STRUKTUR OCH ANALYS 9 P. VT. 2007

Transkript

1 LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS 9 P. VT H H 3 C H 3 C ISTITUTIE FÖR LÄKEMEDELSKEMI AVDELIGARA FÖR FARMAKGSI, RGAISK FARMACEUTISK KEMI CH AALYTISK FARMACEUTISK KEMI

2 IEHÅLLSFÖRTECKIG LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS 9P, VT IEHÅLLSFÖRTECKIG P. 2 KURSPLA. P. 3 ALLMÄ IFRMATI P. 4 LÄRARFÖRTECKIG P. 5 SCHEMA... P. 6 GRUPPIDELIG... P. 11 SÄKERHETSFÖRESKRIFTER & FÖRSÄKRA P. 12 ISTRUKTIER FÖR LABRATISREDGÖRELSE... P. 17 LABRATISHADLEDIG... P. 18 RISK- CH SKYDDSFRASER... P. 26 BISYTESVÄGARA - E ÖVERSIKT. P. 36 ILÄSIGSAVISIGAR - 'URSPRUG'... P. 37 ERRATA D... P. 38 FÖRELÄSIGSUDERLAG mslagsbilden föreställer ett urval av drycker. Camellia sinensis L., moderväxtern till drogen te, världens vanligaste dryck efter rent vatten, den kemiska strukturen för theobromin, den aktiva föreningen i choklad och en kapillärelektroforetisk separation av bl.a. koffein, den aktiva föreningen i kaffe. Upphovsrätten till föreliggande kursmaterial tillhör Inst. för Läkemedelskemi. Materialet får ej mångfaldigas eller på annat sätt nyttjas utan institutionens medgivande. Inst. för Läkemedelskemi,

3 Uppsala universitet::utbildning:kursplan Uppsala universitet::utbildning:kursplan UPPSALA UIVERSITET : Utbildning Läkemedlens ursprung, struktur och analys, 9 poäng Kurskod: 3FK021 Beslut: Beslutad av: Grundutbildningskommittén för farmaceutiska fakulteten Reviderad: Reviderad av: Grundutbildningskommittén för farmaceutiska fakulteten Förkunskaper: Inom programmet gäller generella regler fastställda av farmaceutiska fakultetens grundutbildningskommitté (se utbildningsplanen). För tillträde till fristående kurs krävs, förutom allmän behörighet, 40 poäng kemi eller biologi. ivå: A 1-20 PÄG Ämne: Farmaceutisk kemi Betygsskala: För denna kurs ges endast betyget G Godkänd eller U Underkänd Syfte Den studerande skall efter genomgången kurs: kunna redogöra för de grundläggande principerna och processerna vid upptäckande och utvecklande av nya läkemedel, inkluderande naturprodukters roll vid utveckling och framställning av läkemedel kunna beskriva de viktigaste läkemedelssubstansernas ursprung, struktur och kemiska egenskaper kunna tillämpa läkemedelsnomenklatur ha tillräcklig kunskap i växtmorfologi och växtanatomi för att kunna läsa och förstå facklitteratur inom ämnet farmakognosi med vetenskapliga beskrivningar av växter och droger kunna förklara grundläggande principer för, och tillämpa kunskapen om, biosyntes hos växter inklusive fotosyntesen samt de syntetiserade kemiska substansernas struktur och klassificering kunna redogöra för kemiska substansers grundläggande fysikalisk-kemiska egenskaper och analysera deras betydelse för provupparbetning, extraktion och isolering kunna förklara de grundläggande principerna för kromatografiska tekniker för fraktionering, separation och isolering (vätske-vätskekromatografi, vätskeadsorptionskromatografi, jonbyteskromatografi, gelfiltrering, tunnskiktskromatografi och gaskromatografi) samt kapillärelektrofores och deras tillämpningar inom produkt- och bioanalys, och aktivitetsstyrd isolering, 'bioassay guided isolation' kunna förklara principer för metodkonstruktion och redogöra för syftet med metodvalidering kunna motivera valet av metoder för, samt beskriva utförandet av, kvalitativa och kvantitativa analyser av läkemedel med - UV-VIS absorptionsspektroskopi - fluriometri - masspektroskopi kunna genomföra laborativa moment för grundläggande preparativ utvinning, renframställning och identifiering av naturprodukter kunna använda vätske-vätskeextraktion och fastfasextraktion, och förklara deras applikationer inom forskning och läkemedelsindustri kunna redogöra för sambandet mellan kemisk struktur och biologisk effekt för utvalda läkemedelsgrupper kunna identifiera ett urval av de viktigaste medicinalväxterna, förklara användning av dessa samt redogöra för deras farmaceutiskt aktiva föreningar Innehåll Kursen är fokuserad kring processerna vid upptäckandet och utvecklandet av nya läkemedel och skall ge en fördjupad kännedom om de viktigaste läkemedelssubstansernas ursprung, struktur och kemiska egenskaper. Undervisning Undervisningen kommer att bedrivas i form av föreläsningar, seminarier, gruppövningar, laborationer och litteraturuppgifter. Stor vikt kommer att läggas vid den studerandes eget lärande och förmåga att på ett självständigt sätt söka information och angripa problemställningar. bligatoriska moment innefattar: Kursintroduktion med upprop, deltagande i vissa föreläsningar enligt schema, samt godkänt genomförande av gruppövningar, seminarier och laborationer enligt instruktioner. Examination Examination: Skriftlig examination genomförs vid kursens slut (ursprung: provkod 1010, struktur: provkod 1020, analys: provkod 1030). Vidare krävs godkänd skriftlig laborationsrapport (provkod 1040). För höstterminens kurs ges omprov i januari och för vårterminens kurs ges omprov i augusti. Varje student har rätt till sammanlagt sex provtillfällen, d.v.s. ett prov och fem omprov. Kurslitteratur Uppgift om kurslitteratur saknas. Ta kontakt med ansvarig institution för mer information. Mer information In English Utskriftsanpassad version Tidigare revideringar av denna kursplan: Kursplan enl beslut: Kursplan enl beslut: Kontakt: Ansvarig institution: Institutionen för läkemedelskemi Sida 1 av 3 Sida 2 av 3

4 Kursansvarig lärare: Kurssekreterare: ALLMÄ IFRMATI LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS 9P VT 2007 Univ. lektor Anders Backlund Avd. f. farmakognosi e-post: Maj Blad & Siv Berggren e-post: & tel.: & Kurslitteratur: Enligt kursplan (dock ej i SELMA som genererat sid. 3): Samuelsson: Drugs of atural rigin Claesson, Danielsson & Svensson: Läkemedelskemi, ed.2 Danielsson & Svensson: rganisk-kemisk nomenklatur FASS, senaste edition Kurskompendier bligatoriska moment: Upprop, duggor och laborationer, inklusive introduktion, genomgång och rättning. Examination: Kurskrav: Laborationsredogörelse skall inlämnas skriftligen senast den till kurssekretariatet. Inlämning av justerad redogörelse (efter rättning) skall ske senast den Kursen examineras dels genom webduggor , 03.16, och 03.28, dels genom skriftlig tentamen Avklarade duggor med godkänt resutate erfodras för tillträde till tentamen. Tentamen är delvis av typen 'öppen bok', vilket innebär att Drugs of atural rigin av Samuelsson får medföras, med understrykningar men utan anteckningar. Detta gäller dock ej kompendier och övrigt utlämnat material. Duggorna genomförs över webben, och kräver alltså tillgång till dator och internetanslutning under angiven tid. Svaren avges vid ett tillfälle, enskilt, efter personlig inloggning och under tidsbegränsning. Kursen godkänns i tre delar om läkemedlens ursprung (2 duggor + 2 frågor motsvarande 3.5p), läkemedlens struktur (2 frågor motsvarande 2p) och läkemedlens analys (1 dugga + 3 frågor motsvarande 2.5p). Till detta kommer laborationen motsvarande 0.5p av avsnittet läkemedlens ursprung och 0.5p av avsnittet läkemedlens analys. Godkänd laboration, inklusive laborationsrapport och rättning. Godkänd tentamen (60% på vardera av de tre delarna respektive var och en av de tre duggorna). Betald kåravgift. Samtliga filer finns även tillgängliga som.pdf dokument från kursens hemsida på: 4

5 LÄRARFÖRTECKIG LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS, 9P. VT AB Backlund Anders VB Barclay Victoria LB Bohlin Lars UB Bondesson Ulf RB Burman Robert YH Hedeland Ylva AK Karlén Anders ASa Sandström Anja ASo Sokolowski Anders JL Larsson Josefin CP Pettersson Curt SAMT LABRATRIEASSISTETER 5

6 PRELIMIÄRT SCHEMA VT LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS R3, 9P, V.8 v. 08 Måndag 19 februari Tisdag 20 februari nsdag 21 februari Torsdag 22 februari Fredag 23 februari Upprop * C10:305 FKG F: Läkemedel från * naturen strategi och exempel F: Droger I radix, rhizoma, lignum och cortex WEBFÖRELÄSIG F: Biosyntes I Introduktion C10:305 LB AB B8 (samläs m. A5) JL möjlighet till bokinköp på Pharmen Start 13.45! F: Analyt. farm. kemi C10:305 ASo F: Drug discovery C10:305 ASa v. 09 Måndag 26 februari Tisdag 27 februari nsdag 28 februari Torsdag 1 mars Fredag 2 mars F: Biosyntes II Shikimisyravägen F: Droger II folium, flos, herba, fructus och semen WEBFÖRELÄSIG F: Anatomi & Drogidentifiering WEBFÖRELÄSIG AB F: Droger III aetheroleum, oleum, latex resinum, samt några specialfall WEBFÖRELÄSIG F: Provupparbetning B8 (samläs m. A5) JL AB AB C8:305 YH SFF infolunch B8 F: Biosyntes V Alkaloidbiosyntes F: Biosyntes III Acylpolymalonatvägen F: Biosyntes IV IPP-vägen F: Mätning I MS C2:301 UB B8 (samläs m. A5) JL B8 (samläs m. A5) JL B8 (samläs m. A5) JL F = Föreläsning S = Seminarium * = bligatoriskt moment :59 7

7 v. 10 Måndag 5 mars Tisdag 6 mars nsdag 7 mars Torsdag 8 mars Fredag 9 mars ILÄSIG ILÄSIG F: Mätning II UV flourescens S: Mätning Grp F: Separation I B7:101a YH D1:415 VB B7:113a YH F: Medicinalväxter PHARMADA S: Mätning Grp 1 2 F: Separation II DUGGA * BISYTES B7:113a YH B8 (samläs A5) AB via web öppen till kl BS! registrering på kursen krävs! D1:415 VB v. 11 Måndag 12 mars Tisdag 13 mars nsdag 14 mars Torsdag 15 mars Fredag 16 mars ILÄSIG ILÄSIG F: Kromatografi C10:301 YH F: CE C10:301 CP F: Prod. /bioanalys C10:301 UB F: Metod & validering C10:301 UB S: Droger * Grp 1 2 B10:2 AB S: Separation * Grp 3 4 D1:415 VB ILÄSIG ILÄSIG S: Droger * Grp 3 4 B10:2 AB S: Separation * Grp 1 2 D1:415 VB DUGGA * DRGER via web, öppen till kl F = Föreläsning S = Seminarium * = bligatoriskt moment :59 8

8 v. 12 Måndag 19 mars Tisdag 20 mars nsdag 21 mars Torsdag 22 mars Fredag 23 mars LABRATISVECKA i A5:2 * labchef Robert Burman Grp. 1 2 * extraktion Grp. 1 2 * SPE rening Grp. 1 2 * HPLC Grp. 3 4 * HPLC BS! medför försäkran avseende labsäkerhet. Grp. 3 4 * extraktion Grp. 3 4 * SPE rening S: Lab. Introduktion * C10:301 RB, EB, VB Inför laboration genomför självständigt riskanalys och medför till första laborationstillfället.... DUGGA * AALYS via web, öppen kl till kl v. 13 Måndag 26 mars Tisdag 27 mars nsdag 28 mars Torsdag 29 mars Fredag 30 mars LABRATIS AVSLUTIG Förberedelser inför lab. genomgång ILÄSIG Inlämning av labrapport senast 09.30! * S: Laborations- * genomgång S: Biodiversitet Besök i rangeri och på frilanden, samling vid: Villav 6, Botan AB C4:301 RB, EB, VB F: Strukturer I F: Strukturer II ILÄSIG C8:305 AK B7:101a AK F = Föreläsning S = Seminarium * = bligatoriskt moment :59 9

9 v. 14 Måndag 2 april Tisdag 3 april nsdag 4 april Torsdag 5 april Fredag 6 april ILÄSIG ILÄSIG Dymmelonsdagen Skärtorsdagen Långfredagen ILÄSIG v. 15 Måndag 9 april Tisdag 10 april nsdag 11 april Torsdag 12 april Fredag 13 april Annandag påsk ILÄSIG (undervisningsfri dag) Inlämning av rättad * labrapport senast F: Strukturer III F: Strukturer IV F: Strukturer V C8:301 AK B7:113a AK B7:113a AK MDUGGA (*) BISYTES, DRGER & AALYS via web, öppen till kl Sista dag för anmälan till tentamen F = Föreläsning S = Seminarium * = bligatoriskt moment :59 10

10 v. 16 Måndag 16 april Tisdag 17 april nsdag 18 april Torsdag 19 april Fredag 20 april ILÄSIG ILÄSIG ILÄSIG F: Strukturer VI C10:305 AK F: Strukturer VII A11:310 AK Sista dag för inskickandet av frågor på avsnittet "ursprung" inför tentamen Frågor kring avsnittet "ursprung" som skickats in som e-post senast besvarade och de av allmänintresse inlagda på kursens hemsida S: Tenta. frågestund C4:301 VB,AB,AK v. 17 Måndag 23 april Tisdag 24 april nsdag 25 april Torsdag 26 april Fredag 27 april ILÄSIG BS! godkända duggor krävs för tentamen! TETAME B10:1-2 ÅTERLÄMIG ber MTETAME I AUGUSTI S: Tentamensgenomgång C8:301 AK, YH, AB Praktikinformation * C8:301 LEA RIG Var vänliga och fyll I kursvärdering på webben! ;-) F = Föreläsning S = Seminarium * = bligatoriskt moment :59 11

11 LABRATIER & SEMIARIER LÄKEMEDLES URSPRUG, STRUKTUR CH AALYS, 9P., VT 2007 GRUPPIDELIG V.1 GRUPP 1 10 pers Aganovic,Simona Akbari,Hakima Al-Fatlawi,Rania Al-Sultani,Huda Al-Uthmani,Jamila Albanna,Rasha Alhadad,Kawther Al khoury,darine Amirian,Edlin Azad Slewa,Liza GRUPP 3 10 pers Gustafsson,Linda Hafezi,Hana Hedlund,Christin Imeraj,Zoje Isik,Lillian ikou,eleni disho,iram Rashid Ahmed,Parwin Ringdahl,Elionore Shahnavazi,Mernosh GRUPP 2 10 pers Azarniya,armin Baram,Aala Bergman,Ulrika Bergqvist,Caroline Bergström,Sandra Bogale,Emebet Daghighi,Sahar Fakher,Atyaf Gergis,Jouli Gräsman,Robin GRUPP 4 11 pers Skalleberg,Helena Solaka,Dalia Sulimankhil,Sadaf Timmerman,Per Thall,Jessica Thylwe,Lisa Tuncer,Yasemin Warsame,Suad Wiener,Frida Yousuf,Eni Alishiyaa Zerrouk,Meriem 11

12 Försäkran rörande säkerhetsföreskrifter. Härmed intygas att jag tagit del av säkerhetsföreskrifterna i kurskompendiet, samt att jag har genomfört och inlämnat riskanalys av laborationen. Jag känner också till var brandsläckningsredskap, förbandsmaterial och larmtelefon finns placerade, samt vilka utrymningsvägar och återsamlingsplatser som skall användas. rt och datum amnförtydligande: Detta blad avskiljes och inlämnas till labchefen senast i samband med första laborationstillfället. 12

13 Säkerhetsföreskrifter för laborationer Vid allt laborationsarbete är det nödvändigt att alla är väl förtrogna med gällande säkerhetsföreskrifter. Det är också viktigt att alla känner till var alla typer av säkerhetsanordningar finns och hur de används t ex förbandslåda, brandsläckare, släckningsfilt, nöd- och ögonduschar. m en olycka inträffar skall man uppträda lugnt och tillkalla hjälp så fort som möjligt. Det är extremt viktigt att ni hela tiden vet var närmaste telefon finns (slå ) samt vad laborationslokalen heter (A5 plan 2), och vilken ingång som är närmast (A6, orra vägen) för att kunna tillkalla hjälp snabbt. Alla tillbud skall också anmälas till er handledare. lyckor behöver inte inträffa vid laborationerna om du följer några enkla regler: Säkerhetsregler. Gör en riskbedömning innan du startar laborationen; tänk efter vilka moment och substanser som kan vara farliga (Se Appendix A) Sug alltid upp vätska med peleusboll eller dylikt, använd aldrig munnen! Arbeta lugnt och metodiskt. Håll rent och snyggt på din laborationsplats. Det är viktigt med god ordning på laboratorierna samt att alla gemensamma ytor rengöres efter avslutat arbete. Arbete med organiska lösningsmedel och starka syror/baser utförs alltid i dragskåp. Dragskåpsluckan skall vara neddragen så långt som möjligt vid arbete i dragskåp. m den allmänna eller dragskåpsventilationen skulle sluta att fungera anmäler du det till din handledare. Rengör och nollställ vågar efter användandet. Brandsläckare finns inne på lab. Använd alltid laboratorierock och skyddsglasögon. Såväl rökning och snusning som förtäring av mat och dryck är förbjuden på laboratoriet. Utrymning beordras av brandförsvarets personal via högtalarsystemet. Efter utrymning skall återsamling ske vid entrén till läkemedelsverket. Avfallshantering. rganiska lösningsmedel hälls i flaskor avsedda för detta ändamål. Slaskflaskorna är märkta Halogenerat respektive Icke halogenerat. Krossat glas kastas i märkt riskavfallskartong. Pipetter skall kastas i glaskärl avsedda för dessa. 13

14 Här följer några enkla råd och anvisningar som du skall lära dig för att kunna handla snabbt och ändamålsenligt vid ett olyckstillbud: Eldsläckning Brinnande kemikalier: släck alla lågor i närheten och ta om möjligt bort brandfarliga ämnen! Eld i kärl med mindre mängder lösningsmedel eller dylikt släcks genom kvävning med ett urglas, en porslinsskål etc. Vid större bränder bör kolsyresläckaren användas. Öppningsventilen skall öppnas helt och släckarens munstycke skall riktas i en liten vinkel mot brandhärden, BS! Rikta aldrig en kolsyresläckare rakt ned i en brinnande vätska. Brinnande kläder m det tar eld i kläderna släcks elden snabbast i närmaste nöddusch. Finns inte sådan till hands, kvävs elden genom att rulla in den brinnande i en brandfilt eller några labrockar. Brännskador Smärre brännskador: Spola omedelbart med rinnande kallt vatten tills smärtan försvunnit. Stick ej hål på brännblåsor. Svårare brännskador: m huden förstörts, skydda med sterila kompresser och för den skadade så fort som möjligt till sjukhus. Risk för chock (se nedan) föreligger! Sårskador Tvätta små ytliga sår med tvål och ljumt vatten och sätt på ett förband. Är såret något större så täck själva såret med en steril kompress och rengör en hudzon runt såret med tvål och ljumt vatten. Spola sedan själva såret med steril koksaltlösning och täck med steril kompress och bomull. Blödningar Håll den skadade kroppsdelen högt. Smärre blödningar stillas med ett vanligt sårförband och en måttligt åtdragen binda. Vid större blödningar skall den skadade snarast komma under läkarvård. Risk för chock (se nedan) föreligger! Frätande eller etsande ämnen Många kemikalier tillhör denna grupp, exempelvis svavelsyra, salpetersyra, saltsyra och alkalihydroxidlösningar. Farligast är givetvis de koncentrerade lösningarna, som kan åstadkomma svåra skador på kroppen och kläderna. Därför bör du omedelbart torka upp utspillda frätande ämnen och skölja med vatten. är du späder koncentrerad svavelsyra skall du hälla den i en fin stråle ner i vattnet under omrörning. Ett kom ihåg tips är namnet SIV = Syra I Vatten. m man gör tvärtom, dvs häller vatten i den koncentrerade syran, får man en explosionsartad värmeutveckling! 14

15 m du skulle få ett frätande ämne på dig, följ dessa råd: På hud: Skölj omedelbart med stora mängder rinnande vatten. BS! Koncentrerad svavelsyra skall först avtorkas innan man spolar med vatten. I ögon: Spola omedelbart rikligt med vatten i ögat i minst 3 minuter. Se till att ögat hålls öppet under spolningen. Spola därefter med steril koksaltlösning. Uppsök sjukhus om irritation kvarstår. Förgiftningar m ett giftigt ämne har svalts bör kräkningar framkallas genom att stoppa fingrarna i halsen. Detta gäller ej för syra eller lut, då man istället bör dricka rikligt med vatten och undvika kräkningar. m någon skulle få i sig andningsförlamande gaser, exempelvis cyanväte, koloxid, och svavelväte, för den skadade till frisk luft och vid behov ges konstgjord andning (syrgas). Sök akut läkarhjälp! Vid förgiftning genom inandning av lungskadande gaser t ex vätefluorid, väteklorid, klor, brom, svaveldioxid och nitrösa gaser fordrar den skadade absolut stillhet, värme och frisk luft tills ambulanspersonalen anländer. Konstgjord andning ges endast om den skadade upphört att andas! Sök akut läkarhjälp. Chock Hos en person som utsatts för omfattande bränn-, frät- eller elskada, förgiftning eller större blödning, kan avsevärda störningar i blodcirkulationen uppstå. Detta tillstånd kallas chock och känns igen på följande symptom: blekhet, kallsvett i pannan och på handflatorna, köldfrossa och kräkningskänsla. Vid chocktillstånd placeras den skadade med fötterna högt i ett varmt och dragfritt rum. Andningsvägarna måste hållas fria (framstupa sidoläge). Håll den skadade varm med filtar eller dylikt. Snarast transport till sjukhus med ambulans! Lämna inte den skadade ensam! 15

16 Appendix A. Farosymboler med farobeteckningar. bservera att symbolernas färg i originalfallet är skarpt orange. 16

17 PM FÖR LABRATISREDGÖRELSER Redogörelser för laborationer är obligatoriska moment på kurser där laborationer ingår, och kan lämnas muntligen eller skriftligen. är ett system med muntliga redogörelser tillämpas anges tidpunkt för detta särskilt i schemat f.n. på kursen "Farmakognosi 5p" för A5 vanligtvis i anslutning till själva laborationen. Muntlig redogörelse. Då muntlig redogörelse lämnas skall i princip samma avsnitt täckas som för den skriftliga motsvarigheten. En grundlig inläsning av och förståelse för laborationens teori är en förutsättning för ett framgångsrikt genomförande. En icke godkänd eller utebliven muntlig redogörelse skall i allmänhet kompletteras skriftligen. Detta skall i detta fall ske senast två veckor efter kursens slut, eller i samband med nästföljande termins kurs. Skriftlig redogörelse, labrapport. Redogörelsen skall i dessa fall vara skriven på dator. Kromatogram kan avritas för hand men inlästa ("scannade") bilder rekommenderas. riginal-kromatogrammen skall dock aldrig lämnas in! Framsidan skall då innehålla följande information: amn, Kurs, Grupp, och Datum Vidare skall den skriftliga redogörelsen utöver de nedan angivna avsnitten också innehåll rubrikerna: Laborationens beteckning och Syfte En godkänd skriftlig rapport är en värdehandling och skall behållas av laboranten till dess kursresultatet inrapporterats till UPPDK. Redogörelsens omfattning och viktiga komponenter. Tillvägagångssätt: Vad händer i de respektive stegen? Ex: Syra tillsattes för att få substansen i polär form, vilket utnyttjades.. Resultat: Kromatogram, samt tolkning därav. Inlästa eller skalenligt avritade TLC-plattor med samtliga Rf-värden beräknade. Retentionstider redovisade i tabellform. Beräkning av utbyte. Diskussion och slutsats: Har syftet uppnåtts, motivera detta! Diskutera utseendet av kromatogrammen (TLC & HPLC). Varför studeras TLC-plattan vid två våglängder? Kan utbytet förbättras? Jämför med teoretiskt utbyte. m flera substanser har isolerats, hur skulle man gå tillväga för att isolera en helt ren produkt? Vilken / vilka andra metod /-er kan användas? Utvärdera tillämpade extraktionsmodeller, samt jämför med andra alternativ, diskutera fördelar, nackdelar, användningsområde, mm. 17

18 LABRATI ISLERIG AV KIAALKALIDER Gör riskbedömning innan du påbörjar laborationen! Ur barken från träd i släktet Cinchona kan ett antal alkaloider isoleras. Av de uppemot 25 besläktade alkaloiderna är kinin och kinidin de viktigaste. Kinin har genom århundranden spelat en viktig roll som antimalariamedel Idag har dock kinaalkaloiderna kommit lite i skymundan, det finns bara ett kininpreparat registrerat på den svenska marknaden, detta med indikation mot två medfödda muskelkrampsjukdomar och som behandlingsalternativ vid svåra fall av klorokinresistent malaria. Kinidin finns registrerat med indikation som profylax mot allvarliga hjärtrytmrubbningar där annan medikamentell behandling ej haft effekt eller givit oacceptabla biverkningar (FASS 01). H R H H H R H H H H kinin R= -CH 3 cinkonidin R= -H kinidin R= -CH 3 cinkonin R= -H Figur 1. De vanligaste kinaalkaloiderna. kinin R = CH 3 pka 4,1 ; 8,5 kinidin R = CH 3 pka 4,2 ; 8,8 cinkonidin R = H pka 4,0 ; 8,2 cinkonin R = H pka 4,1 ; 8,2 Vad kännetecknar en alkaloid? Hur föreligger alkaloiden i växten? 18

19 1. Soxhletextraktion av kinabark Utförande Förberedelser till nästa dags laborationsgrupp 1.25 g kalk (Ca) släcks i en mortel genom portionsvis tillsats av 20 ml vatten. Blandningen försätts sedan med 10 ml 2% (vikt/volym) ah, varefter 10 g kinabark rörs i. Blanda väl, och låt sedan torka i värmeskåp över natt. Vad händer när man släcker kalk? Varför tillsätts Ca och ah till kinabarken? Varför torkas provet i värmeskåp? Den torra kinabarken extraheras med 200 ml diklormetan med Soxhletuppsättning (se Figur 2) i ett värmebad under 90 minuter Extraktionen sker kontinuerligt så länge lösningsmedlet hålls kokande i rundkolven. Ångan leds till återloppskylaren där den kondenseras och droppar ned i extraktionsmellandelen. är vätskenivån når upp till sifonens överkant töms vätskan i mellandelen automatiskt ner i rundkolven, varvid allt börjar på nytt. Lösningsmedlet avdunstas därefter på rotationsindunstare. Vilka fördelar respektive nackdelar finns med soxhletextraktion? ämn några alternativ till soxhletextraktion? Vilka fördelar respektive nackdelar har diklormetan som lösningsmedel? Vilka egenskaper har ett idealt lösningsmedel? Det indunstade extraktet från Soxhletextraktionen av kinabarken återupplöses i 5,0 ml fosfatbuffert (ph 7). Skrapa loss från väggarna och rör om med en spatel och placera kolven i i ultraljudsbad i ca 5 min. Spara det återupplösta extraktet till lab 2b (Upprening av kinabarksextraktet från Lab. 1 inför vidare analys). Vad händer under rotationsindunstningen? Figur 2. Soxhletuppsättningen består av rundkolv 1, extraktionsmellandel 2 och kylare 3. I mellandelen placeras materialet i en extraktionshylsa av papp. 19

20 2. Fastfasextraktion (SPE) Bakgrund Före analys av ett komplicerat prov (t.ex. plasma eller växtextrakt) med en kromatografisk teknik, behövs oftast ett förberedande upparbetningssteg. Detta har huvudsakligen två syften; att rena provet från ämnen som kan interferera med analysen, samt att koncentrera provet för att förbättra detekterbarheten. De vanligaste metoderna för att uppnå detta är vätskevätskeextraktion och fastfasextraktion [på engelska: solid phase extraction (SPE)]. Fördelarna med den sistnämnda metodiken är bl.a. att konsumtionen av farliga lösningsmedel kan minskas, samt att arbetet kan automatiseras med robotar. Föreliggande laboration skall illustrera fastfasextraktionstekniken och är uppdelad i två delar: a) retardering av färgämnen på fast fas och b) upprening av kinabarksextraktet inför vidare analys med HPLC (Lab. 3). a) Retardering av färgämnen på fast fas En god förståelse för de fysikalisk-kemiska krafter som ligger till grund för bindningen av provet till den fasta fasen, är mycket viktig för att optimalt kunna utnyttja SPE. Denna dellaboration (2a) syftar till att allmänt introducera fast fasextraktionstekniken, samt att belysa vilka retentionssätt som kan utnyttjas för ämnen med olika karaktär. Teori Se kurskompendiet. Utrustning Snabbpipetter ( l, l) Vakuumsug för fastfasextraktion lika fastfaskolonner (C18, SAX, SCX) Figur 3. SPE-kolonn och vakuumsug 20

21 Fastfaskolonner Kolonn Typ Exempel på lösningmedel som används. C18 polär MeH,Ac med Buffertar SAX Anjonbytare Buffertar med salt SCX Katjonbytare Buffertar med salt På laboratoriet kommer det att finnas informationsblad om de olika kolonnerna. Kemikalier Metanol R: 11-23/25 S: Fosfatbuffert acl Azur A klorid S: 22-24/25 Alizarin S: 22-24/25 Buffertlösningar att välja bland: Till C18 kolonnen A/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0 B/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0 C/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0: MeH (50:50 v/v) D/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0: MeH (50:50 v/v) Till SAX kolonnen A/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0 B/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0 E/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0 med 1M acl F/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0 med 1M acl Till SCX kolonnen A/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0 B/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0 E/ 10 mm fosfatbuffert ph 2.0 med 1 M acl F/ 10 mm fosfatbuffert ph 7.0 med 1 M acl Princip En typisk fastfasextraktion ser ut enligt nedan: 1. Aktivering av den fasta fasen. 2. Jämviktning av stationärfas med ett lösningsmedel med svag elueringsstyrka (oftast samma lösning som provet är löst i). 3. Applicering av provlösning på kolonnen. 4. Borttvättning av inteferenser från kolonnen. 5. Eluering av analyten från kolonnen. 21

22 Er uppgift är att hitta minst två kombinationer av fastfaskolonner och lösningsmedel som starkt retarderar var och en av era två analyter (alizarin och azur A). i skall utföra steg 1-3 i proceduren som beskrivits ovan (se nedan för mer detaljer). Struktuer och ungefärliga pka-värden för era analyter finns nedan. För att minimera åtgången på fastfaskolonner så är det viktigt att ni tänker ordentligt vilka två kombinationer ni vill testa för varje substans, och att ni konsulterar er handledare innan experimenten utförs. I fastfasextraktion vill man att analyten skall retarderas av den fasta fasen, medan interfererande substanser tvättas av utan förlust av analyt. Analyten skall sedan kunna tvättas av från kolonnen med en liten mängd elueringsmedel. Varför utför man steg 1 och 2? Vad skall man tänka på i steg 4 och 5? H pka ca 8-9 H CH CH pka ca 3-4 Alizarin complexon Azur A H 3 C C H 3 pka ca 5-6 S Cl H 2 pka ca 5 Utförande Späd 40 l av ert färgämne med 1 ml av den lösning ni tänkt använda för att jämvikta kolonnen (jämviktningslösningen). Placera kolonnerna i vacuumbehållaren. Förbehandla alla kolonner med 3 ml metanol och sedan 3 ml MQ-vatten. Stäng ventilen då vätskenivån är 1-3 mm ovanför packningsmaterialet. Tillsätt 3 ml av lämplig jämviktningslösning till kolonnerna (som ni väljer utifrån lösningarna ovan). Stäng ventilen då vätskenivån är 1-3 mm ovanför packningsmaterialet. Tillsätt 0,5 ml av ert prov utspätt i jämviktningslösningen. Öppna ventilen och studera retentionen. Klassificera retentionen för ert prov som: stark = ett smalt band, intermediär = brett band, svag = bädden är fylld med färg. Motivera varför ni valt de kombinationer som ni gjort. Hur retarderas era analyter på de olika kolonnerna? 22

23 b) Upprening av kinabarksextraktet från Lab. 1 inför vidare analys Det indunstade råextrakt som erhållits från Soxhletextraktionen innehåller en mängd ämnen från kinabarken. En direkt bestämning av alkaloiderna kinin, kinidin, cinkonin och cinkonidin med HPLC skulle inte vara möjlig, eftersom tillräckligt rena kromatogram ej kan erhållas. En provupparbetning av råextraktet från Lab. 1 med hjälp av fastfasextraktion skall därför utföras i denna dellaboration (2b). Detta innebär en grov upprening av provet, där de intressanta alkaloiderna och med dem närbesläktade ämnen sparas för analys, medan många andra substanser tvättas bort. Utrustning Vakuumsug för fastfasextraktion Fastfaskolonner (C18, 200 mg) Pipetter Ultraljudsbad Indunstare Kemikalier Metanol R: 11-23/25 S: Etanol R: 11 S: 7-16 Fosfatbuffert (ph 7,13 I=0,01) Kinin R: 22-36/37/38-42/43 S: /37 Kinidin R: 22 S: 22-24/25 Cinkonin R: 20/21/22 S: 36/37 Cinkonidin R: 23/24/25 S: 36/37/39-45 Utförande En fastfaskolonn (C18) konditioneras med 3 ml metanol, 3 ml MQ vatten och 3 ml fosfatbuffert (ph 7). Stäng ventilen då vätskenivån är 1-3 mm ovanför packningsmaterialet. BS! Låt ej kolonnen gå torr efter dessa steg. Det återupplösta provet filtreras genom ett 0,45 µm sprutfilter och appliceras på kolonnen. Kolonnen tvättas sedan med 3 ml fosfatbuffert (ph 7 I=0,01) och skall därefter gå torr. Provet elueras sedan med 4 ml etanol (95%). Låt kolonnen gå torr. Eluatet indunstas under kvävgasström i 60 0 C. Varför valdes buffert med ph 7 till påsättning på kolonnen? Vilka lösningsmedel är lämpliga att eluera med om man skall göra en HPLC- eller GC-analys av eluatet? Varför gör man en indunstning av eluatet? 23

24 3. Analys av SPE-extraktet av kinabark med vätskekromatografi (HPLC) Teori Se kurskompendiet. Syfte Vid denna laboration skall vi först kontrollera att de fyra intressanta alkaloiderna kinin, kinidin, cinkonin och cinkonidin, verkligen finns i det upprenade extraktet från kinabarken, d.v.s. en kvalitativ analys. I nästa steg skall vi bestämma hur stor mängd cinkonidin, som extraktet innehåller, d.v.s. en kvantitiativ analys. Utrustning HPLC-system med UV-detektor vid λ316 nm och skrivare Mobil fas: 4 µm trietylamin-fosfatbuffert (ph 2,5) + acetonitril (91+9) Separationskolonn: C18 (hydrofob stationär fas) Vollpipett Peleusboll Figur 4. HPLC-system Kemikalier Acetonitril R: 11-20/21/22-36 S: 16-36/37 Trietylamin R: 11-20/21/22-35 S: /37/39-45 Fosfatbuffert ph 2,5 Kinin 50 µm R: 22-36/37/38-42/43 S: /37 Kinidin 50 µm R: 22 S: 22-24/25 Cinkonin 50 µm R: 20/21/22 S: 36/37 Cinkonidin 50 µm R: 23/24/25 S: 36/37/

25 Gör riskbedömning innan du påbörjar laborationen! Princip Den kvalitativa delen av analysen, d.v.s. fastställandet av närvaron av alkaloiderna utföres genom att retentionstiderna för standardsubstanser jämförs med retentionstiderna för komponenterna i kinabarksextraktet. Den kvantitativa analysen, d.v.s. haltbestämningen av cinkonidin utföres med hjälp av en extern standardkurva konstruerad genom injektioner av standardsubstans (cinkonidin) vid olika koncentrationer. Utförande Återupplös indunstningsresten från fastfasextraktionen i 4 ml fosfatbuffert (ph 2,5 I 0,01). Späd denna lösning 50 gånger i ovanstående buffert på följande sätt. Ta ut 1 ml med vollpipett och späd till 50 ml i en mätkolv. Injicera standardsubstanserna för de fyra alkaloiderna kinin, kinidin, cinkonin, cinkonidin var för sig på HPLC-systemet och notera retentionstiderna. Injicera det spädda provet. Avgör om provet innehåller alla de fyra alkaloiderna. Injicera standardlösningarna med fem olika koncentrationer (5-50 µm) av cinkonidin på HPLC-systemet och mät upp topphöjder/-areor. På kurslab finns en stam av cinkonidin med en koncentration på ca 50 µm att utgå ifrån. Konstruera en standardkurva. Beräkna koncentrationen av cinkonidin i ert eluat, samt antal mg cinkonidin i barken om utbytet i alla steg är 100 %. Vilka är för- och nackdelarna med att göra en standardkurva med extern respektive intern standard? 25

26 Riskfraser Enkla riskfraser Kursiverad stil avser brandfarliga och explosiva egenskaper. Single risk phrases Italics indicate flammable and explosive properties. R 1 Explosivt vid torrt tillstånd Explosive when dry R 2 R 3 R 4 Explosivt vid stöt, friktion, eld eller annan antändningsorsak Mycket explosivt vid stöt, friktion, eld eller annan antändningsorsak Bildar mycket känsliga explosiva metallföreningar Risk of explosion by shock, friction, fire or other sources of ignition Extreme risk of explosion by shock, friction, fire or other sources of ignition Forms very sensitive explosive metallic compounds R 5 Explosivt vid uppvärmning Heating may cause an explosion R 6 Explosivt vid kontakt och utan kontakt med luft Explosive with and without contact with air R 7 Kan orsaka brand May cause fire R 8 R 9 Kontakt med brännbart material kan orsaka brand Explosivt vid blandning med brännbart material R 10 Brandfarligt Flammable Contact with combustible material may cause fire Explosive when mixed with combustible material R 11 Mycket brandfarligt Highly flammable R 12 Extremt brandfarligt Extremely flammable R 14 Reagerar häftigt med Reacts violently with water vatten R 15 Vid kontakt med vatten bildas extremt brandfarliga gaser Contact with water liberates extremely flammable gases R 16 Explosivt vid blandning med oxiderande ämnen Explosive when mixed with oxidizing substances R 17 Självantänder i luft Spontaneously flammable in air R 18 Vid användning kan brännbara/explosiva ångluftblandningar bildas In use, may form flammable/explosive vapour-air mixture R 19 Kan bilda explosiva peroxider May produce explosive peroxides R 20 Farligt vid inandning Harmful by inhalation R 21 Farligt vid hudkontakt Harmful in contact with skin R 22 Farligt vid förtäring Harmful if R 23 Giftigt vid inandning Toxic by inhalation R 24 Giftigt vid hudkontakt Toxic in contact with skin R 25 Giftigt vid förtäring Toxic if R 26 Mycket giftigt vid Very toxic by inhalation inandning R 27 Mycket giftigt vid hudkontakt Very toxic in contact with skin R 28 Mycket giftigt vid förtäring Very toxic if R 29 Utvecklar giftig gas vid kontakt med vatten Contact with water liberates toxic gas R 30 Kan bli mycket brandfarligt vid användning Can become very flammable in use R 31 Utvecklar giftig gas vid kontakt med syra Contact with acids liberates toxic gas R 32 Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra Contact with acids liberates very toxic gas R 33 Kan ansamlas i kroppen och ge skador Danger of cumulative effects R 34 Frätande Causes burns R 35 Starkt frätande Causes severe burns R 36 Irriterar ögonen Irritating to eyes R 37 Irriterar andningsorganen Irritating to respiratory system R 38 Irriterar huden Irritating to skin R 39 R 40 R 41 R 42 R 43 R 44 Risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador Möjlig risk för bestående hälsoskador Risk för allvarliga ögonskador Kan ge allergi vid inandning Kan ge allergi vid hudkontakt Explosionsrisk vid uppvärmning i sluten behållare Danger of very serious irreversible effects Possible risks of irreversible effects Risk of serious damage to eyes May cause sensitisation by inhalation May cause sensitisation by skin contact Risk of explosion if heated under confinement R 45 Kan ge cancer May cause cancer R 46 Kan ge ärftliga genetiska skador May cause heritable genetic damage R 48 Risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering Danger of serious damage to health by prolonged exposure R 49 Kan ge cancer vid inandning May cause cancer by inhalation R 50 Mycket giftigt för vattenorganismer Very toxic to aquatic organisms R 51 Giftig för vattenorganismer Toxic to aquatic organisms R 52 Skadligt för vattenorganismer Harmful to aquatic organisms R 53 Kan orsaka skadliga långtidseffekter i vattenmiljön May cause long-term adverse effects in the aquatic environment R 54 Giftigt för växter Toxic to flora R 55 Giftigt för djur Toxic to fauna R 56 Giftigt för markorganismer Toxic to soil organisms R 57 Giftigt för bin Toxic to bees R 58 Kan orsaka skadliga långtidseffekter i miljön May cause long-term adverse effects in the environment R 59 Farligt för ozonskiktet Dangerous for the ozone layer R 60 Kan ge nedsatt May impair fertility fortplantningsförmåga R 61 Kan ge fosterskador May cause harm to the unborn child R 62 Möjlig risk för nedsatt Possible risk of impaired

27 fortplantningsförmåga fertility R 63 Möjlig risk för fosterskador Possible risk of harm to the unborn child R 64 Kan skada spädbarn under amningsperioden May cause harm to breastfed babies R 65 Farligt: kan ge lungskador vid förtäring Harmful: May cause lung damage if R 66 Upprepad kontakt kan ge torr hud eller hudsprickor. Repeated exposure may cause skin dryness or cracking. R 67 Ångor kan göra att man blir dåsig och omtöcknad. Vapours may cause drowsiness and dizziness. R 313 Uttorkande på huden Defatting to the skin R 320 R 322 R 340 Sammansatta riskfraser R 14/15 R 15/29 R 20/21 R 20/22 R 20/21/22 R 21/22 R 23/24 R 23/25 R 23/24/25 R 24/25 R 26/27 R 26/28 R 26/27/28 R 27/28 Kan vara farligt vid inandning efter ofta upprepad exponering Kan vara farligt vid förtäring Viss risk för cancer kan inte uteslutas efter ofta upprepad exponering Reagerar häftigt med vatten varvid extremt brandfarliga gaser bildas Utvecklar giftig och extremt brandfarlig gas vid kontakt med vatten Farligt vid inandning och hudkontakt Farligt vid inandning och förtäring Farligt vid inandning, hudkontakt och förtäring Farligt vid hudkontakt och förtäring Giftigt vid inandning och hudkontakt Giftigt vid inandning och förtäring Giftigt vid inandning, hudkontakt och förtäring Giftigt vid hudkontakt och förtäring Mycket giftigt vid inandning och hudkontakt Mycket giftigt vid inandning och förtäring Mycket giftigt vid inandning, hudkontakt och förtäring Mycket giftigt vid hudkontakt och förtäring May be harmful by inhalation after frequently repeated exposure May be harmful if Some risk of cancer cannot be excluded after frequently repeated exposure Combination of risk phrases Reacts violently with water, liberating extremely flammable gases Contact with water liberates toxic, extremely flammable gas Harmful by inhalation and in contact with skin Harmful by inhalation and if Harmful by inhalation, in contact with skin and if Harmful in contact with skin and if Toxic by inhalation and in contact with skin Toxic by inhalation and if Toxic by inhalation, in contact with skin and if Toxic in contact with skin and if Very toxic by inhalation and in contact with skin Very toxic by inhalation and if Very toxic by inhalation, in contact with skin and if Very toxic in contact with skin and if R 36/37 Irriterar ögonen och Irritating to eyes and andningsorganen respiratory system R 36/38 Irriterar ögonen och huden Irritating to eyes and skin R 36/37/38 Irriterar ögonen, andningsorganen och huden R 37/38 Irriterar andningsorganen och huden R 39/23 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning R 39/24 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid hudkontakt R 39/25 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid förtäring R 39/23/24 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning och hudkontakt R 39/23/25 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning och förtäring R 39/24/25 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid hudkontakt och förtäring R 39/23/24/25 Giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning, hudkontakt och förtäring R 39/26 R 39/27 R 39/28 R 39/26/27 R 39/26/28 R 39/27/28 Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid hudkontakt Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid förtäring Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning och hudkontakt Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning och förtäring Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid hudkontakt och förtäring Irritating to eyes, respiratory system and skin Irritating to respiratory system and skin Toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation Toxic: danger of very serious irreversible effects in contact with skin Toxic: danger of very serious irreversible effects if Toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation and in contact with skin Toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation and if Toxic: danger of very serious irreversible effects in contact with skin and if Toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation, in contact with skin and if Very toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation Very toxic: danger of very serious irreversible effects in contact with skin Very toxic: danger of very serious irreversible effects if Very toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation and in contact with skin Very toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation and if Very toxic: danger of very serious irreversible effects in contact with skin and if

28 R 39/26/27/28 R 40/20 R 40/21 R 40/22 R 40/20/21 R 40/20/22 R 40/21/22 R 40/20/21/22 R 42/43 R 48/20 R 48/21 R 48/22 R 48/20/21 R 48/20/22 R 48/21/22 Mycket giftigt: risk för mycket allvarliga bestående hälsoskador vid inandning, hudkontakt och förtäring Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid inandning Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid hudkontakt Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid förtäring Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid inandning och hudkontakt Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid inandning och förtäring Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid hudkontakt och förtäring Farligt: möjlig risk för bestående hälsoskador vid inandning, hudkontakt och förtäring Kan ge allergi vid inandning och hudkontakt Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom hudkontakt Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom förtäring Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning och hudkontakt Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning och förtäring Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom hudkontakt och förtäring Very toxic: danger of very serious irreversible effects through inhalation, in contact with skin and if Harmful: possible risk of irreversible effects through inhalation Harmful: possible risk of irreversible effects in contact with skin Harmful: possible risk of irreversible effects if Harmful: possible risk of irreversible effects through inhalation and in contact with skin Harmful: possible risk of irreversible effects through inhalation and if Harmful: possible risk of irreversible effects in contact with skin and if Harmful: possible risk of irreversible effects through inhalation, in contact with skin and if May cause sensitisation by inhalation and skin contact Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure in contact with skin Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure if Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation and in contact with skin Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation and if Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure in contact with skin and if R 48/20/21/22 R 48/23 R 48/24 R 48/25 R 48/23/24 R 48/23/25 R 48/24/25 R 48/23/24/25 R 50/53 R 51/53 R 52/53 Farligt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning, hudkontakt och förtäring Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom hudkontakt Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom förtäring Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning och hudkontakt Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning och förtäring Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom hudkontakt och förtäring Giftigt: risk för allvarliga hälsoskador vid långvarig exponering genom inandning, hudkontakt och förtäring Mycket giftigt för vattenorganismer, kan orsaka skadliga långtidseffekter i vattenmiljön Giftigt för vattenorganismer, kan orsaka skadliga långtidseffekter i vattenmiljön Skadligt för vattenorganismer, kan orsaka skadliga långtidseffekter i vattenmiljön Harmful: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation, in contact with skin and if Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure in contact with skin Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure if Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation and in contact with skin Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation and if Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure in contact with skin and if Toxic: danger of serious damage to health by prolonged exposure through inhalation, in contact with skin and if Very toxic to aquatic organisms, may cause long-term adverse effects in the aquatic environment Toxic to aquatic organisms, may cause long-term adverse effects in the aquatic environment Harmful to aquatic organisms, may cause long-term adverse effects in the aquatic environment

29 Skyddsfraser Enkla skyddsfraser Kursiverad stil avser brandfarliga och explosiva egenskaper. Single safety advice phrases S 1 Förvaras i låst utrymme Keep locked up S 2 Förvaras oåtkomligt för barn Keep out of the reach of children S 3 Förvaras svalt Keep in a cool place S 4 S 5 S 6 S 7 Förvaras avskilt från bostadsutrymmen Förvara innehållet i... (lämplig vätska anges av tillverkaren) Förvaras i... (inert gas som anges av den som släpper ut produkten på marknaden) Förpackningen förvaras väl tillsluten Keep away from living quarters Keep contents under... (appropriate liquid to be specified by the manufacturer) Keep under... (inert gas to be indicated by the person placing the product on the market) Keep container tightly closed S 8 Förpackningen förvaras torrt Keep container dry S 9 S 12 S 13 S 14 Förpackningen förvaras på väl ventilerad plats Förpackningen får inte tillslutas lufttätt Förvaras åtskilt från livsmedel och djurfoder Förvaras åtskilt från... (oförenliga ämnen anges av den som släpper ut produkten på marknaden) Keep container in a wellventilated place Do not keep the container sealed Keep away from food, drink and animal feedingstuffs Keep away from... (incompatible material to be indicated by the person placing the product on the market) S 15 Får inte utsättas för värme Keep away from heat S 16 S 17 S 18 S 20 Förvaras åtskilt från antändningskällor - Rökning förbjuden Förvaras åtskilt från brandfarliga ämnen Förpackningen hanteras och öppnas försiktigt Ät inte eller drick inte under hanteringen Keep awaw from sources of ignition - o smoking Keep away from combustible material Handle and open container with care When using do not eat or drink S 21 Rök inte under hanteringen When using do not smoke S 22 Undvik inandning av damm Do not breathe dust S 23 Undvik inandning av gas/rök/ånga/dimma (lämplig formulering anges av den som släpper ut produkten på marknaden) Do not breathe gas/fumes/vapour/spray (appropriate wording to be indicated by the person placing the product on the market) S 24 Undvik kontakt med huden Avoid contact with skin S 25 Undvik kontakt med ögonen Avoid contact with eyes S 26 S 27 Vid kontakt med ögonen, spola genast med mycket vatten och kontakta läkare Tag genast av alla nedstänkta kläder In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice Take off immediately all contaminated clothing S 28 S 29 S 30 S 33 S 35 Vid kontakt med huden tvätta genast med mycket... (anges av den som släpper ut produkten på marknaden) Får inte tömmas i avloppet Töm ej i avloppet Häll aldrig vatten på eller i produkten Vidtag åtgärder mot statisk elektricitet Produkt och förpackning skall oskadliggöras på säkert sätt After contact with skin, wash immediately with plenty of... (to be indicated by the person placing the product on the market) Do not empty into drain ever add water to this product Take precautionary measures against static discharges This material and its container must be disposed of in a safe way S 36 Använd lämpliga skyddskläder Wear suitable protective clothing S 37 Använd lämpliga skyddshandskar Wear suitable gloves S 38 S 39 S 40 S 41 S 42 Använd lämpligt andningsskydd vid otillräcklig ventilation Använd skyddsglasögon eller ansiktsskydd Golv och förorenade föremål tvättas med... (anges av den som släpper ut produkten på marknaden) Undvik inandning av rök vid brand eller explosion Använd lämpligt andningsskydd vid gasning/sprutning (specificeras av den som släpper ut produkten på marknaden) S 43 Vid brandsläckning använd... (komplettera med lämpligt släckmedel. m vatten ökar riskerna, tillägg: Använd aldrig vatten) S 45 Vid olycksfall, illamående eller annan påverkan, kontakta omedelbart läkare. Visa om möjligt etiketten S 46 Vid förtäring kontakta genast läkare och visa denna förpackning eller etiketten S 47 Förvaras vid en temperatur som inte överstiger... o C (anges av den som släpper ut produkten på marknaden) S 48 Innehållet skall hållas fuktigt med... (anges av tillverkaren) In case of insufficient ventilation, wear suitable respiratory equipment Wear eye/face protection To clean the floor and all objects contaminated by this material, use... (to be specified by the person placing the product on the market) In case of fire and/or explosion, do not breathe fumes During fumigation/spraying wear suitable respiratory equipment (to be indicated by the person placing the product on the market) In case of fire, use... (indicate in the space the precise type of fire-fighting equipment. If water increases risks, add: 'ever use water') In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately. Show the label where possible If, seek medical advice immediately and show this container or label Keep at a temperature not exceeding... o C (to be indicated by the person placing the product on the market) Keep wet with... (appropriate material to be specificed by the manufacturer) Keep only in the original container Do not mix with... (to be indicated by the person placing the product on the market) S 49 Förvaras endast i originalförpackningen S 50 Blanda inte med... (anges av den som släpper ut produkten på marknaden) S 51 Sörj för god ventilation Use only in well-ventilated areas