EQUALIS användarmöte i klinisk mikrobiologi Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi Centralsjukhuset, Karlstad och Aleris Medilab, Täby

Transkript

1 EQUALIS användarmöte i klinisk mikrobiologi 2010 Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi Centralsjukhuset, Karlstad och Aleris Medilab, Täby

2 Chlamydia trachomatis, nukleinsyra /1-6

3 Chlamydia trachomatis, nukleinsyra /1-6 Utskicket visar att nukleinsyradiagnostik av C. trachomatis är av hög kvalitet, vilket återspeglas i utfallet för prov innehållande vildtyp resp nv Ct av C. trachomatis. Skillnad i laboratoriernas detektionförmåga mellan vildtyp resp. nv Ct kunde inte påvisas. Då enskilda laboratorier finner sensitivitetsproblem i upprepade utskick (ex.v. oförmåga att detektera C. trachomatis i prov uttitrerade kring detektionsgräns) rekommenderas att anledningarna till detta analyseras

4 Borreliautskick Prov 1 Anamnes: 43-årig kvinna med misstänkt erytem för 2 månader sedan. Ej antibiotikabehandlad. Förväntat resultat: Pos (IgG) Gräns (IgM) Neg (syfilis) Bedömningsalternativ C Provet visar på problemet med möjlig borrelios vid en lokal hudreaktion liknande erytema migrans. Serologi är här inget tillförlitligt redskap för diagnos eftersom antikroppssvaret varierar och i hög grad inte ens är mätbart med våra tester. Resultat: Alla tester utom IDEIA är enhetligt reaktiva för IgG. IDEIA-resultaten är spridda kring gränsvärde med en liten övervikt för reaktiva test. För IgM är majoriteten av testerna reaktiva med undantag av Liaison-testerna där majoriteten är negativa. Tillverkaren av denna test anger en sensitivitet för IgM kring 50 %. Givna kommentarer är överlag adekvata utifrån erhållna resultat.

5 Borreliautskick prov 2-4 Prov 2, 3 och 4 belyser bland annat problemet med att borreliaserologi tas för säkerhets skull eller som led i ett screeningprogram vid diffusa symtom som oftast inte beror på borrelios. I en befolkning där många utsatts för borreliasmitta har också många IgG-antikroppar som tecken på tidigare exposition. Här kan variationen i IgG-resultat mellan de olika testerna kanske delvis förklaras med olika kinetik för antikroppar riktade mot de olika antigen som används i testerna. För en del antigen verkar antikroppssvaret vara mätbart många år efter exposition medan för andra antikroppssvaret snabbt klingar av. Den individuella variationen är också stor.

6 Borreliautskick Prov 2 Anamnes: 50-årig hundägare med diffusa muskelbesvär sedan 4 månader. Förväntat resultat: Neg (IgG) Neg (IgM) Neg (syfilis) bedömningsalternativ A Alla deltagare får negativa resultat för både IgG och IgM. Kommentarerna är överlag adekvata.

7 Borreliautskick Prov 3 Anamnes: 86-årig man med minnessvårigheter sedan 4 mån. tillbaka. Remitterad till infektionsklinik. Resultat: Pos (IgG) Neg (IgM) Neg (syfilis) Bedömningsalternativ G Samtliga tester som innehåller VlsEantigen eller del av detta är uniformt reaktiva. IDEIA-testen fördelar resultaten mellan negativt och gränsvärde samt med ett reaktivt resultat. IgM-testerna är alla negativa. Kommentarerna är i stort sett relevanta utifrån erhållna resultat.

8 Borreliautskick Prov 4 Anamnes: Ledvärk, exponerad för fästingar. Resultat: Pos (IgG) Neg. (IgM) Neg (syfilis) bedömningsalternativ F IDEIA-testens resultat fördelar sig jämt mellan negativt, gränsvärde och reaktivt. Övriga IgG-tester är reaktiva. IgM-testerna är negativa med undantag för ett Lineblot-resultat. Kommentarerna är i stort sett adekvata utifrån de resultat som erhållits i testerna.

9 Luesdiagnostik /1-4 Förväntat svar VDRL TPPA /1 Positiv Positiv /2 Negativ Negativ /3 Svagt positiv Positiv /4 Negativ Positiv Anamneser 41/1: 29-årig man. STI-klinik. MSM. 41/2: 40-årig man. STI-klinik. Kontroll efter Köpenhamnsbesök i våras. 41/3: 23-årig man. STI-klinik. Anamnes saknas. 41/4: 35-årig barnlös kvinna. IVF-klinik. Screening.

10 Luesdiagnostik Paneldeltagarnas resultat: I stort sett mycket bra resultat Noteras kan att ONE-STEP test Syphilis (Toyo Diagnostics) ej detekterar syfilisantikroppar i prov 41/4. Syfilisantikropparna hos denna patient upptäcktes i samband med besök på en IVF-klinik. Patienten var inte tidigare behandlad och remitterades därför till STI-klinik. Patienten bedömdes eventuellt ha en latent infektion och behandlades sedermera. Slutsats: Tillfredsställande syfilisdiagnostik på de laboratorier som ingick i utvärderingen.

11 Chlamydophila pneumoniaeantikroppar /1-5 Syfte: Materialet illustrerar diagnostik av infektioner med C. pneumoniae. Internationellt finns ett önskemål om att harmonisera diagnostiken även vad avser titrar för att uppnå största möjliga jämförbarhet. Av detta skäl önskar vi att deltagarna i prövningen även uppger titrar och inte bara en klinisk bedömning av serologiresultaten.

12 Chl pneumoniae-antikroppar 22/1-5 Svarskommentarer Prov 22/1 22/2 22/3 22/4 22/5 Svarsalternativ A 0/13 8/13 2/13 0/13 B 6/13 2/13 9/13 5/13 C 6/13 0/13 13/13 0/13 7/13 D 1/13 2/13 1/13 1/13 E 0/13 1/13 1/13 0/13 A = Serologiskt stöd för aktuell C. pneumoniae-infektion B = Tidigare genomgången C. pneumoniae-infektion, inget säkert stöd för aktuell infektion. C = Inga påvisbara antikroppar mot C. pneumoniae D = Ej säkert bedömbar avseende C. pneumoniae-infektion (vg ange orsak) E = Annat (kommentera).

13 Chl pneumoniae-antikroppar 22/1-5 Kommentarer av materialleverantören: Prov 1: Falskt negativa resultat för IgG, främst med ELISA-teknik. IgM bara konstaterat på 1 lab med IFL. Prov 2: Bra överensstämmelse. Två lab har bedömt resultaten som alt. B. Felregistrering? Prov 3: Alla korrekt helt negativa. Prov 4: Två IgM positiva, som ej noterats av utsändande lab. Prov 5: Hela 7 stycken lab får IgG negativt, främst med ELISA-test. Slutsats: Den mest använda ELISA-testen missar IgG i relativt hög utsträckning.

14 Chl pneumoniae-antikroppar 22/1-5 Kommentarer av expertgruppen: Givna svarskommentarer är överlag adekvata utifrån de resultat laboratoriet erhållit. Ett laboratorium har rekommenderat provtagning för PCR-analys vid tveksamt resultat i serologin. Att utföra molekylärbiologisk diagnostik kan vara ett sätt att förbättra den diagnostiska säkerheten och borde kanske användas mer som komplement till serologin vid tveksamt resultat. Enstaka laboratorier har begärt ett andra prov, vilket också kan vara av värde. Observandum är: Att ELISA-tester inte påvisar IgG-antikroppar i proven 1 och 5. De icke-förväntade IgM-reaktiviteterna i MIF-tester. Som i tidigare utskick de stora variationerna i titerresultat för MIFtesterna i flera av proven.

15 Mycoplasma pneumoniaeantikroppar /1-4 Materialleverantörens kommentarer: En lika stor flora av metoder som 2008 har använts även i år av de olika laboratorierna. Ett av de tre lab, som använder KB, har inte kunnat bedöma 2 av de utskickade proven p.g.a. antikomplementär effekt. Köldagglutination har dykt upp igen. Fem lab mäter enbart IgM-antikroppar med hjälp av ELISA eller Immunocard.

16 Prov 1: Mycoplasma pneumoniaeantikroppar /1-3 Detta prov var förväntat negativt i både IgG och IgM samt partikelagglutination. Tre laboratorier detekterar en låg IgG-titer varav 2 dock bedömer provet som negativt eller av tveksam klinisk signifikans. Prov 2: Detta prov var förväntat klart positivt för både IgG och IgM samt partikelagglutination. Alla laboratorier har fått positiva resultat och bedömer det som tecken på aktuell infektion. Prov 3: Förväntat resultat var negativt i IgM och svagt positivt i IgG och partikelagglutination. Alla laboratorier som använt partikelagglutination har uppgett titrar mellan (ett laboratorium har inte angett titervärde). Alla labb får också negativt resultat eller gränsvärde för IgM. IgG-antikroppar detekteras av alla labb utom 1. De laboratorier, som använder AniLabsystems kit samt 2 labb, som inte angett metod, anger höga nivåer av IgG. Bedömningarna varierar därför mellan negativt till förenligt med aktuell eller tidigare genomgången infektion. Två laboratorier bedömer provet som negativt trots ett klart positivt resultat i IgG.

17 Mycoplasma pneumoniaeantikroppar /4 Prov 4: Materialleverantören fick detta prov klart positivt i IgG och partikelagglutination medan IgM var negativt. Alla labb var överens om att provet var positivt i IgG och partikelagglutination. Resultaten för IgM varierade betydligt. Sju labb (alla 4 AniLabsystemanvändare, 1 Savyon, 1 Immunocard och en okänd metod), fick positivt resultat. Av dessa låg dock 4 värden strax ovanför gränsvärdet. Sex laboratorier (alla 3 Virionanvändare, 2 Platelia och 1 Savyon) fick negativt resultat medan 4 labb (3 Savyon, 1 Platelia) angav gränsvärden. På grund av dessa olika resultat varierar bedömningarna från negativ hos 5 laboratorier till aktuell infektion hos 8 labb. Fyra laboratorier ansåg resultatet svårbedömt och begärde nytt prov medan övriga 9 labb gav olika kommentarer som innebar möjlig infektion, oklart när. Ett laboratorium kunde inte bedöma provet alls p.g.a. antikomplementär effekt.

18 Mycoplasma pneumoniaeantikroppar /1-4 Kommentarer av expertgruppen för medicinsk mikrobiologi: De flesta kommentarer till proven är relevanta utifrån erhållna resultat. För Fujirebios metod erhålls i samtliga prov en acceptabel spridning av resultaten (3 spädningssteg) med ett undantag. Det laboratorium som i prov 2 uppmätte titer 160 bör analysera varför. Materialleverantören har kommenterat variationen i EIA-metodernas resultat. För två av proven kan man fundera över om proven innehöll antikroppar nära cut off-gräns (prov 1 IgG, prov 4 IgM). Allmänt bör vi fundera på: Hur låga IgG-värden utan påvisbart IgM kommenteras. Dessa kan ju bero på tidigare genomgången infektion utan aktualitet, ny infektion hos person som tidigare genomgått infektion (där IgM-svar ofta uteblir) eller en aktuell infektion i tidigt skede. Hur lång tid bör vi rekommendera mellan akut- och konvalescentprov? Min erfarenhet är att 7-10 dagar ofta inte är tillräckligt. Sedan vi fick molekylärbiologisk diagnostik rekommenderar jag i första hand denna som alternativ.

19 Helicobacter pylori-antikroppar /1-5 Prov 1: Provet var svagt positivt och härrörde från en ung flicka. ImmuliteOne gav gränsvärde och Enzygnost negativt resultat. Ett annat prov analyserat m samma kit var positivt, men patienter kan bilda olika antikroppar bl.a. beroende på skillnader mellan infekterande stammar. Prov 2: Samtliga laboratorier erhöll positivt resultat. Prov 3: Provet var från en 67-årig kvinna, som med tanke på röntgen-fyndet sannolikt haft besvär under lång tid. Att det var ett svagt positivt värde kan bero på graden av atrofi, vilket inte är ovanligt hos äldre med lång tids infektion. Med Immunolite var ett prov negativt, med Enzygnost 2 prover negativa och med Pyloriset visade 2 prover gränsvärde och 2 negativt resultat. Prov 4: Samtliga laboratorier erhöll negativt resultat. Prov 5: Samtliga laboratorier erhöll positivt resultat.

20 Helicobacter pylori-antikroppar /1-5 Slutsatser och kommentarer av expertgruppen för medicinsk mikrobiologi: God överensstämmelse avseende resultat. Få laboratorier kommenterar sina svar. Kanske borde man fundera på om det skulle vara värt att kommentera att en isolerad IgG-analys inte med säkerhet kan skilja mellan aktuell och tidigare genomgången infektion och eventuellt rekommendera alternativ test (t ex fecesantigen eller urea breath test) för att påvisa aktuell infektion.

21 Helicobacter pylori-antigen /1-5 Resultatet var övervägande gott för de två ELISA-metoderna, medan snabbtesten blev negativ för flertalet användare i det femte, svagt positiva provet. Detta är ett observandum, som kan bero på lägre känslighet i området kring omslagspunkten relativt de andra testerna. Det är dock inte möjligt att dra några slutsatser av detta avseende den kliniska användbarheten av testet. Generellt bör användarna granska resultaten av genomförda paneltester och analysera eventuella avvikelser/förändringar över tid.