillsats av melass varken påverkade mängden mögel eller jäst jämfört med kontrollensilaget, och melass hade inte heller någon effekt på den aeroba stabiliteten. Däremot minskade båda de kommersiella inokulanterna mängden jäst och mögel samt förlängde den aeroba stabiliteten i fodret (Huisden et al., 2008). 10

Mikroorganismer som kan utgöra hygieniska problem i vallfoder Mögel De allra flesta mögelsvampar är aeroba, även om det finns arter som även kan tillväxa vid anaeroba förhållanden (Scudamore och Livesey, 1998). Mögelsvampar kräver generellt ett aningen högre ph-värde än jästsvampar för att tillväxa, vilket gör att de ofta kommer in senare i den aeroba förskämningsprocessen av ensilage när jästsvampar och andra mikroorganismer redan startat förskämningen och därmed skapat en passande levnadsmiljö för mögelsvamparna (McDonald et al., 1991). Mögelsvampar är oönskade i foder dels eftersom de bryter ned WSC, cellulosa och andra cellväggskomponenter, vilket sänker fodrets näringsvärde, men även eftersom ett flertal mögelarter har visat sig kunna bilda mykotoxiner (McDonald et al., 1991). Dessa ämnen kan ha negativa effekter på de djur som utfodras med kontaminerat foder, med bland annat sänkt fertilitet och produktivitet som följd (Scudamore och Livesey, 1998). I vissa fall, som till exempel vid aflatoxinkontaminerat foder, kan mykotoxinerna även överföras till mjölk och eventuellt också till andra produkter från djuren, och på så sätt utgöra en potentiell hälsorisk för människor som konsumerar livsmedel från djur som utfodrats med mögelkontaminerat foder (Scudamore och Livesey, 1998). Olika arter av mögelsvampar kan delas in i fältflora och lagringsflora, beroende på när de infekterar fodret. Fältfloran infekterar grödan innan skörd, framförallt under väderförhållanden som stressar grödan som torka eller kyla. Vanliga mögelsvampar som räknas till fältfloran tillhör släktena Fusarium, Alternaria, Cladosporium samt olika endofytsvampar, till exempel Acremonium lolii som infekterar rajgräs (Scudamore och Livesey, 1998). Om lagringsförhållandena inte är gynnsamma, till exempel om en lufttät lagring av ensilage eller en torr lagring av hö inte kan uppnås, kan en förändring i mögelflora från fältflora till lagringsflora ske. Lagringsfloran infekterar och tillväxer alltså i grödan under lagring, och arter som räknas till lagringsflora innefattar främst släktena Penicillium och Aspergillus (Scudamore och Livesey, 1998). I tabell 1 listas några mögelarter som förekommer i gräs och ensilage och vilka mykotoxiner de producerar, och i tabell 2 redovisas några vanliga mykotoxin, samt vilka effekter de har vid utfodring. Nedan följer även en kortfattad genomgång av några vanliga mögelsläkten. 11

Tabell 1. Några mögelarter som kan återfinnas i ensilage och de mykotoxiner de bildar. Efter Scudamore och Livesey, 1998(egen översättning) Art Acremonium lolii Alternaria spp. Aspergillus clavatus Aspergillus fumigatus Aspergillus versicolor Byssochlamis nivea Claviceps spp. Fusarium spp. Paecilomyces varotia Penicillium aurantiogriseumgruppen Penicillium roqueforti Penicillium verrucosum Penicillium viridicatum Pithomyces chartarum Stachybotris atra Wallemia sebi Mykotoxin Lolitrem B, Paxillin Tenuazonsyra, alternariol, alternariol metyleter, altenuene, iso-altenuene, altertoxin I och II A. clavatus-toxin Aflatoxin Sterigmatocystin Byssochlaminsyra, patulin Ergotamin, ergostin, ergocystin, ergocryptin, ergocornin, ergopeptid pyrrolizidin, derivat av lyserginsyra Deoxynivalenol, nivalenol, HT-2 toxin, moniliformin, T-2 toxin, andra trichotecenföreningar, Zearalenone, fumonisiner (i majsensilage) Patulin Verrucosidin, viomellein, vioxanthin, xanthiomegnin Festuclavin, fumiclavin C Ochratoxin, citrinin Viomellein, vioxanthin, xanthomegnin Sporodesmin Satratoxiner Wallemiol A Tabell 2. Vanligt förekommande mykotoxiner och vilken effekt de har på djur vid utfodring med mykotoxinkontaminerat foder. Efter Scudamore och Livesey, 1998(egen översättning) Mykotoxin Aflatoxin B1 Aspergillus fumigatus-toxiner Sterigmaocystin Ochratoxin A Citrinin Xanthomegnin och Viomellein Zearalenone Patulin Ergotidalkaloider Trichotecener Satratoxiner Penitrem A PR-toxin Gliotoxin Tenuazonsyra Alternariol, alternariol monometyleter Sporidesmin Lolitrem Effekt Carcinogen, hepatotoxisk, DNA-skador Tremorgen, blödningar, diarré, flera andra Carcinogen, leverskador Carcinogen, nephrotoxisk, teratogen, immunhämmande Nephrotoxisk Fotosensibilisering, lever- och njurskador Östrogena effekter Carcinogen? lungödem, blödningar Kallbrand, nedsatt fertilitet Blödningar, diarré, dermatit, fodervägran Nekros, näsflöde, rhinit Tremorgen Lever- och njurskador. Mutagen? Hematuri, immunhämmande Blödningar, konvulsioner, anorexia Cytotoxiskt, faetotoxiskt Fotosensibilisering, leversjukdom Ataxi 12

Penicillium spp. Släktet Penicillium innehåller ett flertal arter som kan återfinnas i ensilage, bland annat Penicillium roqueforti. Många arter ur släktet Penicillium bildar mykotoxiner (tabell 1), vilka kan ha negativa effekter på djur som utfodras med foder kontaminerat med dessa toxiner (tabell 2). Några exempel på toxiner som bildas av Penicillium spp. är ochratoxin, xanthomegnin och viomellein (Scudamore och Livesey, 1998) samt roquefortin C, som är ett paralytiskt neurotoxin (Wagener et al. 1980). Aspergillus spp. Apergillus spp. är ett släkte som innehåller ett flertal arter som kan återfinnas i ensilage och som kan producera mykotoxiner. Bland de mest potenta mykotoxinerna finns aflatoxin som bildas av arterna A. fumigatus och A. flavus (tabell 1). Detta toxin är starkt hepatotoxiskt och carcinogent (tabell 2). Vissa arter av släktet Aspergillus, till exempel A. fumigatus, är både proteolytiska och har ett högt temperaturoptimum (växer mellan 10 C och 55 C för A. fumigatus (McDonald et al., 1991). Dessa båda faktorer gör att bland annat dessa arter kan tillväxa i vävnader hos olika djurarter och därmed agera patogener och infektera människor och djur (Scudamore och Livesey, 1998; Tell, 2005). Aspergillos innebär en infektion av Aspergillus spp. i vävnader hos djur eller människor. Detta sjukdomstillstånd innebär att plack innehållande svamphyfer bildas med inflammation och nekros av vävnaden som följd. Det är främst lungor och andra delar av andningsapparaten samt näshåla och bihålor som påverkas. Hos häst är det vanligaste infektionsstället luftsäckarna (Lepage et al., 2004; Tell, 2005). Aspergillus spp. har även visat sig kunna infektera moderkakan och orsaka spontanaborter hos nötkreatur. Aspergillus fumigatus är den art som oftast orsakar aspergillos, men även andra Aspergillus spp. har visat sig kunna infektera olika djurarter (Tell, 2005). Fusarium spp. Släktet Fusarium innehåller arter som producerar mykotoxiner, till exempel trichotecener (tabell 1), som orsakar vävnadsirritation i mag-tarmkanalen, blödningar och minskat foderintag (tabell 2) (Scudamore och Livesey, 1998). Fusarium spp. bildar även zearalenon som har östrogena effekter. En annan grupp av ämnen som bildas av Fusarium spp. är fumonisiner, varav fumonisin B 1 (FB 1) anses orsaka Equine Leukoencephalomalacia, en sjukdom som ger allvarliga neurologiska symptom (Caloni och Cortinovis, 2010). Mucor spp. Mucor spp. är inte ovanliga mögelsvampar i ensilage. Mucor spp. anses allmänt ha en låg toxicitet, och detta släkte är mindre studerat än till exempel Aspergillus och Penicillium. Dock 13

har Mucor spp. visat sig kunna producera ett flertal olika mykotoxiner, till exempel ergotalkaloider, aflatoxin och fumigaclovin B, och vissa arter ur detta släkte har även visat sig kunna agera patogener och orsaka Mucomykos hos djur och människor (Hollman et al., 2008). Denna sjukdom drabbar främst individer med nedsatt immunförsvar. Mucomykos visar sig framförallt genom att blodkärl blir infekterade, vilket bland annat resulterar i blodproppar (Hollman et al., 2008). I en studie av Hollman et al. (2008) isolerades olika arter i släktena Mucor och Rhizopus från majs- och gräsensilage med synlig mögelväxt. Man fann arterna Absidia corymbifera, Mucor circinelloides samt Rhizopus stolonifer och genomförde test på de två sistnämnda arterna för att kartlägga produktionen av mykotoxin. Mucor circinelloides testades även för toxicitet enligt en MTT-assay. Detta är en fotometrisk metod att mäta enzymaktiviteten i mitokondrierna genom att mäta omvandlingen av det gula saltet 3-(4,5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid (MTT) till den lila, olösliga nedbrytningsprodukten fomazan som bildas i mitokondrierna i metaboliskt aktiva celler. Mängden fomazan som bildades mättes med spektrofotometri och cytotoxiciteten definierades som den lägsta koncentration mykotoxin som krävdes för att reducera mitokondriernas nedbrytning av MTT (Hollman et al., 2008). Man fann att M. circinelloides hade en låg cytotoxicitet samt att M. circinelloides producerade 3-nitropropionat. Detta mykotoxin har visat sig vara både kardiotoxiskt och neurotoxiskt hos möss (Gabrielson et al., 2001) även om det är ovanligt att detta mykotoxin återfinns i livsmedel eller foder (Hollman et al., 2008). Jästsvampar I växande och nyslagen grönmassa finns framförallt aeroba jästarter, till exempel Cryptococcus spp., Rhodotorula spp., Sporobolomyces spp. samt Torulopsis spp. (McDonald et al., 1991). Dessa bidrar, tillsammans med växternas egna enzymer, till respirationen i den aeroba fasen av ensileringsprocessen och kan orsaka varmgång om de får alltför goda tillväxtbetingelser, till exempel höga WSC-halter och utdragen inläggning i silon. Förtorkning har också visat sig kunna öka mängden jäst. Detta tros dels vara på grund av gynnsamma tillväxtförhållanden i den torrare grönmassan och dels genom en större risk för jordinblandning i förtorkat foder (McDonald et al., 1991). Jästsvampar är själva relativt toleranta mot ett lågt ph-värde och de flesta arter kan tillväxa mellan ph 3 och 8, vissa arter kan tillväxa även vid ph 2 (McDonald et al., 1991). Jäst kan generellt växa vid högre ts-halter än bakterier, men behöver till skillnad från mögel en fuktig yta för att kunna tillväxa. Olika jästarter använder olika substrat, de anaeroba behöver WSC som näringskälla medan de aeroba arterna kan använda laktat och andra organiska syror som substrat för sin tillväxt. När laktat används som energisubstrat ökar ph-värdet och detta kan i sin tur bana vägen för tillväxt av andra oönskade mikroorganismer. Det är framförallt laktatassimilerande jästarter, till exempel Saccharomyces cerevisae samt Candida spp. som tros initiera aerob förskämning (Woolford 1990; McDonald et al., 1991). Under anaeroba förhållanden fermenteras socker och i vissa fall mjölksyra till ättiksyra, etanol och koldioxid (McDonald et al., 1991). Jästsvampar producerar inga kända toxiner som kan 14

inverka skadligt på djur som konsumerar ensilage, så jäst anses inte vara skadligt i sig, men kan påverka den aeroba stabiliteten negativt (Müller et al., 2011). Bakterier Klostridier Klostridier är gram-positiva, sporformande, stavformiga bakterier. De är obligat anaeroba bakterier som generellt gynnas av en misslyckad ensilering; låg ts-halt, högt ph, hög buffertkapacitet i grönmassan, lågt WSC-innehåll, hög temperatur samt utdragen inläggning i silon. Klostridier delas in i två grupper; sackarolytiska eller proteolytiska klostridier beroende på vilka substrat de huvudsakligen använder. Vissa arter, till exempel C. perfringens har förmågan att använda både socker och aminosyror som substrat. De sackarolytiska klostridierna fermenterar framförallt socker och organiska syror. Till denna grupp hör bland annat C. butyricum och C. tyrobutyricum. Slutprodukterna av denna fermentation är bland annat butyrat, acetat och i vissa fall etanol (McDonald et al., 1991). De proteolytiska klostridierna bryter ned aminosyror under bildning av bland annat ammoniak, fettsyror och aminer (McDonald, et al., 1991). Aminerna som bildas, i synnerhet histamin, har visat sig kunna ha toxiska effekter på djur som utfodras med klostridiejäst grovfoder (McDonald et al., 1991). Klostridier är oönskade mikroorganismer i ensilage dels på grund av att de kan minska fodrets näringsvärde genom att bryta ned proteiner, dels sänka fodrets smaklighet genom att bilda butyrat, ammoniumkväve och aminer, som alla visat sig minska foderintaget hos idisslare (McDonald et al., 1991). Dessutom bildar vissa arter, till exempel C. botulinum, toxiner som kan vara mycket skadliga för de djur som utsätts för dem. Just C. botulinum-toxinet är ett av det mest potenta toxin man känner till, och det orsakar förlamning och dödsfall hos djur som ätit kontaminerat foder (McDonald et al., 1991). Bacillus spp. Bakterier ur släktet Bacillus är sporbildande, stavformiga bakterier, men till skillnad från klostridierna är Bacillus spp. aeroba, vilket gör att de kan finnas som sporer i ensilage, men normalt inte tillväxer förrän fodret utsätts för syre. Dessa bakterier har visat sig spela en roll vad gäller aerob förskämning av ensilage vid temperaturer över 40 C. Förskämningsfloran skiftar från jäst till Bacillus spp. vid så höga temperaturer i ensilage. Dock verkar det som att Bacillus spp. inte kan inleda den aeroba förskämningsprocessen, utan först behövs tillväxt av jäst med påföljande höjning i ph-värdet för att Bacillus spp. skall kunna tillväxa (McDonald et al., 1991). 15

Enterobakterier Enterobakterier är ett stort släkte och innehåller såväl icke-patogena som patogena arter som kan orsaka sjukdom hos människor och djur, till exempel Escherichia coli. Enterobakterier är stavformiga, gramnegativa, fakultativt anaeroba och icke sporbildande bakterier som fermenterar kolhydrater, och kan även bryta ned protein. Under den tidiga aktiva fermentationsfasen ökar antalet enterobakterier för att senare åter minska i antal när ph-värdet sjunker. Dock kan de ha en fortsatt hög förekomst om fermentationen och ph-sänkningen är långsam, vid tillsats av myrsyra eller i vissa fall under aerob förskämning (McDonald et al., 1991). Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes är en fakultativt anaerob bakterie, som kan tillväxa vid väldigt låg syrekoncentration. Detta innebär att denna bakterie kan utgöra ett problem när förseglingen av ensilaget varit otät så att små mängder syrerik luft läckt in, och just balensilage har visat sig vara extra utsatt då det kan vara svårt att få plasten helt tät (McDonald et al., 1991). Bakterien återfinns till exempel i förmultnande växtmaterial, vatten, gödsel, jord och ensilage. Det finns många fall med får och nötkreatur där listerios kunnat kopplas till utfodring med ensilage av undermålig hygienisk kvalitet, och även vid utfodring med till synes välfermenterade ensilage. Listeria monocytogenes orsakar symptom som spontanabort och encephalit hos djur som konsumerat kontaminerat foder, och får har visat sig vara känsligare än nötkreatur (McDonald et al., 1991). Sjukdomen förekommer även hos häst med likartade symtom som hos nötkreatur och får, även om den är ovanlig hos detta djurslag (Rütten et al., 2006). Hygienisk kvalitet I tabell 3 redovisas rikt- och gränsvärden för olika variabler för hygienisk kvalitet i ensilage. För att fodret skall bedömas ha en god hygienisk kvalitet bör det självfallet inte heller ha synlig växt av jäst eller mögel (Spörndly, 2003). 16

Tabell 3. Normalvärden och riktvärden för olika variabler för hygienisk kvalitet i ensilage. Efter Spörndly (2003) Analys ph < (0,0257 ts %) + 3,71 För ts-halter mellan 15 % och 50 % Mögel 10 5 cfu/g Max Jäst 10 5 cfu/g Max Mjölksyra Direktskördat med myrsyra: Normalvärde 6-10% av ts Direktskördat utan myrsyra: Normalvärde 8-12% av ts Förtorkat (>30% ts): 3-7% av Normalvärde ts Ammoniumkväve <8% av total-n Bra 8-12% av total-n Mindre bra >12% av total-n Dåligt Smörsyra <0,10 % av prov Bra 0,10-0,30% av prov Mindre bra >0,30 % av prov Dåligt Ättiksyra 1-3% i allt ensilage Normalvärde Mjölksyrabildande bakterier >10 4 cfu/g Önskvärt Gramnegativa bakterier 10 3-10 4 cfu/g Max 10 9 cfu/g Mycket dåligt Aeroba bakterier 10 3 cfu/g Max Koliforma bakterier 10 2 cfu/g Max Anaeroba sporbildande 10 3 cfu/g Max bakterier Clostridium spp. 10 3 cfu/g Max Bacillus spp. 10 3 cfu/g Max Egen studie Med tanke på de hygieniska problem som kan uppstå vid syrexponering av inplastat vallfoder genomfördes en studie för att undersöka hur den mikrobiologiska och kemiska sammansättningen i hösilage (ts-halt cirka 60 %) påverkades av ompressning från rundbalar till små fyrkantsbalar, samt hur ett syrabaserat tillsatsmedel inverkade vid denna ompressning. Även den areoba stabiliteten mättes för att undersöka hur ompressning och användning av tillsatsmedel, eller en kombination av de båda, påverkade densamma. En tidigare pilotstudie visade att ompressning kan leda till en ökad jästtillväxt (Müller, 2002). Denna ökade jästtillväxt beror troligen på den extra syreexponering som det redan ensilerade fodret ofrånkomligen utsätts för vid ompressningen. Högre antal jästsvampar kan leda till förkortad aerob stabilitet (McDonald et al., 1991), vilket gör att ensilagebalar med högre jästinnehåll kan förväntas ha kortare hållbarhet efter öppning än balar med lägre antal jästkolonier. Syrabaserade tillsatsmedel har visat sig effektivt kunna hämma tillväxten av jäst och mögel även i ensilage med höga ts-halter (Jaakkola et al., 2010). Denna minskade tillväxt av oönskade mikroorganismer kan verka positivt på den aeroba stabiliteten (Jaakkola et al., 17