PRINCIPER FÖR OCH FÖRKLARING AV METODEN

Transkript

1 BRUKSANVISNING FÄRDIGA ODLINGSPLATTOR PA Rev.: April 2013 BD Sabouraud Glucose Agar BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin AVSEDD ANVÄNDNING BD Sabouraud Glucose Agar används för isolering och odling av svampar (jäst, mögel och dermatofyter) från kliniska prover. BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol, BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol och BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin är selektiva ia för isolering av svamp från kliniska prover. PRINCIPER FÖR OCH FÖRKLARING AV METODEN Mikrobiologisk metod. Sabouraud glukosagar är ett ium för allmänt ändamål ursprungligen avsedd för odlingen av dermatofyter. 1,2 Idag används det för isoleringen och odlingen av alla svampar. 3-5 Peptonerna i Sabouraud glukosagar utgör källor kvävehaltiga tillfaktorer. Glukos tillhandahåller en energikälla för tillen av mikroorganismer. Den höga glukoskoncentrationen är en fördel för tillen av (osmotiskt stabila) svamp an många bakterier inte tolererar den höga sockerkoncentrationen. Dessutom är lågt ph optimalt för svamp, men inte för många bakterier. 3 Sabouraud glukosagar är endast något selektivt mot bakterier. BD Sabouraud-agar, BD Sabouraud-agar gentamicin och och BD Sabouraud-agar penicillin och streptomycin är selektiva ia baserade på Sabouraud glukosagar. Selektiva el för att inhibera bakterier har adderats. Kloramfenikol är ett bredspektrumantibiotikum som är inhiberande för en bred skara av gramnegativa och grampositiva bakterier men kan ha en inhiberande effekt på flera patogena svampar. 4 Antimikrobiotika såsom penicillin, gentamicin och streptomycin, eller en kombination av dessa, har visat sig vara effektiva i inhibitionen av bakterier utan att påverka svamptill. 2-5 Dessa ia används för isoleringen av svamp från kliniska prover eller material som misstänks innehålla bakteriella kontaminanter. Sabouraud glukosagar är en av de ia som används i Microbial Limit Tests (mikrobiella gränstester) i USP och EP. 6,12 REAGENSER Formuleringar: Se tabell 1 FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER. Endast för professionellt bruk. Plattorna får inte användas om de visar tecken på mikrobiell kontamination, missfärgning, uttorkning, sprickbildning eller annan försämring. Se skriften ALLMÄN BRUKSANVISNING för information om aseptiska förfaranden vid hantering, biorisker och bortskaffning av använd produkt. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Förvara plattorna mörkt vid 2 till 8 C i originalomslaget efter mottagandet fram till dess de skall användas. Överhettning och nedfrysning skall undvikas. Plattorna kan inokuleras fram till utgångsdatum (se etiketten på förpackningen) och inkuberas under rekommenderad inkubationsperiod. Plattor från öppnade 10-plattförpackningar kan användas i en vecka vid förvaring i ren miljö vid 2 till 8 C. PA

2 Tabell 1: REAGENSER Sammansättningar* per liter aqua purif Produktnamn BD Sabouraud glukosagar penicillin and streptomycin gentamicin och BD Sabouraud-agar Beståndsdelar Pankreatisk 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g spjälkning av kasein Peptisk digestion av 5,0 5,0 5,0 5,0 djurvävnad Glukos 40,0 40,0 40, Agar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penicillin-G IU - - Streptomycin - 0,06 g - - Gentamicin - - 0,04 - Kloramfenikol - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 *Justerad och/eller kompletterad efter behov för att uppfylla prestandakriterierna. KVALITETSKONTROLL UTFÖRD AV ANVÄNDAREN Inokulera representativa prover följande stammar (för ytterligare information hänvisas till skriften ALLMÄN BRUKSANVISNING). Se not nederst på sidan avseende inkubation. Produktnamn Teststammar BD Sabouraud glukosagar penicillin and streptomycin gentamicin och **Candida God till utmärkt albicans God till utmärkt ATCC **Saccharomyces God till utmärkt cerevisiae God till utmärkt DSM 1333 ** Aspergillus God till utmärkt brasiliensis God till utmärkt ATCC16404 ** Penicillium God till utmärkt roquefortii God till utmärkt ATCC 9295 ***Trichophyton God till utmärkt mentagrophytes God till utmärkt ATCC 9533 *Staphylococcus Ingen inhibition aureus Fullständig inhibition ATCC *Escherichia coli Ingen inhibition ATCC Fullständig inhibition Ej inokulerad Ljust bärnstensfärgad Inkubering: *48 h C / **</= 5 days, C, aerobt FÖRFARANDE Tillhandahållet material BD Sabouraud glukosagar BD Sabouraud-agar BD Sabouraud-agar gentamicin och, eller BD Sabouraud-agar penicillin och streptomycin, alla tillhandahållna som 90 mm Stacker-plattor. Mikrobiologiskt kontrollerade. Material som ej följer Extra odlingsier, reagenser och laboratorieutrustning efter behov. PA

3 Provtyper Produkterna beskrivna I detta dokument är isoleringsia för svamp och kan användas (alternativt eller som en kombination av två av dessa ia) för alla kliniska prover (se också KLINISKA PRESTANDA OCH METODENS BEGRÄNSINGAR). Dessa ia används också inom måga områden av industriell mikrobiologi och för att övervaka hygien. Testförfarande Stryk provet så snart som möjligt efter att det ankommit till laboratoriet. Den strukna plattan används primärt för isolering av renkulturer från prover blandflora. Vid odling direkt från provtagningspinne rullas istället pinnen över ett litet ytområde nära kanten varefter plattan stryks från det inokulerade området. Om proven består av hudskrap, hår eller naglar, placera materialet i mitten på iets yta. Om möjligt, bör större partiklar pressas något nedåt på ytan hjälp av en steril pincett för att kontakt ska erhållas iet. För detektionen av dermatofyter, inkludera också BD Dermatophyte Agar (BD Dermatophyte-agar) eller BD Mycosel Agar (BD Mycosel-agar). Om BD Sabouraud-agar, BD Sabouraud -agar gentamicin och och BD Sabouraud-agar penicillin och streptomycin används, inkludera också en platta BD Sabouraud glukosagar. Slutligen bör ett icke-selektivt ium såsom BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood (BD Columbia-agar 5 % fårblod) också inokuleras för att tillhandahålla en indikation på att bakteriella patogener finns i provet. Om den används för detektionen av jäst (t.ex. Candida species) i kliniska prover, inkubera under 48 h vid 30 till 35 C. Om sporbildande svampar, inkluderande dermatofyter, misstänks, inkubera upp till en vecka vid 25 till 30 C. Dermatofyter kan emellanåt kräva 3 veckor eller längre för att tillväxa. Om den används för övervakning av hygien, inkubera upp till 7 dygn vid 20 to 25 C. Om inkubation är längre än 3 dygn, tillhandahåll tillräckligt fuktighet. Plattor kan förseglas självhäftande tejp för att undvika uttorkning. För detaljer avseende tilltemperatur och inkubation, se referenserna. 5,7-10 Resultat Efter tillräcklig inkubation, kan plattorna visa isolerade kolonier i strykta områden och sammanhängande i områden kraftig inokulation. Undersök plattorna för svampkolonier som uppvisar typisk färg och morfologi. Biokemiska tester och mikroskopiska samt serologiska procedurer bör utföras för att bekräfta fynden. 6-9 Eftersom antalet patogena svampar är stort, ges inga detaljer avseende deras utseende här. Se referenserna. 2,3,5-9 KLINISKA PRESTANDA OCH METODENS BEGRÄNSNINGAR Media som presenteras i detta document är standardia för isoleringen och odlingen av svamp från alla typer av kliniska och icke-kliniska prover På grund av den stora spännvidden vad gäller till och temperatur för svamp, kan det vara nödvändigt att inokulera flera plattor av samma ium och inkubera dem vid olika temperaturer. Se avsnittet för Testförfarande och tillämpliga referenser. 5,7-10 Eftersom BD Sabouraud glukosagar endast är svagt selektivt, kan bakterier växa på iet speciellt efter en förlängd inkubationsperiod. Om bakteriell kontamination av proverna, material eller områden under undersökning misstänks, bör ia en högre selektivitet, t.ex., BD Sabouraud-agar, BD Sabouraud-agar gentamicin och eller BD Sabouraud-agar penicillin och streptomycin användas för odlingen av provet. Nocardia och Actinomyces är filamentbildande bakterier (inga svampar!) och, följaktligen kan de ej växa på alla Sabouraud-ia innehållande bakteriella inhibitorer. PA

4 REFERENSER 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for ical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of ical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar ia. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. FÖRPACKNINGAR/TILLGÄNGLIGHET BD Sabouraud Glucose Agar Kat.nr Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 120 plattor BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol Kat.nr BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol Kat.nr Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 120 plattor BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin Kat.nr YTTERLIGARE INFORMATION Kontakta närmaste BD-representant för ytterligare information: Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

5 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA