Bästa praxis för arbete med Agilent LC-system Tekniskt meddelande Bästa praxis - tekniskt meddelande Detta tekniska meddelande beskriver bästa praxis för arbete med LC-system från Agilent. Innehåll Grundregler 2 Hur man hanterar lösningsmedel 2 Förbereda prover 3 Dagliga/veckovisa uppgifter 4 Starta upp/stäng av systemet 5 Starta upp systemet 5 Stänga av systemet 6 Rekommendationer för avgasare 7 Rekommendationer för pumpar 8 Rekommendationer för pumpar med MCGV 8 9 Rekommendationer för provväxlare 14 Rekommendationer för pumpar och provväxlare med valfritt inline-filter 15 Rekommendationer för kolonner 16 Rekommendationer för detektorer 17 Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar 18 Agilent Technologies
Grundregler Hur man hanterar lösningsmedel Grundregler Hur man hanterar lösningsmedel Använd endast rena flaskor. Använd endast flaskor av borosilikatglas. Skölj flaskan med önskat lösningsmedel innan du fyller den. Flaskorna kan kontamineras av rengöringsmedel från diskmaskinen. Byt vattenbaserade lösningsmedel varje dag. Algtillväxt kan blockera avgasaren eller filtren. Kondenserade olösliga salter kan blockera filter eller kapillärer. Välj en lösningsmedelsvolym som används upp inom 1-2 dagar. Använd bara lösningsmedel av HPLC-kvalitet och vatten filtrerat genom 0,2 µm filter. Spår eller kontaminering kan blockera filter eller kapillärer. Märk flaskor korrekt med flaskans innehåll och fyllningsdatum/utgångsdatum. Använd inloppsfilter för lösningsmedlet så att systemet skyddas från ingående partiklar. Minska risken för algtillväxt: använd bruna flaskor för vattenlösningar, undvik direkt solljus eller slå in flaskorna i aluminiumfolie. FÖRSIKTIGT Kontaminerat lösningsmedel från tätningstvätt. För att undvika kontaminering ska du inte återanvända lösningsmedlet från tätningstvätten Veckovis utbyte av lösningsmedlet för tätningstvätt Vi rekommenderar starkt att Sats för tvätt av flaskförsegling (5067-6131) används Ytterligare åtgärder med acetonitril (ACN) Filtrera ACN med ett 0,45 µm nylonfilter. OBS Filtrering med nylonfilter rekommenderas inte för högkänsliga LCMS. Häll ACN i bruna flaskor och använd minsta möjliga mängd för att förebygga fotokemiska reaktioner och oxidering. OBS Tillsätt 5 10 % vatten i ACN, särskilt för LCMS-applikationer där 0,1 % myrsyra förekommer (om detta är möjligt). Spola systemet varje månad med varmt vatten (60 70 C (140 158 F)) - 1 L vid 2 ml/min så att alla spår av ACN-reaktionsprodukter löses upp. 2
Grundregler Förbereda prover Förbereda prover FÖRSIKTIGT Risk för provkondens Kontrollera att provet är helt lösligt i såväl det använda provlösningsmedlet och den mobila fasen i startläget. Välj en provlösning som motsvarar den valda mobila fasen noggrant för att förebygga kondens. Filtrera, dekantera eller centrifugera provet så att det skiljs från olösliga fasta ämnen. Kontrollera att provlösningsmedlet är fritt från partiklar. 3
Dagliga/veckovisa uppgifter Förbereda prover Dagliga/veckovisa uppgifter Dagliga uppgifter Byt ut lösningsmedel och lösningsmedelflaskor för mobila faser baserat på vatten/buffervätska. Byt ut lösningsmedel och lösningsmedelflaskor för organiska mobila faser varannan dag eller oftare. Kontrollera tätningens tvättlösning. Avlufta varje kanal med nytt lösningsmedel vid 2,5 3 ml/min i 5 min. Nollställ ditt system med en sammansättning för din applikation i 15 min. Använd konditionering för 1290-system. Veckovisa uppgifter Byt tätningens tvättlösning (10 %/90 % isopropanol/vatten) och flaskan. Spola alla kanaler med vatten vid 2,5 3 ml/min i 5 min så att saltdepåer avlägsnas om bufferapplikationer har använts. Kontrollera om smuts eller blockage förekommer i lösningsmedelsfiltren. Rengör eller byt ut om det inte kommer något flöde från lösningsmedelsslangen när denna avlägsnas från avgasaren. 4
Starta upp/stäng av systemet Starta upp systemet Starta upp/stäng av systemet Starta upp systemet Starta upp pumpen Använd en ny eller annan mobil fas (efter behov). Avlufta varje kanal med 2,5 3 ml/min i 5 min. Öppna avluftningsventilen (1260) eller använd avluftningskommandot (1290). Nollställ ditt system med en sammansättning för din applikation i 15 min. Använd konditionering för 1290-system. Starta upp provväxlaren Avlufta autosamplern varje dag, samt före och efter provanalys. Detta gäller särskilt om du använder buffervätska. Ställ in flödet på lämpligt värde för din applikation och stäng avluftningsventilen. Pumpa i cirka 10 min. Använd obegagnat rengöringsmedel och/eller bakåtspolningslösningsmedel för nålen, till exempel metanol eller acetonitril och vattenblandningar utan buffert. Kontrollera att ampullerna har tillräckligt mycket provvätska för samtliga injektioner. Starta upp detektorn Värm upp lampan i minst 1 h. Endast RI-detektorer: Spola referens- och provsidan med obegagnat lösningsmedel för den aktuella applikationen. 5
Starta upp/stäng av systemet Stänga av systemet Stänga av systemet OBS Använd lika delar metanol/vatten eller 2-propanol/vatten utan tillägg för att spara systemet. Långtidslagring för kolonnen Spola kolonnen med lämpligt lösningsmedel, se kolonnbruksanvisningen. Ta bort och försegla kolonnen och förvara vid behov enligt god laboratoriesed. Långtidsavstängning av systemet Spola systemet med vatten för att avlägsna buffert. Ta bort alla prover från provväxlaren och lagra enligt god laboratoriesed. Använd rekommenderade lösningsmedel vid förvaring av systemet. Stänga av systemet. 6
Rekommendationer för avgasare Stänga av systemet Rekommendationer för avgasare FÖRSIKTIGT Fuktkondens i avgasaren Om en intern eller högpresterande avgasare används med lösningsmedel med låg kokpunkt kan ångor från lösningsmedlet kondensera i avgasarkammaren när vakuumpumpen är avstängd. Avlufta alla lösningsmedelskanaler med 2-propanol och låt avgasaren pumpa i ytterligare två timmar. Kontrollera att lösningsmedlet är kompatibelt med avgasaren och applikationen Använd interna eller högpresterande avgasare för standardapplikationer Använd standardavgasare (G1322A eller G7122A) för RI-applikationer Använd standardavgasaren för mycket flyktiga lösningsmedel med ångtryck över 100 mbar i rumstemperatur. Använd Evacuation Mode om den interna avgasaren inte fungerar optimalt. Du kommer åt den här funktionen i avgasarkontrollen på instrumentets kontrollskärm i Agilent LabAdvisor. Figur 1 Avgasarkontroll för interna avgasare i Agilent LabAdvisor OBS Följ anvisningarna på skärmen när du startar Evacuation Mode. 7
Rekommendationer för pumpar Rekommendationer för pumpar med MCGV Rekommendationer för pumpar Kontrollera pumparnas funktion regelbundet Utför det förebyggande underhållet så ofta som det föreskrivs. Förbered pumpen enligt anvisningarna i stycket om uppstart för optimal funktion och livslängd. Använd tätningstvättfunktionen enligt anvisningarna för optimal funktion och livslängd, se nedan. Rekommendationer för pumpar med MCGV Välj kanaler för ventilen för flerkanalsgradient (MCGV) Använd de lägre kanalerna (A och/eller D) för buffertlösningar. Spola regelbundet alla MCGV-kanaler med 200 ml varmt vatten för att avlägsna saltavlagringar. Kontrollera kompatibiliteten hos buffertar och organiska lösningsmedel för att undvika fällning MCGV-blandningskammaren. OBS När du blandar oförenliga lösningsmedel kan salt kondensera vid blandningstillfället, vilket kan blockera flödesvägen nedströms och skada delar av utrustningen. 8
Rekommendationer för pumpar Tätningstvätt (G4204A, G4220A, alla 1260-pumpar) FÖRSIKTIGT Kontaminerat lösningsmedel från tätningstvätt. För att undvika kontaminering ska du inte återanvända lösningsmedlet från tätningstvätten Veckovis utbyte av lösningsmedlet för tätningstvätt. Vi rekommenderar starkt att Sats för tvätt av flaskförsegling (5067-6131) används Vi rekommenderar starkt att tätningstvättfunktionen används när du använder vatten eller vattenbaserade lösningsmedel, till exempel buffert, övriga icke-flyktiga lösningsmedel eller tillsatser som kan lämna avlagringar på kolvar och förseglingar. Tätningstvättfunktionen rengör dessa delar automatiskt. Fördelar med tätningstvätt: Tar bort partiklar, saltkristaller och andra icke-flyktiga rester från kolvar och förseglingar som annars kan kunnat skada kolvarna eller kolvförseglingarna Smörjning av gränssnittet mellan försegling/kolv Kylning av kolvar Dialogrutan för tätningstvätt i ditt CDS Den här dialogrutan återfinns under kontrollskärmen. Vi rekommenderar att du använder inställningarna som visas i Figur 2 på sidan 11. Observera: Tätningstvättinställningarna är INTE metodparametrar Tätningstvätten måste aktiveras manuellt efter: Ett FEL har avhjälpts Ström på 9
Rekommendationer för pumpar Tätningstvätt: REGELBUNDEN åtgärd, till exempel 0,5 min varje 7 min Inställningen kan ändras på kontrollskärmen, se Figur 2 på sidan 11. De här inställningarna finns tillgängliga via sammanhangsmenyn, se Figur 4 på sidan 11. Ett typiskt lösningsmedelsflöde är 0,7 ml/min vilket motsvarar en cirkaförbrukning på 3 ml/h eller 0,5 l/vecka vid full drift Använd 10 % 2- propanol i vatten 100 % 2- propanol för normal fasapplikation Placera lösningsmedelsflaskan för rengöring ovanför och avfallsflaskan nedanför instrumentet Återanvänd INTE lösningsmedlet för tätningstvätt Vi rekommenderar att du använder satsen för tätningstvätt (Agilent-artikelnummer: 5067-6131) Byt lösningsmedlet varje vecka Fyll INTE lösningsmedel för tätningstvätt i använda flaskor. Använd alltid rena, nya flaskor. Test för peristaltisk pump Rör vid den peristaltiska pumpen med fingret och förvissa dig om att pumpen fungerar eller kontrollera rengöringsmedlets flöde genom att kontrollera att det droppar ut genom slangen 10
Rekommendationer för pumpar Tabell 1 Dialogruta och användning av tätningstvätt G4204A, G4220A samtliga 1260-pumpar Figur 2 Tätningstvättinställningar (1290 Infinity-pumpar) Figur 3 Tätningstvättinställningar (samtliga 1260-pumpar) Figur 4 Sammanhangsmeny (1290 Infinity-pumpar) Figur 5 Sammanhangsmeny (samtliga 1260-pumpar) 11
Rekommendationer för pumpar Tätningstvätt (G7104A, G7120A) FÖRSIKTIGT Kontaminerat lösningsmedel från tätningstvätt. För att undvika kontaminering ska du inte återanvända lösningsmedlet från tätningstvätten Veckovis utbyte av lösningsmedlet för tätningstvätt. Vi rekommenderar starkt att Sats för tvätt av flaskförsegling (5067-6131) används Tätningstvättpumpen startar när den analytiska pumpen flyttar lösningsmedel för att avlägsna avlagringar på kolvar och förseglingar. Tätningstvättfunktionen rengör dessa delar automatiskt. Tätningstvättsensorn kontrollerar ständigt tätningstvättsystemet och varnar användaren om någon avvikelse påträffas. Tätningstvätt: Tätningtvättintervallet är 30 s varje 7 min. Flödet är 500 µl/min. Regelbundna kontroller sker för att kontroller att tätningstvättsystemet är intakt Normal lösningsmedelsanvändning är cirka 1 L i veckan Använd 10 % isopropanol i vatten 100 % isopropanol för normal fasapplikation Placera lösningsmedelsflaskan för rengöring ovanför och avfallsflaskan nedanför instrumentet Fyll INTE lösningsmedel för tätningstvätt i använda flaskor. Använd alltid rena, nya flaskor. Vi rekommenderar att du använder satsen för tätningstvätt (Agilent-artikelnummer: 5067-6131) Byt lösningsmedlet varje vecka Återanvänd INTE flaskor för tätningstvätt 12
Rekommendationer för pumpar EMF-symbolen blir gul när pumparnas tätningstvättsensorer påträffar en avvikelse Byt ut tätningstvättlösningsmedlet och aktivera funktionen tätningstvättflödning från sammanhangsmenyn (se Figur 6 på sidan 13) Figur 6 Sammanhangsmeny Kontrollera tätningstvättsledningar och filter för repor, läckage och blockage Kontrollera om avfallsledningarna är blockerade och se till att lösningsmedelsavfall dräneras fritt: Om lösningsmedelavfallet lagras i ledningarna fungerar inte sensorn korrekt Kontrollera att den peristaltiska pumpen fungerar Känn på den peristaltiska pumpen med fingret att den fungerar korrekt, eller Kontrollera tätningstvättlösningsmedlet genom att se om det droppar from ledningen 13
Rekommendationer för provväxlare Rekommendationer för provväxlare Rengör autosamplern efter provanalys. Avlägsna bufferten med vatten av HPLC-kvalitet. Avlägsna kontaminerande ämnen med ett starkt lösningsmedel, till exempel rent acetonitril. Växla injektionsventilen mellan huvudledning och sidoledning medan reningen pågår. Använd alltid obegagnat lösningsmedel vid rengöring av nålen eller sätet. Avlägsna bufferten med vatten av HPLC-kvalitet. Avlägsna kontaminerande ämnen med ett starkt lösningsmedel, till exempel rent acetonitril. Placera tvättlösningsmedelbehållaren för nåltvätt (valfritt: nålfäste) i lösningsmedelfacket. Använd ett lämpligt lösningsmedel för provett och den mobila fasens egenskaper. OBS Nåltvättslösningsmedlets sammansättning bör bestå av ditt starkaste lösningsmedel (mest lösningsbara). Valet är del av metodutvecklingen. En blandning av 50 % upp till 100 % organiskt lösningsmedel i destillerat vatten är lämplig för många applikationer. Kontrollera dräneringsledningarna från tvättportens utlopp till en avfallsbehållare. Fyll varje ampull med tillräckligt mycket provvätska för samtliga injektioner. Använd endast ampuller som har rekommenderats av Agilent. Fyll inte ampullerna för mycket. Fyll dem högst till 90 %. Avänd septa med skåra när du hämtar stora volymer eller flera hämtningar från samma ampull. Filtrera, dekantera eller centrifugera provet så att det skiljs från olösliga fasta ämnen. OBS Provlösningen bör vara fri från partiklar. Kontrollera att provlösningen motsvarar den valda mobila fasen i största möjliga mån. 14
Rekommendationer för pumpar och provväxlare med valfritt inline-filter Rekommendationer för pumpar och provväxlare med valfritt inline-filter Valfritt inline-filter för pumpar och provväxlare (1290 INfinity och 1290 Infinity II) I de flesta fallen är högt bakåttryck den främsta faktorn som begränsar UHPLC-kolonnernas livslängd. Partikelämnen i provet samlas i inloppsfrittet i kolonnen, vilket leder till ökat bakåttryck tills systemets trycknivå har uppnåtts. Vi rekommenderar att ett inline-filter används för att förebygga blockage i kolonnfrittet, vilket sker när provberedningen inte möjliggör filtrering eller provet avger kondens. Följande moduler kan utrustas med extra inline-filter: Pumpar (G7104A, G4204A): Inline-filterenhet (5067-5407) Alla autosamplers från Agilent Technologies: 1290 Infinity II inline-filtersats (5067-6189) Detta inline-filter med en nominell filterporgrovlek på 0,3 µm skyddar UHPLC-kolonnen effektivt från partikelblockage från prover eller från UHPLC-systemet. Fördelar hos inline-filter: Mycket liten intern volym Fördröjd volym med hård kapillär 1,3 µl Fördröjd volym med flexibel kapillär 1,6 µl Avsedd för högt tryck (högsta drifttryck 1300 bar) Med ett inline-filter i G4204A eller G7104A rekommenderas för att skydda nedströmssystemet från blockage i följande fall: När lösningskombinationerna kan leda till kondens efter blanding, När applikationer med buffertar eller tillägg körs och kolonner med liten partikelstorlek används Allmänna tips för effektiv användning av inline-filter: Filtrera lösningsmedel före användning Följ bästa praxis Bakåtspola filtret i pumpen varje vecka (starta Spola Filtret från sammanhangsmenyn) Byt ut filterfrittet (Fritt 0,3 µm till inline-filter, 5/fp (5023-0271)) varje 1000 injektion eller när bakåttrycket stiger med 15 % OBS Se Technote G7167-90130 för mer information. 15
Rekommendationer för kolonner Rekommendationer för kolonner Använd endast kolonner i den anvisade riktningen. Använd alltid lämpliga anslutningar för din valda kolonn. Kolonner från olika försäljare kan behöva olika anslutningar. En felaktig anslutning kan leda till toppspridning eller allvarliga skador hos kolonnen. Agilent rekommenderas A-Line-anslutningar för att undvika anslutningsproblem när du använder kolonner från olika försäljare. Observera alltid drift- och applikationsbegränsningarna som föreskrivs i bruksanvisningen för varje kolonn. Nollställ kolonnen med 10 20 kolonnvolymer för användning. Vi rekommenderar att du genomför en spolning med en mobil fas med rätt sammansättning utan tillsatser innan du nollställer för det slutgiltiga lösningsmedlet med tillsatser. Det är lämpligt att användas en skyddskolonn för att skydda din kolonn och förlänga dess livslängd. OBS Långtidsförvaring av kolonner bör alltid ske i en lämplig förvaringslösnings. Mer information om kolonner i bruk finns i kolonnens bruksanvisning. 16
Rekommendationer för detektorer Rekommendationer för detektorer FÖRSIKTIGT Lampan slås på/av ofta Lampans livslängd förkortas Undvik att slå på/av lampan i onödan. OBS Lampor kan endast tändas på nytt efter en viss säkerhetsperiod/-väntetid. Värm upp lampan i minst 1 h. Se till att omgivningstemperaturen är stabil. Utsätt inte detektorn för direkt solljus. Utsätt inte detektorn för alltför mycket luftström från HVAC. Installera ett tryckvalv när du ansluter en andra detektor efter Max-light-kassetten. Använd rekommenderade avfallsledningar för varje detektortyp. Se till att cellutloppet inte klämmer avfallsledningen. Kontrollera att detektorflödescellen är fri från bubblor. Endast RI-detektorer: Spola referens- och provsidan med obegagnat lösningsmedel för den aktuella applikationen. Spola flödescellen efter användning. Använd vatten av HPLC-kvalitet för att avlägsna slater. Använd isopropanol för att avlägsna organiska lösningsmedel. Fyll oanvända flödesceller med isopropanol innan du avlägsnar dem för att förebygga algtillväxt. 17
Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar Pumparna Agilent 1290 Infinity och 1290 Infinity II är utrustade med automatiska rengöringsventiler. Detta möjliggör en mängd extrafunktioner som inte finns tillgängliga för Agilent-pumpar med manuell rengöringsventil. Det är möjligt att förbereda pumpen (ange parametrar och starta funktionerna Purge, Condition eller Prime) med programvaran. Avlufta Använd avluftningsfunktionen för att: Fyll systemet med ett annat eller nytt lösningsmedel. Kontrollera att det nya lösningsmedlet kan blandas med det gamla lösningsmedlet. Förebygg skador på avgasaren eller pumpen med ett förebyggande steg med ett blandbart lösningsmedel vid behov. Avlägsna luftbubblor i slangar och pumphuvuden. Efter att pumpen har används för första gången. Efter att pumpen har varit i vänteläge i några timmar eller längre (luften kan ha lösts upp i lösningsledningarna). När avluftningen har genomförts övergår modulen automatiskt till analytiskt läge. Konditionering Om mikroluftbubblor blir kvar i pumphuvudet kan pumpfunktionen verka korrekt, men pumpen kommer att utföra extra arbete och noggrannheten/precisionen påverkas negativt. Funktionen Konditionering kan användas för att avlägsna luft effektivt. I samband med konditioneringen levererar pumpen ett flöde i systemet (kolonn) och de sista använda metodinställningarna, till exempel flöde, sammansättning och maxtryck används. Använd ett lämpligt flöde (till exempel 1,5 ml/min), kompositioninställning (till exempel A: 50 % B: 50 %) och bakåttryck (>200 bar) så att alla luftbubblor avlägsna effektivt från alla fästen. Vid behov kan du skapa ytterligare en konditioneringsmetod i början av sekvensen. Konditionera pumpen om du ser: Stora tryckpulser. Stora kompositionspulser (baslinjebuller/blandningsbuller bullernivåerna ändras med sammansättningen), när du är säker på att rätt lösningsmedel används och det inte finns några tecken på oväntat läckage från pumpen. Konditionering kan behövas: Dagligen vid start av pumpen Efter en lång väntetid När lösningsmedlet är tagit slut Efter service eller reparation 18
Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar FÖRSIKTIGT Fylla tomma lösningsmedelsledningar Skador på förseglingar Använd en sond när du fyller tomma lösningsmedelsledningar Använd inte funktionen Prime till att fylla tomma lösningsmedelsledningar. Flöda Funktionen Flöda är lämplig vid luftförekomst i pumphuvuden. Modulen drar lösningsmedel i hög hastighet med alla pumpledningar samtidigt och fördelar det i avfallspositionen i den automatiska avluftningsventilen. Detta sker 20 gånger innan processen når sitt slut. Använd funktionen Flöda för att: Fylla pumphuvuden när de är helt torra. Frigöra en eventuellt blockerad ventil. 19
Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar Funktionerna som beskrivs kan aktiveras från drivrutinens gränssnitt: 1290 Infinity II OBS Mer information om parameterinställningar finns på Figur 2 på sidan 11. 1. 2. Figur 7 Förbereda pumpen (1290 Infinity). 1. Högerklicka på modulens instrumentpanel 2. Välj lämplig funktion för att starta rutinen 20
Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar Den användaroptimerade sammanhangsmenyn Förebered pump ersätter standardmenyn: 1290 Infinity II-pumpar 1. 2. 3. 4. Figur 8 Förbered pumpen (1290 Infinity II-pumpar). 1. Högerklicka på modulens instrumentpanel 2. Välj Prepare Pump... 3. Välj rutin och fyll i lämpliga parametrar 4. Klicka på Start för att köra den valda rutinen 21
Ytterligare information om 1290 Infinity- och 1290 Infinity II-pumpar Programvaruvokabulär Programvaruvokabulär C Condition Konditionera E Evacuation Mode Evakueringsläge P Prepare Pump... Förbered pump... Prime Flöda Purge Avlufta S Start Starta *01200-90090SE* *01200-90090SE* 01200-90090SE Part Number: 01200-90090SE Edition: 07/2016 Printed in Germany Agilent Technologies, Inc 2016 Agilent Technologies, Inc Hewlett-Packard-Strasse 8 76337 Waldbronn Germany