Avdelningen för kemi och Biomedicinsk vetenskap Karlstads universitet Hematologi Räkning av blodceller i kroppsvätskor Vid räkning av blodceller

Transkript

1 Avdelningen för kemi och Biomedicinsk vetenskap Karlstads universitet Hematologi Räkning av blodceller i kroppsvätskor Vid räkning av blodceller används en kammare som innehåller en viss volym. Kammaren är uppdelad i rutor som motsvarar olika volymer. Dessa volymer blir exakta när täckglaset sitter fast ordentligt över kammaren djupet på kammaren blir då 0,100mm. Kammaren består av två fält som separeras av en fåra. Varje fält rymmer 9/10 µl fördelat på 9 stycken s.k A-rutor en A-ruta rymmer 1/10µl (0,1µl). A 1

2 A-ruta Varje A-ruta rymmer 16 B-rutor En B-ruta rymmer 1/160 µl Hur mycket rymmer en CD-ruta? Innan Burkerkammaren fylls med provspädning skall täckglaset fästas över de båda fälten så att rutnäten täcks. Täckglaset fäster lättare om du fuktar det lite först. Newtons färgringar skall synas och kammaren får inte vara fuktig inuti när provet appliceras. Applikationen sker lättas med hjälp av ett kapillärrör. Hela fältet skall fyllas men inget i diket emellan fälten. Leukocyter och Trombocyter räknas i en spädning som är 1/20 medan erytrocyter behöver spädas 10 ggr ytterligare. 20 µl blod spädes med Turks färglösning för räkning av leukocyter och med Stromatol färglösning för räkning av trombocyter. För räkning av erytrocyter kan fysiologisk koksalt användas. Vid räkning av leukocyter räknas vanligast 32 B- rutor, trombocyter 16 CD-rutor 2

3 Det är viktigt att spädningen blir exakt och att provet blandas ordentligt både innan och efter spädningen, dock försiktigt så cellerna inte skadas. Kontrollera att cellerna fördelat sig jämt i kammaren, annars får du lägga upp ett nytt preparat. Du skall räkna antalet celler på två olika ställen i kammaren och ta medelvärdet. Om provet hunnit torka i kammaren, lägg upp ett nytt. Leukocyter anges i 10 9 /l Räkna leukocyter på 4 av dina kurskamrater (patienter) och jämför. Tabell: Mätdata leukocyträkning Student 1 (mätvärde) Student 1 Student 2 (mätvärde) Student 3 (mätvärde) Student 4 (mätvärde) Student 2 Student 3 Student 4 M = medelvärde Student 1 (mätvärde medelvärde) 2 Student 2 (mätvärde medelvärde) 2 Student 3 (mätvärde medelvärde) 2 Student 4 (mätvärde medelvärde) 2 SD = standardavvikelse CV = variationskoefficient (beräknat värde) (beräknat värde) (beräknat värde) (beräknat värde) SD = CV = (mätvärde medelvärde) 2 (antalet mätningar 1) SD M 3

4 Retikulocyter Retikulocyter som de ses i May-Grunwald-Giemsa färgning. Anges som polykromasi graderat i arbiträra enheter 1-3. Den unga retikulocyten innehåller fortfarande rester av RNA vilket kan ses mikroskopiskt i sk supra vitalfärgning. Denna färgning precipiterar retikulocytens ribosomer och mitokondrier vilket ger karakteristiska blålila färgade inklusioner. Retikulocyter kan även räknas flödescytometriskt. Färgvätska : 0,5 g brilliantkresylblått löses i 100 ml fysiologisk koksaltlösning Förfarande microliter blod blandas med 200 microliter färgvätska. Blodkropparna får under 10 minuter ta till sig färgen och spädningen blandas sedan noga. 2. Gör ett tunt utstryk på ett objektglas, lufttorka snabbt för at undvika artefakter. 3. Räkna 1000 erytrocyter och ange i procent hur många av dessa som är retikulocyter. 4. Hur många procent retikulocyter är normalt vid en normal erytrocytmedellivslängd? Hur många procent retikulocyter har en person med erytrocytöverlevnad på 20 dagar om försvinnandet är kompenserat? 4

5 Diff Vid diff räkning (diffrential) av leukocyter får du en procentuell fördelning av leukocyterna i blodet. Totalantalet samt den procentuella fördelningen ger vägledning vid diagnos och behandling Använd dig av det resultat du fått tidigare i leukocyträkningen och resultatet av diffräkningen och räkna ut de absoluta talen. Använder du EDTAblod bör utstryket göras inom fyra timmar. Gör ett blodutstryk på ett objektglas. Vifta torrt! Ofärgade utstrykspreparat skall betraktas som smittförande. Skriv namn, personnummer och provtagningsdatum på glaset. Låt ligga 5-10 minuter. Granska i mikroskop och välj preparat som ser bra ut. Inte för tjockt eller för tunt, cellerna skall inte överlappa varandra. Färga 10 minuter i May-Grunwald som innehåller metanol och fixerar cellerna. Skölj i vatten Färga 20 minuter i Giemsa Skölj med vatten Låt preparatet torka 5

6 Turks färglösning till räkning av leukocyter Observera alla ingående kemikalier är klassade som farliga se bilaga. Stamlösning 0,5 g gientianaviolett 10ml ättiksyra Avjoniserat vatten till 100 ml Brukslösning 20 ml stamlösning 150 ml isättika Avjoniserat vatten till 3 liter Filtrera, dubbla filtrerpapper May-Grunwald Giemsa färgning (Romansky) Giemsa brukslösning 1 del Giemsa 9 delar vatten May Grunwald brukslösning 550ml MG och 250 ml metanol 6

7 Mikroskopera Granska med 100x förstoring Byt till ggr förstoring. Objektiv märkta oil eller oel kräver olja mellan preparatet och linsen Räkna och klassificera 100 leukocyter. Kärnförande erytrocyter anges per 100 leukocyter. Upprepa räkningen minst en gång Tag medelvärdet Bedöm den röda blodbilden De klassificerad leukocyterna anges i procent och / eller absoluta tal Vid förekomst av atypiska eller aktiverade celler meddelas detta som en kommentar Vid förekomst av blaster hos ej tidigare kända patienter meddela sektionsledningen genast! 7

8 Signatur : Signatur : Ingalill Gumaelius

9 9