NOW Legionella Urinantigen test

Produktinstruktioner NOW Legionella Urinantigen test EMERGO EUROPE P.O. BOX 18510 2502 EM THE HAGUE THE NETHERLANDS

AVSEDD ANVÄNDNING Binax NOW Legionella urinantigentest är ett snabbt in vitro immunokromatografianalys för kvantitativ spårning av Legionella pneumophila serogrupp 1 antigen (L. pneumophila serogrupp 1 antigen) i urin hos patienter med symtom på pneumoni. Den är avsedd att vara en hjälp vid sannolik diagnos på Legionella infektion (Legionärssjuka) orsakad av L. pneumophila serogrupp 1 tillsammans med odling och andra metoder. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTEN Legionärssjuka har fått namnet efter sjukdomsutbrottet 1976 bland deltagare vid American Legionkonventet för amerikanska krigsveteraner i Philadelphia. Den orsakas av Legionella pneumophila och karaktäriseras av akuta lungbesvär med feber av olika svårighetsgrad från lindrig sjukdom till dödlig lunginflammation 1. Sjukdomen förekommer i både epidemisk och endemisk form och är inte lätt att särskilja från andra luftvägsinfektioner baserat på kliniska symtom. Det uppskattas att omkring 25 000 2 till 100 000 3 fall av Legionellainfektioner inträffar i USA varje år. Mortaliteten som varierar mellan 25 % till 40 % 2 kan minskas om sjukdomen diagnostiseras snabbt och lämplig antibiotikaterapi sätts in tidigt. Kända riskfaktorer omfattar immunsuppression, rökning, alkoholkonsumtion och samtidigt pågående lungsjukdom. 2 Unga och gamla är speciellt känsliga. 4-6 Legionella pneumophila är orsaken till 80-90 % av rapporterade Legionellainfektioner där serogrupp 1 står för mer än 70 % av all legionellos. 2,7,8 Hittillsvarande metoder för laboratoriemässig spårning av pneumoni orsakad av Legionella pneumophila kräver ett prov från luftvägarna (t.ex. expektorerat sputum, bronkialtvätt, transtrakealaspirat, lungbiopsi) eller parade serumprover (akut- och konvalescentserum) för noggrann diagnostisering. Dessa metoder inkluderar Legionellaodling, direktfluorescerande antikroppar (DFA), DNA-sond och indirekt fluorescerande antikroppar (IFA). Alla dessa är beroende av att man har ett dugligt prov från luftvägarna så att man uppnår tillräcklig känslighet eller att man samlar serum under en två till sex veckors intervall. Tyvärr så är ett av symtomen för patienter med Legionärssjuka minskad slemproduktion. 8,9 Detta medför att det på många patienter är nödvändigt att använda en invasiv metod för att få ett prov från luftvägarna. Diagnos med serologiska metoder är vanligtvis retrospektiva till sin natur och även här är patientens medgörlighet dålig för att få de nödvändiga proverna. Binax NOW Legionella urinantigentest medger en tidig diagnos av Legionella pneumophila serogrupp 1 infektion genom spårning av ett specifikt lösligt antigen som finns i urinen hos patienter med Legionärssjuka. 10-14 Legionella pneumophila serogrupp 1 antigen har spårats i urin så tidigt som tre dagar efter uppträdandet av symtomen. 15 Testet är snabbt och avger resultat efter 15 minuter. Det görs med ett urinprov vilket förenklar provtagning, transport, och följande spårning av såväl tidiga som senare stadier av sjukdomen. 15 PROCEDURPRINCIPER Binax NOW Legionella urinantigentestet är en immunokromatografisk membrananalys för att spåra Legionella pneumophila serogrupp 1 lösliga antigen i urin från människor. Anti-Legionella pneumophila serogrupp 1 antikroppar från kanin, patientlinjen, absorberas på ett nitrocellulosamembran. Get-antikanin IgG, kontrollinjen, absorberas på samma membran som en andra linje. Anti-Legionella pneumophila serogrupp 1 antikroppar från kanin konjugeras till synliga partiklar som torkar på ett inert fibröst underlag. Konjugatkudden och membranet med linjer kombineras och utgör testremsan. Denna testremsa och en brunn som håller pinnen med provet monteras på motsatta sidor av en bokliknande testkort. För att utföra testet doppas en bomullstopp i urinprovet och sätts sedan in i testkortet. Reagens A tillsätts från en droppflaska. Kortet stängs sedan så att provet kommer i kontakt med testremsan. L. pneumophila serogrupp 1 urinantigen uppfångat av immobiliserat anti-l. pneumophila serogrupp 1 antikroppar reagerar med att binda konjugerade antikroppar. Immobiliserat get anti-kanin IgG uppfångar också synligt indikeringskonjugat och bildar kontrollinjen. Ett positivt testresultat avläses 2

visuellt efter 15 minuter eller mindre beroende på koncentrationen av antigen i urinprovet. Ett negativt Binax NOW Legionella urinantigentestresultat, som avläses efter 15 minuter, indikerar att L. pneumophila serogrupp 1 antigen inte kunde spåras i urinprovet. Testet tolkas enligt förekomsten eller avsaknaden av synliga rosa- till lilafärgade linjer. Ett positivt resultat visar både en patient- och en kontrollinje medan en negativ analys endast visar kontrollinjen. Om inte kontrollinjen syns, oberoende av om patientlinjen är synlig eller ej, betyder det att analysen är ogiltig. REAGENS OCH MATERIAL Material som ingår Testkort: Ett membran dragerat med kanin antikroppar specifika för Legionella pneumophila serogrupp 1 antigen och med get anti-kanin IgG, är sammansatt med anti Legionella pneumophila serogrupp 1 antigenkonjugat från kanin i ett hopfällbart testkort. Reagens A citrat/fosfat med Tween 20 och azid. Provtagningspinnar Utformade för att användas i Binax NOW Använd inte andra provtagningspinnar. Legionella urinantigentest. Positiv kontrollprovpinne Värmeinaktiverad L. pneumophila torkad på provpinnen. Negativ kontrollprovpinne L. pneumophila negativ provpinne. Positiv kontroll Reagens Provpinne Negativ kontroll Folieförpackning Testkort Material som inte ingår: Klocka, tidtagarur eller stoppur, standardbehållare för urinprov Tillbehör Binax NOW Legionella förpackning med urinantigenkontrollprovpinnar innehållande 5 positiva och 5 negativa kontrollprovpinnar. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER 1. OGILTIGA RESULTAT, indikeras av att ingen kontrollinje framträder, kan inträffa när en otillräcklig mängd reagens A tillsätts testkortet. För att försäkra att en tillräcklig mängd tillsätts, håll ampullen vertikalt 2,5-4 cm över provpinnens brunn och tillsätt dropparna långsamt. 2. För in vitro diagnostiskt användning. 3. Testkortet är förpackat i en tät skyddande foliepåse. Använd ej om påsen är skadad eller öppen. Tag ut testkortet ur påsen precis innan det skall användas. Vidrör inte testkortets reaktionsom- 3

råde. 4. Använd inte testkort efter angivet utgångsdatum. 5. Blanda inte ihop delar från satser med olika partinummer. 6. Provtagningspinnarna i satsen är godkända för att användas i Binax NOW testet. Använd inte andra provtagningspinnar. 7. Lösningen som används för att göra kontrollprovpinnarna inaktiveras via standardmetoder. Patientprov, kontroller och testkort skall emellertid hanteras som om de kan överföra smitta. Tillämpa gällande försiktighetsåtgärder för mikrobakteriell fara. FÖRVARING OCH STABILITET Förvara satsen i rumstemperatur (15-30 C). Binax NOW Legionella urinantigentestsatsen och reagenser är stabila fram till det utgångsdatum som finns angivet på deras ytterförpackning och behållare. Använd inte satsen efter angivet utgångsdatum. 59-86 F 15-30 C FÖRVARINGS TEMPERATUR PROVTAGNING Urinprov skall samlas upp i standardbehållare för urinprov. Proven kan förvaras i rumstemperatur (15-30 C) om de analyseras inom 24 timmar efter provtagning. Alternativt kan prov förvaras i 2-8 C i upp till 14 dagar eller vid -10 C till -20 C under längre tid innan de analyseras. Borsyra kan användas som konserveringsmedel. Om transport krävs ska urinprov alltid skickas i läckagesäkra behållare i 2-8 C eller frysta. Låt alla prov nå rumstemperatur innan de testas med Binax NOW Legionella urinantigentestet. KVALITETSKONTROLL Daglig kvalitetskontroll: Binax NOW Legionella urinantigentest har inbyggda kontrollfunktioner. Tillverkarens rekommendation som daglig kvalitetskontroll är att dokumentera kontrollerna vid varje provkörning. Positiv procedurkontroll Den rosa- till lilafärgade linjen i "Kontroll"-positionen kan betraktas som en intern positiv procedurkontroll. Om kapillärflöde uppstått framträder alltid denna linje. Negativ procedurkontroll Att bakgrundsfärgen klarnar i resultatfönstret är en negativ bakgrundskontroll. Bakgrundsfärgen i fönstret skall vara ljusrosa till vit inom 15 minuter och skall inte störa avläsningen av resultatet. Externa positiva och negativa kontroller: Goda laboratoriesed rekommenderar att positiva och negativa kontroller används för att säkerställa reagensens funktion och rätt utförande av analysproceduren. Positiva och negativa kontrollprovpinnar som övervakar hela analysen finns med i satsen. Ytterligare Binax NOW Legionella positiva och negativa kontrollprovpinnar finns tillgängliga separat. Alternativt kan ytterligare kontroller testas enligt riktlinjer eller krav från lokala, statliga, och/ eller federala förordningar eller tillsynsmyndigheter. Vid användning av urinkontroller i vätskeform förfar på samma sätt som med patientprov. Positiva och negativa kontroller skall testas en gång för varje ny testsats som öppnas och i övrigt enligt ert laboratoriums standardkvalitetskontrollprocedurer. 4

Om inte förväntade kontrollresultat erhålles skall patientresultaten inte rapporteras. Upprepa kontrolltestningen eller kontakta Binax tekniska serviceavdelning på telefon +1 207 772 3988 eller via fax: +1 207 761 2074. ANALYSPROCEDUR Förfarande med patientprov (och urinkontroller i vätskeform): Tag inte ut testsatsen ur påsen förrän testprovet har nått rumstemperatur. 1. Ställ patienturin och/eller vätskeurinkontroll(er) i rumstemperatur (15-30 C). Tag ut testsatsen ur sin påse precis innan det skall användas och lägg det plant. 2. Doppa en Binax provpinne i det urinprov som skall testas så att hela bomullstoppen täcks. Om det droppar från provpinnen tryck bomullshuvudet mot urinbehållarens insida så att överflödig vätska avlägsnas. 3. Det finns två hål på den inre högra panelen av kortet. För in provpinnen i det NEDRE hålet (provpinnebrunnen) Tryck bestämt uppåt tills provpinnens huvud är helt synlig i det övre hålet. TAG INTE BORT PROVPINNEN. 4. Håll flaskan med reagens A vertikalt 2,5 till 4 cm ovanför kortet. Tillsätt långsamt två (2) fritt fallande droppar av Reagens A i det NEDRE hålet. 5. Drag omedelbart bort det självhäftande skyddet från den högra kanten på testkortet. Stäng och förslut kortet noggrant. Läs av resultatet i fönstret 15 minuter efter att kortet stängts. Resultat som avläses senare än 15 minuter kan vara felaktiga. Emellertid kan vissa positiva patienter visa en synlig provlinje efter kortare tid än 15 minuter. FEL RÄTT OBS: För att underlätta finns det skåror på provpinnens skaft och pinnen kan brytas av efter att kortet stängts. Undvik då att rubba pinnen i brunnen. Läs resultatet i fönstret 5

Hur Binax NOW kontrollprovpinnar används: Tag ut kortet ur sin påse precis innan det ska användas. Lägg kortet plant och utför testen på följande sätt: 1. Det finns två hål på den inre högra panelen av kortet. För in provpinnen i det NEDRE hålet. Tryck bestämt uppåt tills provpinnens huvud är helt synlig i det övre hålet. TAG INTE BORT PROVPINNEN. 2. Håll flaskan med reagens A vertikalt 2,5 till 4 cm ovanför kortet. Tillsätt långsamt sex (6) fritt fallande droppar av Reagens A i det NEDRE hålet. 3. Drag omedelbart bort det självhäftande skyddet från den högra kanten på testkortet. Stäng och förslut kortet noggrant. Läs av resultatet i fönstret 15 minuter efter att kortet stängts. Resultat som avläses senare än 15 minuter kan vara felaktiga. Den positiva kontrollprovlinjen kan emellertid synas efter kortare tid än 15 minuter. TOLKNING AV RESULTATEN Ett negativt prov visar en enda rosa- till lilafärgad kontrollinje i den övre halvan av fönstret, vilket betyder ett sannolikt negativt resultat. Denna kontrollinje betyder att detekteringsdelen av testet har utförts korrekt men att inget L. pneumophila serogrupp 1 antigen har upptäckts. Ett positivt prov visar två rosa- till lilafärgade linjer. Detta betyder att antigen spårades. Prov med låga nivåer av antigen kan visa en svag provlinje. Alla synliga linjer betyder att testet är positivt. CONTROL SAMPLE CONTROL SAMPLE NEGATIVE RESULT POSITIVE RESULT Om ingen linje syns, eller om bara provlinjen syns, så är analysen ogiltig. Ogiltiga test skall göras om. Om problemet kvarstår CONTROL kontakta Binax tekniska serviceavdelning på telefon: +1 207 SAMPLE 772 3988 eller via fax på nr: +1 207 761 2074. INVALID RESULT No Lines CONTROL SAMPLE OR INVALID RESULT Sample Line Only RAPPORTERING AV RESULTAT Resultat Rekommenderat utlåtande Positiv Sannolikt positivt resultat för L. pneumophila serogrupp 1 antigen i urin, vilket tyder på pågående eller tidigare infektion. Negativt Sannolikt negativt resultat för L. pneumophila serogrupp 1 antigen i urin, vilket tyder på att den inte finns någon pågående eller tidigare infektion. Legionella infektion kan inte uteslutas eftersom andra serogrupper och arter kan orsaka sjukdomen, antigen behöver inte förekomma i urin i det tidiga infektionsstadiet och nivån av antigen som finns i urinen kan ligga under testets detektionsgräns. BEGRÄNSNINGAR Binax NOW Legionella urinantigentest har godkänts med enbart urinprov. Andra prov (t.ex. plasma, serum eller andra kroppsvätskor) som kan innehålla Legionellaantigen har inte testats. Testet kan inte används för miljöbetingade prov (t.ex. dricksvatten). Detta test spårar inte infektioner orsakade av andra L. pneumophila serogrupper och andra Legionella arter. Ett negativt antigenresultat utesluter inte infektioner med L. pneumophila serogrupp 1. Odling rekommenderas vid misstänkt pneumoni för att spåra de orsakande substanserna andra än L. pneumophila serogrupp 1 och för att upptäcka L. pneumophila serogrupp 1 när antigen inte spårats i urin. 6

Diagnosen av Legionärssjuka kan inte enbart baseras på kliniska eller röntgenfynd. Det finns inget enskilt tillfredställande laboratorietest för Legionärssjuka. Därför skall odlingsresultat, serologi och antigenspårningsmetoder användas tillsammans med kliniska fynd för att ställa en korrekt diagnos. Utsöndring av Legionellaantigen i urin kan variera från patient till patient. Antigenutsöndring kan börja så tidigt som 3 dagar efter symtom först visat sig och pågå i upp till ett år efteråt. 15 Ett positivt Binax NOW Legionella urinantigentestresultat kan uppkomma på grund av en pågående eller tidigare infektion och är därför inte en absolut indikation på infektion utan kräver andra kompletterande belägg. NOW testet prestationsförmåga på diuretisk urin har inte testats. Binax NOW Legionella urinantigentest har endast utvärderats på sjukhuspatienter. Test har inte utförts på polikliniska patienter. PRESTANDADATA Klinisk känslighet och specificitet (retrospektiv studie): Binax NOW Legionella urinantigentest användes för att testa 300 frusna arkiverade patienturinprov vid ett stort universitet. Etthundra (100) av dessa patienter fick positiva resultat beträffande Legionella pneumophila serogrupp 1 infektion enligt odling, DFA, RIA och/eller IFA (4X titer). Den totala överensstämmelsen för NOW testet jämfört med laboratoriediagnostiken var 95 %. Känsligheten och specificitet var respektive 95 %. Nittiofem procent (95 %) konfidensintervaller står här nedan: Laboratoriediagnos + NOW + 95 10 Resultat 5 190 Känslighet = 95% (88,7% - 98,4%) Specificitet = 95% (91,0% - 97,6%) Överenstämmelse = 95% (91,9% - 97,2%) Klinisk specificitet (prospektiv studie): I en studie utförd på ett flertal platser testades 93 färska urinprov från hospitaliserade patienter med symtom i de nedre luftvägarna eller sepsis med Binax NOW testet. Hundra procent (100 %) av dessa förmodade negativa patienter visade ett negativt NOW testresultat vilket indikerar att Binax NOW Legionella urinantigentest är mycket specifikt inom den grupp för vilket det är avsett. Korsreaktivitet: Av de 200 urinprov som testade negativt var 85 från patienter med bakteriell pneumoni (annan än Legionella ssp.), 84 hade urinvägsinfektioner, 14 hade mykobakteriella infektioner, 5 hade empyem, 11 hade andra lungproblem och 1 hade pneumoni orsakad av transtrakeala aspirat. Etthundranittio (190) av dessa patientprov visade negativa resultat med NOW testet vilket ger en specificitet på 95 %. Reproducerbarhetsstudie: En blind studie med Binax NOW Legionella urinantigentest gjordes på 3 separata platser där man använde en panel med kodade prover. Panelerna innehöll negativa, lågt negativa, medelpositiva och högt positiva prov. Prov både med och utan borsyra testades. Varje prov testades flera gånger vid varje plats under 3 olika dagar. Sexhundratjugonio (629) av de totalt 630 proven som testades visade det förväntade resultatet. 7

REFERENSER 1. Fraser, D.W., T.R. Tsai, W. Orensein, W.E. Parkin, P.H., H.J. Beecham, R.G. Sharrar, J. Harris, G.F. Mallison, S. M. Martin, J.E. McDade, C.C. Shepard, P.S. Brachman, and The Field Investigation Team. Legionnaires disease: description of an epidemic of pneumonia. N. Engl. J. Med. 1977;297:1189-1197. 2. Marston, B.J., H.B. Lipman, R. F. Breiman. Surveillance for Legionnaires Disease: risk factors for morbidity and mortality. Arch. Intern. Med. 1994;154:2417-2422. 3. Horwitz, M. A., B.J. Marston, C.V. Broome, and R.F. Breiman. Prospects for vaccine development. Presented at the 4 th International Symposium on Legionella, 1992. In: Barbaree, J. M., R.F. Breiman, and A. P. DuFour, eds. Legionella: Current Status and Emerging Perspectives. Washington, D.C. American Society for Microbiology, 1993. 4. Kohler, R.B. Antigen detection for the rapid diagnosis of Mycoplasma and Legionella pneumonia. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1988;4:47S-59S. 5. Roig, J., X. Aquiler, J. Ruiz, et. al. Comparative study of Legionella pneumophila and other nosocomial-acquired pneumoniaes. Chest. 1991;99:344-50. 6. Carretala, J., F. Gudiol, R. Pelleres, et. al. Risk factors for nosocomial Legionella pneumophila pneumonia. Am. J. Respir. Crit. Med. 1994;149:625-9. 7. Reingold, A.L., B.M. Thomason, B.J. Brake, L. Thacker, H.W. Wilkinson, and J.N. Kuritsky. Legionella pneumonia in the United States: the distribution of serogroups and species causing human illness. J. Infect. Dis. 1984;149:819. 8. Stout, J.E., V.L. Yu. Legionellosis. New Eng. J. of Medicine. 1997;337:682-7. 9. Edelstein, P.H. Legionnaires Disease. Clinical Infectious Diseases. 1993;16:741-9. 10. Berdal, B.P., C.E. Farshy, and J.C. Feeley. Detection of Legionella pneumophila antigen in urine by enzyme-linked immunospecific assay. J. Clin. Microbiol. 1979;9:575-578. 11. Tilton, R.C. Legionnaires disease antigen detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Ann. Intern. Med. 1979;90:697-698. 12. Kohler, R.B., S.E. Zimmerman, E. Wilson, S.D. Allen, P.H. Edelstein, L.J. Wheat, and A. White. Rapid radioimmunoassay diagnosis of Legionnaires Disease. Ann. Intern. Med. 1981;94:601-605. 13. Bibb, W.F., P.M. Arnow, L. Thacker, and R.M. McKinney. Detection of soluble Legionella pneumophila antigens in serum and urine specimens by enzyme-linked immunosorbent assay with monoclonal and polyclonal antibodies. J. Clin. Microbiol. 1984;20:478-482. 14. Tang, P.W., and S. Toma. Broad-spectrum enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Legionella soluble antigens. J. Clin. Microbiol. 1986;24:556-558. 15. Kohler, R.B., W.C. Winn, Jr., and L.J. Wheat. Onset and duration of urinary antigen excretion in Legionnaires disease. J. Clin. Microbiol. 1984;20:605-607. BESTÄLLNINGSINFORMATION Återbeställningsnummer: 852-012: Binax NOW Legionella Urinary Antigen Test (12 testsatser) 852-000: Binax NOW Legionella Urinary Antigen Test (22 testsatser) 852-010: Binax NOW Legionella Urinary Antigen förpackning med kontrollpinnar Kontaktinformation: Binax, Inc., 217 Read Street, Portland, ME 04103 USA Tel: +1 207 772 3988 FAX: +1 207 761 2074 Internet: www.binax.com 8

Rev. 2 2/6/04 1998 Binax, Inc. IN852000 - Swedish