BIÍTEI Y REGULACIÓ DE LA PRDUCCIÓ DE ÁCID CLAVULÁIC E treptomyces clavuligerus Paloma Liras, Irene antamarta, Rosario Pérez-Redondo, Juan P. Gómez-Escribano y Luis M. Lorenzana Área de Microbiología. Facultad de Biología. Universidad de León e Instituto de Biotecnología (IBITEC). León.
2 C 3 C C 2 C Cefamicina C Ácido Clavulánico treptomyces clavuligerus 27064 C 2 Alanilclavama olomicina R tras clavamas
Ácido clavulánico C X β-lactamasa C C PEICILIA G ACID PEICILIC
2 C 3 C C C 2 Ácido Clavulánico Cefamicina C treptomyces clavuligerus 27064 2 C Alanilclavama y otras clavamas olomicina R
R LMICIA. clavuligerus 27064. clavuligerus cyp::neo clar car cyp fd orf12 oppa2 X X X
Lisina lat pcd 2 C C 2 C C 2 Ácido α-aminoadípico Cisteína Valina pcbab/ ACV BIÍTEI DE ATIBIÓTIC β-lactámic 2 L C LLD-ACV Isopenicillin pcbc/ IP C cefd/ IPE Cephalosporin C Cephalosporium Penicillin G Penicillium 2 D cefe/ DAC 2 2 C3 C 3 C C C C C C C 2 cmc/ CDAC cmci cmcj Cephamycin C treptomyces
C3 (Gliceraldehido-3-P) 2 2 2 C Arginina cea C C -Carboxietilarginina bls / β-l cas2 / C pah / PA BIÍTEI DE ÁCID CLAVULÁIC Y CLAVAMA 2 C Ácido Proclavamínico CLAVAMA cas2 / C 2 C car C Ácido Clavamínico ACID CLAVULÁIC
AGRUPACIÓ DE GEE DE CEFAMICIA C pbp57 cea bls bla pbp74 cmct pcd cs2 cefe cmci pah cmcj oat ceff oppa1 clar car cmc ccar blp lat cyp fd orf12 orf13 orf14 oppa2 orf16 orf17 orf18 orf10 pcbab pcbc pbp57 cea AGRUPACIÓ DE GEE DEL ÁCID CLAVULÁIC
Regulación por CcaR β α1 ------------MTIRLLGPVTL-VKGVPIPIRGQRQRRFLALALRPGQVIKEAIIEDWDGEPPL MDADDCWARAGTVRIRLLGPVEL-ACGTRPVPVTGRRQLRVVAALALEAGRVLTAGLIALWADEPPR ------------MEFGVLGPLYVRVGATTAPAP-KLRVLAMLLVAGQVVPVPLVRDLWDEDPPV ------------MRIRVLGPLADVGVVVPAG-KPRQVLLLALYPGQIMPVPTLMEEIWGAAPPV ------------MQIMLGPLVAGTVTPIAR-KPRQVFLLALQAGTVVPVPALMDELWGTQPPA α3 : :** β6 : β7..: * :... ::. * ** TVGQLQTAWMIR------TALAEAGLPRDALGDRGYELRVLPDIDLFVFREAVRAVRDLARGQ TAARQLQTVWMIRR------ALAVGAPQCVVRTPAGYLLDPAYELDDRFRAVLTARELQRDGR GLTTLQTYILLRKMFAVTGLTTAEVARDVLVTRAGGYALAAEAGVLDVRYQRLVTGREALARGD ALTTLQTYILQLRRRLGTAMGPEAPTAKDVLATRGGYVLQIPADTDVAYERKVREGQAAFEAGD ALTTLQTYILQVRRGITVALGAGPAKDVLRTCYGGYLLDVDPTTDVYAFERLAEEGKRACERGE *:: * : : ** * :. QEAERLDTALALWKGPAFADVTR-LRLRGETLEEERTAAVELRALIDVGLGYYGDAITRLELVD LAQARARVDEGLALWRGPALGAAAGAG-LQPRARRLEEERVFALEQRAGLDLALGRETAIGELLDLIA DAAGVRDLEALLLWRGPALADVPAGRVLERRRQLEERLAAFEYLVDVELRLGMYREVLAELAALTV DEAADTLREALALWQGPALVDVRCGPALIEVLRLEERLVTVERRIDADLRLGRCEIAELRDLTA LDLAARFRQALDLWRGDALVDVAGMRIGMEVARLEERLGVLEARMETDLRLGRAGLLPELALTA...* **:* *: * *... * * * α2 DPFREDLYVLMKAYYAEGRQADAIQVFRAKDILREQIGIPGERMTRVMQAILRQDEQVLRVGT-- QPLREAAYADLMLALYRGRQDALAVYRRAQRVLADELAVRPGPRLAGLERAILRQDELLAG---- EPLEGLGQYMWALLGRRAQALQVFRLRGALVAGLGLEPGPQVQRLQAVLADTAFEPRFT-- RPEGLQAMVALYRGRQAAALDLYRKLRVRLIEELGVEPPQMQRMQAMLVDPALDLATG-- RPMELWAQFMIALRGRTQALEAFIKLRKTLVELGVEPARLQLQAILRADPGIDR-G-- * * :. ** ** : : * :. *. : *:* : PA-----------------. clavuligerus CcaR AAVP---------------. cattleya thienamycin regulator 44.3% VRRPAVAAPATAFGGGRY. galilaeus AclI 34% PRRGTFDLYAA------- treptomyces sp. griseorhodin A regulator 34% PEVPAAAVALA-------. peucetius DnrI 31% CcaR es una proteína ARP
Probe ccar 1 2 3 4 Probe neo 23.1 9.4 6.5 4.3 2.3 neo 2.0 ccar ccar mel pb11b 8.75 kb tsr 1, 3. clavuligerus 27064 2, 4. clavuligerus ccar::neo
Cefamicina C Ácido clavulánico 1.. clavuligerus 27064 2.. clavuligerus ccar::neo 3.. clavuligerus ccar::neo [pb17b]
pcd cefe cef D cmci cmci ceff cmc ccar orf11 blp lat pcbab pcbc cea X Probe: clar WT ccar car WT ccar Cephamycin C Gene Cluster 7.4 5.3 cea bls pah cs2 clar car cyp 2.8 1.9 1.6 Clavulanic Acid Gene Cluster Probe: rda
cefd cmci ccar blp lat Genes de Cefamicina C 782 pb 245 pb 364 pb 550 pb Genes de Ácido Clavulánico clar car cyp 550 pb 520 pb
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Promotor CcaR 242 bp onda Ensayo Ab anti-ccar Ab-anti-conejo Promotor DI, 782 bp onda Ensayo Ab anti-ccar Ensayo Ab anti-conejo
bla pbp74 cmct ccar blp pbp57 pcd cefe cefd cmci cmcj ceff cmc lat pcbab pcbc Lysine lat, pcd CcaR α-aaa+cys+val Penicillin Carbamoyl-DAC ACV pcbab pcbc cefd cefe ceff DAC cmc cmci, cmcj Cephamycin C Isopenicillin DAC
E REUME 1. CcaR E UA PRTEÍA AUTREGULADRA PITIVA QUE CTRLA LA EXPREIÓ DE L GEE DE BIÍTEI DE CEFAMICIA 2. CcaR CTRLA IDIRECTAMETE LA EXPREIÓ DEL GE REGULADR clar Y PR TAT LA FRMACIÓ DE ÁCID CLAVULAIC
A ITERVEID E EL PRYECT: Anteriormente: Francisco J. Pérez-Llarena Antonio Rodríguez-García Alvaro de la Fuente Actualmente: Irene antamarta Rosario Pérez-Redondo Luis M. Lorenzana Juan P. Pérez-Escribano onia Baños Mª Teresa López ajimi, Moshem EL PRYECT A CTAD C LA FIACIACIÓ DE: Proyecto CICYT Bio 2003-03274 Proyecto Fundación Ramón Areces