Reagenssatsens innehåll. Bruksanvisning för B R A H M S PCT LIA. B R A H M S service

Transkript

1 Neuendorfstraße 25 D Hennigsdorf Tyskland Immunluminometrisk analys (ILMA) för bestämning av PCT (prokalcitonin) i humanserum och plasma (system med belagda rör) Artikelnummer: 54.1 (100 bestämningar) B R A H M S och B R A H M S PCT är varumärken som registrerats av. Andra produktnamn i detta dokument används för identifiering och kan vara varumärken och/eller registrerade varumärken från respektive företag. Reagenssatsens innehåll Reagens Mängd för 100 best. Innehåll A 1 flaska, lyofiliserad Spårämne, luminiscensmärkt (akridiniumderivat) anti-pct-antikropp (monoklonal, mus), blåfärgad lösning, 29 ml efter spädning med buffert B B 1 flaska à 29 ml Buffert, för spädning av spårämne A, klar att använda C 2 x 50 rör Belagda rör (teströr) överdragna med anti-pct-antikroppar (monoklonal, mus), klara att använda G 1 flaska à 4 ml Nollserum (humanserum), för spädning av standarder respektive kalibratorer och kontroller, klart att använda W 2 flaskor à 11 ml B R A H M S universella tvättlösning, koncentrat, 11 ml S1, S2, S3, 6 flaskor, lyofiliserade PCT-standarder (rekombinant), späds före användning med vardera S4, S5, S6 0,25 ml nollserum G. Koncentrationsområden: 0,08 (def.); 0,3 0,7; 1,5 2,5; 16 24; ; ng/ml För exakta koncentrationer, se bifogat informationsblad. K1, K2 2 flaskor, lyofiliserade PCT-kontroller 1 och 2, späds före användning med vardera 0,25 ml nollserum G. För koncentrationer, se bifogat informationsblad. REF utgångsdatum se etikett 2 8 C Bruksanvisning för B R A H M S PCT LIA Datum: (Denna version ersätter alla tidigare bruksanvisningar.) Skyddat av följande patent: USA N , N ; Europa N , No , N , N ; Tyskland N , N , N ; Japan N , N ; Australien N ; Kina N ZL X; Ryssland N ; Sydafrika N 93/6042 Innehållsmässiga ändringar jämfört med tidigare version Radering av masterkurva för PCT B R A H M S service Adress Neuendorfstr. 25 D Hennigsdorf, Tyskland Telefonväxel Tel: /883 0 Fax: / E-post: info@brahms.de Beställningar Tel: / , 700, 800 Fax: / E-post: order@brahms.de Kundservice Tel: / Fax: / E-post: service@brahms.de Internet B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 1 av 6

2 Inledning B R A H M S PCT LIA är en immunluminometrisk analys (ILMA) för kvantifiering av PCT-koncentrationen i humanserum och plasma. Två antigenspecifika monoklonala antikroppar som binder PCT, prokalcitonin, (antigenet) till två olika bindningsställen (kalcitonin- och katakalcinsegmenten) tillsätts i överskott. En av dessa antikroppar är luminiscensmärkt (spårämnet) och den andra är fäst på rörets insida (system med belagda rör). Under inkubationen reagerar båda antikropparna med provets PCT-molekyler. Som ett resultat av detta bildas sandwichkomplex, varvid den luminiscensmärkta antikroppen binder till rörets yta. När reaktionen är klar, avlägsnas överflödigt spårämne helt från röret och kasseras. Viktiga anvisningar Observera: Resultaten av B R A H M S PCT LIA ska utvärderas med hänsyn till alla laboratoriefynd och patientens totala kliniska status. Varning: Detta reagenskit innehåller material (t ex serum) av humant ursprung. För tillverkningen används endast material som har testats negativa på HBsAg liksom HIV I/II- och HCVantikroppar. Alla reagenser och patientprov måste emellertid hanteras med försiktighet eftersom allt humant material innebär en potentiell smittorisk. Följande reagenser i kitet innehåller konserveringsmedlet natriumazid i koncentrationer på < 0,1 viktprocent: buffert B och nollserum. Reagenserna får inte sväljas eller komma i beröring med hud eller slemhinnor. Hållbarhet och förvaring Förvara alla reagenser vid 2 8 C i sina originalförpackningar fram till användning. Iakttag de utgångsdatum som anges på huvudförpackningen och flasketiketterna. Den utspädda tvättlösningen kan användas i upp till 4 veckor, om den förvaras vid 2 8 C. Kontaminerad tvättlösning får inte användas. Detta visar sig som grumlighet eller ph-värden som är lägre än 6. Mängden spårämne som finns kvar på rörväggen kvantifieras genom att mäta luminiscenssignalen med lämplig luminometer och B R A H M S Basiskit LIA reagenser. Luminiscenssignalens intensitet () är direkt proportionell mot PCT-koncentrationen i provet. När en standardkurva har fastställts med hjälp av kända antigenkoncentrationer (kalibrerade mot syntetiskt intakt humant prokalcitonin) kan därefter de okända PCT-koncentrationerna i patientens serum- eller plasmaprov kvantifieras genom att jämföra testvärdena med kurvan. De reagensspecifika EU-säkerhetsdatabladen enligt EG-direktiv 91/155/EEG skickas på begäran. Vänd er till B R A H M S kundtjänst på telefonnummer: / Om det finns glasflaskor i reagenskiten, vill vi uttryckligen varna för risken för sprickor och därmed sammanhängande skaderisk. Reagenserna och avfall som uppstått genom testkiten måste avfallshanteras enligt lokala myndighetsföreskrifter för laboratorieavfall. Resultaten av denna analys skall alltid bedömas i kombination med den kliniska undersökningen, patientens anamnes och andra fynd innan några omedelbara åtgärder inleds. Om mindre än 100 bestämningar har utförts per analys, gäller följande förvaringsvillkor för utspädda reagenser: Förvara utspädda standarder resp. kalibratorer och kontroller vid 20 C (upptining möjlig tio gånger). Det utspädda spårämnet är hållbart i tre dagar vid 2 8 C, i annat fall skall det förvaras vid 20 C (upptining möjlig tio gånger). Laboratoriekvalitetskontroll Nationella riktlinjer för kvalitetskontroll av kvantitativa tester i medicinska laboratorier (nuvarande version) måste följas. Testnoggrannhet och precision kan exempelvis kontrolleras med hjälp av interna och/eller kommersiellt tillgängliga kontrollmaterial för laboratorier. Om oacceptabla kontrollvärden erhålls, följs standardmetoder för laboratoriediagnostik för att fastställa orsaken och vidta korrigeringsåtgärder. B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 2 av 6

3 Referensområden OBSERVERA: Brytpunkten kan variera beroende på den kliniska situationen. Därför bör läkare använda PCT-resultaten i kombination med andra laboratoriefynd och patientens kliniska tecken och tolka de verkliga värdena med hänsyn till patientens kliniska situation. Referensområdena nedan anges därför endast i orienterande syfte. Diagnos av systemisk bakterieinfektion/sepsis 1,2,3 SIRS (Systemic Inflammatory Response Syndrome), sepsis, allvarlig sepsis, och septisk chock kategoriserades i enlighet med kriterierna från konsensuskonferensen som hölls av American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine. 6 PCT < 0,5 ng/ml Lokal bakterieinfektion är möjlig Systemisk infektion (sepsis) 6 är inte trolig PCT > 0,5 och < 2 ng/ml Systemisk infektion (sepsis) är möjlig, men även olika andra tillstånd är kända för att inducera PCT (se nedan). PCT > 2 och < 10 ng/ml Systemisk infektion (sepsis) är trolig, även om andra orsaker är kända. PCT > 10 ng/ml Viktigt systemiskt inflammationssvar, nästan uteslutande beroende på bakteriell sepsis eller septisk chock Varning: PCT-nivåer under 0,5 ng/ml utesluter inte infektion, eftersom lokala infektioner (utan systemsymtom) kan ge så låga värden. Även om PCT-mätningarna utförs mycket snart efter bakterieprovokation (oftast < 6 timmar) kan dessa värden fortfarande vara låga. I detta fall bör PCT analyseras igen 6 24 timmar senare. 4 Liten risk för utveckling av allvarlig systeminfektion (allvarlig sepsis). 6 Måttlig risk för utveckling av allvarlig systemisk infektion (allvarlig sepsis). 6 Patienten ska noga övervakas såväl kliniskt som genom ännu en PCT-analys inom 6 24 timmar. Hög risk för utveckling av allvarlig systeminfektion (allvarlig sepsis). 6 Hög sannolikhet för allvarlig sepsis eller septisk chock. 6 Ökade PCT-nivåer behöver inte alltid bero på systemisk infektion: Det finns ett fåtal situationer beskrivna när PCT kan vara förhöjt på grund av andra orsaker än infektion. Dessa omfattar, men är inte begränsade till, - de första dagarna efter ett större trauma, större kirurgiska ingrepp, brännskador, behandling med OKT3-antikroppar och andra läkemedel som stimulerar frisättningen av proinflammatoriska cytokiner, småcellig lungcancer, medullär C-cellscancer i tyreoidea, nyfödda < 48 timmar gamla. 4 - patienter med långvarig eller allvarlig kardiogen chock, långvariga allvarliga organperfusionsanomalier. 4 Normala individer: PCT-koncentrationer i serum eller plasma hos friska personer som mäts med denna analys är < 0,3 ng/ml, dvs. under testets detektionsgräns. Bestämning av normalvärden med ett test med hög känslighet visade normalvärden som låg under 0,05 ng/ml. 7 Litteraturförteckning 1. Müller B. et al.: Calcitonin precursors are reliable markers of sepsis in medical intensive care unit. Crit. Care Med. 2000, 28(4): Harbarth S. et al.: Diagnostic value of procalcitonin, interleukin-6 and interleukin 8 in critically ill patients admitted with suspected sepsis. Am. J. Resp. Crit. Care Med. 2001, 164: Brunkhorst F.M. et al.: Procalcitonin for early diagnosis and differentiation of SIRS, sepsis, severe sepsis and septic shock. Intensive Care Med. 2000, 26(suppl.2): Meisner M.: Procalcitonin (PCT) A new, innovative infection parameter. Biochemical and clinical aspects. Thieme Stuttgart, New York 2000, ISBN: Meisner M. et al.: Procalcitonin Influence of temperature, storage, anticoagulation and arterial or venous asservation of blood samples on procalcitonin concentrations. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997, 35 (8): American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine: Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis. Crit Care Med 1992, 20: Morgenthaler N. et al.: Detection of procalcitonin (PCT) in healthy controls and patients with local infection by a sensitive ILMA. Clin Lab (5-6): Chiesa C, Panero A, Rossi N, Stegagno M, De Giusti M, Osborn JF, Pacifico L. Clin Infect Dis (1998), 26: : Reliability of Procalcitonin Concentrations for the Diagnosis of Sepsis in Critically III Neonates B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 3 av 6

4 Analyskarakteristik Utspädning (med standardkurva) Prov Utspädning Uppmätt koncentration [ng/ml] 1 outspädd 1:2 1:4 1:8 1:16 2 outspädd 1:2 1:4 1:8 1:16 3 outspädd 1:2 1:4 1:8 1:16 30,9 15,1 7,08 3,5 1,63 482,0 247,0 125,0 62,2 32,2 6,14 3,01 1,59 0,72 0,35 Förväntad koncentration [ng/ml] 30,2 28,3 28,0 26,1 28,2 494,0 500,0 497,5 515,2 501,7 6,0 6,4 5,8 5,5 5,9 Utbyte (%) Spädda provers linearitet är godtabgar över hela koncentrationsområdet. Noggrannhet: Den analytiska analyskänsligheten är ca 0,1 ng/ml. Den funktionella analyskänsligheten (20 % variationskoefficient vid interanalys) är ca 0,3 ng/ml. Alikvoter av 14 prover fördelade över mätområdet analyserades i duplikat på 20 dagar av 4 olika operatörer med olika reagensloter. Profilerna för precision totalt och inom körning (medelvärde av PCT-koncentration mot CV %) är följande: Total Precision inom precision körning Medelvärde (ng/ml) CV % CV % 00/20 0,54 13,4 4,0 00/21 2,61 8,7 3,1 Prov 1 0,14 16,6 10,0 Prov 2 0,43 13,9 6,3 Prov 3 1,00 9,6 4,0 Prov 4 2,46 7,9 3,4 Prov 5 2,44 9,6 4,3 Prov 6 2,17 9,5 3,3 Prov 7 4,92 8,9 2,5 Prov 8 14,1 7,1 2,4 Prov 9 43,2 5,3 2,7 Prov 10 34,2 7,1 2,5 Prov 11 66,6 5,7 2,8 Prov ,7 3,2 Återställning Sera med olika PCT-koncentrationer tillsatta med en definierad mängd PCT.Återställningsvärdena låg i ett godtagbart område ( %). Kalibrering Standarderna ges i definierade PCT-koncentrationer, området är mellan 0,8-500 ng/ml.kalibratorernas koncentrationer validerades med N-terminal aminosyrasekvensering (Edmanns metod) och massanalys.materialet som används är rekombinant humant PCT. Störande ämnen: Serumbeståndsdelarna som listas i tabellen nedan testades i B R A H M S PCT LIA.Testförfarandet följer CLSI EP7-P, Interference Testing in Clinical Chemistry.De listade koncentratonerna befanns inte påverka testprestandan. Påverkan av läkemedel Ingen påverkan av antimikrobiella ämnen, kemoterapeutika, vasoaktiva läkemedel, analgetika, antikoagulantia eller diuretika på PCT-mätningen har observerats (se nedan).läkemedel som ger en massiv frisättning av cytokiner, t.ex. OKT3-antikroppar, kan ge en förhöjning av PCT-halten, oberoende av infektion. Störande ämne Bilirubin (konjugerat) Triglycerid Hemoglobin Protein (albumin) Imipenem Cefotaxim Vancomycin Dopamine Noradrenalin Dobutamin Heparin Furosemid Kalcitonin Katakalcin a-cgrp* ß-CGRP* Kalcitonin lax Kalcitonin ål *Kalcitonin genrelaterad peptid High dose hook -effekt Icke-störande koncentration 40 mg/dl 643 mg/dl 500 mg/dl 1 g/dl 1,18 mg/ml 90 mg/dl 3,5 mg/ml 13 mg/dl 2 µg/ml 11,2 µg/ml 8000 U/l 2 mg/dl 8 ng/ml 30 ng/ml 30 ng/ml 30 ng/ml 30 µg/ml 30 µg/ml High dose hook -effekt uppkommer i immunometriska analyssystem och ger felaktigt låga PCT-resultat vid mycket höga PCT-koncentrationer (mer än 900 ng/ml efter kalibrering). Om PCT-resultat som är högre än den högsta standarden erhålls, bör därför proven spädas med det spädningsserum (nollserum) som finns i analyssatsen och testet görs om för att få rätt PCTkoncentration. Även utan dessa spädningssteg, kommer alla koncentrationsvärden som erhålls med de olika analysmetoderna att ligga i området som anger högre PCT-koncentrationer, vilket skulle medge en diagnos på sepsis. B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 4 av 6

5 Testmetod Inkubationsschema 1. Numrering Teströr (a, b) S1 S6 K1, K2 P1 etc. 2. Pipettering Standarder µl 20 Kontroller µl 20 Patientprov µl Pipettering Spårämne µl Inkubering 1 tim 1 tim 15 min i rumstemp. (18 25 C) på rundgående skakbord ( varv/min) 5. Dekantering Tillsätt 1 ml tvättlösning till varje teströr och dekantera av vätskan. 6. Tvättning Tillsätt 1 ml tvättlösning fyra gånger till varje teströr och dekantera av vätskan. Vänd rören upp och ned och låt dem därefter rinna av på läskpapper i 5 10 minuter. 7. Insortering Placera alla teströren i luminometern. 8. Mätning Mät i luminometern genom automatisk injektion av B R A H M S Basiskit LIAreagenserna 1 och 2 Provbehandling Serum eller plasma kan användas, dock ska samma matrix användas till alla patienter vid kontroller. Prov, som inte används i analysen inom 24 timmar efter blodprovstagning, måste frysas och förvaras i 20 C Det är möjligt att frysa in och tina upp tre gånger. 5 Anvisningar för utförande av testen Använd inga reagenser som passerat det utgångsdatum som står på etiketten. De olika komponenterna i satsen är optimalt anpassade till varandra. Om komponenter från olika batcher byts ut eller blandas kan inte längre garantera resultatens tillförlitlighet. Vid stora testserier poolas reagenser med samma batchbeteckning. För varje testserie skall en ny arbetskurva göras. Vi rekommenderar dubbelbestämning av kalibratorer, kontroller och patientprov. Den angivna ordningsföljden på de olika arbetsstegen skall ovillkorligen följas. Patientprov där den fastställda koncentrationen ligger över mätområdet skall klassas som "> högsta standard". Resultatet får inte extrapoleras. Det motsvarande patientprovet skall spädas ut och testas på nytt. Ytterligare information kan du få genom att vända dig till kundservice på. Testbeskrivning 1. Förberedelser Låt alla kitkomponenter och patientprov bli rumstempererade. Rekonstituera standarder och kontroller med vardera 0,25 ml nollserum (reagens G). Rekonstituera spårningsämnet. Som en hjälp till korrekt märkning av rekonstituerad tracer (lot, utgångsdatum) kan 100 blanka etiketter beställas gratis under best.nr Skaka varsamt alla flytande reagenser även patientproven före användning (undvik skumbildning). Numrera de belagda rören (helst med a, b för dubbelproven). Förbered tvättlösning: Späd 11 ml koncentrat med destillerat vatten till 550 ml. Innan andra tvättlösningar används, rekommenderar vi å det bestämdaste att ni kontaktar tillverkaren eller distributören. Förbered luminometern för användning. 2. Pipettera ner 20 µl PTC-standard i stigande koncentrationer i teströrens botten S1 a, b... S6 a, b. Pipettera ner 20 µl av varje kontroll i teströren K1 a, b samt K2 a, b och 20 µl av varje patientprov med serum eller plasma i rören P1 a, b osv. För att undvika överföring till följande prov bör en ny pipettspets användas för varje prov. Obs! Det rekommenderas att provmatrixen inte ändras vid en uppföljningsanalys. 3. Pipettera ner 250 µl spårämne i alla teströr. Obs! För att minimera möjliga förskjutningseffekter ska den rekommenderade sammanlagda arbetstiden för steg 2 och 3 vara 15 minuter. 4. Teströren skakas kort på en provblandare, täcks med självhäftande folie och inkuberas under 1 tim 1 tim 15 min i rumstemperatur (18 25 C) i en horisontell rotator ( varv/min). Varning! Skydda teströren från ljus under inkubation. Utsätt aldrig teströren för ljus. 5. När inkubationen är klar, tillsätts 1 ml tvättlösning i varje teströr och därefter dekanteras vätskan av helt. Se till att även den övre delen av rörets innervägg är helt och hållet fuktad med tvättlösning när mer tvättlösning tillsätts. Endast på det här sättet kan man ta bort eventuella rester av spårämnet, som kan ha fastnat på den övre delen av rörets innervägg. 6. Tillsätt därefter 1 ml tvättlösning fyra gånger till alla teströr (se punkt 5 ovan) och dekantera av vätskan helt efter varje tvättsteg. Efter det sista sköljsteget får rören stå 5 10 minuter upp och ned på rent läskpapper för att vätska skall rinna av. Därefter knackas rören försiktigt mot läskpappret, så att de sista vätskeresterna försvinner. 7. Teströren placeras i luminometern i den ordningsföljd som mätprotokollet anger. 8. Starta luminiscensmätningen med automatisk injektion av vardera 300 µl av B R A H M S Basiskit LIAreagenser 1 och 2. Rekommenderad mättid är 1 sekund per rör. B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 5 av 6

6 Följ tillverkarens anvisningar strikt! Standardkurvan skall tas fram på nytt vid början av varje analys och reagensen skall hanteras enligt beskrivningen. Hantera reagenserna enligt anvisningarna. Olämplig hantering av reagenserna kan ge felaktiga testresultat. ansvarar inte för felaktiga testresultat som beror på olämplig förvaring, användning eller hantering. Beräkning av resultat Vid datorstödd utvärdering måste ett utvärderingsprogram (spline/outjämnad) väljas som passar den specifika kombinationen av dator och mätutrustning. Med hjälp av standardkurvan kan sedan de uppmätta luminiscenssignalvärdena användas för direkt bestämning av PCT-koncentrationer i ng PCT/ml i de okända proven. För teknisk support, kontakta kundservice på B R A H M S Aktiengesellschafts eller lämplig distributör/försäljare. Beräkningsexempel Signalvärden ( = relativa ljusenheter) med en AutoCliniLumat LB 952 (Laboratorium Prof. Berthold, Wildbad, D). Teströr (a) (b) (medelv.) PCT ng/ml Standard S (def.) 0,08 Standard S ,5 Standard S ,0 Standard S Standard S Standard S Patientprov P ,6 Signalvärdena kan variera beroende på vilken luminometer som används. Dessa värden skall därför endast betraktas som orienteringshjälp. Nödvändiga apparater/tillbehör B R A H M S Basiskit LIA (kan beställas från B R A H M S Aktiengesellschaft) Mikropipetter (20 µl, 250 µl) med utbytbar plastspets Provblandare Vortex Horisontell rotator Dispenser (5 ml) för B R A H M S universella tvättlösning, koncentrat, 11 ml Destillerat vatten Luminometer med två injektorer Standardkurva ,01 0, PCT [ng/ml] Symboler Symbol Användning Symbol Användning Symbol Användning Tillverkare CE-märkt enligt direktiv 98/79/EG om medicinsk utrustning för in vitro-diagnostik 50 Innehållet räcker till (antal) tester, t.ex. 50 Används senast Temperaturgräns REF Artikelnummer/ Katalognummer Grön punkt enligt tysk lag B R A H M S PCT LIA Bruksanvisning (version R12sv) Sida 6 av 6