och Mats Bergström Klinisk kemi

Transkript

1 Erytrocyten och hemoglobinet! Mats Bergström Klinisk kemi Unilabs Eskilstuna Ekilt

2

3 Något saknas, t ex: Järn B12 Folsyra Vad är problemet? Benmärgen mår illa, t ex av: Sekundär anemi Genetisk defekt Kan inte bilda Hb kedjor kdj Bildar tokigt hemoglobin

4 Konsekvenserna Det blir för litet hemoglobin Det blir för få erytrocyter y Det som finns fungerar dåligt Erytrocyterna ser konstiga ut Vi får en anemi (= utan blod ) För liten Hb massa i systemet för att vi skall må bra

5 Hb mätningen Oftast borde vi väl mäta Hb (g/l) x blodvolym(l) = g Hb men vi gör Hb (g/l) i regel Baseras på Blodets färg (Mörkt = OK, ljust = anemi) Hem:s absorption vid olika våglängder g Hemoglobinets peroxidas egenskap

6 Even today, in this galaxy The WHO Hemoglobin Colour Scale

7 Avancerad färgmätning + syra, blir hematin, jämför färgen med stand Sahli Autenrieth-Königsberg Duboscq

8 Hem: ljusabsorption

9 Cyanmethemoglobin NaCN + K ferricyanid =Drabkins lösning Blir cyanmethemoglobin Trevlig absorbans vid 540 nm Skall man känna till någon klassisk metod så är det denna! Alla gillar inte cyaniden (människor och miljö)

10 Cyanid fritt Mät vid alkaliskt ph (ammoniak eller karbonat) går bra det också Nyare cyanidfria med olika principer

11 Att mäta Hb och räkna röda man borde göra något mer! Maxwell Wintrobe

12 Wintrobe indices Hb mätning Hematokrit Räkna röda Räkna ut hur ery ser ut i medeltal

13 Wintrobe Medel cellvolym: MCV Medel cellhemoglobin: MCH ( färgindex ) Medel cellhemoglobinkoncentration: MCHC Detta har gällt från 1930 talet och framåt

14 Wintrobe: vi kan säga att: Erytrocyterna i medeltal är små Mikrocytos (MCV) Erytrocyterna i medeltal är bleka Hypokromasi i(mchc) Erytrocyterna y i medeltal innehåller litet Hb (små, eller bleka, eller bådadera)

15 Klassiskt används En fotometer ger hyfsat bra Hb-mätning

16 Klassiskt används Ett snyggt mikroskop ger antal röda med stor osäkerhet

17 Klassiskt används En centrifug som ger bra mått på hematokriten (kanske)

18 Nu kommer matematiken! Hb: Fotometri (bra) (EVF/EPK) = MCV: Dåligt EVF: Centrifug (bra?) (Hb/EPK) = MCH: Dåligt EPK: Mikroskop (Dåligt) (Hb/EVF) = MCHC: Bra

19 Så när vi undervisade sa vi att: Ni skall använda MCHC för det bygger på bra analyser! Så det så.

20 Sedan fick vi cellräknare

21 MCHC är det ngt skumt med! Impedansmätning MCH y = 0,3191x + 3,1097 R 2 = 0, MCV MCH = k x MCV MCH = MCHC x MCV HB/EPK = HB/EVF x EVF/EPK

22 Så vi ändrade oss motvilligt och sa: Våra analysmaskiner är litet konstiga, så om ni inte har någon som gör index manuellt så skall ni använda MCV eller MCH. Helst inte MCHC. Det beror på att hematokritcentrifugerna gav falskt hög EVF vid aniso- och poikilocytos, t ex vid Fe-brist. Så att ni såg låga MCHC var egentligen fel. MCV eller MCH, då? Forts följer

23 Fortsättning MCH bygger på bra analyser, pre analytiskt säkra (maskinella Hb och EPK), bra precision, bra kalibrering. MCV är en dålig analys och påverkas av allt möjligt. Så Svår att kalibrera. Provets ålder. MCH alltså!

24 Nu då? Instrument A Impedansmätning m hydrodyn fokusering MCH y = 0,2835x + 5, R 2 = 0, MCV

25 Instrument B Optisk mätning MCH y = 0,2674x + 7, R 2 = 0, MCV

26 Forts MCV och MCH ger ungefär samma information och MCHC är mest till glädje för maskinskötaren. Kliniker har fantastiskt intresse för MCV Även från lab förnyat intresse för MCV med Även från lab förnyat intresse för MCV, med ansträngningar för att hitta bra metoder att kalibrera.

27 RDW Red Cell Distribution Width Ur storleksfördelning erhålles MCV Medelvärdet RDW Spridningsmått som är SD/MCV dvs CV för alla Erc Kan användas som ledtråd till förekomst av flera Erc populationer

28 MCV RDW

29 Makrocytär pop (folatbrist) under behandling + en mikrocytär pop (demaskerad järnbrist) MCV 92 fl RDW 33 % MCV i dessa fall är just en medel-cellvolym! MCV i dessa fall är just en medel cellvolym! Blivit vanligt att i liknande fall säga att MCV är falskt låg eller hög medan den tvärtom är sant låg eller hög. RDW upplyser om att det är något skumt.

30 Alternativ till Hypo normokrom /Mikromakrocytär algoritmen Bessman: Am J Clin Pathol Även i Gröna boken. MCV: Lågt, normalt eller högt? RDW: Normal eller hög?

31 Wallace Coulter Känt sedan tidigare att EVF kan mätas genom analys av blodets ledningsförmåga Mätte motstånd när celler i ledande vätska passerade en liten apertur (cellofan från cigktmed nålstick) paket åltik) Celler är dåliga ledare

32 Impedansmetoden Resistens, konduktivitet... Bahniuk, D Medical Design 2001

33 Hydrodynamisk fokusering Crossland Taylor 1953 Sheath h flow principle i Crossland-Taylor, P.J. (1953). A Device for Counting Coss d y o,.j. ( 9 ). ev ce o Cou g Small Particles Suspended in a Fluid through a Tube. Nature 171,

34 Speciella ting: Mie Scatter Gustav Mie , tysk fysiker Mie Scattering (MS) is elastic scattered light of particles that have a diameter similar to or larger than the wavelength of the incident light. The signal from Mie scattering is proportional to the frontal area the incident light encounters, i.e. the square of the particle diameter.

35 Exempel på Mie Scatter

36 Speciella ting Technicon Mohandas et al. Blood 1986

37 Speciella ting Technicon Mohandas et al. Blood 1986

38 Speciellt Technicon Ur dessa scatterdiagram kan speciella parametrar beräknas: CHC: Hb konc i varje enskild Erc CHCM: Medelvärde av detta, kan användas för jmf med MCHC och för att sätta flaggor

39 Technicon, forts % Hypokroma celler = %-andel < 280 g/l

40 Technicon, forts Motsvarande kan göras för retikulocyter: CHr: Content Hemoglobin/retikulcoytes CHCMr: Medelvärde av de individuellt mätta Hbkonc i retikulocyterna Man kan alltså beräkna hur mkt Hb som finns Man kan alltså beräkna hur mkt Hb som finns i Erc och hur mycket i retikulocyterna

41 Sysmex RBC Y beräknas ur forward scatter för Erc och kan anv för beräkning av erytrocyt Hb t RET Y motsvarande för retikulocyter, kan anv för att beräkna Ret Hb, och korrelerar väl med CHr

42

43 Beckman Coulter Red blood cell size factor (RSf) RSf = (MCVxMRV) 1/2 Kombinerar storlek på erytrocyter och retikulocyter

44 Beckman Coulter ROC - FID Urrechaga, 2009

45 Användning? % Hypokroma Erc kom först Användbart för att detektera och följa funktionell järnbrist/ironrestricted erythropoesis, spec studerat hos njurpatienter under Epobehandling. Problem: Preanalytik tik(2 4 tim RT, 8 tim klkå!)k kylskåp!), kalibrering! i CHr =Rtc MCH Samma indikation. Kan användas för att begränsa misshushållning med Epo. Tycks vara mer resistent mot provförvaring (1 dygn RT, 3 dygn kylskåp) RET Y, RSf(?) Som CHr

46 Thomas & Thomas2002

47 För detta gäller i särskilt hög grad: Amanuensen: Men professorn! Det är ju samma tentamens- frågor som förra året! Professor Einstein: Ja, men jag har ändrat svaren.