Nyheter i resistensbestämning Jenny Åhman EUCAST Development Laboratory

Transkript

1 Nyheter i resistensbestämning Jenny Åhman EUCAST Development Laboratory

2 Brytpunktstabell v. 4.0 Enterobacteriaceae Pefloxacin och Salmonella spp. Pseudomonas spp. (zonbrytpunkter) Staphylococcus spp. S. saprophyticus och ampicillin (zonbrytpunkt) Cefoxitin-screen för S. pseudintermedius Enterococcus spp. Ciprofloxacin, levofloxacin och norfloxacin (screen) för okomplicerad UVI

3 Ciprofloxacinresistens hos Salmonella spp. Ny screeningbrytpunkt för pefloxacin 5 µg Enterobacteriaceae Fluoroquinolones MIC breakpoint (mg/l) Disk content (µg) Zone diameter breakpoint (mm) S R > S R < Ciprofloxacin, Salmonella spp Note A Note A Pefloxacin (screen), Salmonella spp. NA NA A. Susceptibility of Salmonella spp. to ciprofloxacin can be inferred from the pefloxacin disk diffusion susceptibility test result.

4 No of readings Pefloxacin 5 µg vs. FQ resistance mechanism Salmonella spp., 126 isolates (1044 readings) 3 laboratorier Lappar från 3 leverantörer MH från 4 leverantörer 6 avläsare FQ resistance mechanism aac6 QRDR qnr None 20 0 Inhibition zone diameter (mm)

5 No of readings Pefloxacin 5 µg vs. Ciprofloxacin MIC Salmonella spp., 126 isolates (1044 readings) 3 laboratorier Lappar från 3 leverantörer MH från 4 leverantörer 6 avläsare MIC (mg/l) Inhibition zone diameter (mm)

6 No of isolates No of isolates Rutindistributioner för Salmonella spp. vs ciprofloxacin 5 µg och pefloxacin 5 µg. 51 konsekutiva isolat testades för ciprofloxacin och pefloxacin parallellt under Ciprofloxacin 5 µg Gammal NordicASTbrytpunkt Inhibition zone diameter (mm) Ny screeningbrytpunkt Pefloxacin 5 µg Inhibition zone diameter (mm)

7 Brytpunktstabell v. 4.0 Enterobacteriaceae Pefloxacin och Salmonella spp. Pseudomonas spp. (zonbrytpunkter) Staphylococcus spp. S. saprophyticus och ampicillin (zonbrytpunkt) Cefoxitin-screen för S. pseudintermedius Enterococcus spp. Ciprofloxacin, levofloxacin och norfloxacin (screen) för okomplicerad UVI

8 Pseudomonas spp. Kliniska isolat från SENTRY (JMI, USA): Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas non-aeruginosa Zon/MIC-korrelat EUCAST: Lappdiffusion JMI: MIC med buljongspädning Artidentifiering med MALDI-TOF

9 MALDI-TOF resultat för 192 Pseudomonas non-aeruginosa Putida-gruppen: (n=113) P. putida, P. oryzihabitans, P. monteilii, P. mosselii, P. plecoglossicida, P. fulva. Stutzeri-gruppen: (n=35) P. stutzeri, P. luteola, P. balearica Flourescens-gruppen: (n=20) P. flourescens, P. synxantha, P. libanensis, P. azotoformans, P. extremorientalis, P. rhodesiae, P. antarctica. Aeruginosa-gruppen: (n=6) P. mendocina, P. oleovorans. Övriga: (n=18) P. chlororaphis, P. koreensis, P. graminis, P. asplenii

10 No of isolates 40 Ceftazidime 10 µg vs. MIC Pseudomonas aeruginosa, 107 clinical isolates MIC (mg/l) Inhibition zone diameter (mm) Brytpunkter ECOFF MIC S 8, R>8 mg/l WT 8 mg/l Zondiameter S 16, R<16 mm

11 No of isolates 25 Ceftazidime 10 µg vs. MIC Pseudomonas non-aeruginosa, 188 clinical isolates MIC (mg/l) Inhibition zone diameter (mm) Brytpunkter ECOFF MIC S 8, R>8 mg/l WT 8 mg/l Zondiameter S 16, R<16 mm

12 No of isolates 25 Ceftazidime 10 µg vs. species 192 clinical isolates, Pseudomonas non-aeruginosa Species Other Aeruginosa group Fluorescens group Stutzeri group Putida group 5 0 Inhibition zone diameter (mm) Brytpunkter ECOFF MIC S 8, R>8 mg/l WT 8 mg/l Zondiameter S 16, R<16 mm

13 No of isolates 30 Ciprofloxacin 5 µg vs. MIC Pseudomonas aeruginosa, 106 clinical isolates MIC (mg/l) Inhibition zone diameter (mm) Brytpunkter ECOFF MIC S 0.5, R>1 mg/l WT 0.5 mg/l Zondiameter S 25, R<22 mm

14 No of isolates 18 Ciprofloxacin 5 µg vs. MIC Pseudomonas non-aeruginosa, 173 clinical isolates MIC (mg/l) Inhibition zone diameter (mm) Brytpunkter ECOFF MIC S 0.5, R>1 mg/l WT 0.5 mg/l Zondiameter S 25, R<22 mm

15 Pseudomonas spp. Zonbrytpunkter som tidigare baserats på data för P. aeruginosa är validerade även för andra arter av Pseudomonas. Mindre justeringar av zonbrytpunkter i EUCAST Brytpunktstabell v 4.0 Piperacillin och piperacillin-tazobaktam Ticarcillin och ticarcillin-klavulansyra Cefepim Doripenem

16 Brytpunktstabell v. 4.0 Enterobacteriaceae Pefloxacin och Salmonella spp. Pseudomonas spp. (zonbrytpunkter) Staphylococcus spp. S. saprophyticus och ampicillin (zonbrytpunkt) Cefoxitin-screen för S. pseudintermedius Enterococcus spp. Ciprofloxacin, levofloxacin och norfloxacin (screen) för okomplicerad UVI

17 Brytpunktstabell v. 4.0 Staphylococcus spp. Cephalosporins Cefoxitin (screen) S. aureus, S. lugdunensis and S. saprophyticus MIC breakpoint (mg/l) Zone diameter breakpoint (mm) Disk content (µg) S R > S R < Note 3 Note A 22 A Notes Numbers for comments on MIC breakpoints Letters for comments on disk diffusion 3. S. aureus and S. lugdunensis with cefoxitin MIC values >4 mg/l are methicillin resistant, mostly due to the presence of the meca gene. Disk diffusion reliably predicts methicillin resistance. A. Susceptibility inferred from cefoxitin. Cefoxitin (screen) Coagulase negative staphylococci other than S. lugdunensis and S. saprophyticus Note 4 Note A 25 A lugdunensis the cefoxitin MIC is a poorer predictor of 4. For coagulase-negative staphylococi other than S. methicillin resistance than the disk diffusion test. Cefoxitin (screen) S. pseudintermedius Note 4 Note A 35 A

18 S. pseudintermedius Koagulas-positiv Vanlig hos djur, ffa hund och katt 243 isolat: - Statens Veterinärmedicinska anstalt (SVA) - Veterinærinstituttet (Norge) Artbestämning med MALDI-TOF Lappdiffusion med cefoxitin 30 µg meca enligt PCR

19 No of isolates 50 Cefoxitin 30 µg vs. meca status S. pseudintermedius, 243 clinical isolates tested in duplicate meca status Positive Negative Inhibition zone diameter (mm) Breakpoints Zone diameter (screen) S 35, R<35 mm

20 Brytpunktstabell v. 4.0 Enterobacteriaceae Pefloxacin och Salmonella spp. Pseudomonas spp. (zonbrytpunkter) Staphylococcus spp. S. saprophyticus och ampicillin (zonbrytpunkt) Cefoxitin-screen för S. pseudintermedius Enterococcus spp. Ciprofloxacin, levofloxacin och norfloxacin (screen) för okomplicerad UVI

21 Brytpunktstabell v. 4.0 Corynebacterium spp. (zon- och MIC-brytpunkter) Bensylpenicillin, ciprofloxacin, moxifloxacin, gentamicin, vankomycin, klindamycin, tetracyklin, linezolid och rifampicin Inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker och streptokocker

22 Corynebacterium spp. 258 kliniska isolat av Corynebacterium spp. Santander, Spanien SENTRY, JMI, USA Växjö, Sverige Lappdiffusion och buljongspädning (BMD) Artidentifiering med MALDI-TOF

23 MALDI-TOF resultat för 258 Corynebakterier C. striatum (n=78) C. amycolatum (n=63) C. jeikeium (n=35) C. pseudodiphtheriticum (n=20) C. urealyticum (n=18) C. afermentans (n=9) C. aurimucosum (n=8) Övriga: (n=27) - C. propinquum, C. singulare, C. coyleae, C. imitans, C. glucuronolyticum, C. minutissimum, C. xerosis, C. freneyi, C. mucifaciens, C. riegelii, C. simulans, C. ulcerans.

24 Corynebacterium spp. Metod Media Inokulat Inkubering Lappdiffusion MH-F McFarland h (40-48 h) 1 35±1 C 5% CO 2 Buljongspädning (BMD) MH-F-buljong 5 x 10 5 cfu/ml h (40-48 h) 1 35±1 C Luft (förslutna paneler) 1 Isolat med otillräcklig växt (ingen växt eller ej konfluerande växt) efter h inkuberas igen omedelbart och läses av efter totalt h inkubering.

25 Brytpunktstabell v. 4.0 Corynebacterium spp. Bensylpenicillin, ciprofloxacin, moxifloxacin, gentamicin, vankomycin, klindamycin, tetracyklin, linezolid och rifampicin Inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker och streptokocker

26 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos stafylokocker. 26

27 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos streptokocker Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos streptokocker. 27

28 Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprim-sulfametoxazol Bortse från inväxt i zonen, som kan ses för Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprimsulfametoxazol. Inväxten kan variera i utseende från tunn dimma till tydlig växt. 6 mm Om en yttre zon kan urskiljas, mät den yttre zonen. = Känslig om zonen 16 mm Tjock växt in till lappen = Resistent

29 Enterokocker och vankomycin Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonen. Otydlig zonkant och kolonier i zonen indikerar vankomycinresistens. Om zonen är 12 mm och zonkanten är otydlig, utför konfirmatoriska tester. E. faecalis Ej VRE E. faecium VRE 29

30 Ny QC-tabell v. 4.0 Amoxicillin-klavulansyra och ampicillin-sulbaktam MIC är validerade för testning med fast koncentration av hämmare Ceftobiprol MIC E. coli ATCC och pefloxacin 5 µg E. faecalis ATCC och ciprofloxacin, levofloxacin och norfloxacin (zon och MIC) H. influenzae ATCC 49766, tentativa MIC-gränser

31 Utvärdering av lappar från olika leverantörer

32 Utvärdering av utvalda lappar från 9 leverantörer Leverantörer Abtek BD Bio-Rad Bioanalyse HiMedia Liofilchem Mast Oxoid SirScan Utförande Stora agarplattor (150 mm) Varje lapp testas med Samma inokulat Samma inkubering Samma avläsare 3 upprepningar per QC-stam och lapp

33 Testade antibiotika Bensylpenicillin 1 unit Amoxicillin-klavulansyra µg Piperacillin-tazobaktam 30-6 µg Oxacillin 1 µg Mecillinam 10 µg Cefotaxim 5 µg Ceftazidim 10 µg Cefoxitin 30 µg Meropenem 10 µg Norfloxacin 10 µg Pefloxacin 5 µg Ciprofloxacin 5 µg Gentamicin 10 µg Tobramycin 10 µg Erytromycin 15 µg Tetracyklin 30 µg

34 P. aeruginosa ATCC Ceftazidim 10µg

35 Exempel: Ceftazidim 10 µg QC-stam A B C D E F G H I P. aeruginosa ATCC P. aeruginosa ATCC P. aeruginosa ATCC Medelvärde Target Range QC-stam A B C D E F G H I E. coli ATCC E. coli ATCC E. coli ATCC Medelvärde Target Range /- 1 mm +/- 2 mm +/- 3 mm Out of range

36 S. pneumoniae ATCC Bensylpenicillin 1 unit

37 Exempel: Bensylpenicillin 1 unit QC-stam A B C D E F G H S. pneumoniae ATCC S. pneumoniae ATCC S. pneumoniae ATCC Medelvärde Target Range QC-stam A B C D E F G H S. aureus ATCC S. aureus ATCC S. aureus ATCC Medelvärde Target Range /- 1 mm +/- 2 mm +/- 3 mm Out of range

38 MIC-bestämning med buljongspädning

39 MIC-bestämning med buljongspädning Specialgjorda MIC-paneler (Sensititreplattor) Antibiotika i NordicASTs tabeller Intervall som täcker EUCASTs brytpunkter och större delen av vildtypspopulationen QC på target Användningsområden Rutinmässig MIC-bestämning på klinisk mikrobiologi Växjö/Karlskrona Beställningsbart för andra lab Zon/MIC-korrelationer (EUCAST)

40 Tillgängliga MIC-paneler Enterobacteriaceae (27 ab) Pseudomonas & Acinetobacter (13 ab) Stafylokocker & Enterokocker (32 ab) Streptokocker (24 ab) H. influenzae (13 ab)

41 Exempel Enterobacteriaceae: Antimicrobial agent Range Ampicillin 2-32 Amoxicillin 2-32 Amoxicillin-clavulanate (constant 2) Piperacillin-tazobactam 1-64 Cefadroxil 4-32 Cefalexin 4-64 Cefepime Cefotaxime Ceftazidime Ceftibuten Ceftriaxone Cefuroxime 1-16 Doripenem Ertapenem Imipenem Meropenem Ciprofloxacin Levofloxacin Amikacin 1-64 Gentamicin Tobramycin Tigecycline Azithromycin 4-64 Fosfomycin p.o Nitrofurantoin Trimethoprim Trimethoprim-sulfamethoxazole

42 Piperacillin-tazobaktam Cefotaxim Ciprofloxacin Gentamicin

43 QC P. aeruginosa ATCC Test AMI AZT CAZ CIP DOR GEN IMI LEV MER PTZ TOB In-house broth In-house broth In-house broth Commercial broth Commercial broth Commercial broth Target Range On target Upper limit Lower limit Out of range

44 Övrigt pågående arbete Nya antibiotika: Lappstyrka, QC-kriterier & zonbrytpunkter Ceftobiprol Två cefalosporiner med β-laktamashämmare Fosfomycin zonbrytpunkter Organismer som saknar metod/brytpunkter: Aerokocker Kingella kingae Anaerober N. gonorrhoeae