Mikrobiologi - Livsmedel

Transkript

1 Rapport Kompetensprovning Mikrobiologi - Livsmedel Oktober 213 av Laurence Nachin, Christina Normark och Irina Boriak LIVSMEDELS VERKET NATIONAL FOOD AGENCY, Sweden

2 Intern och extern kontroll av dricksvatten- och livsmedelsanalyser I all analysverksamhet är det viktigt att arbetet håller en dokumenterat hög standard. För detta ändamål har de flesta laboratorier någon form av internt system för kvalitetssäkring. Hur väl analyserna fungerar måste dock även utvärderas av oberoende part. Genom deltagande i kompetensprovningar (KP) får laboratorierna en extern kvalitetskontroll av sin kompetens, vilket ackrediteringsorganen vanligen kräver. Vid en kompetensprovning analyseras likadana prov av ett antal laboratorier med sina rutinmetoder. Organisatören sammanställer och utvärderar resultaten i form av en rapport. Livsmedelsverkets kompetensprovningar ger: Extern och oberoende utvärdering av laboratoriers analyskompetens. Ökad kunskap om analysmetoder för olika typer av organismer. Expertstöd. Underlag för bedömning av ackreditering. Extra material för uppföljning av resultat utan kostnad. För mer information, besök vår webbplats: Livsmedelsverkets referensmaterial Som ett komplement till kompetensprovning tillverkar Livsmedelsverket även 7 olika referensmaterial (RM) för interna kontroller av livsmedels- och dricksvattenanalyser, inklusive analyser av patogener. För mer information, besök vår webbplats: Utgåva Version 1 ( ) Ansvarig utgivare Annika Rimland, Chef vid undersökningsavdelningen, Livsmedelsverket Programansvarig Laurence Nachin, Mikrobiolog, Mikrobiologienheten, Livsmedelsverket KP Oktober 213 har diarienummer 2519/213 vid Livsmedelsverket, Uppsala.

3 Kompetensprovning Mikrobiologi Livsmedel Oktober 213 Kvantitativa analyser Aeroba mikroorganismer, 3 C Aeroba mikroorganismer, 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 ºC Koliforma bakterier 37 ºC Termotoleranta koliforma bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Enterokocker Kvalitativa analyser Gramnegativa bakterier i pastöriserad mjölk och grädde Laurence Nachin, Christina Normark, Irina Boriak Livsmedelsverket, Mikrobiologienheten, Box 622, SE Uppsala, Sweden

4 Förkortningar Substrat BcS BGB BP BP+RPF EC medium PCA MPCA MPN MYP S&B TBX TSA TGE VRG VRGG Bacillus cereus Selektiv agar Briljantgrönt buljong Baird-Parker agar Baird-Parker agar + Rabbit Plasma Fibrinogen Escherichia coli medium Plate count agar Milk Plate Count agar Most Probable Number Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar Slanetz & Bartley agar Tryptone Bile X-Glucuronide agar Trypton Soja agar Trypton Glukos Extrakt agar Violettröd Galla agar Violettröd Galla Glukos agar Organisationer ISO International Organization for Standardization NMKL Nordisk Metodikkomité for Næringsmidler SLV/NFA Livsmedelsverket/National Food Agency, Sweden

5 Innehåll Allmän information om utvärdering av resultaten... 4 Analysresultat från provtillfället oktober Generellt utfall Aeroba mikroorganismer, 3 C och 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 ºC och 37 ºC Termotoleranta koliforma bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Enterokocker... - Gramnegativa bakterier i pastöriserad mjölk och grädde Utfall av enskilda laboratoriers analysresultat bedömning Boxdiagram Testmaterial och kvalitetskontroll Testmaterial Kvalitetskontroll Referenser Bilaga 1 Deltagarnas analyssvar Bilaga 2 z-värden

6 Allmän information om utvärdering av resultaten Statistisk utvärdering av resultaten Värden som ligger utanför en strikt normalfördelning identifieras som extremvärden (Grubbs' test med modifiering av Kelly (1)). I en del gränsfall görs subjektiva justeringar för att sätta rätt gräns utifrån den kunskap som finns om innehållet i blandningarna. Falska svar och extremvärden inkluderas inte i beräkningarna av medelvärden och standardavvikelser. Resultat som har rapporterats > värde kan inte utvärderas. Resultat som rapporterats < värde betraktas som noll (negativt utfall). Alla rapporterade resultat finns i bilaga 1. Enligt EN ISO/IEC 1743, som Livsmedelsverkets kompetensprovningar är ackrediterade mot, är det obligatoriskt för deltagande laboratorier att rapportera metodinformation för alla analyser som de rapporterar analyssvar för. Metoduppgifterna kan vara svåra att tolka, eftersom många laboratorier t.ex. har uppgivit substrat som skiljer från vad den refererade standarden anger. Jämförelser uppdelade efter metodeller substratval presenteras i anknytning till analysresultaten. Mätosäkerhet för åsatt värde Mätosäkerhet för ett åsatt värde beräknas som standardavvikelsen från provomgången dividerat med kvadratroten ur antal korrekta svar. Åsatt värde är medelvärdet av deltagarnas resultat för en parameter. Förklaringar till tabeller och figurer Tabeller n antal laboratorier som utförde analysen m medelvärde av deltagarnas resultat i log 1 cfu/ml (falska och extrema värden ingår inte) s standardavvikelse av deltagarnas resultat (falska och extrema värden ingår inte) F antal falskpositiva eller falsknegativa resultat < antal låga extremvärden > antal höga extremvärden totalt resultat för analysen värden som diskuteras I text Figurer Frekvensdiagram visar fördelningen av deltagarnas resultat för var blandning. Analysens medelvärde anges ovanför staplarna. värden inom accepterat intervall (bilaga 1) extremvärden falsknegativa resultat värden utanför X-axelns intervall 4 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

7 Analysresultat av provtillfälle oktober 213 Generellt utfall Provmaterial sändes ut till 199 laboratorier, varav 48 i Sverige, 134 i övriga Europa och 17 laboratorier i övriga världen. Av de 197 laboratorier som rapporterade utvärderade svar hade 65 (33 %) minst ett analyssvar med anmärkning. Vid det senaste provtillfället med ungefär samma parametrar (oktober 212) var andelen 5 %. Individuella resultat för varje analys visas i bilaga 1 och finns även på hemsidan efter inloggning Tabell 1: Mikroorganismer i varje blandning och % av avvikande resultat (F%: falskpositiv / falsknegativ, Ext: extremvärden). Blandning A Blandning B Blandning C % deltagare med avvikande svar 1 avvikande svar 2 avvikande svar >2 avvikande svar 13% 3% 1% 83% 24% 2% % 74% 4% 1% % 8% Organismer Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Enterococcus faecium Micrococcus sp. Pediococcus acidilactici Staphylococcus xylosus Micrococcus sp. Escherichia coli Bacillus cereus Staphylococcus aureus Analys Målorganism F% Ext Målorganism F% Ext Målorganism F% Ext Aeroba mikroorg. Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier Termotoleranta koliforma bakterier 3 o C K. pneumoniae 4 Micrococcus 1 1 Micrococcus 3 E. coli E. coli P. acidilactici 2 o C B. cereus E. faecium 3 5 S. xylosus 8 S. aureus Micrococcus K. pneumoniae Micrococcus E. coli E. coli 12 8 E. faecium S. xylosus B. cereus S. aureus K. pneumoniae E. coli E. coli 1 3 o C K. pneumoniae E. coli 37 o C E. coli K. pneumoniae E. coli E. coli 3 E. coli E. coli E. coli 5 5 Presum. B. cereus B. cereus 1 4 Koagulaspositiva stafylokocker (S. xylosus) Enterococker E. faecium 1 4 (P. acidilactici) 43 - S. aureus - Gramneg mikroog. i K. pneumoniae past. mejeriprodukt. E. coli E. coli :saknar målorganism: (mikroorganism):falskpositiv; analysen utvärderas inte Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 5

8 Aeroba mikroorganismer, 2 C och 3 C Blandning A I blandning A förekom stammen av Enterococcus faecium i den högsta koncentrationen och utgjorde därför de flesta kolonierna på plattorna. Blandning B I blandning B förekom stammar av Pediococcus acidilactici och Staphylococcus xylosus i de högsta koncentrationerna och utgjorde därför de flesta kolonierna på plattorna. På Livsmedelsverket bildade P. acidilactici mindre kolonier, speciellt under inkubering vid 2 C, vilket kan förklara den stora spridningen av resultaten. Blandning C I blandning C förekom stammar av Micrococcus sp. och Staphylococcus aureus i de högsta koncentrationerna och utgjorde därför de flesta kolonierna på plattorna. Resultat från analys av aeroba mikroorganismer, 2 C Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 36 4,1, ,1,4 36 4,69, PCA 27 4,1, ,19,4 27 4,66, Petrifilm 3 4,2,7 3 3,84,8 3 4,74,2 A A 2 4, 2 PCA Petrifilm B log 1 B log 1 2 4,1 2 PCA Petrifilm C log 1 C log 1 2 4,7 2 PCA Petrifilm log 1 log 1 6 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

9 Resultat från analys av aeroba mikroorganismer, 3 C Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 186 4,4, ,26, ,83, PCA 14 4,3, ,35, ,84, Petrifilm 35 4,6, ,3, ,81,12 MPCA 23 4,4,6 23 4,36, ,83,7 TSA 12 4,5,1 12 4,21, ,86,1 TGE 5 4,, ,21,31 5 4,8,14 TEMPO 4 3,92,5 4 3,92,32 4 4,72,14 A A , PCA Petrifilm MPCA TSA 3 3 B log 1 B log , PCA Petrifilm MPCA TSA 2 2 C log 1 4,8 C 1 log PCA Petrifilm MPCA TSA log 1 log 1 För blandning A och C finns ingen tydlig skillnad i resultat från analys med olika substrat. För blandning B är resultaten från inkubering i 3 C spridda i två toppar, där de lägre resultaten är kopplade till användning av Petrifilm. De medelvärden som analys på Petrifilm gav vid både 3 C och 2 C motsvarar ungefär koncentrationen av S. xylosus i blandning B. Detta tyder på att stammen av P. acidilactici troligen inte bildar kolonier på Petrifilm och förklarar lägre medelvärden och standardavvikelser. De enstaka laboratorierna, som använde den MPN-baserade metoden Tempo för analys vid 3 C fick lägre medelvärden för alla blandningarna. Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 7

10 Främmande mikroorganismer Blandning A På Livsmedelsverket räknade vi tre morfologiskt olika kolonier på plattorna, vilket indikerar att det fanns tre stammar i blandning A som bildade kolonier på sockerfri agar, d.v.s. Enteroccoccus faecium, Klebsiella pneumoniae och Escherichia coli. Blandning B På Livsmedelsverket kunde vi urskilja tre olika typer av kolonier, vilket indikerar att de tre stammarna som fanns i blandning B kunde bilda kolonier på sockerfri agar, d.v.s. Pediococcus acidilactici, Staphylococcus xylosus och Micrococcus spp. Kolonier av P. acidilactici var dock mycket små (pin-point) och skulle därför inte räknas enligt metoden ISO 13559:22 / IDF 3:22. Blandning C Liksom för analys av aeroba mikroorganismer utgjordes de flesta kolonierna på plattorna av Micrococcus sp. och S. aureus. Resultat från analys av främmande mikroorganismer Metod Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 23 3,78, ,78, ,49,52 ISO13559: ,85, ,77, ,74,13 Annan 12 3,72, ,79, ,23,65 A A 2 3,8 2 ISO 13559:22 / IDF 3:22 Annan B log 1 B log 1 2 3,8 2 ISO 13559:22 / IDF 3:22 Annan C log 1 C log 1 2 4,5 2 ISO 13559:22 / IDF 3:22 Annan log 1 log 1 8 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

11 Få laboratorier utförde analysen och resultaten är spridda för alla tre blandningarna. Hälften av laboratorierna rapporterade att de följde metoden ISO 13559:22 / IDF 3:22, men alla använde samma substrat, sockerfri agar. Enterobacteriaceae Blandning A Både Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae var målorganismer för analysen. Blandning B I blandning B fanns inga målorganismer för analysen. Blandning C En stam av Escherichia coli var målorganism för analysen. Resultat från analys av enterobacteriaceae Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 148 3,37, ,2,16 2 VRGG 19 3,36, ,99,17 1 Petrifilm 33 3,39, ,11,11 A A , VRGG Petrifilm C log 1 C log , VRGG Petrifilm log 1 log 1 För blandning C rapporterade de laboratorier som använder Petrifilm något högre värden än de som använder VRGG. Det är möjligt att indikatorfärgämnet som ingår i Petrifilm underlättade avläsningen av kolonier och ledde därmed till ett högre värde för blandning C. Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 9

12 Koliforma bakterier, 3 C och 37 C Blandning A Både Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae var målorganismer för dessa analyser. Blandning B I blandning B fanns inga målorganismer för dessa analyser. Blandning C En stam av Escherichia coli var målorganism för dessa analyser. Resultat från analys av koliforma bakterier, 3 C Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 63 3,31, ,99, VRG 42 3,3, ,96, 1 TSA/VRG 7 3,37, ,7,26 Petrifilm CC 5 3,34, ,7,11 1 Petrifilm EC/CC 4 3,32, ,5,17 A A 4 3 3,3 4 3 VRG TSA / VRG C log 1 C log , 4 3 VRG TSA / VRG log 1 log 1 Resultat från analys av koliforma bakterier, 37 C Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 3,36, ,3, VRG 51 3,36, ,98, TSA/VRG 1 3,45, ,11, Petrifilm CC 3,41, ,13,6 1 Petrifilm EC/CC 14 3,4, ,9,14 BGB 6 3,27, ,5, Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

13 A A , VRG Petrifilm CC Petrifilm EC/CC TSA / VRG 1 1 log 1 log 1 C C , VRG Petrifilm CC Petrifilm EC/CC TSA / VRG 1 1 log 1 log 1 Analyserna av koliforma bakterier orsakade inga problem. Resultaten är snarlika oberoende av vilket substrat som användes. Termotoleranta koliforma bakterier Blandning A Både Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae är termotoleranta koliforma bakterier. Blandning B I blandning B fanns ingen målorganism för analysen. Blandning C En stam av Escherichia coli var målorganism för analysen. Resultat från analys termotoleranta koliforma bakterier Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 59 3,36, ,1, TSA/VRG 28 3,43, ,14,11 VRG 13 3,31, ,1,12 EC medium 7 3,29, ,5, Petrifilm EC/CC 5 3,38, ,4,7 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 11

14 A A , TSA / VRG VRG EC medium 5 5 C log 1 C log , TSA / VRG VRG EC medium 5 5 log 1 log 1 Laboratorier som följde MPN-baserade metoder med EC-buljong fick större spridning på resultaten och några av dem blev identifierade som extremvärden för blandning C. Escherichia coli Blandning A Både Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae är termotoleranta koliforma bakterier. På Livsmedelsverket kunde vi tydligt urskilja två olika typer av kolonier på TSA/VRGG efter inkubering vid 44 C. Båda jäste laktos vid 44 C, men bara en typ var positiv i indoltest, d.v.s. kolonier av E. coli. Blandning B I blandning B fanns inga målorganismer för denna analys. Blandning C En stam av Escherichia coli var målorganism för denna analys. Resultat från analys av E. coli Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 126 3,16, ,9, Petrifilm EC/CC 34 3,9, ,9, 1 1 Petrifilm SEC 17 3,16, ,,8 1 1 TSA/VRG 22 3,3, ,13,16 VRG 14 3,18, ,8, TBX 14 3,, ,93, Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

15 A A , Petrifilm EC/CC Petrifilm SEC TSA / VRG VRG TBX C log 1 C log , Petrifilm EC/CC Petrifilm SEC TSA / VRG VRG TBX log 1 log 1 Det finns inga statistisk signifikant skillnad mellan redovisade resultat som beror på valet av substrat. Det kan dock noteras att användning av det kromogena substratet TBX ger ett lägre värde jämfört med det totala medelvärdet, 3, mot 3,16 och 2,93 mot 3,9 för blandning A och C. På detta substrat, som påvisar β-glucuronidase-aktivitet, bildar bara E. coli typiska kolonier (K. pneumoniae producerar inte enzymet β-glucuronidase). För blandning A redovisades högre resultat med TSA/VRG. På VRG, både med och utan TSA, bildar både E. coli och K. pneumoniae typiska kolonier, som kan tolkas som E. coli om konfirmeringssteget uteblir eller om majoriteten av konfirmerade kolonier är E. coli. Presumtiv Bacillus cereus Blandning A I blandning A fanns ingen målorganism för analysen. Blandning B I blandning B fanns ingen målorganism för analysen. Blandning C Blandning C innehöll en typisk stam som tillhör gruppen presumtiv Bacillus cereus. Resultat från analys av presumptiva B. cereus Metod Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar ,52, NMKL 67: ,54, ISO 7932: ,45,21 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 13

16 C C 4 3 3,5 4 3 NMKL 67:21 ISO 7932: log 1 log 1 NMKL metoden 67:21 föreskriver konfirmering av misstänkta kolonier från blodagar-plattor på BcS eller Cereus-Ident-Agar (kromogent substrat), medan ISO metoden 7932:24 föreskriver isolering på MYP-agar och därefter konfirmering av misstänkta kolonier på blodagar. Erhållna resultat med ISO-metoden är fördelade i en topp något förskjuten mot lägre värden jämfört med de resultat som erhållits med NMKL-metoden. Koagulaspositiva stafylokocker Blandning A I blandning A fanns ingen målorganism för analysen. Blandning B Det fanns ingen målorganism för analysen, men en stam av Staphylococcus xylosus ingick i blandning B. Tolv laboratorier rapporterade ett falskt positivt resultat. På BPagar kunde kolonierna tolkas som koagulaspositiva stafylokocker, men var negativa i efterföljande test av koagulasaktivitet. På BP-agar med RPFA var kolonier av S. xylosus atypiska, de saknade utfällningszon. Blandning C En stam av Staphylococcus aureus var målorganism för analysen. Resultat från analys av koagulaspositiva stafylokocker Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar ,6, BP ,59, BP + RPF ,65,1 1 Petrifilm Staph ,6,11 C C , BP BP+RPF Petrifilm 3 3 log 1 log 1 14 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

17 Nästan alla laboratorier som rapporerade ett falskt positivt resultat för blandning B använde BP-agar, vilket indikerar att konfirmeringssteget uteblev eller misslyckades. För blandning C finns ingen skillnad i resultat som beror på substratvalet. Enterokocker Blandning A En stam av Enterococcus faecium var målorganism för analysen. Blandning B I blandning B fanns inga enterokocker. På Livsmedelsverket bildade stammen av Pediococcus acidilactici rosa-aktiga kolonier på Slanetz-Bartley-agar. Kolonier ympade på BEA-agar hade inte hydrolyserat eskulin efter 2 timmars inkubering vid 44 C, men efter 24 timmar fanns en svärtning i substratet. Denna egenskap kan förklara att 43 % av laboratorierna, som utförde analysen, rapporterade ett positivt resultat. På grund av svårigheten att tolka analysen är resultaten inte utvärderade och ger därför inga z- värden. Resultaten är dessutom inte medräknade i tabellerna under boxdiagrammen. Blandning C I blandning C fanns ingen målorganism för analysen. Resultat från analys av enterokocker. Substrat Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar 78 3,93, S&B 59 3,92, TSA/S&B 9 3,93, A A 4 3 3,9 4 3 S&B TSA / S&B log 1 log 1 De flesta laboratorierna utförde analys av enterokocker enligt metoden NMKL 68:211 och/eller använde S&B-agar. Den höga andelen falska positiva resultat för blandning B kan därför inte kopplas till något speciellt metod- eller substratval, utan beror troligen på egenskaperna hos stammen av P. acidilactici som fanns i blandningen. Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

18 Gramnegativa bakterier i pastöriserad mjölk och grädde Blandning A Både Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae var målorganismer för analysen. Blandning B I blandning B fanns ingen målorganism för analysen. Blandning C En stam av Escherichia coli var målorganism för analysen. Resultat från analys av gramnegativa bakterier i pastöriserad mejeri produkter. Metod Blandning A Blandning B Blandning C n m s F < > n m s F < > n m s F < > Alla svar NMKL 192: Metoden NMKL 192:211 påvisar återkontamination av gramnegativa bakterier i pastöriserad mjölk och grädde. Metoden föreskriver förinkubering av förpackning vid 25 C i 24 timmar eller vid rumstemperatur i 28 timmar och därefter utstryk av 1 respektive 1 μl på VRGG. 16 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

19 Utfallet av enskilda laboratoriers analysresultat bedömning För att göra det möjligt att jämföra resultat från olika analyser och provblandningar med varandra omräknas laboratoriernas resultat från samtliga analyser till standardvärden (zvärden). För kvantitativa analyser blir standardvärdet positivt eller negativt beroende på om resultatet ligger över eller under laboratoriernas gemensamma medelvärde. För kvalitativa analyser, erhåller korrekta resultat z-värdet noll. Z-värden redovisas i bilaga 2 och används med fördel vid laboratoriernas egen uppföljning av resultaten. En sammanfattande bild över varje enskilt laboratoriums resultat inklusive extremvärde ges av ett boxdiagram, som baseras på z-värden i bilaga 2. Ju mindre variationsbredd diagrammet har från lägsta till högsta värde och ju mer centrerat kring standardvärdet noll boxen ligger, desto större likhet är det generellt mellan laboratoriets resultat och medelvärden av samtliga laboratoriers svar. Laboratorierna är inte grupperade eller rangordnade utifrån sina resultat. Varje enskilt laboratorium kan bedömas med antalet falska svar och extremvärden i tabellerna under boxdiagramen. Svaren med anmärkning är dessutom markerade i Bilaga 1, där alla laboratoriers samtliga inrapporterade svar redovisas, liksom lägsta respektive högsta accepterade värde för varje analys. Verksamhetsprotokollet (2) beskriver hur analysresultaten är bearbetade och ger kortfattade rekommendationer om hur resultaten kan följas upp. Extra prov för uppföljning av analyser med avvikande svar kan beställas utan kostnad via webbsidan till Boxdiagram och antal avvikande värden för varje laboratorium. - Diagrammen är baserade på laboratoriernas svar från samtliga analyser. Svaren är omräknade till standardvärden (z-värden) enligt formeln: z = (x m)/s, där x är enskilt laboratoriums resultat, m är medelvärde beräknat från deltagande laboratoriers svar och s är standardavvikelse beräknad från deltagande laboratoriers svar. - Korrekta negativa resultat för kvantitativa analyser och korrekta resultat för kvalitativa analyser har erhållit z-värdet noll. - Laboratoriets medianvärde markeras med horisontellt streck i boxen. - Boxens volym innesluter 25 % av svaren över medianvärdet och 25 % av svaren under medianvärdet. Resterande 5 % av svaren innesluts av de från boxen utskjutande strecken och ringarna. - Mycket avvikande värden markeras med en ring och beräknas enligt formeln: boxens minsta värde 1,5 (boxens största värde boxens minsta värde) eller boxens största värde + 1,5 (boxens största värde boxens minsta värde). Standardvärden högre än +4 respektive mindre än 4 har i figuren fått värdena +4 respektive 4. - Bakgrunden är uppdelad med linjer och i olika skuggade fält för att visa inom vilket intervall ett laboratoriums värden hamnade. Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 17

20 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Falsknegativa? 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

21 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 19

22 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Falsknegativa? 2 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

23 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 21

24 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Falsknegativa? 4 Standardvärde Labnr Antal värden Falskpositiva Falsknegativa Låga extremer Höga extremer Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

25 Testmaterial och kvalitetskontroll Testmaterial Testmaterialet bestod av tre frystorkade mikroorganismblandningar, A-C, som tillverkades och frystorkades portionsvis (,5 ml) i vialer enligt beskrivning av Peterz och Steneryd (3). Varje laboratorium erhöll en vial av varje blandning. Före provansättning skulle innehållet i en vial lösas upp i 254 ml steril spädningsvätska. Innehållet i provblandningarna framgår av tabell 2. Tabell 2. Mikroorganismer i respektive provblandning Blandning 1 Mikroorganism Stambeteckning A Klebsellia pneumoniae SLV-186 Escherichia coli SLV-165 Enterococcus faecium SLV-459 B Micrococcus sp. Pediococcus acidilactici Staphylococcus xylosus SLV-213 SLV-283 C Micrococcus sp. SLV-55 Escherichia coli SLV-524 Bacillus cereus SLV-518 Staphylococcus aureus SLV-28 1 För koppling av slumpad provbeteckning till respektive provblandning hänvisas till bilaga 1. Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 23

26 Kvalitetskontroll av provblandningarna Homogena provblandningar och lika volym i varje vial är förutsättningar för att samtliga tillverkade frystorkade prov från en provblandning ska vara jämförbara. Kvalitetskontroll av provblandningarna utfördes i samband med tillverkningen enligt verksamhetens protokoll (2). Resultaten anges i tabell 3. Kravet på homogenitet för samtliga analyser är att standardavvikelsen för 1 analyserade prov inte får överstiga, tiologaritmenheter och att differensen mellan högsta och lägsta värdet inte får överstiga,5 tiologaritmenheter. Tabell 3: Medelvärden av halter (m) och standardavvikelser (s) från kvalitetskontroll av 1 vialer per blandning; m och s anges i log 1 cfu (colony forming units) per ml prov. Analys och metod Aeroba mikroorganismer, 3 C NMKL-metod nr. 86 Aeroba mikroorganismer, 2 C NMKL-metod nr. 86 Främmande mikroorganismer ISO-method nr IDF-method nr. 3:22 Enterobacteriaceae NMKL-metod nr. 144 Koliforma bakterier 3 C NMKL-metod nr. 44 Koliforma bakterier 37 C NMKL-metod nr. 44 Termotoleranta koliforma bakterier NMKL-metod nr.125 Escherichia coli NMKL-metod nr. 125 Presumtiv Bacillus cereus NMKL-metod nr. 67 Koagulaspositiva stafylokocker NMKL-metod nr. 66 Enterokocker NMKL-metod nr. 68 Gramnegativa bakterier i pastöriserad mjölk och grädde. Detektion av återkontamination NMKL-metod nr. 192 A B C m s m s m s 4,7,3 4,36,4 4,88,3 4,8,4 4,34,4 4,87,5 4,7,3 3,88,6 4,93,4 3,47,8 3,23,4 3,36,11 3,16,5 3,43,6 3,17,4 3,46,8 3,24,3 2,99,14 3,24,3 3,6,5 4,74,4 3,93,3 pos neg pos Ingen målorganism Livsmedelsverket är inte ackrediterade för metoden Petrifilm SEC 24 Livsmedelsverkets rapport nr 26/213

27 Referenser 1. Kelly, K Outlier detection in collaborative studies. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 73: Anonym, 212. Verksamhetsprotokoll. Mikrobiologi. Dricksvatten & Livsmedel, Livsmedelsverket. 3. Peterz. M. Steneryd. A.C Freeze-dried mixed cultures as reference samples in quantitative and qualitative microbiological examinations of food. J. Appl. Bacteriol. 74: Livsmedelsverkets rapport nr 26/213 25

28 Bilaga 1 Laboratoriernas analyssvar - october 213 Alla värden är log 1 cfu per ml uppspätt prov. Svar angivna som <"ett värde" har betraktats som noll. Svar angivna som >"ett värde" är inte medtagna i beräkningar. Streck i tabellen indikerar att analysen inte har utförts. Extremvärden, falskpositiva och falsknegativa svar är markerade och summerade i slutet av tabellen. Resultat från analys av Enterockocker i blandning B ingår varken i beräkningar av z-värden (Bilaga 2) eller i antal avikande resultat (Boxdiagram) Lab nr. Provnr. Aeroba mikroorganismer 3 C Aeroba mikroorganismer 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 C Koliforma bakterier 37 C Termotoleranta kolif. bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Gramnegativa bakterier i past. mejeriprod. A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C ,8 4,86 4, ,32 <1 2, ,4 <1 2,88 <1 <1 3,79 <1 <1 4, ,18 4,18 4, ,48 <1 3, ,32 <1 3, ,9 <1 3,23 <1 <1 3,4 <1 <1 4, ,6 4,32 4, ,35 <1 3,9 3,35 <1 3,7 3,32 <1 3,2 3,32 <1 3,22 <2 <2 3, ,91 4,8 < ,11 4,38 4, ,45 <1 2,95 3,36 <1 2,59 3,48 <1 2,85 3,58 <1 3,2 3,46 <1 3,2 <2 <2 3,63 <2 <2 4,65 4,8 4,26 < ,11 4,3 4,79 4,11 4,3 4, ,46 <1 3,2 3,38 <1 3,2 3,46 <1 3,18 3,46 <1 3,2 3,37 <1 3,18 <2 <2 3,76 <2 <2 4,72 3,99 <2 < ,3 4, ,4 < ,2 <1 <1 <1 <1 3,6 <2 <2 4, ,7 4,32 4, ,6 <1 3, <2 <2 3, ,87 4,2 4,64 4,83 4,2 4, ,96 2,87 3 2,89 3 2,99 3,6 3 2,84 2,91 3,2-4, ,91 4,55 4, ,29 2, ,94 2,78 3,55 4,73 3, ,81 <2 3, <2 <2 4, ,89 4, ,13 <1 <1 3,54 <1 3,16 3,3 <1 3,1 3,12 <1 3,23 <2 <2 3,48 <2 <2 4, ,3 4,66 4, ,56 <1 3, ,53 <1 2, ,18 <1 2, ,98 3,89 4,68 3,94 3,84 4, ,42 <1 3, ,28 <1 3,16 <1 <1 3,52 <1 <1 4, ,98 4,2 4, ,28 <1 3,8 3,25 <1 3,4 3,3 <1 3, ,4 <1 2, ,97 4,2 4, < ,5 <1 2, <2 <2 4, ,4 4,32 4, ,39 3,81 4,81 3,43 <1 3, ,41 <1 3,17 3,38 <1 3 3,38 <1 2,95 <1 <1 3,59 <1 <1 4, ,3 3,95 4, ,52 <1 4, ,8 <1 2, <1 <1 4, ,5 6,45 4, ,4 3,4 3,4 2, , ,14 3,85 4, ,54 <1 3, ,57 <1 3, ,4 <1 3,11 <2 <2 3,4 <2 <2 4, ,3 4,38 4, ,4 <1 3, ,5 4,34 4,78 4,5 4,33 4, ,43 <1 3, ,38 <1 3,2 3, <1 3,17 <2 <2 3,81 <2 <2 4,86 3,93 <2 < ,8 3,91 4,85 4,8 3,76 4, ,38 <1 3, 3,4 <1 3, <2 <2 3, ,93 3,87 4, ,6 <1 3, ,3 <,6 2, <2 <2 3, ,9 <2 < ,93 3,83 4, ,2 2,95 3, ,2 3 3,11 2, ,99 4,34 4, ,3 <1 3, ,21 <1 3, ,52 4, ,3-2,98 3,42-2, ,1-3, , ,7 3, ,4 4,14 4, ,4 <1 3, <1 <1 3, Pos Neg Pos ,1 3,92 4, ,45 <1 3, ,4 <1 3, 3,28 <1 3 3,11 <1 3, <2 <2 4, ,94 4,24 4, ,31 <1 3, <1 <1 3, Pos Neg Pos ,2 4,18 4, ,42 <1 2, ,8 4,54 4, ,28 < ,43 <1 3,3 3,43 <1 3,34 <2 <2 3,79 <2 <2 < ,1 4,19 4, ,33 2, ,5 2, , ,88 4,2 4, ,34 <1 3,1 3,31 <1 3,8 3,34 <1 3,14 3,23 <1 3,2 2,85 <1 3, <2 <2 3,4 <2 <2 4, ,96 4,42 4, ,47 2, ,8 3,57 4, ,36 <1 3, ,44 <1 3, <2 <2 4,43 4,4 4,6 < m 4, 4,26 4,83 4, 4,1 4,69 3,8 3,78 4,5 3,4 3, 3,3 3, 3,36 3,3 3,36 3,1 3,2 3,1, 3,5, 4,6 3,9, pos neg pos m s,9,26,12,9,4,19,31,,53,12,16,127,16,18,17,17,1,196,16,181,1, s Enterokocker Lab nr.

29 Lab nr. Provnr. Aeroba mikroorganismer 3 C Aeroba mikroorganismer 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 C Koliforma bakterier 37 C Termotoleranta kolif. bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Gramnegativa bakterier i past. mejeriprod. A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C ,8 4,32 4, ,41 3, ,65 3,1 3, ,47 4,11 4, ,9 4,73 5, >3,4 <1 3,4 >3,4 <1 3 3,4 <1 3, <1 <1 3, ,29 4, <2 <2 2, <2 <2 3,2 <2 3,7 4,36 3,96 4,25 < ,99 4,27 4, ,43 <1 2,86 3,31 <1 2,8 3,35 <1 3, ,85 <1 3 <1 <1 3, ,85 <1 < ,98 4,24 4, ,25 <1 2,99 3,34 <1 2,99 3,3 <1 2,98 3,41 <1 3,2 3,18 <1 3,23 <2 <2 3,48 <2 <2 4,68 3,92 <2 < ,4 4,32 4, ,34 <1 3,8 3,3 <1 3,8 3,36 <1 3, 3,38 <1 3,2 3,38 <1 3,18 <2 <2 3,7 <2 <2 4,7 4,1 <2 < ,74 3,77 4, ,87 2, ,84 4,17 4,72 3,88 4,8 4, ,25 2, ,3 2, ,1 4,32 4, ,4 <1 1, ,8 4,11 4, ,52 <1 3, ,27 <1 3,24 <1 <1 3,62 <1 <1 4, ,95 4,37 4, ,46 3,72 4,48 3,3 <1 3,6 3,23 <1 2, <1 <1 3, Pos Neg Neg ,88 4,17 4, ,27 <1 2, ,4 4,28 4, ,2 <1 2, ,28 <1 2, ,57 <1 2,7 <1 <1 3,59 <1 <1 4,59 4,4 4,11 < ,1 4,31 4, ,32 <1 3,3 3,2 <1 2,82 3,41 <1 2,94 3,38 <1 3,2 3,38 <1 3, <2 <2 3,82 <2 <2 4,63 3,89 4,23 < ,11 4,35 4, ,4 < ,45 <,6 3, <2 <2 3, ,78 <3 < ,97 4,25 4, ,24 <1 2, ,99 <1 3, ,3 <2 4, ,2 4,91 4, ,42 <1 3, ,2 <1 3, <1 <1 4, ,92 4,14 4, ,22 < 3, < < 3, ,9 4,38 4, ,92 3,78 4,69 3,34 <1 2, ,29 <1 2,81 3,34 <1 3 3, <1 3,19 <2 <2 3,72 <2 <2 4,67 3,84 <2 < ,1 4,35 4, ,28 <1 3,3 3,33 <1 2,97 3,36 <1 2, ,98 <1 2,95 <2 <2 3,61 <2 <2 4, ,1 4,38 4, ,2 3,75 4,73 3,45 <1 3,2 3,4 <1 3,26 3,48 <1 3,2 3,52 <1 3,3 3,42 <1 3,28 <2 <2 3,34 <2 <2 4,63 4 <2 < ,58 4,72 3,28 2,89 3,32 2,93 3,42 3,11 3,6 3 3, 3,8 3,4 2,8 4,51 3,81 4, ,28 4,56 4, ,62 <2 3, <2 <2 3, ,11 4,34 4, ,42 <1 2, ,57 <1 3, ,18 <1 2,91 <1 <1 3,11 <1 <1 4,49 3,85 <1,3 <1, ,99 4,44 4, ,36 <1 2,52 3,37 <1 2,88 3,5 <1 2,74 3,35 <1 3,2 3,5 <1 3,21 <2 <2 2,4 <2 <2 4,52 3,78 4,3 < ,98 3,84 5, ,38 <1 3, <1 <1 4,31 <1 3,8 4,21 3,95 <1 < ,4 4 4,58 3,98 3,63 4, ,36 <1 3, ,38 <1 3,6 3,32 <1 3 - <1,3 3, <2 <2 <2 3,84 <2 < ,11 4,54 4,86 4 3,7 4, ,28 3, ,49 3,8 3,38 3,1 3,49 3,8 3,64 4,61 3, ,18 4,18 4, ,7 <1 2, ,84 <1 < ,22 <1 2, ,53 3,67 < ,4 3,98 4, ,46 <1 3, ,43 <1 3,7 3,2 <1 3 2,95 <1 3,1 <2 <2 3,64 <2 <2 4, ,12 3,96 4, ,53 <1 3, ,48 <1 3, ,95 <1 3,12 <2 <2 3,4 <2 <2 4, ,3 4,31 4, ,19 <1 2,96 3,28 <1 2,96 3,4 <1 3,32 3, <1 3 3, <1 3 <1 <1 3,56 <1 <1 4,65 3,92 <1 < ,9 <1 5, ,48 <1 2, <1 <1 2, ,95 3,52 4, ,36 <1 3, ,41 <1 3, ,21 4,3 5, ,62 <1 2, ,13 <1 3,18 <1 <1 3, , <1 < ,2 3,99 4, ,41 <1 3, ,48 <1 3, <1 <1 4,63 3,98 <1 < ,19 4,3 4, ,3 <1 3, ,93 <1 3,13 <2 <2 <2 <2 <2 4, ,96 4,34 4, ,7 2, ,96 4,34 4, ,96 4,11 4,77 3,3 <1 3, ,72 <1 3, ,99 <1 3,4 <2 <2 3, ,93 <1 2, ,64 <1 < ,87 3,9 4, ,34 <1 3,14 3,2 <1 2,45 3,18 < ,89 <1 1,85 <2 <2 2 <2 <2 4, ,98 4,26 4, ,4 <1 2, ,8 <1 3, ,7 4,41 4,91 4,8 4,38 4, ,46 <1 3, ,2 <1 2, <1 <1 3,48 <1 <1 4,67 3,88 <1 < m 4, 4,26 4,83 4, 4,1 4,69 3,8 3,78 4,5 3,4 3, 3,3 3, 3,36 3,3 3,36 3,1 3,2 3,1, 3,5, 4,6 3,9, pos neg pos m s,9,26,12,9,4,19,31,,53,12,16,127,16,18,17,17,1,196,16,181,1, s Enterokocker Lab nr.

30 Lab nr. Provnr. Aeroba mikroorganismer 3 C Aeroba mikroorganismer 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 C Koliforma bakterier 37 C Termotoleranta kolif. bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Gramnegativa bakterier i past. mejeriprod. A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C ,9 4,28 4, ,19 <1 3,7 3,18 <1 3, ,13 <1 3,16 <2 <2 3,36 <2 <2 4,61 3,98 <2 < ,16 4,4 4, ,58 <1 3, ,6 4,33 4, ,51 <1 3, ,36 <1 3 3,39 <1 3 3,3 <1 2,97 <2 <2 3,73 <2 <2 4,6 3,86 <2 < ,99 3,9 4, ,22 <1 2, ,1 <1 2,18 <1 <2 3,89 <1 <2 4, ,96 4,25 4, ,97 3,77 4,74 3,29 <1 3, ,2 <1 2,86 <1 <1 3,51 <1 <1 4,56 3,83 4,17 < ,98 4,36 4, ,41 <1 3,24 3,34 <1 3,24 3,3 <1 3, ,17 <1 3,2 <1 <1 3,26 <1 <1 4, ,4 4,3 4, ,94 3,76 4,84 3,46 2,95 3,46 2,92 3,4 2, , ,85 4,22 4, ,8 3,91 4, <1 <1 3,49 <1 <1 4,66 4,27 <1 < ,95 <1 2, <1 <1 4,64 4,65 <1 < ,8 4 4, ,41 <1 3, ,36 <1 3, ,4 <1 3,18 <1 <1 3,81 <2 <2 4,74 3,97 <2 < ,7 4, ,35 < ,1 <1 3 <2 - - <2-4, ,2 4,34 4, ,77 4,32 4, ,44 <1 3, <2 <2 3, ,98 4,28 4, ,41 <1 2, ,18 <1 2,63 <2 <2 3,43 <2 <2 4, ,88 2, ,28 4,28 4, ,38 <,6 2, ,4 <,6 2,81 <2 <2 3, ,17 5,2 5, ,21 4,39 4, ,52 <1 3, <1 <1 3, ,2 4,31 4, ,75 <1 2, ,4 4,34 4, ,52 <1 3,8 3,4 <1 2, ,11 <1 3,4 <1 <1 3,86 <1 <1 4,62 4 <1 < ,1 3,88 4, ,46-3, ,39-3, ,8 4,41 4, ,56 <1 3, ,26 <1 3,4 <2 <2 3,32 <2 <2 4, ,4 4, ,26 <1 2, ,35 <1 2, ,55 <1 3, <2 <2 3,4 <2 <2 4,6 3,6 4,5 < ,24 4,8 4 4,18 4, ,28 <1 3, ,18 <1 3,1 3,37 <1 3,3 3,37 <1 3, <2 <2 4,65 4 4, < ,96 4, 4,29 3,75 4,22 4, ,9 <1 2, ,96 4,35 4, ,3 <1 2,91 3,36 <1 2,83 3,3 <1 2,89 3,24 <1 2,9 3,19 <1 2,93 <1 <1 3,48 <1 <1 4,68 3,92 <1 < ,7 4,35 4, ,38 <1 3, <2 <2 3,45 <2 <2 4,67 4,2 <2 < ,4 4,3 4, ,34 <1 2, ,9 <,6 2, <2 <2 3, ,94 4,23 4, ,96 2, ,2 4,31 4, >3,4 <,47 >3, >3,4 <,47 >3, ,3 4,57 4, <1 <1 3, ,18 3,85 5 4,26 3,73 5 3,8 3,4 4,43 3,41 <1 3,3 3,28 <1 3,4 3,38 <1 3,2 3,32 <1 3,2 3,8 <1 3,18 <2 <2 3,45 <2-4,78 4,11 <2 < ,4 3,88 4, ,28 <1 3, ,2 <1 3,8 <2 <2 3,7 <2 3,7 4, ,7 3,95 4, ,5 <1 3, ,36 <1 3, ,8 4,79 4, ,22 <1 2, ,7 <1 3,3 3,7 <1 3,3 - <1 3, <1 <1 4, ,18 3,88 4, ,35 <1 3,11 3,37 <1 3, <2 <2 3,69 <2 <2 4,63 3,98 4,22 <2 Pos Neg Pos ,88 4,9 4, ,36 3,2 3,33 3,2 3,14 3,64 4,65 3, ,92 4,23 4, , ,4 3,7 3, ,3 3,99 4, ,55 2, , ,18 4,47 4, ,57 <1 3, <1 <1 3, ,3 3,96 5, ,51 <1 2, ,22 <1 3,12 3,4 <,47 3 3,9 <1 3, <2 <2 4,74 3,87 4,31 < ,1 4,2 4,77 4,4 3,92 4,75 4,17 3,94 4,74 3,47 <1 3,9 3,32 <1 2,85 3,31 <1 2, <1 2, ,94 5,2 5,89 4,92 5,28 5, ,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3 3,4 3, , ,98 4,13 5, ,29 <1 2, <1 <1 3, ,84 4,9 < m 4, 4,26 4,83 4, 4,1 4,69 3,8 3,78 4,5 3,4 3, 3,3 3, 3,36 3,3 3,36 3,1 3,2 3,1, 3,5, 4,6 3,9, pos neg pos m s,9,26,12,9,4,19,31,,53,12,16,127,16,18,17,17,1,196,16,181,1, s Enterokocker Lab nr.

31 Lab nr. Provnr. Aeroba mikroorganismer 3 C Aeroba mikroorganismer 2 C Främmande mikroorganismer Enterobacteriaceae Koliforma bakterier 3 C Koliforma bakterier 37 C Termotoleranta kolif. bakterier Escherichia coli Presumtiv Bacillus cereus Koagulaspositiva stafylokocker Gramnegativa bakterier i past. mejeriprod. A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C ,3 3,87 4, ,95 4,34 4, ,91 2, , ,8 4,29 4, ,33 <2 3, ,39 <1 3,9 3,45 <1 3,2 3,5 <1 3,2 <1 <1 3,82 <2 <2 4,82 3,86 4,29 < ,43 4,42 4, ,42 <1 3, ,45 <1 3, ,16 <1 2,99 <1 <1 3,56 <1 3,8 4, ,18 4,9 4, ,39 <1 2,79 3,33 <1 2, ,29 4, ,28 <1 2, >1 <1 >1 <1 <1 3,53 <1 <1 4, ,72 <2 3,23 3,28 <1 2, <2 4 4, ,5 4,3 4, ,28 <1 3,8 3,38 <1 3, ,4 3,9 4,56 4,3 3,72 4, ,48 <1 2,95 3,53 <1 2, ,6 <1 2, ,32 4,88 4,8 4,32 4,58 3,41 3,93 4,89 3,28 <1 3,4 3,52 <1 3,3 3,73 <1 3,32 3,34 <1 3,3 3,11 <1 3,3 <2 <2 3,38 <2 <2 4,67 3,99 <2 < ,98 4 4,97 3,96 3,94 4, ,38 <1 2, ,39 <1 2,8 3,17 <1 2,9 3,17 <1 2,9 <2 <2 3,3 <2 <2 4, ,62 4, ,87 <1 3, <2 <2 3, , 4,14 < ,5 4,28 4,91 3,94 4,26 4, ,25 <1 2,86 3,32 <1 2,79 3,17 <1 2,86 3,28 <1 3, ,91 4,12 < ,98 4,81 4,98 3,99 4,88 5, ,53 3,24 3,53 3,2 3,53 3,24 3,67 4, ,3 4,57 4, ,23 <1 2, ,25 <,6 2, <1 <1 3, ,26 4,58 4, ,4 3, ,24 3, ,7 4, ,11 4,48 5, ,24 <1,3 3, ,37 <1 3,29 <2 <2 3,55 <2 <2 4,65 4,18 4,17 < ,96 3,87 4, ,4 3, ,95 3, ,5 4,33 4, ,9 3,89 4,44 3,32 < ,37 <1 3, ,7 <1 <1 <2 <2 3,2 <2 3,8 4, ,4 4,39 4, ,34 <1 3,1 3,46 <1 3,26 3,46 <1 3,26 3,45 <1 3,1 3,45 <1 3,8 <2 <2 3,7 <2 <2 4,6 3,95 4,3 < ,6 4,63 4, ,48 <1 3, ,17 4,74 4,58 4,16 4,44 4,32 4,6 4,56 4,67 3,36 3,12 3,34 3,17 3,39 3,17 3,23 3,2 3,9 3,14 3,35 4,68 4,5 Pos Neg Pos ,4 4,36 4, ,46 <1 3,1 3,23 <1 2,95 3,26 <1 3 3,26 <1 3,2 3,26 <1 3,2 <2 <2 3,4 <2 <2 4,48 3,85 <2 < ,4 3,9 4, ,36 <1 3, <2 <2 3, Pos Neg Pos ,1 3,65 4, , ,48 3,19 3,33 3,2 3,23 3, ,65 3,91 4, ,94 4,34 4,93 3,98 3,95 4, ,54 <1 2,93 3,34 <1 2,86 3,3 <1 2,77 3,49 <1 3,1 3,34 <1 3,11 <2 <2 3,6 <2 <2 4,57 3,8 4,18 < ,6 3,99 4, ,36 <1 3, ,17 <1 3, <1 <1 4, ,8 3,78 4, ,41 <1 3, ,18 <1 3,23 <2 <2 3, Pos Neg Pos ,28 4,81 <2 3,34 3, ,2 <1 2, <2 <2 3, ,8 4,32 4, ,56 <1 3 3,51 <1 2,91 3,59 <1 2,99 3,52 <1 3,3 3,23 <1 3,32 <2 <2 3,41 <2 <2 4,69 3,77 4, < ,13 4, 4, ,27 <1 2,74 3,29 <1 3,2 3,1 <1 3,8 4,35 <1 3,1 3,13 <1 3,7 <1 <1 3,48 <1 <1 4,82 4,88 <1 < ,11 3,86 4, ,3 <1 2, ,93 <1 2,98 <2 <2 3,41 <2 <2 4,68 3,9 4,14 < ,16 4,32 4, ,3 <1 2, ,32 <,6 2, <2 <2 3, ,98 4,26 < ,4 3,89 4, ,64 <1 4,11 4,28 <1 3,89 4,34 < ,8 <1 4,11 <1 <1 3,61 <1 <1 3,67 3,83 <1 < ,3 4,33 4,89 3,98 4,35 4, ,16 <1 2,97 3,36 <1 3,11 3,34 <1 3,26 3,46 <1 3,1 3,37 <1 3,11 <2 <2 3,34 <2 <2 4, ,6 3,85 4, ,28 <1 3, ,91 <1 3,9 <1 <1 3,3 <1 <1 4,56 3,91 <1 < ,7 4,42 4, ,8 <2 3,51 3,32 <1 3,9 3,34 <1 3,5 3,37 <1 3, ,13 <1 2,93 <2 <2 3,62 <2 <2 4,7 3,94 <2 < ,56 4,26 5, ,76 <1 3, ,57 <1 3,56 <1 <1 3,3 <1 3,9 5, ,98 4,38 4,85 4,3 3,94 4, ,31 <1 3,12 3,32 <1 3 3,29 <1 2,96 3,46 <1 3,2 3,46 <1 3, <2 <2 3,6 <2 <2 5,8 3,91 <2 < ,5 4,37 4, ,39 <1 3, ,14 4,49 4, ,66 <1 3, ,61 <1 3,2 3,61 <1 3,13 <2 <2 3,78 <2 3,5 4,64 4,9 4,4 < ,91 4,4 4, ,25 <1 2, ,28 <,6 2, <2 <2 3, ,8 4 < ,97 4,24 4,7 3,92 4,23 3, ,4 <1 2, ,4 <,3 2,66 3,4 <,3 2,7 2,66 <,3 2, ,6 4,37 4,85 3,99 3,74 4, ,36 <1 2,89 3,29 <1 2,91 3,23 <1 2,79 3,37 <1 3,2 3,2 <1 3,19 <2 <2 3,87 <2 <2 4,4 3,94 3,96 < ,8 4,58 4, ,59 <1 2, m 4, 4,26 4,83 4, 4,1 4,69 3,8 3,78 4,5 3,4 3, 3,3 3, 3,36 3,3 3,36 3,1 3,2 3,1, 3,5, 4,6 3,9, pos neg pos m s,9,26,12,9,4,19,31,,53,12,16,127,16,18,17,17,1,196,16,181,1, s Enterokocker Lab nr.