Konsensusmöte om referensmetodik för parasitologisk diagnostik. Serologiska och molekylärbiologiska metoder

Transkript

1 Konsensusmöte om referensmetodik för parasitologisk diagnostik Serologiska och molekylärbiologiska metoder Juni 12, 2012 Echinococcus spp. Schistosoma spp. Strongyloides spp. Trypanosoma cruzi

2 Echinococcus species (dvärgbandmask)

3 Echinococcus (dvärgbandmask) Vilken är den enklaste/säkrare/mer kostnadseffektiv metod för att fastställa en diagnos? Klinisk misstanke + epidemiologi Avbildningsmetoder (UL, röntgen, DT, MRI) + Antikroppsbestämning (IgG) Asx Sx Kontroller med rtg/ upprepad serologi Punktera? (mik., PCR) Behandla? - + konfirmera med annan Ak metod Från: WHO & OIE, Manual on Echinococcosis in humans and animals, 2002

4 Diagnostik av Echinococcus Brunetti et al. Acta Tropica Volume 114, Issue 1, April 2010, Pages 1 16 Thompson & Lymbery, Echinococcus and hydatid disease, CAB International,1995

5 Antikroppsdetektionstester för E. granulosus Metod Sensitivitet Specificitet Korsreaktioner ELISA IgG (HFF) 78* 93% 73* - 97% IHA (HFF) 61* 90% 76 95% Em*, Cystic., Schistosoma Fasciola, Filaria Em*, Cystic., Schistosoma Fasciola, Filaria IEP (Arc5) 31 73% ca 100% inga WB 92-95% 95-98% Cc, Sch (enstaka band) Eg-specifik IgE 10* 80% 50% *mycket låg vid inaktiva cystor, Korsreaktion med andra maskar

6 Antikroppsdetektionstester för E. multilocularis Metod Sensitivitet Specificitet Korsreaktioner ELISA Em2/ *-98% Eg*, Cc (låg pos) ELISA Em *-100% Em*, Cc (låg pos) WB (Em Ag) 92-95% (25*) 95-98% Cc, Sch (enstaka band) Specifik IgE 62%??

7 Andra detektionsmetoder för Echinococcus Metod Fördelar Nackdelar Antigen detektion i serum Icke invasivt prov okänslig ej lätt tillgänglig Antigen detektion i CV Känslig vid aktiva cystor Invasivt prov okänslig vid sterila cystor, ej lätt tillgänglig PCR (CV, biopsimaterial) Mycket känslig, vid neg. serologi/steril cysta? + typningsmöjligheter Invasivt prov Tillgänglig i några få referenslaboratorier

8 Schistosoma spp. (Bilharzia, snäckfeber)

9 1. Cerkariedermatit 2. Akut Schistosoma infektion 3. Kronisk Schistosoma infektion (ca 20 dagar) 25 till 70 dagar (slut lokalerisering)

10 Utveckling av Schistosoma-infektionen 1 10 dagar 3 10 veckor? flera år Fas Cerkarie dermatit Akut Schistosomiasis (om Sx: Katayama) Kronisk Schistosomiasis Symptom Asx eller hudsx Asx eller feber, utslag eosinofili, lungsx, GI, hepatosplenomeg. Asx eller Gastrointestinala urinära Laboratorie diagnostik Klinik + epidem. Serologi Mikroskopi, serologi, histopatologi Antikroppar/ ägg Nej IgG, IgE (ägg +/-) Ägg, IgG, (ag) Komplikationer Nej Akut inflammatorisk syndrom, vaskulit, CNS Hepatosplenisk syndrom, cirrhos CNS, njur/uretero/genitala skador

11 Icke morfologiska detektionsmetoder för Schistosoma Metod Fördelar Nackdelar Antikroppsdetektion i serum (IgG) Antigen detektion i serum/urin (CCA/CAA dipstick) Känsligt (prepatent eller vid ingen/låg ägg utsöndring och parasitbörda) Känsligare/= än mikrosk. vid hög parasitbörda, kronisk infektion, markör för aktiv infektion Otillräckligt nytta för behandlingsuppföljning och i endemiska område Ej känslig för icke endemiska patienter, ej lätt tillgänglig metod PCR (serum, feces/urin) Mycket känslig (?), tidig detektion, markör för aktiv infektion (utvärd. av behandlingseffekt) Ej väl utvärderad i kliniska fall, tillgänglig i endast få ref/forksningslaboratorier

12 Trypanosoma cruzi (amerikansk trypanosoma, Chagas )

13 Tidsutvecklingen av Chagas sjukdom 4 v 8 v år? Fas Akut Kronisk (obestämd) Kronisk Sx Symptom 1-5% ~ 0 % 30% (5-10% GI 85-90% ) Parasitemi /- +/- Antikroppar IgM/IgG IgG IgG Dödlighet 1 % 0 %? 10-60%

14 Serologisk diagnostik (kronisk fas) Baseras på detektion av specifika IgG antikroppar ( 2-4 veckor) Påvisbar IgG korrelerar med kronisk infektion (Ag+) Minst 2 olika testformat rekommenderas (för diagnostik) Känsligare än PCR i den kroniska fasen Många olika tester finns i kommersiellt format Användbarhet för uppföljning efter behandling: - akut/tidig kronisk (= i unga patienter, bra) - kronisk (kan ta flera år)

15 Jämförelse av serologiska metoder WHO, 2009 Otani MM et al. Transfusion Complications 49, 2009

16 Diagnostik med PCR används för: Vid fall av kongenital infektionsmisstanke i nyfött barn För monitorering av reaktivering (organtransplanterade, HIV) För detektion i biopsimaterial För uppföljning av behandlingseffekt (?) Vid misstanke om laboratorieinfektion PCR-metoderna fortfarande ej standardiserade (in house)

17 Strongyloides spp. (Dvärgtrådmasken)

18 Parasitologisk diagnostik av Strongyloides Konc. formalin/etylacetat (10-30%) Baermann (ca 50-60%) Ofix. färskt prov Antal prov Mängd feces Agarplatta (upp till 80-90%) Känslighet

19 Odling av Strongyloides med agarplatta Referensmetod? 2 gr färskt feces tejp! 2-5 dagar (26-33 grader) + 10% formalin Garcia L., Diagn. Med. Parasitology, th Ed. ASM press

20 Larvmigrationsspår på agarsubstrat Infektionsrisk!

21 Icke parasitologiska detektionsmetoder för Strongyloides Metod Fördelar Nackdelar Antikroppsdetektion i serum (IgG) Känsligare än mikro och AP (80-95%), bra för ickeendemisk med kronisk inf. Begränsad nytta för behandlingsuppföljning (?) och i endemiska område korsreaktioner PCR (feces) Känsligare än parasitologiska metoder (än AP?), tidig detektion Begränsad mängd feces (inhibitionsproblem) tillgänglighet

22 Anamnart W et al. J. Clin Microbiol. 2010, 48(11) Rapporterade detektionsnivåer av olika PCR metoder: larver/gr

23 Tack så mycket!