Chagas sjukdom: Aktuell serologisk diagnostik

Transkript

1 Chagas sjukdom: Aktuell serologisk diagnostik Användarmöte för Transfusionsmedicin Equalis, oktober Silvia Botero-Kleiven Leg. Läkare, Med. Dr. Parasitologisk Diagnostik (DV-D)

2 PAHO: kontroll av smitta via skinnbaggar (2011) WHO 2010: ~ 10 miljoner smittade Smittöverföring via vektorn människor fortfarande finns Smittöverföring via vektorn avbruten Ingen vektorburen smitta Inget program finns Huvudvektorn har eliminerats

3 Barona-Vilar C, et al. Prevalence of Trypanosoma cruzi infection in pregnant Latin American women and congenital transmission rate in a non-endemic area: the experience of the Valencian Health Programme (Spain). Epidemiol Infect Dec 1:1-8.

4 Antikroppssvar och parasitemi i den akuta fasen Coura et al., Acta Tropica, 115, 2010

5 Parasitologisk diagnostik av Chagas sjukdom (akutfas, reaktivering) Mikroskopisk påvisning -Direkt mikroskopi, tjockdroppe plus tunt utstryk -Mikrohematokrit (undersökning av buffy coat efter centrifugering) -Centrifugering av serum efter koagulering (Strout)

6 Tidsutveckling av Chagas sjukdom 4 v 8 v år? Fas Akut Kronisk (obestämd) Kronisk Sx Symptom 1-5% ~ 0 % 30% (5-10% GI 85-90% ) Parasitemi /- +/- Antikroppar IgM/IgG IgG IgG Dödlighet 1 % 0 %? 10-60%

7 Diagnostik med PCR Vid fall av kongenital infektionsmisstanke i nyfött barn För monitorering av reaktivering (organtransplanterade, HIV) För detektion i biopsimaterial För uppföljning av behandlingseffekt (kanske) Vid misstanke om laboratorieinfektion PCR-metoderna fortfarande ej standardiserade (in house)

8 Serologisk diagnostik (obestämd och kronisk fas) Baseras på detektion av specifika IgG antikroppar ( 2-4 veckor) Påvisbar IgG korrelerar med kronisk infektion (Ag+) Minst 2 olika testformat rekommenderas för diagnostik Känsligare än PCR i den kroniska fasen Användbarhet för uppföljning efter behandling: - akut/tidig kronisk (= i unga patienter, bra) - kronisk: inte bra

9 Serologiska metoder som används för Chagas diagnostik: Indirekthemaglutination (äldre) (lysat) ELISA-baserade, olika generationer: Parasitlysat --- > Rekombinant/peptidantigen Chemoluminescense-linked immuno-assay (CLIA) (rekombinant antigen/peptid) Immunkromatografisk test (ICT) (rekombinant antigen/peptid) Westernblot, Immunoblot, (WB, IB) (lysat eller rekombinant antigen) Immunfluorescens (IF) (fixerade parasiter) Radioimmunoprecipitation (RIPA) (radioaktivt inmärktparasitlysat)

10 Jämförelse av serologiska metoder WHO, 2009 Otani MM et al. Transfusion Complications 49, 2009

11 Chagatest ELISA recombinante v.4.0 (Wiener Lab group): Recombinant antigens Ag1 Ag2 Ag30 Ag13 Ag36 Chronic Ag13 Ag 36 SAPA Acute Ag2 Ag13 SAPA Congenital Olika antigen kombinationer ger sensitiviteter och specificiteter 96,6-100 % Måste täcka de olika kända genetiska linjer av T. cruzi (I till VI)

12 Motivering för serologisk testning för Chagas vid SMI? (patienter, potentiella blodgivare, barn ) Uppvisar T. cruzi-relaterade symptom Är född/uppväxt i Latinamerika (stad vs landsbyg) eller har bott (> 5 år) i endemiskt område Rest i endemiskt område Har en Latinamerikansk mor med kronisk infektion Har andra anhöriga med T. cruzi infektion Har fått en blodtransfusion i Latinamerika Turister med akuta symptom

13 Förekomst av T. cruzi-infektion i icke-endemiska länder: Importerat fall (akut/kronisk) eller reaktivering i immunsupprimerad patient Kongenital infektion Efter blodtransfusion eller transplantation Laboratorieinfektion Via infekterad mat (sockerrörjuice, fruktjuice)(europa?)

14 Chagatest ELISA recombinante v.4.0 (Wiener Lab group) Crossreactivity with other pathologies Leishmaniasis Amebiasis Toxocariasis Toxoplasmosis Teniasis Hydatidosis Hepatitis B Hepatitis C Syphilis HIV 1/10 0/7 0/6 0/5 0/5 0/2 0/22 0/28 0/19 0/25 Other pathologies Lymphoma 0/1 Myeloma 0/1 Lung tuberculosis 0/4 Autoimmune disorders 1/4

15 Föreslagen sekvens för serologisk testning: Positiv med 2/2 tester T. cruzi infektion Negativ med 2/2 tester Ingen T. cruzi infektion Positiv med 1/2 tester avvikande resultat ( inconclusive ) Testa ett nytt prov efter 3-4 mån med samma metod(er) Testa samma prov med tredje metod (annan Elisa, immunoblot) Lapa et al., European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases Springer-Verlag /s PCR? (dock begränsad sensitivitet)

16 Diagnostik hos nyfött barn från mamma med Chagas: Vid födseln: navelsträngsblod eller perifert blod: - Mikroskopi, direkt och efter koncentration (TD, mikrohematokrit) - PCR - Serologi (för jämförelse?) PCR upprepas efter 1-3 månader Vid symptomatisk infektion: ny mikroskopisk undersökning av blod (ev. CSV) + PCR Kontroll serologi: test för specifik IgG efter 7-9 månader

17 Sosa-Estani S, Colantonio L, Segura EL. Therapy of chagas disease: implications for levels of prevention. J Trop Med. 2012;2012:

18 Antibody levels correlate with detection of Trypanosoma cruzi DNA by sensitive polymerase chain reaction assays in seropositive blood donors and possible resolution of infection over time Transfusion Volume 53, Issue 6, pages , 25 SEP 2012 DOI: /j x