QUANTA Lite R h-ttg IgA ELISA För in vitro diagnostik CLIA-komplexitet: Hög

Transkript

1 QUANTA Lite R h-ttg IgA ELISA För in vitro diagnostik CLIA-komplexitet: Hög Användningsområde Denna analys är avsedd för mätning in vitro av specifika IgA-autoantikroppar mot vävnadstransglutaminas (ttg) i humant serum, och som stöd vid diagnos av celiaki. Tillräckligt material medföljer för analys av högst 41 dubbelprover eller av 89 enkelprover med en kalibreringskurva och två kontroller. Sammanfattning och förklaring av analysen Celiaki karakteriseras av glutenintolerans som leder till ett kroniskt malabsorptionssyndrom på grund av inflammation i tunntarmens slemhinna och skada av epitelvävnaden 1. De reviderade kriterierna för diagnos av celiaki, enligt The European Society for Paediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN) 1990, förutsätter identifiering av en enskild positiv tarmbiopsi tillsammans med förekomst av minst två av de tre IgA-autoantikropparna som beskrivs nedan. Autoantikroppar som är associerade med celiaki är: IgA-antikroppar mot endomysium 3, IgG- och IgA-antikroppar mot gliadin 4 och retukulin. Flera studier visar att IgA-antikroppar mot endomysium analyser har över 99 % specificitet för celiaki och högre sensitivitet än anti-gliadin och anti-retikulin analyser ELISA för bestämning av IgA-antikroppar mot ttg är ett lämpligt alternativ till immunofluorescensanalyser (IFA) och lämpar sig synnerligen väl för såväl små- som storskalig screening 9,10. Användning av rekombinant humant vävnadstransglutaminas som antigenkälla behandlas i referenserna 11 och 12. Analysprincip Mikrotiterbrunnarna är fördragerade med rekombinant humant ttg. Antigenet har framställts i Baculovirus celler med en cdna-kod för den långa sammansatta isoformen av humant ttg. Kalibratorer, kontroller och spädda patientprover tillsätts i brunnarna och autoantikroppar med specificitet för ttg binder till detta under den första inkuberingen. Brunnarna tvättas därefter för att avlägsna obundna antikroppar. Peroxidaskonjugerat get anti-humant IgA tillsätts. Konjugatet binder till den humana autoantikroppen och obundet konjugat avlägsnas sedan genom ytterligare en tvätt. Det bundna konjugatet görs synligt med 3,3, 5,5 - tetrametylbensidinsubstrat (TMB), som ger en blå reaktionsprodukt. Färgintensiteten är proportionell mot koncentrationen av autoantikroppar i provet. Svavelsyra tillsätts i varje brunn för att avbryta reaktionen. Detta ger en gul ändpunktsfärg som avläses vid 450 nm. Reagenser 1. Polystyren mikrotiterbrunn ELISA-platta täckt med rekombinant ttg-antigen (12-1 x 8 brunnar), med hållare i folieförpackning som innehåller desickanter. 2. ELISA negativ kontroll, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant serum utan några IgA humana antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 3. R h-ttg IgA ELISA kalibrator A, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serumantikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 4. R h-ttg IgA ELISA kalibrator B, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serum antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 5. R h-ttg IgA ELISA kalibrator C, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serum antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 6. R h-ttg IgA ELISA kalibrator D, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serum antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 7. R h-ttg IgA ELISA kalibrator E, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serum antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 8. R h-ttg IgA positiv kontroll, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant IgA serum antikroppar mot ttg, förspätt, 1,2 ml. 9. HRP provutspädningsvätska, 2 flaskor ljusröda, innehållande Tris-buffrad saltlösning, Tween 20, proteinstabiliserare och konserveringsmedel, 50 ml 1

2 10. HRP tvättkoncentrat, 1 flaska med 40x koncentrat rödfärgad innehållande Tris-buffrad saltlösning och Tween 20, 25 ml. Se avsnittet för Metoder för utspädningsinstruktioner. 11. HRP R h-ttg IgA konjugat, anti-humant IgA, 1 flaska gulfärgad innehållande buffert, proteinstabiliserare och konserveringsmedel, 10ml 12. TMB Kromogen, 1 flaska innehållande stabiliserare, 10 ml 13. HRP stopplösning, 0,344M svavelsyra, 1 flaska färglös, 10 ml Varningar 1. VARNING: Denna produkt innehåller ett kemiskt ämne (0,02 % kloramfenikol) i provlösningen, kontrollerna och konjugatet som i staten Kalifornien är känt att orsaka cancer. 2. Allt humant källmaterial som används vid framställningen av kontroller för denna produkt har testats och befunnits negative gällande antikropp mot HIV, HBsAg och HCV med metoder som godkänts av FDA. Ingen testmetod kan emellertid garantera fullständig frånvaro av HIV, HCV eller annat smittämne. R h-ttg IgA kontroll, R h-ttg IgA kalibratorer A till E och ELISA negativ kontroll bör därför hanteras på samma sätt som potentiellt smittsamt material Natriumazid används som konserveringsmedel. Natriumazid är ett gift och kan vara toxiskt om det förtärs eller absorberas genom hud eller ögon. Natriumazid kan reagera med bly- eller kopparrör och bilda potentiellt explosiva metallazider. Om reagens hälls ut i vasker bör dessa spolas med stora mängder vatten för att förebygga anhopning av azid. 4. HRP-konjugatet innehåller ett utspätt giftig/korroderande kemiskt ämne som kan vara toxiskt om det förtärs i stora mängder. För att förhindra eventuella kemiska brännskador bör kontakt med hud och ögon undvikas. 5. TMB Kromogen innehåller ett irriterande ämne som kan vara skadligt om det inhaleras, förtärs eller absorberas genom huden. För att undvika skada bör inhalering, förtäring eller kontakt med hud och ögon undvikas. 6. HRP-stopplösningen består av en utspädd svavelsyrelösning. Undvik exponering för baser, metaller eller andra föreningar som kan reagera med syror. Svavelsyra är ett gift och ett korroderande ämne som kan vara toxiskt om det förtärs. För att förhindra kemiska brännskador bör kontakt med hud och ögon undvikas. 7. Använd lämplig personlig skyddsutrustning vid arbete med dessa reagenser. 8. Spillda reagenser bör torkas upp omedelbart. Spill ska tas hand om i enlighet med vad federala, statliga och lokala miljöföreskrifter påbjuder. Försiktighetsåtgärder 1. Denna produkt är avsedd att användas för in vitro-diagnostik. 2. Denna produkt bör endast användas av personal med lämplig utbildning. 3. Det rekommenderas att metodbeskrivningen följs noga. Avvikelser kan påverka analysprestanda och resultaten som fås. Lägg märke till särskilda Anm. och varningar i metodbeskrivningen. 4. Batchnummer av kalibrator, kontroll, konjugat och plattor är inte utbytbara. Utbyte av dessa komponenter mot komponenter med batchnummer som avviker från de som ingår i kitet kan leda till inkonsekventa och felaktiga resultat. Alla strips ska vara från samma folieförpackning. 5. För att undvika kontaminering av reagens, använd endast nya eller rena plast/glaskärl. Häll aldrig tillbaka överblivet reagens i flaskorna. 6. Låt aldrig reagensflaskor stå öppna; avdunstning eller kontamination som uppstår kan leda till felaktiga resultat. 7. TMB kromogen får inte utsättas för ljus eller vatten. 8. Mikrobt kontaminerade, hemolyserade eller lipemiska sera eller grumliga prover får inte användas 9. Felaktig provspädning kan inte kontrolleras eftersom kontrollerna är färdigspädda. Kalibrerade pipetter samt lämplig intern kontroll rekommenderas. 10. Användning av automatiserade analyssystem, provspädare och annan automatiserad utrustning kan ge skillnader i resultat vid jämförelse med manuella metoder. Varje laboratorium ansvarar för validering av systemet och säkerställande av att resultatet faller inom här angivna gränsvärden och åtföljande QC certifikat. 11. All utrustning måste kalibreras och underhållas enligt tillverkarens instruktioner. 2

3 Förvaringsförhållanden 1. Kitet förvaras vid 2-8 C och får inte f r ys as. F elaktiga förvaringstemperaturer kommer att påverka resultatet. 2. Spädd tvättbuffert är stabil under 1 vecka vid 2-8 C. 3. Utgångsdatum visas på kitets yttre etikett. Provtagning 1. Blodprover skall tas genom venpunktion och skall koagulera naturligt utan tillsatser. Serumet ska separeras. 2. Serumet kan förvaras vid 2-8 C upp till 7 dagar före analys 13 eller vid längre förvaring, alikvoteras och förvaras vid -20 C eller lägre. 3. Upprepad frysning och upptining bör undvikas. 4. Serumprover får inte värmeaktiveras eftersom detta kan ge falska positiva resultat. Metod Material som ingår Metodbeskrivning: Detaljerat analysprotokoll. QC certifikat: Visar batchens förväntade prestanda. Human Transglutaminase Coated Wells (Brunnar täckta med humant transglutaminas): Mikrotiterplatta med 12 delbara strips med 8 brunnar täckta med rekombinant ttg. Varje platta är förpackad i en återförslutningsbar folieförpackning med två desickanter. HRP Sample Diluent (Spädningsvätska): 2 flaskor med vardera 50 ml buffert för provspädning (ljusröd färgkod). Färdig att användas. HRP Wash Concentrate (Tvättbuffert): 1 flaska med 25 ml av 40x koncentrerad buffert för tvättning av brunnarna. R h-ttg IgA Calibrators (Kalibratorer): 5 flaskor med vardera 1,2 ml spätt humant serum, med följande koncentrationer av IgA anti-ttg antikroppar:100; 33,3; 11,1; 3,7; 1,23 U/ml.. Färdiga att användas. R h-ttg IgA Positive Control (Positiv kontroll): 1 flaska med 1,2 ml spätt humant serum. Förväntat värde finns angivet på QC certifikatet. Färdig att användas. ELISAn Negative Control (Negativ kontroll): 1 flaska med 1,2 ml spätt humant serum. Förväntat värde finns angivet på QC certifikatet. Färdig att användas. HRP R h-ttg IgA Conjugate (Konjugat): 1 flaska med 10 ml renad peroxidas-konjugerad antikropp mot humant IgA (gul färgkod). Färdig att användas. TMB Chromogen (kromogen): 1 flaska med 10 ml TMB kromogen. Färdig att användas. HRP Stop Solution (Stopplösning): 1 flaska med 10 ml 0,344 M svavelsyra. Färdig att användas. Ytterligare material som krävs men som inte medföljer Automatisk tvätt för mikrotiterplattor: Rekommenderas, men tvätt av mikrotiterplattorna kan även göras manuellt. Plattläsare: Med möjlighet att mäta vid 450 nm optisk densitet och med luft som referens. Destillerat eller avjoniserat vatten: Detta skall vara av högsta möjliga kvalitet Kalibrerade mikropipetter: För dispensering av 1000, 100 & 10 μl. Multikanalspipett: Rekommenderas för att dispensera 100 μl volymer av konjugat, substrat och stopplösning. Glas/plaströr: För provspädning. Metod Förberedande steg 1. Låt kitet anta rumstemperatur Kitet är avsett att användas vid rumstemperatur (20-24 C). Ta ut kitet från förvaring och låt det stå i rumstemperatur ca 60 minuter. Brunnarna får inte tas ur foliekuvertet förrän de har antagit rumstemperatur. Anm. Kitet kan förvaras vid rumstemperatur upp till 1 vecka. 2. Kitets komponenter Varje kitkomponent blandas varsamt före användning. 3. Spädning av tvättbuffert Tillsätt 25 ml av tvättbuffertkoncentratet i 975 ml destillerat vatten (1 på 40 spädning) i en ren behållare och blanda om. An m. Spädd tvättbuffert kan förvaras vid 2-8 C i en vecka. Späd därför endast en lämplig mängd. Om bufferten uppvisar några tecken på mikrobiell kontamination eller blir grumlig, häll ut den och gör en färsk lösning. 3

4 4. Provspädning Späd 10 μl av varje prov med 1000 μl provspädningsvätska (1:101) och blanda noga. Anm. Spätt prov måste användas inom 8 timmar. 5. Hantering av ram och strips Placera önskat antal brunnar i striphållaren. Med start från brunn A1, fylls kolumnerna från vänster till höger över plattan. Vid hantering av plattan ska långsidorna pressas mot varandra för att förhindra att brunnarna faller ur. Anm. Lägg genast tillbaka oanvända brunnar i foliekuvertet med de två desickantpåsarna och tillslut ordentligt så att brunnarna inte utsätts för fukt. Var försiktig så att folien inte punkteras eller går sönder, se nedan. VARNING: Om brunnarna utsätts för fukt eller kontamineras med damm eller andra partiklar kan detta förorsaka nedbrytning av antigenet och därmed leda till dålig precision och potentiellt felaktiga resultat. Analysförfarande Bibehåll samma dispenseringssekvens genom hela analysen. 1. Tillsats av prov Tillsätt 100 μl av varje kalibrator, kontroll och spätt (1:101) prov till respektive brunn i den medföljande plattan. Anm. Proven måste tillsättas till plattan så snabbt som möjligt för att minimera analysförskjutning, och timern ska startas efter tillsats av det sista provet. Inkubera vid rumstemperatur 30 minuter. 2. Tvätt Tvättproceduren är kritisk och kräver särskild uppmärksamhet. En felaktigt tvättad platta kommer att ge oriktiga resultat, med dålig precision och hög bakgrund. Efter inkubering ska plattan avlägsnas och tvättas 3 gånger med μl tvättbuffert per brunn. Tvätta plattan antingen med hjälp av en automatisk plattvätt eller manuellt enligt nedan. Efter den sista automattvätten, vänd plattan upp och ner och slå den torr mot ett absorberande papper. Plattorna kan tvättas manuellt enligt följande: a. Slå lätt till plattan och låt innehållet falla ner i ett tvättfat. b. Slå brunnarna torra mot ett absorberande papper. c. Fyll varje brunn med μl tvättbuffert. Använd en multikanalspipett. d. Skaka plattan försiktigt på en plan yta. e. Repetera a-d två gånger. f. Repetera a och b 3. Tillsats av konjugatet Tillsätt 100 μl konjugat i varje brunn, torka försiktigt runt brunnarna med en servett för att ta bort eventuella stänk. An m. För att undvika kontamination får överblivet konjugat aldrig hällas tillbaka i reagensflaskan. Inkubera vid rumstemperatur under 30 minuter. 4. Tvättning Upprepa steg Tillsats av kromogen (TMB) Tillsätt 100 μl TMB kromogen i varje brunn, torka försiktigt runt brunnarna med en servett för att ta bort eventuella stänk. An m. För att undvika kontamination får överblivet TMB aldrig hällas tillbaka i reagensflaskan. Inkubera vid rumstemperatur i mörker under 30 minuter. 6. Stopplösning Tillsätt 100 μl stopplösning i varje brunn. Detta ger ett färgomslag från blått till gult. 7. Mätning av optisk densitet Inom 30 minuter efter tillsats av stopplösning avläses den optiska densiteten (OD) vid 450 nm med en mikrotiterläsare. Kvalitetskontroll 1. Kvalitetskontroll För att en analys ska vara godkänd måste följande kriterier uppfyllas: Kalibratorer och positiva och negativa kontroller måste ingå i varje omgång. De värden som fås för de positiva och negativa kontrollerna bör vara inom de angivna gränsvärdena som specificeras i QC-certifikatet. Kurvans form bör likna kalibreringskurvan som visas i QC-certifikatet. Om de ovanstående kriterierna inte uppfylls är analysen ogiltig och bör göras om. 2. Beräkna genomsnittlig optisk densitet (endast för analyser som görs som dubbelanalyser). Beräkna den genomsnittliga optiska densiteten för varje kalibrator, kontroll och prov vid avläsningarna av dubbelprov. Den procentuella variationskoefficienten (CV %) för varje duplikat OD bör vara lägre än 15 %. 3. Plotta kalibreringskurvan Det går att plotta kalibreringskurvan antingen automatiskt eller manuellt på följande sätt: Plotta koncentrationen anti-ttg IgA antikroppar på den logaritmiska skalan mot den optiska densiteten (OD) på den linjära skalan för varje kalibrator: Automatiskt använd lämplig godkänd programvara och den typ av kurva som bäst passar aktuella värden. Manuellt använd rutat papper för logaritmiska och linjära skalor. Dra en följsam kurva genom punkterna (inte en rak linje eller från punkt till punkt). 4

5 4. Behandling av avvikande punkter Om en enstaka punkt inte ligger på kurvan kan den tas bort. Om detta innebär att kurvans form inte längre liknar provkalibreringskurvan eller om flera punkter är avvikande bör analysen göras om. 5. Beräkning av kontrollvärden Läs av mängden anti-ttg IgA antikroppar från kalibreringskurvan. Dessa värden bör falla inom de intervall som anges på QC-certifikatet. 6. Beräkning av mängden autoantikroppar i spädda prover Läs av mängden anti-ttg IgA antikroppar i de spädda proverna direkt från kalibreringskurvan. Anm. Kalibreringsvärdena har justerats med en faktor på 100 för en provspädning på 1:101, vilket innebär att ytterligare omräkning inte behövs. 7. Analyskalibrering Analysen är kalibrerad i U/ml mot en godtycklig referenskalibrator, eftersom ingen internationellt erkänd referenspreparation finns tillgänglig. Metodens begränsningar 1. Detta kit används endast som stöd vid diagnostik av celiaki. Ett positivt resultat antyder vissa sjukdomar som måste bekräftas med kliniska undersökningar och andra serologiska tester. 2. Resultaten från denna analys utgör inte en bekräftelse på om sjukdomen förekommer eller inte. 3. Användning av denna analys har inte utvärderats med prover från barn. 4. Ett negativt resultat kan bero på IgA-brist och utesluter inte förekomsten av celiaki. Förväntade värden Det normala området bestämdes utgående från 200 normala vuxna blodgivare. Ett av dessa prov bekräftades innehålla anti-ttgiga-antikroppar. Områdena som ges är endast indikativa. ELISA-analyser är mycket känsliga och kan detektera små differenser i provpopulationer. Det rekommenderas att varje laboratorium bestämmer sitt eget normala område som grundar sig på de populationstekniker och den utrustning som används. TOLKNING AV RESULTAT Negativ <4.0 U/ml Svagt positiv 4-10 U/ml Positiv >10 U/ml Prestandakarakteristika Precision Precisionen inom analysen mättes med sex prover inom kalibreringskurvans intervall. CV % för varje prov visas nedan: PRECISION INOM ANALYS n=20 Koncentration (U/ml) C V % Prov 1 2,8 2,8 Prov 2 5,1 3,9 Prov 3 15,8 1,9 Prov 4 21,6 3,2 Prov 5 29,4 5,5 Prov 6 55,8 3,3 Precisionen mellan analyser mättes med sex dubbelprover sex gånger i tre dagar. CV % för varje prov visas nedan: PRECISION MELLAN ANALYSER n=6 Koncentration (U/ml) C V % Prov 1 3,2 4,5 Prov 2 5,3 5,8 Prov 3 17,2 6,8 Prov 4 25,2 7,1 Prov 5 30,5 6,9 Prov 6 74,0 6,7 5

6 ANALYTISK SENSITIVITET Den analytiska sensitiviteten på 1,23 U/ml bekräftades med analys av två prover i multipla replikat med värden 1,5 och 2,5 gånger det lägsta kalibreringsvärdet (1,23 U/ml). Statistisk analys enligt Student s t test bekräftade att det var en signifikant skillnad mellan dessa prover (p<0,0001). M ÄTINTERV ALL Analysens mätintervall är 1, U/ml. Normalvärden Nivån anti-ttg IgA autoantikroppar uppmättes i serum från 200 normala vuxna blodgivare. Enligt rikttolkningen var 0,5 % (1/200) positiva för ttg IgA autoantikroppar. Detta prov visade sig också positivt med ett alternativt ttg IgA EIA-kit. 200 No. of samples < IgA anti-ttg U/mL Dessutom visade sig 39/40 prover från patienter med Chrons sjukdom (n=21) och ulcerös kolit (n=19) som analyserades vara negativa med anti ttg IgA-analysen. Det enstaka prov som var positivt för Chrons sjukdom bekräftades positivt med anti-iga endomysial IFA. RELATIV SPECIFICITET, SENSIVITET, ÖVERENSSTÄMMELSE Den relativa specificiteten, sensitiviteten och överensstämmelsen har fastställts med ett IFA-kit för analys av IgAantikroppar mot endomysium med hjälp av 106 prover från patienter som via biopsier fått misstanke om celiaki bekräftad eller avförd. BINDAZYME Anti-transglutaminas IgA Anti-IgA endomysial IFA a - 1 b 49 Relativ sensitivitet 98,2 % Relativ specificitet 94,2 % Relativ överensstämmelse 96,2 % a. 3/3 EIA-positiva/IFA-negativa prover var från patienter som via biopsi fått misstanke om celiaki bekräftad. b. Prov svagt positivt med IFA. Interfererande ämnen En rad interfererande ämnen har tillsatts anti-ttg IgA-prover, såväl positiva som negativa, som sedan har analyserats. Den metod som använts för att kontrollera dessa ämnen är baserad på Interference Check A plus - Kokusai Shiyaku, Japan. Ämne Koncentration Bilirubin F (fritt) 19,3 mg/dl Bilirubin C (konjugat) 19,9 mg/dl Hemolyserat hemoglobin 485 mg/dl Chyle 1550 enheter Reumatoid faktor 45 IU/ml Ingen interferens upptäcktes i de prover som analyserats. 6

7 Analysens linjäritet Tre prover har analyserats för linjäritet tvärsöver kalibreringsområdet, regressionskoefficienten R 2 var större än 0,997 vid jämförelse mellan faktiska och förväntade värden i U/ml, medelåtervinning var 99 %. Utvärdering av Prozon-effect Tre positiva prover späddes 1:6,25 i spädningsvätska (normal spädning 1:101) för att med överskott fastställa möjlig prozon-effekt. Alla prover späddes därefter på lämpligt sätt, inga falska negativa värden observerades vid lägsta provspädning, sålunda observerades ingen prozon-effekt. Plattans mall Se sista sidan i denna manual A B C D E F G H Sammanfattning av proceduren 1. Tillsätt 100μL av varje kalibrator, kontroll och 1:100 spätt prov i lämpliga brunnar. Inkubera i 30 minuter. Tvätta. 2. Tillsätt 100μL konjugat i varje brunn. Inkubera i 30 minuter. Tvätta. 3. Tillsätt 100μL substrat i varje brunn. Inkubera i 30 minuter. 4. Tillsätt 100μL stopplösning i varje brunn. Mät absorbansen vid 450 nm. 7

8 Referenser 1. Trier, JS. Celiac Sprue. The New England Journal of Medicine 1991; 24: Walker Smith J A et al. Revised criteria for the diagnosis of celiac disease: Report of working group of European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood. 1990;65: Valdermarsson T et al. Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti-endomysial antibodies. 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive Diseases and Science. 1996;41: Bürgin-W olff et al. Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease. Archives of Disease in Childhood 1991; 66: Volta U et al. IgA anti-endomysial antibody test: A step forward in celiac disease screening. Digestive Diseases and Science. 1991;36: Grodzinsky E. Hed J, Skogh T. IgA anti-endomysial antibodies have a high predictive value for celiac disease in asymptomatic patients. Allergy. 1994:49: Dieterich W et al. Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of Celiac Disease. Nature Medicine. 1997; 3: Dieterich W et al. Autoantibodies to Tissue Transglutaminase as Predictors of Celiac Disease. Gastroenterology. 1998; 115: Sulkane S et al. Tissue Transglutaminase Autoantibody Enzyme linked Immunosorbent Assay in detecting Celiac Disease. Gastroenterology. 1998; 115: Sollid LM and Scott H. New tool to predict Celiac Disease on its Way to the Clinics. Gastroenterology. 1998; 115: Sardy M et al. Recombinant Human Tissue Transglutaminase ELISA for the Diagnosis of Glutin-sensitive Enteropathy. Clin Chem. 1999; 45:12, Sblattero D et al. Human recombinant Tissue Transglutaminase ELISA: An Inovative Diagnostic Assay for Celiac Disease. Ammeriacan Journal of Gastroenterology. 2000; 95:5, Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. QUANTA Lite och INOVA Diagnostics, Inc. är registrerade varumärken. Copyright 2012 Alla rättigheter reserverade Tillverkad av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Teknisk service (endast USA och Kanada): Teknisk service (utanför USA): support@inovadx.com Auktoriserad representant inom EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: SW E Juni 2012 Revision 1 8