PM Handläggare SVA Dnr 976/2012 Estelle Ågren 2014-04-04 Enhet för idisslare och gris Jordbruksverket Tankmjölkscreening avseende antikroppar mot salmonellainfektion Resultatredovisning Syfte med projektet: Att få en god bild av salmonellaförekomst bland svenska mjölkbesättningar samt en bedömning om förekomsten förändrats sedan 2007. Utvärdering av hur lyckosam bekämpning av salmonella varit i svenska mjölkbesättningar de senaste åren. Projektet förväntas även ge underlag för beslut om det finns behov av en förändring av salmonellakontrollen i svenska mjölkbesättningar. Utvärdering av resultat (enligt ansökan): Prevalens för olika gränsvärden tas fram för hela landet och jämförs med resultat från tidigare screeningar. Geografisk fördelning av positiva prover visas på karta. Spatial analys där geografisk fördelning av positiva prover undersöks för att påvisa områden med högre eller lägre förekomst än förväntat (clustering) (kommer att redovisas senare i vetenskaplig tidskrift). Uppföljning av besättningar som haft en spärr pga salmonella som lyfts under de senaste åren. Sammanfattning Tankmjölkscreeningen av samtliga svenska mjölkbesättningar visar att 141 besättningar var testpostiva för antikroppar mot salmonella i tankmjölken (positiva i Mixed ELISA). 40 av dessa besättningar är positiva i Dublin ELISA vilket innebär att antikropparna sannolikt är orsakade S Dublin infektion. Ytterligare en besättning är enbart positiv i Dublin ELISA. Sammanlagt är det 142 besättningar som är testpositiva i Mixed ELISA och/eller Dublin ELISA. Andelen positiva besättningar är 3.0 % för Mixed ELISA och 0.9 % för Dublin ELISA. Förekomsten av testpositiva mjölkbesättningar varierar mellan olika regioner, från 0-5,5 % för besättning som var positiva i Mixed ELISA men inte positiva i Dublin ELISA. För Dublin ELISA varierade förekomsten från 0-17,7 %. Jämförelse med en screening 2007 visar ingen statistiskt signifikant skillnad i förekomst av testpositiva besättningar. 1(20)
26 av 41 besättningar som är positiva i Dublin ELISA är lokaliserade på Öland. Jämförelse med resultat från screeningen av samtliga mjölkbesättningar på Öland 2009 visar att det är statistiskt signifikant färre besättningar på Öland som är positiva i Dublin ELISA jämfört 2009. Av de 35 mjölkbesättningar som har varit spärrade på grund av salmonella sen 2005 och där spärren har hunnit lyftas har antikroppar påvisats i 37 % av besättningarna. Orsaken kan vara kvarstående infektion i besättningarna eller/och återinfektion efter lyft spärr. Resultaten ger anledning att ställa frågan om bekämpningen så som den har utförts i dessa besättningar har gett önskat resultat. Eftersom samtliga mjölkbesättningar omfattades gav screeningen en tydlig bild av nuläget och de geografiska skillnaderna blev mycket tydliga. Det möjliggjorde också uppföljning av de besättningar som varit spärrade. Resultaten har också stort värde för jämförelse med eventuella screeningar i framtiden. Prover och analyser Tankmjölksprov från samtliga mjölkleverantörer i Sverige togs ut av Eurofins under mars och april på beställning av Växa Sverige. Proverna har analyserats med två olika indirekta ELISA-tester för analys av antikroppar mot salmonella hos nötkreatur: 1. PrioCheck Salmonella Ab bovine Dublin ELISA nedan benämnd Dublin. Innehåller O- antigen 1,9, 12 och riktar sig primärt mot antikroppar orsakade av infektion med Salmonella Dublin, korsreaktioner mot andra serotyper kan förekomma. 2. PrioCheck Salmonella Ab bovine ELISA nedan benämnd Mixed. Innehåller O-antigen 1, 9, 12 samt 1, 4, 5, 12 och riktar sig primärt mot antikroppar orsakade av infektion med S Dublin och/eller S Typhimurium, men korsreaktioner med andra serotyper förekommer. De flesta typer av salmonella som förekommer hos nötkreatur i Sverige har ett eller flera av de O-antigen som denna test innehåller. Gränsvärde: Tillverkaren Prionics rekommenderar gränsvärde Percent Positivity (PP) 35. Baserat på resultat från tidigare projekt har SVA dock gjort bedömningen att ett gränsvärde på PP 20 är en rimligare nivå för svenska förhållanden. I denna rapport har gränsvärde PP 20 använts om inte annat anges. Sensitivitet: Testet har låg sensitivitet för detektion av infekterade besättningar om endast ett enstaka tankmjölkprov analyseras. I en studie av Veling et al anges sensitiviteten till 54 % (Veling, Barkema et al. 2002). En annan studie av Warnick et al visar att sensitiviteten kan höjas till över 90 % vid analys av upprepade tankmjölksprover (Warnick, Nielsen et al. 2006). Specificitet : Testet har utvärderats på tankmjölksprover från svenska mjölkbesättningar. För Dublin har specificiteten beräknats till minst 98.8 % (97.9 99.3 CI 95 %) och för Mixed 96.3 % (94.9 97.3 CI 95 %) vid gränsvärde PP 20 (Nyman, Agren et al. ). Dessa värden togs fram från resultaten i en begränsad tankmjölksundersökning på svenska mjölkbesättningar 2007 med antagandet att alla positiva resultat var falskt positiva. Det innebär att siffrorna är en underskattning av den faktiska specificiteten. Om resultaten i Dublin testet från års screening från samtliga regioner utom Öland och Skåne (där det finns kända Dublinbesättningar) används för att ta fram en justerad specificitet blir resultatet 99.7 % (99.6-99.9 CI 95 %). Apparent prevalens : I denna rapport presenteras apparent prevalens dvs förekomst av andel testpositiva mjölkbesättningar om inget annat anges. 2(20)
Resultat i hela landet 2007 och Under hösten 2007 samlades tankmjölksprover in från ca 1000 svenska mjölkbesättningar. Proverna analyserades med samma test som användes vid screeningen. Tabellen nedan visar resultaten för hela landet. Andelen positiva besättningar bör jämföras med konfidensintervallet som är framtaget för 2007 års screening. Test och år Antal positiva (PP 35) Antal positiva (PP 20) Antal undersökta Andel positiva (PP 35) Andel positiva (PP 20) 95 % CI (PP20) Dublin 2007 6 13 1013 0.6% 1.3% 0.6-2.0 % Dublin 29 41 4683 0.6% 0.9% Alla undersökta Mixed 2007 21 37 935 2.2% 4.0% 2.7-5.2 % Mixed 72 141 4683 1.5% 3.0% Alla undersökta Uppskattning av antal infekterade besättningar ( True prevalens ) Den sanna förekomsten av salmonellainfekterade mjölkbesättningar kan beräknas utifrån apparent prevalens tillsammans med testets sensitivitet och specificitet. Problemet är att värdena för sensitivitet och specificitet endast är ungefärliga och små skillnader kan göra stora skillnader i slutresultatet när ett stort antal prover undersöks. Om vi antar att sensitiviteten för båda testerna är 60 %. För specificiteten utgår vi från den justerade specificiteten för Dublin testet på 99.7 % (99.6-99.9 CI 95 %) enligt ovan. Vi antar också att Mixed testet har samma specificitet som Dublin testet. Baserat på dessa antaganden kan en ungefärlig uppskattning av antalet salmonellainfekterade mjölkbesättningar göras. Agens Uppskattad true prevalens med 95 % CI Uppskattat antal salmonellainfekterade mjölkbesättningar med 95 % CI (beräknat utifrån totalt 4683 mjölkbesättningar) Alla serotyper 4.6 % (4.3 4.8) 217 (201-226) Salmonella Dublin 1.0 % (0.7 1.3) 49 (34-59) Uppskattat antal besättningar infekterade med salmonella Dublin är 23 % av uppskatta antal infekterade besättningar med samtliga serotyper. För antal test positiva besättningar är den relationen 29 % dvs i motsvarande storleksordning. Det stödjer att samma höga specificitet kan användas för Mixed Elisan. Om specificiteten för Mixed Elisan har överskattats så innebär det att antalet salmonellainfekterade besättningar (alla serotyper) också har överskattats. 3(20)
0 Frequency 1000 2000 3000 4000 0 Frequency 1000 2000 3000 4000 Histogrammen nedan visar antal besättningar på Y-axeln och PP värde för testet på X-axeln. Mixed (n=4683) 0 10 20 30 40 60 70 80 90 100 110 120 130 140 1 160 170 Resultat O49 Dublin (n=4683) 0 10 20 30 40 60 70 80 90 100110101401160170180190 Resultat O9 4(20)
0 Mixed 100 1 200 Diagrammet nedan visar analysresultat för samtliga tankmjölksprover med Mixed resultat på Y- axeln och Dublin resultat på X-axeln. Gränsvärdena PP 20 är markerade med röda linjer. Sammanlagt var 142 besättningar positiva i Mixed och/eller Dublin. 141 besättningar var positiva i Mixed varav 40 var positiva även i Dublin. Ytterligare en besättning var positiv i Dublin men inte i Mixed. 0 100 1 200 Dublin 5(20)
Tabellerna nedan visar de besättningar som är undersökta både 2007 och. Där framgår hur många som kvarstår positiva, kvarstår negativa samt hur många som konverterat från positiva till negativa respektive negativa till positiva. Mixed Elisa Påvisat Ej påvisat Totalt Påvisat 2007 8 20 28 Ej påvisat 2007 21 564 585 Totalt 29 584 613 Dublin Elisa Påvisat Ej påvisat Totalt Påvisat 2007 2 9 11 Ej påvisat 2007 7 644 651 Totalt 9 653 662
0 1001 0 1001 Mixed 0 1001 0 1001 0 1001 Resultat uppdelat per län 2007 och Resultaten nedan visar att förekomsten av positiva besättningar i olika regioner varierar mellan 0 % och 17.7 % för Mixed och mellan 0 % och 15 % för Dublin. Förekomsten av Dublin positiva besättningar är högst i Kalmar län, med endast enstaka positiva besättningar i andra län. Samtliga resultat för ligger inom konfidensintervallet för 2007 års undersökning, det vill säga att ingen statistiskt signifikant ökning eller minskning av förekomsten har kunnat påvisas. I sju av de åtta län där inga positiva besättningar påvisades med Mixed i 2007 års screening finns enstaka positiva besättningar. Detta kan bero på att inte alla besättningar undersöktes 2007 eller vara ett tidigt tecken på spridning. Diagrammen nedan visar analysresultat uppdelat per län för samtliga tankmjölksprover med Mixed resultat på Y-axeln och Dublin resultat på X-axeln. Gränsvärdena PP 20 är markerade med röda linjer. TMP screening (n=4683) Blekinge län Dalarnas län Gotlands län Gävleborgs län Hallands län Jämtlands län Jönköpings län Kalmar län Kronobergs län Norrbottens län Skåne län Stockholms län Södermanlands län Uppsala län Värmlands län Västerbottens län Västernorrlands län Västmanlands län Västra Götalands län Örebro län 0 100 1 200 0 100 1 200 0 100 1 200 0 100 1 200 Östergötlands län 0 100 1 200 Graphs by Lan Dublin 7(20)
0 1001 0 1001 Mixed 0 1001 0 1001 0 1001 TMP screening 2007 (n~1000) Blekinge län Dalarnas län Gotlands län Gävleborgs län Hallands län Jämtlands län Jönköpings län Kalmar län Kronobergs län Norrbottens län Skåne län Stockholms län Södermanlands län Uppsala län Värmlands län Västerbottens län Västernorrlands län Västmanlands län Västra Götalands län Örebro län 0 100 0 100 0 100 0 100 Östergötlands län 0 100 Graphs by Lan Dublin 8(20)
Tabellerna nedan visar resultat per län sorterat så att de län som har högst andel positiva besättningar kommer först. Mixed per län Antal pos Antal us Antal pos 2007 Antal us 2007 Andel pos Andel pos 2007 95% CI nedre Öland 31 175 9 34 0.177 0.265 0.129 0.444 Gotlands län 12 218 4 0.055 0.080 0.022 0.192 Dalarnas län 4 90 0 19 0.044 0.000 0.000 0.176 Skåne län 17 414 2 87 0.041 0.023 0.003 0.081 Örebro län 3 88 1 20 0.034 0.0 0.001 0.249 Gävleborgs län 5 157 0 27 0.032 0.000 0.000 0.128 Östergötlands län 9 297 2 70 0.030 0.029 0.003 0.099 Uppsala län 5 166 1 27 0.030 0.037 0.001 0.190 Västra Götalands län 22 833 8 188 0.026 0.043 0.019 0.082 Värmlands län 3 115 0 21 0.026 0.000 0.000 0.161 Södermanlands län 3 136 2 25 0.022 0.080 0.010 0.260 Kronobergs län 4 188 1 43 0.021 0.023 0.001 0.123 Jämtlands län 3 145 0 29 0.021 0.000 0.000 0.119 Norrbottens län 2 106 0 27 0.019 0.000 0.000 0.128 Stockholms län 1 59 1 11 0.017 0.091 0.002 0.413 Hallands län 4 269 1 51 0.015 0.020 0.000 0.104 Kalmar län utom Öland 4 275 2 59 0.015 0.034 0.004 0.117 Blekinge län 1 72 1 9 0.014 0.111 0.003 0.482 Jönköpings län 5 463 0 51 0.011 0.000 0.000 0.070 Västernorrlands län 1 124 2 30 0.008 0.067 0.008 0.221 Västerbottens län 2 2 0 48 0.008 0.000 0.000 0.074 Västmanlands län 0 43 0 9 0.000 0.000 0.000 0.336 TOTALT 141 4683 37 935 0.030 0.040 0.027 0.052 95% CI övre 9(20)
10(20)
Dublin per län 95% CI Antal pos Antal us Antal pos 2007 Antal us 2007 Andel pos Andel pos 2007 nedre gräns 95% CI övre gräns Öland 26 175 7 35 0.149 0.200 0.084 0.369 Skåne län 5 414 1 93 0.012 0.011 0.000 0.058 Uppsala län 2 166 0 30 0.012 0.000 0.000 0.116 Norrbottens län 1 106 0 31 0.009 0.000 0.000 0.112 Södermanlands län 1 136 1 26 0.007 0.038 0.000 0.196 Östergötlands län 2 297 1 73 0.007 0.014 0.000 0.074 Kronobergs län 1 188 0 47 0.005 0.000 0.000 0.075 Västerbottens län 1 2 0 52 0.004 0.000 0.000 0.068 Västra Götalands län 2 833 1 207 0.002 0.005 0.000 0.027 Kalmar län utom Öland 0 275 2 66 0.000 0.030 0.004 0.105 Blekinge län 0 72 0 10 0.000 0.000 0.000 0.308 Dalarnas län 0 90 0 20 0.000 0.000 0.000 0.168 Gotlands län 0 218 0 53 0.000 0.000 0.000 0.067 Gävleborgs län 0 157 0 30 0.000 0.000 0.000 0.116 Hallands län 0 269 0 54 0.000 0.000 0.000 0.066 Jämtlands län 0 145 0 31 0.000 0.000 0.000 0.112 Jönköpings län 0 463 0 54 0.000 0.000 0.000 0.066 Stockholms län 0 59 0 12 0.000 0.000 0.000 0.265 Värmlands län 0 115 0 24 0.000 0.000 0.000 0.140 Västernorrlands län 0 124 0 35 0.000 0.000 0.000 0.100 Västmanlands län 0 43 0 9 0.000 0.000 0.000 0.336 Örebro län 0 88 0 21 0.000 0.000 0.000 0.161 TOTALT 41 4683 13 1013 0.009 0.013 0.006 0.020 11(20)
12(20)
Mixed minus Dublin per län Mixed- Dublin Antal us Andel pos Mixed-Dublin Gotlands län 12 218 0.055 Dalarnas län 4 90 0.044 Örebro län 3 88 0.034 Gävleborgs län 5 157 0.032 Skåne län 12 414 0.029 Öland 5 175 0.029 Värmlands län 3 115 0.026 Uppsala län 4 166 0.024 Västra Götalands län 20 833 0.024 Östergötlands län 7 297 0.024 Jämtlands län 3 145 0.021 Stockholms län 1 59 0.017 Kronobergs län 3 188 0.016 Hallands län 4 269 0.015 Södermanlands län 2 136 0.015 Kalmar län utom Öland 4 275 0.015 Blekinge län 1 72 0.014 Jönköpings län 5 463 0.011 Norrbottens län 1 106 0.009 Västernorrlands län 1 124 0.008 Västerbottens län 1 2 0.004 Västmanlands län 0 43 0.000 TOTALT 101 4683 0.022 13(20)
14(20)
0 Mixed 100 1 200 Resultat Öland 2007, 2009 och I Kalmar län finns 26 av de 41 besättningar som är positiva i Dublin Elisan, samtliga dessa besättningar ligger på Öland. 21 av de positiva besättningarna ligger i Borgholms kommun. Resultaten har jämförts med de prover som insamlades på Öland 2007 samt resultaten från den screening som genomfördes på Öland 2009. År 2009 samlades tankmjölkprover in under mars och analyserades med samma Dublin test som användes 2007 och. Resultaten nedan visar en statistiskt signifikant lägre andel positiva besättningar jämfört med 2009 (binomial test p = 0.02). Tabell med resultat för Ölandsbesättningar vid screeningarna 2007, 2009 och. Öland Dublin Antal pos Antal us Andel pos 95% CI nedre gräns 95% CI övre gräns 2007 7 35 0.200 0.084 0.369 2009 203 0.246 Alla undersökta 26 175 0.149 Alla undersökta Diagrammet nedan visar analysresultat för samtliga tankmjölksprover från Öland med Mixed Elisans resultat på Y-axeln och Dublin Elisans resultat på X-axeln.. Gränsvärdena PP 20 är markerade med röda linjer. Öland Screening 0 100 1 200 Dublin 15(20)
Tabellen nedan visar att 13 av de besättningar som var positiva 2009 kvarstod positiva. 32 av besättningarna hade konverterat från positiva till negativa och 13 besättningar hade gått från negativa 2009 till positiva. Öland Dublin Påvisat Ej påvisat Saknas Totalt Påvisat 2009 13 32 5 Ej påvisat 2009 13 117 23 153 Totalt 26 149 28 203 Tabellen nedan visar resultaten för Ölands två kommuner. Andelen positiva besättningar är högre än i övriga delar av landet i båda kommunerna, men tre gånger så hög i Borgholms kommun som i Mörbylånga. Öland Dublin /kommun Antal pos Antal us Andel pos Borgholm 21 102 0.21 Mörbylånga 5 73 0.07 Totalt 26 175 0.15 16(20)
Uppföljning av spärrade besättningar I dessa resultat ingår samtliga 35 mjölkbesättningar som spärrats efter 2005 och där salmonella har påvisats i besättningen och spärren har hunnit lyftas. Besättningar som haft serotyper av salmonella som inte har något av de O-antigen som ingår i testerna, och som därför inte förväntas kunna ge positivt utslag i testerna, har inte inkluderats. Resultaten visar att 37 % av dessa besättningar har positiva tankmjölksprover. Hos de besättningar som har varit spärrade på grund av S Dublin är denna andel högre än bland de som varit spärrade på grund av andra serotyper (47 % jämfört med 28 %). Orsaken till positiva tankmjölksprover kan vara kvarstående infektion i besättningen eller/och återinfektion av besättningen efter lyft spärr. Hur länge sen spärren lyftes verkar inte påverka sannolikheten för att en besättning som varit spärrad ska ha antikroppar i tankmjölken, kvarstående antikroppstitrar efter att infektionen försvunnit förklarar följdaktligen inte resultaten. Resultaten ger anledning att ställa frågan om bekämpningen så som den har utförts i dessa besättningar har gett önskat resultat. Tabellen nedan visar resultaten för mjölkbesättningar som varit spärrade på grund av salmonella, där salmonella har påvisats i besättningen och där spärren har hunnit lyftas. Besättningar med lyft spärr (Mixed) Antal pos Antal us Andel pos Spärr Dublin 8 17 0.47 Spärr Övriga (som har O-antigen som ingår i Mixed Elisan) 5 18 0.28 Totalt 13 35 0.37 17(20)
0 100 Mixed 0 100 0 Mixed 100 Diagrammet nedan visar analysresultat för samtliga tankmjölksprover från besättningar som varit spärrade på grund av salmonella. Mixed Elisans resultat på Y-axeln och Dublin Elisans resultat på X-axeln. Gränsvärdena PP 20 är markerade med röda linjer 0 20 40 60 80 100 Dublin. Diagrammet nedan visar analysresultat för samtliga tankmjölksprover från besättningar som varit spärrade på grund av salmonella uppdelat på serotyper. Mixed resultat på Y-axeln och Dublin resultat på X-axeln. Gränsvärdena PP 20 är markerade med röda linjer. Dublin (n=17) Reading (n=5) Subsp (I) 4,5:b:- (n=1) 0 100 Subsp (I) O4,5,12:i:- (n=2) Typhimurium (n=10) 0 100 0 100 Graphs by Serotyp I Dublin 18(20)
0 100 Mixed 0 100 0 Mixed 100 Diagrammet nedan visar analysresultat för tankmjölksprover i förhållande till när spärren lyftes. Mixed resultat på Y-axeln och datum för lyft spärr på X-axeln.. Gränsvärdet PP 20 är markerat med en röd linje. 01jan2007 01jan2008 01jan2009 01jan2010 01jan2011 01jan2012 01jan sparrlyft Diagrammet nedan visar analysresultat för tankmjölksprover i förhållande till när spärren lyftes för besättningar som varit spärrade på grund av salmonella. Mixed resultat på Y-axeln och datum för lyft spärr på X-axeln.. Gränsvärdet PP 20 är markerat med en röd linje. Dublin Reading Subsp (I) 4,5:b:- Subsp (I) O4,5,12:i:- Typhimurium Graphs by Serotyp I sparrlyft 19(20)
Referenser: Nyman, A. K. J., E. C. C. Agren, et al. (). "Evaluation of the specificity of three enzymelinked immunosorbent assays for detection of antibodies against Salmonella in bovine bulk milk." Acta Veterinaria Scandinavica 55. Warnick, L. D., L. R. Nielsen, et al. (2006). "Simulation model estimates of test accuracy and predictive values for the Danish Salmonella surveillance program in dairy herds." Preventive veterinary medicine 77(3-4): 284-303. Veling, J., H. W. Barkema, et al. (2002). "Herd-level diagnosis for Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin infection in bovine dairy herds." Preventive veterinary medicine 53(1-2): 31-42. 20(20)