Leukemi hos barn och ungdomar Diagnostik

Storlek: px

Starta visningen från sidan:

Download "Leukemi hos barn och ungdomar Diagnostik"

Linda Håkansson
för 7 år sedan
Visningar:

1 Leukemi hos barn och ungdomar Diagnostik Stefan Söderhäll Sektionen för onkologi och koagulation Astrid Lindgrens Barnsjukhus Med en del bilder från Cilla Söderhäll Novum Huddinge

2 Hematopoes pluripotent stamcell myeloid stamcell Differentiering megakaryocyter erytrocyter basofiler eosinofiler granulocyt/monocyt lymfoid stamcell B lymfocyt T lymfocyt

3 Diagnostik/ terapisvarbedömning Benmärgsaspiration Morfologisk analys aspirat/biopsi Immunfenotypning Genetisk analys Kromosomanalys (traditionell) DNA index FISH (interfas) PCR för Translokationsanalys och MRD analys CGH array Sekvensning Lumbalpunktion När och hur? Klinisk undersökning Allmäntillstånd Blödningar, petechier Körtlar, lever-mjältförstoring Andning, halsvenstas Testikelpalpation

4 Riskgruppering idag Vad är det för risk vi menar? Hur bestämmer man den? Är den alltid lika stor eller kan den förändras? Vad påverkar risken?

5 Prognostiska faktorer ALL LPK vid insjuknandet Ålder Lymfomatösa manifestationer CNS engagemang Immunofenotyp Cytogenetik / DNA ploidi Initialt terapisvar Konventionell teknik Minimal residual disease (MRD)

6 Immunofenotypning monoklonal antikropp fluorokrom differentierings associera ytantigen malign cell Leukemier indelas efter transformerad ursprungscell och identifieras efter sitt uttryck av olika ytantigener

7 Giemsa banded Karyotype

8 Spectral Karytyping SKY

9 SKY (spectral karyotyping)

10 Interfas fluorescerande in situ hybridisering = interfas FISH

11 Kromosomanalys av ALL celler Prognos+ t(12;21)(p12;q22),tel-aml1, 20%?, pre B ( kryptisk ) Hyperdiploidi modaltal 47-50, 15%, pre B Hyperdiploidi modaltal 51-65, 25%, pre B Prognos- t(9;22)(q34;q11), BCR-ABL, 3%, B/pre-B t(4;11)(q21;q23), MLL-AF4 och varianter, 2%, pre-pre B Hypodiploidi <44 dic(9;20), preb t(1;19)(q23;p13), E2A-PBX1, 5%,

12 Kromosomanalys Genetisk analys vid AML Prognos + t(15;17)(q22;q11-21), PML-RARA, 7%?, M3 inv16, CBFb-MYHll, 7%, M4EO (t(8,21)(q22;q22), AML1-ETO, 10%, M2) Prognos - monosomi 7 t(1;22)(p13;q13),?, 2%, M7

13 Differentialdiagnoser diagnostik hjälp Icke maligna sjukdomar Bakteriell infektion speciellt meningokocksepsis Virala infektioner i synnerhet EBV, CMV Idiopatisk trombocytopen purpura ITP retikulocyter Aplastisk anemi Biopsi!!!! Upprepade BM prover Hemolytiskt uremiskt syndrom Kreatinin, blodtryck, retikulocyter, hemolystecken

14 Differentialdiagnoser Maligna sjukdomar Myelodysplasi Maligniteter med benmärgsinfiltration ex Bilaterala prover, biopsier Neuroblastom Lymfom Ewing sarkom Mjukdelssarkom Mfl som metastaserar till benmärgen

15 Bedömning av terapisvar Klinik Blodvärden transfusionsintervall Morfologi D15, d29, d78 Flödescytometri MRD D15? Fångar upp ev markörskift samt snabbt terapisvar Känslighet ner till (10-5 ) PCR MRD Immunglobulinrearrangemang, T-cellsreceptorrearrangemang Specifika translokationsrearrangemang Känslighet ner till 10-5 FISH Begränsad känslighet %-nivå

16 NOPHO ALL-2008 BM: d0 preb>100 or T IR (35%): preb<100 MRD timepoints d15 HR (10-15%): I-D + I-P + d29 t(1;19) Amp21 dic(9;20) MLL Hypo<45 >10-3 CNS3 <10-3 R1 >10-3 d79 A B C A B C A B C HDMx3, PEGasp 6MP 25-75mg/m 2 HDMx3, PEGasp 6MP 25mg/m 2 R2 SCT* II DC GCSF VCR/Dexa reinductions DepoCyte/pred.succinate i.t. MTX HDMTX with i.t. MTX TIT with conventional AraC PEG-asparaginase R3 II C I-D+/P+ II DC II C II Induction with dexa. or pred. DI w/ daunorubicin and cyclo DI w/ cyclo DI w/o daunorubicin and cyclo II C 6MP MTX 6MP MTX SR (50-55%): <10-3 R1 R2 II 6MP MTX HDMx3, PEGasp 6MP 25-75mg/m R1 6MP dose increments ( mg/m 2 if HDM w/o ANC<0.5 and T<50), N= R2 R3 PEG-asparaginase IU/m 2 at 2 vs 6 weeks intervals weeks 13-33, N= Standard TIT vs DepoCyte/pred.succinate at 12w intervals x6, N= *SCT if d29 M2/3 or d79/post-b >10-3 Svensk version

17 MRD begreppet minimal residual disease Nya tekniker för att mäta små kvarvarande mängder leukemiceller Terapisvar d29 och d79 mätt med MRD slår ut nästan alla andra prognosfaktorer 100 D29 MRD < Years from Dx

18 Flödescytometri % leukemi-lika av alla Framrenade mononukleara celler PCR restmängd jämförd med klonen som karakteriserades vid diagnos

19 Minimal residual disease assessment in childhood acute lymphoblastic leukaemia: a Swedish multi centre study comparing real time polymerase chain reaction and multicolour flow cytometry British Journal of Haematology Volume 152, Issue 6, pages , 20 JAN 2011 DOI: /j x

20 Minimal residual disease assessment in childhood acute lymphoblastic leukaemia: a Swedish multi centre study comparing real time polymerase chain reaction and multicolour flow cytometry British Journal of Haematology Volume 152, Issue 6, pages , 20 JAN 2011 DOI: /j x

21 British Journal of Haematology Volume 152, Issue 6, pages , 20 JAN 2011 DOI: /j x

22 British Journal of Haematology Volume 152, Issue 6, pages , 20 JAN 2011 DOI: /j x

23 Riskindelning dag29 Nonhigh från början MRD < 0,001 (=0,1%) Ja < 0,1% Nej 0,1% HR cytogenetik? Nej IR cytogenetik? Nej CNS3? Ja Ja Ja >5% blaster i BM? Nej HR cytogenetik? Nej Ja Ja HR + SCT HR Nej Standard Intermediär

24 CGH-Array CGH

25 Comparative genome hybridization CGH-Array

26 Comparative genome hybridization CGH-Array CGHC

27 Next generation DNA sequencing/ massively parallel DNA sequencing Nya metoder för storskalig sekvensering Ett fåtal märken på marknaden (2004->) som använder olika teknologi Gemensamt DNA molekylerna fästs på yta Parallell sekvensering Sekvensen läses i realtid Korta sekvenser snabbare och billigare Kan automatiseras => snabbare och billigare => projekt som för några år sedan var helt orimliga kan idag genomföras på några månader

28 Metodbeskrivning Fragmentera provet Gör bibliotek Fäst till yta Amplifiera Sekvensera Sekvensanalys Pussla samman sekvensen december 5, 2014 Cilla Söderhäll 28

29 Metodbeskrivning Fragmentera provet Gör bibliotek Fäst till yta Amplifiera Sekvensera Sekvensanalys Pussla samman sekvensen RNA cdna cdna = DNA sträng som tillverkats från RNA mall 29

30 Riktad ResekvenseringDNA Exom Exom = alla kända exon i ett genom Anrika för exonsekvenser Jämför sekvens mellan sjuka och friska monogena sjukdomar Fördelar: Mycket mindre än hela genomet (1,5%) Störst chans att hitta något här Nackdelar: Labintensivt Endast exon 30

31 Major changes in AML 2012 MRD flow is used for evaluation of treatment response Intensification and lengthening of induction courses Risk grouping refined HR definition Poor response after course 1 15% LC Poor response after course >4.9% after induction 1 Poor response still after induction 2 >0,1% FLT3-ITD without NPM1 mutation Standard risk patients receive three consolidation courses Standard risk patients with Inv(16) receive two consolidation courses

32 Konstitutionell genuppsättning Exempel Variation i omsättning av läkemedel Olika subtyper av leukemi Olika DNA reparationsförmåga Mm, mm

33 AML jämförelse Down och övriga 1,0,9,8, (n=36) DS Probability,6,5, (n=242 non-ds,3,2,1 0, Years from diagnosis

34 Transkriptomsekvensering RNA RNA cdna sekvenseras Alla uttryckta gener Varierar mellan vävnader Varierar över tid Skillnad mellan sjuka och friska? Mängden reads motsvarar uttrycksnivån Information om transkriptens utseende Transkriptionsstart Splice varianter Nya transkript december 5,

Relevanta dokument

Leukemi hos barn och ungdomar Diagnostik

Leukemi hos barn och ungdomar Diagnostik Stefan Söderhäll Sektionen för onkologi och koagulation Astrid Lindgrens Barnsjukhus Med en del bilder från Jonas Abrahamsson Drottning Silvias Barnsjukhus History