Introduktion till cellodling cellen cellodling desinfektion
Milstolpar i cellodlingshistorik Hooke studerade kork och gav namnet cell till de små kammare som han såg Arnolds arbetade med grodlymfocyter Earle odlade cellkultur från en enda cell Eagle utvecklade basalmedium 1665 1887 1913 1955 1838 1906 1910-1950 1975 Schleiden och Schwann, Cellteorin: Allt levande består av celler som bildas genom delning av andra celler. Harrison arbetade med levande nervfiber utveckling av cellmedium: jästextrakt, plasma, serum, mm. Köhler och Milstein utvecklade hybridomteknik
Cellstorlek liten molekyl T4-fagvirus bakterie djurcell växtcell ½ tiokronorsmynt 0,1 Å 1 nm 10nm 100 nm 1 µm 10 µm 100 µm 1 mm 1 cm Elektronmikroskop Ljusmikroskop Bakterier, virus och molekyler är mycket mindre än djurceller som man använder i cellodling. Bakterier och virus till exempel finns överallt och det är därför viktigt att hålla allting rent och sterilt när du arbetar med cellodling så att bakterierna och virusen inte kommer in i dina odlingsflaskor.
Varför odla celler in vitro? (utanför den levande organismen) Diagnostik: för att identifiera virus eller genetiska sjukdomar Vaccintillverkning: producera monoklonala antikroppar Forskning: för att förstå cellfunktion, skillnad mellan celler, skillnad mellan friska och sjuka celler, infektionsprocesser Minska användandet av försöksdjur
Cellodling i 12-steg 1. Tvätta händerna noggrant. 2. Ta på dig skoskydd och laboratorierock med öppning på baksidan. 3. Gå in i cellodlingslabbet och stäng dörren direkt. 4. Slå på cellodlingsbänken (LAF-bänk) - luftströmmen ska vara på full hastighet; se till att glasfönstret är neddragen till rätt höjd. 5. Desinficera LAF-bänken med 70 % etanol. Det är viktigt att du arbetar med sterila material när du odlar dina celler. 6. Ta fram dina cellodlingsflaskor från inkubatorn. Arbeta med en cellinje åt gången. Desinficera och vänta 15 minuter innan du arbetar med en annan celllinje. 7. Kolla dina celler i mikroskop innan du arbetar. 8. Desinficera allting som du ställer in i LAF-bänken. 9. Öppna cellodlingsflaskor, medium och reagens bara inne i LAF-bänken där det är sterilt. 10. Ställ tillbaka dina cellodlingsflaskor i inkubatorn efter att du är klar med dem. 11. Desinficera LAF-bänken. 12. Ta av dig allt skyddsmaterial utanför cellodlingslabbet.
Desinfektion med olika medel Etanol 70% - För rengöring av material, LAF-bänkar och mindre ytor Oxidationsmedel (klorin, virkon) - För avdödning av större ytor - Används för avdödning av celler ( slask ) Glasbägare med bomull - bomull suger upp slask - bägare placeras i metallbox och autoklaveras
Rengöring och desinficering Daglig rengöring Desinficering av LAF-bänken innan och efter arbete Görs också sist på dagen; under natten tas damm upp av LAF-bänkar eller luftreningssystem Typen av arbete som görs påverkar hur mycket rengöring som behövs Arbetsytor och apparatur torkas av Kvartalsvis rengöring Total rengöring av hela rummet (tak, väggar, golv) och alla apparatur Rengöring görs innan desinficering för att ta bort damm som kan hindra desinfektionsmedlets verkan
Ordlista in vitro: i en artificiell miljö utanför den levande organismen monoklonala antikroppar: antikroppar specifika för endast en epitop epitop: den del hos ett främmande ämne som en antikropp kan reagera med LAF-bänk: Laminar Flow Hood eller cellodlingsbänk cellodlingsmedium: vätskan där celler odlas, innehåller glukos, växtfaktorer och andra näringsämnen från blod eller kalvserum L-glutamin: aminosyra, tillsättning i cellodlingsmedium trypsin: ett viktigt matsmältningenzym centrifug: en apparat som använder centrifugalkraft för att separera partiklar från en suspension hemocytometer: användes från början för att beräkna blodceller men används nu även inom andra områden, till exempel vid beräkning av celler vid cellodling. Vätskan hälls på en tjock glasplatta med noga inristade linjer. Ett täckglas läggs på och man räknar cellerna inom utvalda linjer. Eftersom man vet arean och höjden av området inom linjerna kan man också beräkna volymen och därmed få ett mått på antalet celler med milliliter. slask: vätskeavfall från cellodling, består av gammalt medium och även celler autoklavering: är processen där utrustning och tillbehör steriliseras genom att utsätta dem för högt tryck med mättad ånga vid 121 grader eller mer, vanligen i 15-20 minuter beroende på storleken av lasten och innehållet
För fördjupning, se material på Sigma-Aldrich (obs! på engelska) http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-culture/learning-center/ecacchandbook/cell-culture-tech-glossary.html#glossary Bildinformation: Blue-grey cells: Cho_cells_adherend2_public domain, Wikimedia Disinfection of Hood: Javier Quevedo, Attribution Sharealike 2.0, Flickr Creative Commons Biocontainment laminar flow hood with blue chair: Public domain, Wikimedia Sucrose molecule 3D model: GNU, Wikimedia 800px Swedish coin 10 kr: GNU, Creative Commons, Wikimedia Washing hands: Arlington County, Attribution Sharealike 2.0, Flickr Creative Commons Microscope: Tuchodi, Attribution 2.0 Generic, Flickr Creative Commons Cell culture, hand in hood: GNU public documentation licence, Wikimedia