QUANTA Lite TM h-ttg IgA (Human Tissue Transglutaminase) För In Vitro Diagnostisk Användning CLIA Komplexity: Hög

Transkript

1 QUANTA Lite TM h-ttg IgA (Human Tissue Transglutaminase) För In Vitro Diagnostisk Användning CLIA Komplexity: Hög Avsedd användning QUANTA Lite TM h-ttg IgA är en enzymlänkad immunosorbent assay (ELISA) fför den semikvantitativa bestämningen av IgA antikroppar mot vävnadstransglutaminase (endomysium) i humant serum. Bestämningen av dessa antikroppar är ett hjälpmedel vid diagnosen av vissa glutenkänsliga enteropatier såsom celiaki och dermatitis herpetiformis. Summering och förklaring av testet Celiaki och dermatitis herpetiformis, de två erkända formerna av glutenkänslig enteropati (GSE) karaktäriseras av kronisk inflammation i den intestinala slemhinnan och epitelutplattning eller positiv "villous atrophy" 1,2 Intolerans mot gluten, ett veteprotein som finns i vete, råg och korn orsakar GSE. Patienter med celiaki kan lida av diare, gastrointestinala problem, anemi, trötthet, psykiska problem och andra diffusa symptom eller så kan dom vara asymptomatiska. 2 Dermatitis herpetiformis är en hudsjukdom som är associerad med GSE. Alla GSE patienter har en ökad risk för lymfom. 3 En gluten-fri diet kontrollerar GSE och de associerade riskerna. Upptäckten på femtiotalet att gluten orsakar celiaki möjliggjorde behandling genom att sätta patienter på en glutenfri diet. Efter utvecklingen av en metod för oralt utförda tarmbiopsier, hade läkarna en möjlighet att undersöka om det förelåg villous atrofi. Eftersom positiv villous atrofi kan förekomma i andra sjukdomar, kan GSE diagnosticeras genom de urspungliga kriterierna utarbetade av European Society for Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Dessa kriterier förutsätter ungefär ett år med omfattande studier där patienten skall ha: a) en initialt positive tarmbiopsi, b) 6 månader på en glutenfri diet, c) en negativ andra tarmbiopsi, d) gluten exponering under 6 månader, e) en positiv tredje tarmbiopsi. Utvecklingen av serumbaserade tester för förekomsten av tre olika antikroppar av IgA isotyp 3 gjorde det möjligt att utarbeta snabbare, reviderade ESPGAN kriterier för celiaki som rapporterades i Dessa tester inkluderade IgA endomysium antikroppar (EMA), 4 IgA antigliadin antikroppar (AGA) och R1 antireticulin antikroppar (ARA). De reviderade ESPGAN kriterierna kräver: a) en positiv tarmbiopsi och b) bevisad förekomst av åtminstone två av de tre IgA-klass antikropparna som nämns ovan. Efter detta har flera studier demonstrerat att IgA EMA tester har över 99% specificity för GSE och en större känslighet än ARA eller AGA tester Eftersom IgA EMA försvinner hos patienter med celiaki eller dermatitis herpetiformis som följer en gluten-fri diet, så är tester för dessa antikroppar också ett hjälpmedel i monitoreringen av patientens åtföljande av en glutenfri diet. 4,5,12 Nyligen, har endomysium antigenet identifierats som det protein korsbindande enzymet känt som vävnadstransglutanminas (ttg). 14,15 Antigen specifika ELISA procedurer som har inkorporerat ttg erbjuder en tillförlitligt och objektivt alternativ till den traditionella immunofluorescens-baserade assayn som använder tunna skivor av ap-esofagus som substrate ELISA proceduren kan anpassas till bade stora och små volymer av patientprover. Under de senaste två åren har humant ttg antigen producerats med hjälp av rekombinant teknik. Rekombinant humant antigen kan ha vissa fördelar jämfört med de mer traditionella testerna som baserat sig på antigen från marssvinslever. 16,17,20 Två nyare utvecklingar i serologi rörande celiaki, är användandet av nativt humant vävnadstransglutaminas renat från röda blodceller och användandet av tester som kan detektera IgG klass vävnadstransglutaminas. Användningen av nativt humant ttg från röda blodkroppar snarare än marssvin eller humant antigen av rekombinant ursprung möjliggör en enklare reningsprocedure och resulterar i en preparation fri från bakteriell, insekt eller annan proteinkontaminering. 21, 22, 23, 24 ELISA assays med humant antigen ttg som presenterats i litteratur verkar fungera väl i förhållande till mer traditionella marssvinsantigen baserade 16, 17, tester. Gliadin antikroppstest av IgG klass har använts under en tid, primärt som ett hjälpmedel vid utvärdering av IgA deficienta individer. Flera forskare har demonstrerat det kliniska värdet av att bestämma IgG antikroppar mot ttg. 17,20,21 I en studie ökade känsligheten från 91.5% för IgA antikroppen ensam, till 98.5% när både resultaten för IgA och IgG togs i beaktning. 17 Procedur Nativt humant vävnadstransglutaminas (h-ttg) antigen isolerat från färska röda blodkroppar binds till brunnarna på en microtiterplatta av polystyren under förhållanden som bevarar antigen i sin nativa form. Förspädda kontroller och utspädda patientserum adderas till egna mikrotiterbrunnar, vilket låter förekommande h-ttg IgA antikroppar att binda till det immobiliserade antigen. Obundet prov tvättas bort och ett enzymmärkt anti-humant IgA konjugat adderas till varje brunn. En andra inkubation tillåter den enzymmärkta antikroppen att binda till patientantikropparna, som har fast sig vid mikrotiterbrunnarnas väggar. Efter att ha tvättat bort obundet enzymmärkt anti-humant IgA, så kan den återstående enzymaktiviteten mätas genom att tillsätta ett cromogent substrate och mäta intensiteten i färgutvecklingen. Assayen kan utvärderas spektrofotometriskt genom att mäta och jämföra färgintensiteten i patientbrunnen med färgen i kontrollbrunnarna. Reagens 1. Polystyren microtiter ELISA platta coatad med renat h-ttg antigen (12-1 x 8 wells), med hållare i folieförpackning med torktillsats 2. ELISA Negativ Kontroll, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant serum utan antikroppar mot h-ttg IgA, förspädd, 1.2 ml 3. h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot h-ttg IgA, förspädd, 1.2mL 1

2 4. h-ttg IgA ELISA Hög Positiv, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant serum med antikroppar mot h-ttg IgA, förspädd, 1.2mL 5. HRP Prov Diluent, 1 flaska färgad rosa innehållande Tris-buffrad koksaltlösning, Tween 20, protein stabiliserare och konserveringsmedel, 50mL 6. HRP Tvättlösningskoncentrat, 1 flaska med 40x koncentrat färgad röd innehållande Tris-buffrad koksaltlösning och Tween 20, 25mL. OBS, Se Metod delen för spädningsinstruktioner. 7. HRP IgA Konjugat, (get), anti-human IgA, 1 flaska färgad gul innehållande buffer, protein stabiliserare och konserveringsmedel, 10mL 8. TMB Cromogen, 1 flaska innehållande stabiliserare, 10mL 9. HRP Stopplösning, 0.344M Svavelsyra, 1 flaska färglöst, 10mL Varning 1. VARNING: Den här produkten innehåller kemikalier (0.02% chloramphenicol) i provspädningsbufferten, kontrollerna och konjugatet, som av delstaten California är kända för att orsaka cancer. 2. Allt humant material som använts till förberedning av kontroller för denna produkt har testats och befunnits vara negativt avseende antikroppar mot HIV, HbsAg, och HCV med FDA registrerade metoder. Ingen testmetod kan fullständigt garantera att HIV, HBV, HCV eller andra infektiösa smittbärande substanser inte finns i materialet. Därför bör h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, h-ttg IgA ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll hanteras på samma sätt som potentiellt infektiöst material Sodium Azid används som konserveringsmedel. Sodium Azid är ett gift och kan vara giftigt om det inmundigas eller absorberas genom huden eller ögon. Sodium azide kan reagera med bly och koppar i avloppsledningar och bilda potentiellt explosiva metallazider. Spola ur avloppen med stora mängder vatten för att förebygga bildandet av metallazider. 4. HRP konjugatet innehåller en utspädd giftig/korrosiv kemikalie, som kan vara giftig om den inmundigas i stora mängder. För att förebygga kemikalie skador, undvik kontakt via hud och ögon. 5. TMB Cromogenet innehåller en irritant, som kan vara skadlig om den inhaleras, inmundigas eller absorberas via huden. För att undvika skada, undvik inhalation, inmundigande eller kontakt med hud och ögon. 6. HRP Stopplösningen består av en utspädd svavelsyralösning. Undvik exponering för basiska material, metaller eller andra ämnen som kan reagera med syror. Svavelsyra är giftigt och korrosivt och kan vara giftigt om det inmundigas. För att undvika kemikalieskador, undvik kontakt med hud och ögon. 7. Använd lämplig personlig skyddsutrustning när du arbetar med de inkluderade reagenserna. 8. Utspillt reagens bör torkas upp omedelbart. Var vänlig att respektera all gällande lagstiftning när ni hanterar kemikalierester. Försiktighetsåtgärder 1. Denna produkt är avsedd för In Vitro Diagnostiskt bruk. 2. Utbyte av komponenter i detta kit, mot andra än sådana som levererats med reagenskitet kan leda till felaktiga resultat. 3. Ofullständig tvätt eller en ineffektiv tvätt samt otillräcklig aspiration av vätska från mikrotiterbrunnarna kommer att orsaka försämrad precision och/eller hög bakgrund. 4. Anpassning av detta test för användning med automatiserad provhanterare eller andra vätskehanteringssystem kan resultera i skillnader i testresultat, jämfört med den manuella proceduren. Det är varje laboratoriums ansvar att validera att deras instrument ger provsvar som är acceptabla. 5. Många olika faktorer kan påverka testets prestanda. Dessa är bland andra start temperatur för reagenserna, omgivningstemperaturen, noggrannheten och reproducerbarhet i pipetteringstekniken, noggrannheten i tvätt och aspiration av vätska från mikrotiterbrunnarna, fotometern som används för att mäta färgutvecklingen, och inkubationstidernas längd under assay proceduren. Noggrann uppmärksamhet är nödvändig för att erhålla korrekta och reproducerbara resultat. 6. Rekommendationen är att följa protokollet i detalj. 7. Dålig förslutning av den zip-lock försedda foliepåsen innehållande mikrotiterbrunnremsor och torkmedel kommer att resultera i antigen degradering och försämrad precision. 8. Oacceptabelt låga absorbanser kan erhållas efter två eller flera användningar av en flaska HRP konjugat efter en tid. Det är viktigt att följa rekommendationer avseende hantering av HRP konjugat för att undvika att detta problem uppstår. 9. Kemisk kontamination av HRP konjugatet kan resultera från otillräcklig rengöring eller sköljning av utrustning eller instrument. Rester av vanliga laboratoriekemikalier såsom formalin, blekmedel, etanol eller tvättmedel orsakar nedbrytning av HRP konjugatet över tid. Skölj noggrant all utrustning och alla instrument efter användning av kemiska rengöringsmedel/desinficeringsmedel. Lagringsförhållanden 1. Lagra alla kitreagenser i 2-8 C. Frys inte ner. Reagenserna är stabila tills utgångsdatum om dom lagras och hanteras enligt rekommendation. 2. Oanvända antigen coatade mikrotiterbrunnsremsor bör förvaras i den noggrant återförslutna foliepåsen tillsammans med torkningsmedlet och lagras i 2-8 C. 3. Färdigspädd tvättbuffer är stabil i 1 vecka vid lagring i 2-8 C. Provinsamling Denna testprocedur bör utföras med ett serumprov. Tillsatser av azid eller andra konserveringsmedel kan 2

3 påverka resultaten negativt. Mikrobiologisk kontaminering, värmebehandling eller prover som innehåller synliga partiklar bör inte användas. Prover med kraftig hemolys, lipemiska serum eller prover bör undvikas. Efter insamling så skall provet separeras från koagel. NCCLS Document H18-A2 rekommenderar följande lagringsförhållanden för prover: 1) Lagra prover vid rumstemperatur i högst 8 timmar. 2) Om testproceduren inte kommer att vara utförd inom 8 timmar förvara provet i kyla vid 2-8 C. 3) Om testproceduren inte kommer att utföras inom 48 timmar, eller om prover skall skickas, frys ner provet och förvara det vid -20 C eller lägre. Frusna prover måste mixas efter de är tinade. Procedur Inkluderat material 1 h-ttg IgA ELISA microtiterbrunnplatta (12-1 x 8 brunnar), med hållare 1 1.2mL förspädd ELISA Negativ Kontroll 1 1.2mL förspädd h-ttg IgA ELISA Låg Positiv 1 1.2mL förspädd h-ttg IgA ELISA Hög Positiv 1 50mL HRP Provdiluent 1 25mL HRP Tvätlösningskoncentrat, 40x koncentrat 1 10mL HRP IgA Konjugat, (get), anti-humant IgA 1 10mL TMB Cromogen 1 10mL HRP Stopplösning, 0.344M Svavelsyra Rekommenderad utrustning som inte ingår Mikropipetter för dispensering av 5, 100, och 500µL Engångsspetsar för mikropipett Provrör för spädning av patientprover, 4mL volym Destillerat eller avjoniserat vatten 1L behållare för utspädd HRP Tvättlösning Mikrotiterplattläsare som kan läsa Absorbans vid 450nm (och 620nm för referensvåglängd) Metod Innan du startar 1. Alla reagens och prover skall ha rumstemperatur (20-26 o C) och mixa dom noga. 2. Späd HRP Tvättkoncentratet 1:40 genom att addera innehållet till en behållare med 975mL destillerat eller avjoniserat vatten. Om hela plattan inte används kan en mindre kvantitet förberedas genom att addera 2.0mL av koncentratet till 78mL destillerat eller avjoniserat vatten per två remsor av mikrotiterbrunnar som används. Den utspädda bufferten är stabil i en vecka vid 2-8 o C. 3. Förbered en 1:101 spädning av varje patientprov genom att addera 5µL patientprov till 500µL HRP provdiluent. Utspädda prover måste användas inom 8 timmar. SPÄD INTE h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, h-ttg IgA ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll. 4. Bestämning av förekomsten eller frånvaron av h-ttg IgA antikroppar använder arbiträra enheter och kräver två brunnar för varje av de tre kontrollerna och en eller två brunnar för varje patient prov. Det är rekommenderat att analyserna utför i duplikat. Assay procedur 1. ALLA REAGENS MÅSTE HA RUMSTEMPERATUR (20-26 C) INNAN ASSAYEN PÅBÖRJAS. Placera det erforderliga antalet mikrotiterbrunnar/remsor i hållaren. Stoppa omedelbart in ej använda remsor med mikrobrunnar i foliepåsen tillsammans med torkmedlet och återförslut den för att minimera exponeringen för vattenångor. 2. Addera 100µL av den förspädda h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, h-ttg IgA ELISA Hög Positiv, och ELISA Negativ Kontroll samt de spädda patientproverna till brunnarna. Täck brunnarna och inkubera i 30 minuter vid rumstemperatur på en jämn yta. Inkubationstiden börjar efter tillsatsen av det sista provet. 3. Tvättsteg: Aspirera noggrant innehållet i varje brunn. Addera µL av den utspädda HRP Tvättbufferlösningen till alla brunnar, aspirera sedan. Repetera detta två gånger till, totalt tre tvättcykler. Vänd upp och ner på plattan och knacka den mot ett absorberande material för att avlägsna återstående vätska efter den sista tvättcykeln. Det är viktigt att helt tömma varje brunn efter varje tvättsteg. Bibehåll samma sekvens för aspireringen av vätska som användes vid tillsättningen av prover. 4. Addera 100 µl av HRP IgA Konjugatet till varje brunn. Konjugatet skall avlägsnas från flaskorna under renliga förhållanden och enligt god laboratorieteknik. Avlägsna endast den mängd av konjugat som behövs för att utföra assay proceduren. FÖR ATT UNDVIKA POTENTIELL MIKROBIOLOGISK OCH/ELLER KEMISK KONTAMINATION, HÄLL ALDRIG TILLBAKA OANVÄNT KONJUGAT I FLASKAN. Inkubera brunnarna i 30 minuter som i steg Tvätt steg: Repetera steg Addera 100µL av TMB Cromogen till varje brunn och inkubera i mörker i 30 minuter vid rumstemperatur. 7. Addera 100µL av HRP Stopplösning till varje brunn. Upprätthåll samma sekvens och timing som vid tillsättningen av TMB Cromogen. Knacka försiktigt med ett finger på plattan för att mixa reagenserna i brunnarna noggrant. 8. Läs absorbansen (OD) för varje brunn vid 450nm inom en time från det att reaktionen stoppats. Om bikromatiska mätningar önskas kan 620nm användas som referens våglängd. 3

4 Kvalitetskontroll 1. h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, h-ttg IgA ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ kontroll bör användas i varje batch av regaenser för att säkerställa att alla reagenser och procedurer har fungerat korrekt. 2. Var uppmärksam på att h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, h-ttg IgA ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll alla är förspädda och att dom inte kan avslöja hanteringsfel vid spädning av prover. 3. Ytterligare kontroller kan testas i enlighet med de krav eller guidelines som gäller för det enskilda laboratoriet. Ytterligare lämpliga kontrollsera kan förberedas genom allikvotering av en pool med humant serum som lagras vid <-20 C. 4. För att test resultaten skall anses vara giltiga, måste samtliga nedanstående kriterier uppfyllas. Om något eller några av dessa inte är uppfyllt bör analyssvaret anses vara ogiltigt och analysen bör upprepas. a. Absorbansen hos h-ttg IgA ELISA Hög Positiv måste vara större än absorbansen hos h-ttg IgA ELISA Låg Positiv, som måste vara större än absorbansen hos ELISA Negativ Kontroll. b. h-ttg IgA ELISA Hög Positiv måste ha en absorbans större än 1.0 OD och ELISA Negativ Kontroll får inte ha en absorbans som överstiger 0.2. OD. c. h-ttg IgA ELISA Låg Positiv måste ha en absorbans som är mer än två ganger högre än absorbansen hos ELISA Negativ Kontroll eller överstiga 0.25 OD. d. ELISA Negativ Kontroll och h-ttg IgA ELISA Hög Positiv är avsedda att monitorera för substantiella reagens fel. h-ttg IgA IgG ELISA Hög Positiv säkerställer inte precision vid testets cutoff. e. Användaren bör följa NCCLS Document C24-A för ytterligare vägledning avseende lämpliga QC procedurer. Beräkning av Semikvantitativa resultat - Ratio Metoden Den genomsnittliga absorbansen (OD) för varje set av duplikat bestäms först. Reaktiviteten för varje prov kan då beräknas genom att dela den genomsnittliga absorbansen med den genomsnittliga absorbansen för h- ttg IgA ELISA Låg Positiv. Resultaten multipliceras med det antal units som tilldelats h-ttg IgA Låg Positiv och kan läsas på etiketten. Provets OD Provets Units = x h-ttg IgA ELISA Låg Positiv (Units) h-ttg IgA ELISA Låg Positiv OD Reaktiviteten är relaterad till kvantiteten av närvarande antikropp på ett icke-linjärt sätt. Även om ökningar och minskningar kommer att reflekteras av en motsvarande ökning och minskning i reaktivitet så är inte förändringen proportionell. (t.ex.en dubblering av antikroppskoncentrationen kommer inte att dubblera reaktiviteten). Om en mer precis bestämning av patientens antikroppsnivå krävs, så kan seriella spädningar av patientprovet göras och den sista spädningen som är positiv i analysen bör rapporteras som patientens antikroppstiter. Tolkning av Resultat Ett ELISA test är en känslig teknik som kan mäta mycket små skillnader i patient populationer. Värdena som visas här är endast förslag. Varje laboratorium bör etablera sina egna normalvärden som baserar sig på sina egna tekniker, kontroller, utrustning och patientpopulation enligt deras egna etablerade procedurer. Proverna kan sedan klassificeras som negativ, svagt positiv, positiv eller starkt positiv i enlighet med nedanstående tabell. Units Negativ <20 Svagt Positiv Positiv till Starkt Positiv >30 1. Ett positivt resultat indikerar förekomsten av h-ttg IgA antikroppar och föreslår möjligheten att patienten kan ha gluten känsliga enteropatier såsom celiaki och dermatitis herpetiformis. 2. Ett negativt resultat indikerar att inga h-ttg IgA antikroppar finns i provet eller att förekomsten är vid en så låg koncentration att nivån understiger den cut-off som testet har. 3. Det föreslås att följande ordalydelse följer provsvaret vid laboratoriets rapport: Resultaten har erhållits med INOVA QUANTA Lite TM h-ttg IgA ELISA. h-ttg IgA värden erhållna med olika tillverkares assay metoder kan inte jämföras direkt. Storleken av de rapporterade IgA nivåerna kan inte korreleras till en end-point titrering. Begränsningar i Proceduren 1. Förekomsten av immunkomplex eller andra immunoglobulin aggregat i patient provet kan orsaka en ökad nivå av icke-specifik bindning och producera falskt positiva svar i denna assay. 2. Ett negativt h-ttg IgA resultat exkluderar inte en gluten känslig enteropati. Detta kan ofta förklaras av av en selektiv IgA deficiens, ett relativt frekvent fynd i celiaki. INOVA erbjuder ett h-ttg IgG kit för testande av dessa patienter. (QUANTA Lite TM h-ttg IgG). 3. Resulten av denna assay bör användas i kombination med kliniska fynd och andra serologiska tester. 4. Testets prestanda har inte undersökts med andra matrix än serum. Förväntade värden Förmågan hos QUANTA Lite TM h-ttg (human tissue transglutaminase) IgA ELISA att detektera h-ttg IgA antikroppar utvärderades med en jämförelse med en ELISA som mäter IgA ttg antikroppar såväl som genom jämförelse med faktisk klinisk diagnos i två externa kliniska utvärderingar och en stor intern studie. 4

5 Normal värden Normalvärdes studien utfördes vi forskningslaboratoriet vid INOVA Diagnostics. Totalt 185 prover slumpmässigt utvalda blodgivare testades 83 kvinnor åldern varierade mellan 7-63 med en medelålder på 31 och 102 män åldern varierade mellan 6 och 60 med en medelålder på 34. Ett (0.5%) av proverna var positivt för humant ttg IgA. Provet var precis över den positiva cut-off som testet har på 20 Units. Förutom detta svagt positiva prov hade näst högsta prov en koncentration på 11.5 Units. Majoriteten av proverna var under 10 Units i koncentration. Medelvärdet för populationen var 4.4 Units. Relativ Sensitivitet och Specificitet För att bestäma sensitivitet och specificitet för testet, så analyserades 257 prover med både QUANTA Lite h-ttg IgA och ett annat kommersiellt tillgängligt test för ttg antikroppar. Resultaten presenteras nedan: h-ttg * Relativ Sensitivitet 92.7% marssvinsbaserat Relativ Specificitet 91.6% ttg - 17** 185 Relativ Effektivitet 91.8% * 2 av dessa var endomysium och gliadin IgA negativa. ** De flesta av dessa var kända eller misstänkta celiaki patienter som vid tidigare testning hade svagt positiv eller negativ serologi. Klinisk Sensitivitet och Specificitet QUANTA Lite TM h-ttg IgA antikropps kitet utvärderades i en extern och en intern klinisk studie. Tabellen nedan summerar fynden i dessa två studier: Patient Grupp Nr. Nr. Pos (%) Normals 185 1* (0.5) Celiaki (100) Celiaki (pediatric) (91) Celiaki IgA deficient 16 0 Ulcerös kolit 14 0 Crohn's disease 6 1** (17) Perniciös anemi 6 0 Kronisk aktiv hepatit 9 0 Misc. connective tissue 55 0 autoantibody positives * Detta prov var svagt positivt vid 20 Units. ** Detta prov var svagt positivt vid 23 Units och var också svagt positivt vid 22 Units på QUANTA Lite ttg kitet som använder antigen från marssvinslever. Korsreaktivitet För att utvärdera specificiteten hos QUANTA Lite h-ttg IgA kitet, så testades totalt 90 patienter med andra gastrintestinala problem såväl som patienter med höga nivåer av ett antal olika autoantikroppar associerade med bindvävssjukdomar. Totalt 14 sera från patienter med ulcerös kolit, 6 med Crohn's disease, 6 med perniciös anemi, 9 med kronisk aktiv hepatit. Vidare testades också en grupp sera från en samling med sera som används internt av INOVA Diagnostics vid tillverkningen av andra autoantikropps tester. Totalt 55 sera Testades inclusive 8 positiva för SS-A, 6 positiva för SS-B, 9 positiva för Sm, 11 positiva för RNP, 13 positiva för Scl-70 och 8 positiva för Jo-1. Av dessa totalt 90 prover var endast ett prov från en patient med Chrohn's disease positivt. Denna patient var svagt positiv med 23 Units för IgA h-ttg. Detta prov, var när det testades med marssvinsbaserat ttg kit, positivt på en nivå av 22 Units. Förutom detta svagt positiva prov, översteg inget annat prov 8 units. Precision och reproducerbarhet Precision och reproducerbarhet för Assayen mattes genom att analysera sex replikat var av en starkt positive, en svagt positive och ett negativt prov i sex separate körningar. Medel reaktiviteten för det starkt positiva provet var Units, det svagt positive provet var 25.0 Units medans det negativa provet hade en reaktivitet på 13.4 Units. Standard avvikelserna och variationskoefficienterna är summerade nedan: Negativt Starkt Positivt Svagt Positivt SD CV SD CV SD CV Total % % % Inom-körning % % % Mellan-körning % % % Referenser 1. Meuweisse GW. Diagnostic criteria in celiac disease. Acta Paediatr Scand 59: 461, Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J, Shmerling DH, Visakorpi JK. Revised criteria for diagnosis of celiac disease: Report of working group of Euorpean Society of Pediatric 5

6 Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood 65: , Chorzelski TP, Beutner EH, Zalewski TK, et al. editors. Serologic diagnosis of celiac disease. Boca Raton (FL): CRC Press; Chorzelski TP, Sulej J, Tcherzewska H, et al. IgA class endomysium antibodies in dermatitis herpetiformis and celiac disease. Ann NY Acad Sci 420: , Volta U, Molinar N, De Franchis R, et al. Correlation between IgA antiendomysial antibodies and subtotal villous atrophy in dermatitis herpetiformis. J Clin Gastroenterol 14: , Valdimarsson T, Franzen L, Grodzinsky E, Skogh T, Strom M. Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti-endomysial antibodies? 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive Diseases and Science 41: 83-87, Unsworth FJ. Serologic diagnosis of gluten sensitive enteropathy. J Clin Path 49: , Volta U, Molinaro M, Fusconi M, Cassani F, Bianchi FB. IgA antiendomysial antibody test: A step forward in celiac disease screening. Digestive Diseases and Science 36: , Wilfang S, Knauss M, Stern M. IgA endomysiumantikorper. Montsschr Kinderkeilkd 140: , Muscart-Lemone F, Van den Broek J, Cadranel S, Colombel JF. Serologic aspects of celiac disease. Acta Gastro-Enterologica Belgica 55: , Grodzinsky E, Hed J, Skogh T. IgA antiendomysium antibodies have a high predictive value for celiac disease in asymptomatic patients. Allergy 49: , Sategna-Guidetti C, Pulitano R, Grosso S, Ferfoglia G. Serum IgA antiendomysium antibody titers as a marker of intestinal involvement and diet compliance in adult celiac sprue. J Clin Gastroenterol 17: , Catassi C. Screening of coeliac disease. In: Maki M, Collin P, Visakorpi JK. editors. Coeliac disease. Tampere (Finland): Coeliac Disease Study Group; p , Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, et al. Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nature Medicine 3: , Sollid LM, Molberg O, McAdam S, Lundin K, et al. Autoantibodies in coeliac disease: tissue transglutaminase guilt by association? Gut 41: , Sardy M, et al. Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten-sensitive enteropathy. Clin Chem 45: 2142, Sblattero D, et al. Human recombinant tissue transglutaminase ELISA : an innovative diagnostic assay for celiac disease. Am J Gastroenterology 95: 1253, Beutner EH, et al. A case of dermatitis herpetiformis with IgA endomysial antibodies but negative direct immunofluorescent findings. J Am Acad Dermatol 43: 329, Sugai E, et al. Tissue transglutaminase antibodies in celiac disease: assessment of a commercial kit. Am J Gastro 95: , Lampasona V, et al. Tissue transglutaminase and combined screening for coeliac disease and type 1 diabetes-associated autoantibodies. Lancet 352: , Hansson T, et al. Antibody reactivity against human and guinea pig tissue transglutaminase in children with celiac disease. J Pediatric Gastroenterology and Nutrition 30: 379, Andersson AS, et al. Inhibition of endomysial staining with human tissue transglutaminase. Ninth International Symposium on Celiac Disease. J Pediatric Gastroenterology and Nutrition 31: S16, Axiö-Frekricksson UB, et al. Differences in human and guinea pig tissue transglutaminase. Ninth International Symposium on Celiac Disease. J Pediatric Gastroenterology and Nutrition 31: S16, Signorini M, et al. Human erythriocyte transglutaminase: Purification and preliminary characterization. Biological Chemistry 369: 275, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 1999, Fourth Edition, (HHS Pub. # (CDC) ). Tillverkad av: Technical Service INOVA Diagnostics, Inc May Old Grove Road Revision SWE6 San Diego, CA United States of America Representant: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: