HLA-diagnostik vid celiaki

Transkript

1 HLA-diagnostik vid celiaki Ann-Charlotte Wikström Docent, Bitr.överläkare Klinisk immunologi och Transfusionsmedicin Karolinska Universitetssjukhuset

2 Lite historia. Först beskrivet av Samuel Gee 1888 On the Coeliac Affection Termen coeliac kommer från grekiskans κοιλιακος koiliakaos abdominal (i buken) eller tarmlidande Aretaeus från Kappadokien (nuv. Turkiet) beskrev 200 e. Kr. en kronisk malabsorptionssjukdom som motsvarar celiaki

3 Lite mer historia. Willem K Dicke

4 CELIAKI ÄR ETT AUTOIMMUNT TILLSTÅND (INTE EN ALLERGI)! Gener Sjukdom Immunreglering Omgivning

5 Vad är celiaki? Inflammatorisk reaktion på glutenpeptider hos genetiskt predisponerade individer Finns i hela världen prevalens 1/100-1/200 Inflammationen drivs av T celler

6 Normal intestinal biopsy Small intestinal biopsy in a patient with active celiac disease Source:NEJM

7 Skada på tarmmucosan

8 Symptom Vanliga Diarre Trötthet Uppblåst mage Magsmärtor Viktnedgång Flatulens Ovanliga Osteopeni/ osteoporos Leverskada Kräkning Järnbristanemi Neurologiska besvär Förstoppning Illamående

9 Osteoporos Thyroidearubbningar Följdsjukdomar Brist på folsyra, vitamin B12, fettlösliga vitaminer och järn Ökad dödlighet pga ökad risk för malignitet Non-Hodgkin lymfom (3-6x vanligare) Munhåla-svalg, matstrups och tunntarms adenocarcinom

10 Definition Immunmedierad skada i tarmslemhinnan Orsakas av känslighet för gluten hos genetiskt predisponerade individer: DQ2 och/eller DQ8 positiv HLA haplotyp är nödvändig men inte tillräcklig Kan vara symptomatisk eller asymptomatisk Är vanligare hos personer med: Typ 1 diabetes Downs syndrom Turners syndrom IgA brist Förstagrads släktingar till celiakipatienter 10

11 Isberget Klassisk celiaki: 1:4500 Atypisk : 1:250 Tyst Latent

12 Epidemiologi Finns i hela världen Troligen mer i Europa (mer gluten?) 1/77 Svenska barn (Carlsson, et al, 2001) 1/230 Italienska barn (Catassi, et al, 1996) 1/100 5 åringar i Denver (Hoffenberg, et al, 2003) Endast 3-5% av de som har celiaki är diagnosticerade Kvinnor mer än män 1.5-3:1

13 Växtfamiljer

14 Genetik Stark HLA association 90-95% av patienterna är HLA-DQ % av friska kontroller De flesta övriga är DQ % av kontroller 10% av patienter med celiaki har en sjuk släkting 14

15 Varför HLA-testa Högt negativt prediktivt värde : neg DQ2/DQ8 utesluter celiaki med 99% säkerhet Asymptomatiska släktingar Down, Turner & Williams syndrom Typ 1 diabetes Diagnostiska dilemman

16 Grundläggande om HLA

17 HLA-Human Leucocyte Antigen Ann-Charlotte Wikström Source: Nature

18

19 Nedärvning av HLA Ann-Charlotte Wikström

20 HLA class II Ann-Charlotte Wikström

21 HLA class II DQB1 DQA1 Ann-Charlotte Wikström

22 Nomenklatur: DQB1 alleler DQB1*03:01 = DQ7 DQB1*03:02 = DQ8 DQB1*03:03 = DQ9 DQB1*03:04 = DQ7 DB1*02:01-02:05 =DQ2

23 Nomenklatur:DQ8 Antigen, serotyp, allel DQA1*03, DQB1*03 Antigen DQA1*03:01, DQB1*03:02 Allel DQA1*03:01, DQB1*03:02 DQ8 serotyp

24 HLA class II

25 Genetiska riskfaktorer för celiaki Risken starkt kopplad till förekomsten av två olika gener som kodar för HLA klass II molekylerna: DQ2,5 (DQA1*05:01 och DQB1*02) DQ8 (DQA1*03:01 och DQB1*03:02) DQ2,2 (DQA1*02:01 och DQB1*02 låg risk *=Anger genomisk typning

26 Riskgener för celiaki

27 Riskgener för celiaki DQ2 CIS TRANS

28 Riskgener för celiaki DQ8

29 Teori: Celiakipatogenes Alaedini, A. et. al. Ann Intern Med 2005;142:

30 30 Alaedini, A. et. al. Ann Intern Med 2005;142:

31 Diagnostik Biopsi Gliadin ak Serologi TTG ak HLA typning Alaedini, A. et. al. Ann Intern Med 2005;142:

32 Sammanfattning Celiaki är en vanlig sjukdom Underdiagnosticerad Diagnos görs med Serologi Biopsi HLA-typning för DQ2/DQ8 Saknas DQ2/DQ8 är sannolikheten för att ha celiaki mycket liten

33 ???? FRÅGOR???????

34 Metoder för HLA-typning vid celiaki PCR-SSP (sequence specific primers) Realtids-PCR olika varianter SNP (single nucleotide polymorphism) associerade till HLA-DQ2/DQ8 Microarray

35 HLA typning med SSP (sequence specific primer) DNA extraheras ur blod. Specifika primers amplifierar allel specifika produkter som sedan detekteras på en gel. Kontrollbandet högst upp är amplifierat GAPDH. DQ2 positiv DQ2 och DQ8 negativ

36 Olerup PCR SSP DQA1*02, DQA1*05 DQB1*02 DQB1*03:02 DQ2: DQ2,5: DQA1*05, DQB1*02 (02:01 eller 02:02) DQ2,2: DQA1*02:01, DQB1*02 DQ8: DQA1*03, DQB1*03:02

37 Realtids PCR (qpcr) Reinton et al (2006) J. Immunol Meth RT-PCR som detekterar DQA1*05, DQB1*02 och DQB1*03: PCR reaktioner Ollika et al (2009) Anal Biochem Trippel plex RT-PCR fluorescensdetektion PerkinElmer DELFIA Celiac disease hybridization assay

38 Karolinskas qpcr Tre PCR reaktioner med primers för DQ2,5 DQA*05 DQB*02 DQ2,2 DQA*02 DQ8 DQA*03 DQB*03:02 GAPDH FAM/ NED / VIC märkta prober

39 Tolkning Både DQA och DQB skall vara positivt i någon av de tre kombinationerna för ge ett positivt svar Skiljer på risk för: DQ2,5 - mycket hög risk DQ2,2 - låg risk DQ8 - hög risk Om DQB allelen positiv men inte motsvarande DQA- kommentar

40 SNP analys Monsuur et al (2008) PlosOne Analys av 6 st DQ2/8 associerade SNPar Gäller europeiska individer!

41 Microarray analys PCR (2 multiplex PCR) Microarray hybridisering 7 primer par och 7dubbelpunkter Scanning, automatisk utvärdering och dokumentation (Euroarray / Dynex)

42 Reflektioner HLA-typning celiaki I Sverige har ungefär 25-30% av befolkningen DQ2 eller DQ8 men av dessa insjuknar bara 2-5%. En positiv HLA typning för DQ2 och DQ8 ökar sannolikheten för att en patient har celiaki men är absolut inte diagnostiskt En negativ HLA typning för DQ2 och DQ8 utesluter i princip celiaki.

43 Vilken metod skall man välja? Kompetens och utrustning Kostnad Provvolymen Viktigt att ha en metod som kan identifiera DQ2,5 DQA*05 DQB*02 DQ2,2 DQA*02 DQ8 DQA*03 DQB*03:02

44 Indikationer för HLA typning Ny utredningsalgoritm Förstagrads släktingar Oklart diagnostiskt utfall symtom/serologi/pad Celiaki-associerade sjd Barn med diabetes mellitus (IDDM), selektion av barn att följa med serologi/biopsi Downs syndrom Turners syndrom Dermatitis herpetiformis (DH) Autoimmuna endokrina syndrom Patienter som provat glutenfri kost

45 Tack till : Mehmet Uzunel Dan Hauzenberger Petter Höglund Per Marits Jakob Nilsson och för Er uppmärksamhet!

46 ???? FRÅGOR???????