Difco Shigella Antisera Poly

Transkript

1 Difco Shigella Antisera Poly Se symbolförteckningen vid slutet av bipacksedeln. S /07 Svenska AVSEDD ANVÄNDNING Difco Shigella Antisera Poly används för presumtiv identifiering av Shigellaspecies genom agglutinationstest på objektglas. Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly används för presumtiv identifiering av mikroorganismer i Alkalescens-Dispar-gruppen genom agglutinationstest på objektglas. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Shigella-species förorsakar den humana diarrésjukdomen shigellos (klassisk bacillär dysenteri). Sjukdomsgraden varierar från mild diarré till allvarlig dysenteri som kännetecknas av magkramp och ofta förekommande tarmtömningar med blodig, mukös avföring. Medan sjukdomen vanligtvis är självbegränsande kan den vara livshotande för unga, äldre och undernärda personer. Shigella-species har vanligtvis humana bärare och sprids vanligtvis inte i naturen. Trots att överföringen vanligtvis sker från person till person och genom förorenat vatten förekommer födoämnesburna sjukdomsutbrott. Genuset Shigella tillhör släktet Enterobacteriaceae. Shigella-species är fakultativa, anaeroba, gramnegativa bakterier som normalt är oxidasnegativa, laktosnegativa, H 2 S-negativa och icke-gasproducerande. Shigella och Escherichia är genetiskt besläktade. Vissa stammar av E. coli kan likna Shigella biokemiskt eftersom båda kan vara laktosnegativa, orörliga och ickegasproducerande. Dessa anaerogena, orörliga typer har historiskt kallats Alkalescens-Dispar-gruppen och klassificeras för närvarande som biotyper av E. coli. Konsultera tillämpliga referenser avseende biokemiska tester som är specifika för differentiering av dessa stammar från Shigella. 1-6 Serologisk testning med polyvalenta och gruppspecifika antisera bör användas för att bekräfta identifieringen av isolat som morfologiskt och biokemiskt identifieras som Shigella-species. Shigella-species är orörliga, så identifiering grundas på somatiska (O) antigener. Vissa stammar har dock antigener i viruskärna (envelope) som hindrar agglutination i somatiskt antiserum. Upphettning av suspensionen till 100 C i min förstör dessa interfererande antigener. De fyra species eller serotyper av Shigella som namngivits är S. dysenteriae (10 serotyper), S. flexneri (sex serotyper), S. boydii (15 serotyper) och S. sonnei. Se tillämpliga referenser för en komplett och aktuell förklaring av klassificeringen av Shigella. 1,2 PRINCIPER FÖR METODEN Identifiering av Shigella-species innefattar isolering av mikroorganismen, biokemisk identifiering och serologisk verifiering. Serologisk verifiering involverar den reaktion vid vilken mikroorganismen (antigenet) reagerar med dess motsvarande antikropp. Vid denna in vitro-reaktion uppstår en makroskopiskt synlig sammanklumpning som kallas agglutination. Den avsedda homologa reaktionen är snabb, dissocierar inte (hög aviditet) och har starka bindningar (hög affinitet). Eftersom en mikroorganism (antigen) kan agglutinera med antikroppar som producerats via reaktion mot andra species kan heterologa reaktioner förekomma. Dessa karaktäriseras av att de har svaga bindningar och bildas långsamt. Sådana oväntade och eventuellt oförutsägbara reaktioner kan orsaka en viss förvirring vid den serologiska identifieringen. En positiv homolog agglutinationsreaktion bör därför stödja den morfologiska och biokemiska identifieringen av mikroorganismen. Homologa reaktioner sker snabbt och har starka bindningar. Heterologa reaktioner uppstår sakta och har svaga bindningar. REAGENSER Difco Shigella Antisera Poly och Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly består av frystorkade, polyklonala antisera från kanin och innehåller cirka 0,04 % Thimerosal som konserveringsmedel. Difco Shigella Antisera Poly absorberas vid behov för att varje serumparti skall vara lika specifikt som praktiskt. Antisera absorberas till en viss grad utan att de homologa reaktionerna reduceras till en otillfredsställande nivå. De har absorberats inter- och intra-specifikt förutom när Shigella antisera inte bereds eller testas för: S. dysenteriae tillfälliga serotyper, S. flexneri X- och Y-varianter eller Alkalescens-Dispar-grupper

2 Antiserum Reagerar med Shigella Antiserum Poly, grupp A S. dysenteriae, typ 1-7 Shigella Antiserum Poly, grupp A 1 S. dysenteriae, typ 8ab, 8ac, 9, 10 Shigella Antiserum Poly, grupp B S. dysenteriae, typ 1-6 Shigella Antiserum Poly, grupp C S. boydii, typ 1-7 Shigella Antiserum Poly, grupp C 1 S. boydii, typ 8-13 Shigella Antiserum Poly, grupp C 2 S. boydii, typ Shigella Antiserum Poly, grupp D S. sonnei I och II Alkalescens-Dispar Antiserum Poly Alkalescens-Dispar, grupp 1, 2, 3 och 4 Efter utförd rehydrering och användning enligt anvisningarna räcker varje flaska Difco Shigella Antisera Poly och Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly till 60 objektglastester. Varningar och försiktighetsbeaktanden: Avsedd för in vitro-diagnostik. Förpackningen till denna produkt innehåller torrt naturgummi. Iakttag aseptisk teknik och vedertagna infektionsförebyggande försiktighetsåtgärder under samtliga förfaranden. Efter användning och innan de kasseras skall alla prover, behållare, objektglas, provrör och annat kontaminerat material steriliseras i autoklav. Följ bruksanvisningen noga. Förvaring Förvara frystorkade och rehydrerade Difco Shigella Antisera Poly och Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly vid 2 8 C. Långvarig exponering för andra temperaturer än de specificerade skadar reagenserna. Produktförsämring Utgångsdatum gäller för produkt i intakt behållare vid förvaring enligt anvisningarna. Använd inte produkten om den är sammanklumpad, missfärgad eller visar andra tecken på försämring. PROVTAGNING OCH -FÖRBEREDELSE Kliniska prover: Shigella kan påvisas på selektiva differentiella medier som t.ex. Hektoen Enteric Agar eller XLD Agar. Se tillämpliga referenser avseende specifika rekommendationer. 2-4 Kontrollera att en renkultur av mikroorganismen har erhållits och att reaktionerna vid biokemiska tester är förenliga med identifiering av organismen såsom Shigella-species. Efter att dessa kriterier har uppfyllts kan serologisk identifiering utföras. Prover från födoämnen: Shigella kan påvisas i en rad olika födoämnen förutsatt att proverna behandlats så att skadade mikroorganismer kan påvisas och så att överväxt av kompetetiva mikroorganismer förhindras. För rekommenderade förfaranden vid testning av födoämnesprover hänvisas till rekommenderade referenser. 5,6 Efter att ett fastställt protokoll har följts, kontrollera att en renkultur av mikroorganismen har erhållits. Reaktionerna vid biokemiska tester skall vara förenliga med identifiering av organismen såsom Shigella-species. Efter att dessa kriterier har uppfyllts kan serologisk identifiering utföras. FÖRFARANDE Tillhandahållet material: Difco Shigella Antisera Poly, Difco Alkalescens- Dispar Antiserum Poly Material som krävs men ej medföljer: Objektglas för agglutination med 1-tumsrutor, appliceringspinnar, vattenbad, kokning, steril 0,85-procentig koksaltlösning. Reagensberedning Vänta tills samtliga material uppnått rumstemperatur innan testerna utförs. Se till att alla glasföremål och pipetter är rena och fria från rester av t.ex. rengöringsmedel. Rehydrera genom att tillsätta 3 ml steril 0,85-procentig koksaltlösning och snurra ampullen försiktigt tills innehållet har lösts fullständigt. Testa isolatet för autoagglutination 1. Överför en ögla full med bakteriekultur från ett icke-selektivt medium till en droppe steril 0,85-procentig koksaltlösning på ett rent objektglas och slamma upp organismen. 2. Vicka runt objektglaset i en minut och läs sedan av för agglutination. 3. Om agglutination (autoagglutination) uppstår, är kulturen ojämn och kan inte testas. Renodla på icke-selektiv agar, inkubera och testa organismen igen enligt anvisningarna i steg 1 och Om ingen agglutination uppstår, fortsätt med testningen av organismen. Testförfarande Använd detta förfarande för att testa isolatet med varje utvalt antiserum. 1. Dispensera 1 droppe (35 µl) av det antiserum som skall testas på ett objektglas för agglutination. 2

3 2. Överför en del eller en ögla full med tillväxt från en isolerad koloni från ett fast, icke-hämmande agarmedium till reaktionsområdet ovan och blanda noggrant. 3. Negativ kontroll: Dispensera 1 droppe steril 0,85-procentig koksaltlösning på ett objektglas för agglutination. Tillsätt 1 droppe Difco Shigella Antiserum som skall testas på ett objektglas för agglutination och blanda noggrant. 4. Positiv kontroll: Dispensera 1 droppe Difco Shigella Antiserum som skall testas på ett objektglas för agglutination. Tillsätt 1 droppe lämpligt Difco QC Antigen Shigella eller stamkultur med känd serologisk identifiering. 5. Blanda varje reaktionsområde med en separat applceringspinne och vicka i 1 min. Avläs för agglutination. Kvalitetskontroll utförd av användaren Vid användningstillfället skall både homologa och heterologa antigenkontroller användas för att kontrollera funktionen hos antiserum samt de tekniker och den metodologi som används. Difco QC Antigens Shigella eller Difco QC Antigen Alkalescens-Dispar grupp 1 kan användas som homolog kontroll. Se förpackningsinlagan till Difco QC Antigens Shigella eller Difco QC Antigen Alkalescens-Dispar grupp 1 för ytterligare instruktioner. Kvalitetskontroll måste utföras i enlighet med gällande bestämmelser eller ackrediteringskrav samt laboratoriets etablerade procedurer för kvalitetskontroll. Det rekommenderas att användaren konsulterar tillämpliga NCCLS-riktlinjer och CLIA-föreskrifter för lämpliga kvalitetskontrollförfaranden. RESULTAT 1. Avläs och anteckna resultaten enligt följande: % agglutination (klar till något suddig bakgrund) % agglutination (bakgrunden lätt grumlig) % agglutination (bakgrunden måttligt grumlig) % agglutination (bakgrunden helt grumlig) - Ingen agglutination 2. Den positiva kontrollen bör uppvisa agglutination av grad 3+ eller högre. 3. Den negativa kontrollen bör inte uppvisa någon agglutination. 4. Positivt resultat för testisolat utgörs av agglutination av grad 3+ eller högre efter 1 min. 5. Om ingen agglutination förekommer eller om agglutinationen är svag skall detta förfarande följas för att avlägsna blockerande envelopeantigener: Bered en tät suspension av isolatet från ett agarmedum i 3 5 ml steril 0,85-procentig koksaltlösning. Upphetta i ett kokande vattenbad i min och låt svalna. Suspensionen skall inte visa någon fällning efter upphettningen. Om detta sker skall en annan koloni väljas för testen. Centrifugera vid 1000 rpm i min. Aspirera och kassera supernatanten. Resuspendera sedimentet i 0,5 ml steril 0,85-procentig koksaltlösning. Använd en droppe av suspensionen och utför agglutinationstesten på objektglas enligt anvisningarna ovan. 6. En delvis (mindre än 3+) eller fördröjd agglutinationsreaktion skall betraktas som negativ. 7. Om testresultatet för antingen den positiva eller den negativa kontrollen avviker från de resultat som beskrivs ovan, är testen ogiltig och resultatet kan inte rapporteras. METODENS BEGRÄNSNINGAR 1. Korrekt tolkning av de serologiska reaktionerna är avhängiga kulturens renhet, morfologiska karakteristika och biokemiska reaktioner förenliga med identifiering av mikroorganismen såsom Shigella-species. 2. Enbart serologiska metoder är inte tillräckliga för identifiering av isolatet såsom Shigella species. 3. Kraftig värme från externa källor (heta odlingsöglor, lågor, ljuskällor, m.m.) kan förhindra framställning av en jämn suspension av mikroorganismen eller orsaka avdunstning eller fällning i testblandningen. Falskt positiva reaktioner kan förekomma. 4. Ojämna kulturisolat kan förekomma. Dessa agglutinerar spontant och orsakar agglutination av den negativa kontrollen (autoagglutination). Vid serologiska tester bör släta kolonier väljas och testas. 5. Difco Shigella Antisera Poly och Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly har testats med kulturer som tagits direkt från agarmedier. Dessa antisera har inte testats med antigensuspensioner i koksaltlösning eller andra spädningsmedier. Om användaren gör ändringar i de rekommenderade 3

4 stegen måste varje parti antiserum testas med kända kontrollkulturer för att verifiera att förväntade reaktioner kommer att erhållas vid det modifierade förfarandet. KLINISKA PRESTANDA I en studie av Lefebvre, Gosselin, Ismail, Lorange, Lior och Woodward jämfördes i en agglutinationstest på objektglas den kliniska prestandan hos Difco Shigella Antisera, tillverkat av Difco Laboratories, med fem andra kommersiellt tillgängliga antisera och en kommersiellt tillgänglig latexagglutinationstest för serologisk gruppindelning av Shigella. 7 Fyrtiosex (46) Shigella-referensstammar, 50 kliniska Shigella-stammar och 9 icke- Shigella-stammar användes i denna studie. 7 Resultaten återfinns i tabellen nedan. Produkt Sensitivitet a Specificitet b Grupp A Grupp B Grupp C Grupp D Kommersiella antisera nr 1 85 (66/78) 100 (94/94) 97 (68/70) 100 (95/95) 99 (82/83) Kommersiella antisera nr 2 93 (88/95) 97 (86/89) 97 (68/70) 95 (79/83) 95 (79/83) Difco Antisera 94 (85/90) 99 (90/91) 96 (67/70) 100 (86/86) 98 (81/83) Kommersiella antisera nr 3 85 (71/84) 99 (96/97) 97 (68/70) 88 (76/86) 98 (81/83) Kommersiella antisera nr 4 47 (42/90) 100 (91/91) 100 (70/70) 100 (86/86) 99 (82/83) Kommersiella antisera nr 5 91 (77/85) 98 (91/93) 99 (69/70) 98 (87/89) 96 (80/83) Latexagglutinationstest 91 (84/92) 100 (89/89) 100 (70/70) 100 (86/86) 99 (82/83) a Nämnare varierade med antalet homogena stammar som påvisades av kommersiella antisera. b Totalt antal icke-shigella och heterologa Shigella-stammar som testades. För stammarna som utvärderades i denna studie var den totala sensitiviteten hos Difco Shigella Antisera 94 % och specificiteten hos Difco Shigella grupp A 99 %, Difco Shigella grupp B var 96 %, Difco Shigella grupp C 100 % och Difco Shigella grupp D 98 %. 7 I denna studie observerades korsreaktiviteten mellan: P. shigelloides och grupp D antisera H. alvei och S. flexneri och grupp B antisera E. coli ATCC och grupp D antisera E. coli 0157:H19 och grupp B antisera TILLGÄNGLIGHET Kat. nr. Beskrivning Difco Shigella Antiserum Poly, grupp A, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp A 1, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp B, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp C, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp C 1, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp C 2, 3 ml Difco Shigella Antiserum Poly, grupp D, 3 ml Difco Alkalescens-Dispar Antiserum Poly, 3 ml Difco Shigella Grouping Antiserum Set, 1 sats Satsen innehåller: Sju flaskor, 3 ml vardera, av grupp A, A 1, B, C, C 1, C 2, och D REFERENSER 1. Ewing, W.H. (ed.) Edwards and Ewing's identification of Enterobacteriaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York, N.Y. 2. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Forbes, B.A., D.F. Sahm, A.S. Weissfeld and E.A. Trevino Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 11th ed. Mosby Year Book, Inc., St. Louis, Mo. 4. Pezzlo, M. (ed.) Aerobic bacteriology, p In H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Association of Official Analytical Chemists FDA Bacteriological analytical manual online. < 6. Downes, F.P. and K. Ito (eds.) Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 4th edition. American Public Health Association, Washington, D.C. 7. Lefebvre, J., f. Gosselin, J. Ismail, M. Lorange, H. Lior and D. Woodward Evaluation of commercial antisera for Shigella serogrouping. J. Clin. Microbiol. 33:

5 Manufacturer / Producent / Fabrikant / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / ÊáôáóêåõáóôÞò /Ditta produttrice / Fabrikant / Fabricante / Tillverkare Use by / Anvendes før / Houdbaar tot / Viimeinkäyttöpäivä / A utiliser avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëþîçò / Usare entro / Brukes før / Utilizar em / Usar antes de / Använd före / YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) / JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) / JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) / ÅÅÅÅ-ÌÌ-ÇÇ / ÅÅÅÅ-ÌÌ (ÌÌ = ôýëïò ôïõ ìþvá) / AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) / aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) Catalog number / Katalognummer / Catalogusnummer / Tuotenumero / Numero catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Numero di catalogo / Katalognummer / Numero do catalogo / Numero de catalogo / Katalognummer Authorized Representative in the European Community / Autoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisossa / Representant agree pour la C.E.E. / Autorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Rappresentante autorizzato nella Comunita europea / Autorisert representant i EU / Representante autorizado na Uniao Europeia / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Auktoriserad representant i EU In Vitro Diagnostic Medical Device / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêþ éáôñéêþ óõóêåõþ / Dispositivo medico diagnostico in vitro. / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispositivo médico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik Temperature limitation / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Temperatura limite / Temperaturbegrensning / Limitação da temperatura / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning Batch Code (Lot) / Batch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Erakoodi (LOT) / Code de lot (Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Codice del lotto (partita) / Batch-kode (Serie) / Codigo do lote (Lote) / Codigo de lote (Lote) / Satskod (parti) Contains sufficient for <n> tests / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor <n> tests / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / ÐåñéÝ åé åðáñêþ ðïóüôçôá <n> åîåôüóåéò / Contenuto sufficiente per <n> test / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Contémo suficiente para <n> testes / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester Consult Instructions for Use / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing / Tarkista kayttoohjeista / Consulter la notice d emploi / Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ñþóçò / Consultare le istruzioni per l'uso / Se i bruksanvisningen / Consulte as instrucoes de utilizacao / Consultar las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen Control / Kontrol / Controle / Kontrolli / Contrôle / Kontrolle / ëåã ïò / Controllo / Kontroll / Controlo / Control / Kontroll 5

6 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: Difco is a trademark of Difco Laboratories, Inc., a subsidiary of Becton, Dickinson and Company. BD and BD Logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.