Analys av fria lätta kedjor i cerebrospinalvätska vid MS-diagnostik

Transkript

1 Analys av fria lätta kedjor i cerebrospinalvätska vid MS-diagnostik Magnus Hansson Specialistläkare, Klinisk kemi, Karolinska Universitetslaboratoriet Frida Duell ST-läkare, Klinisk kemi, Karolinska Universitetslaboratoriet

2 2 Multipel skleros

3 3 Multipel skleros

4 MS behandling Hög sjukdomsaktivitet tidigt i förloppet, komplikationer sent Kraftfull behandling ofta uppskjuten tills mer uttalade symptom Viktigt identifiera patienter tidigt innan irreversibel destruktion

5 Csv Isoelektrisk fokusering

6 Oligoklonala band, OCB Har använts länge för att identifiera intratekal Ig(G) produktion Dikotomt svar utan gradering Manuell metod, lång svarstid, dyr Risk för bedömarbias i gråzonen Svårigheter vid förekomst av M-komponent samt vid IgM kloner

7 IgG-index (Csv IgG/P IgG) / (Csv Alb/P Alb) Cut off med hög specificitet och låg sensitivitet

8 Fria lätta kedjor (Free light Chains, FLC) Vid ett normalt immunsvar byggs kompletta immunoglobulinmolekyler, bestående av vardera två identiska tunga kejor (α, γ, μ, δ, ε) och två identiska lätta kedjor (κ, λ) Jämfört med mängden tunga kedjor som produceras av varje plasmacellklon, produceras ett litet överskott av lätta kedjor och frisätts i blodbanan som obundna eller fria lätta kedjor (FLC). Hos friska individer existerar således majoriteten av lätta kedjor i bunden form som kompletta immunoglobuliner och endast ett fåtal FLC cirkulerar. Intratekal syntes av FLC kappa observeras vanligen vid inflammatoriska sjukdomar i detcentrala nervsystemet av antingen infektiöst eller autoimmunt ursprung. Skillnad plasmacell/b cell?

9 Fördelar KFLC Kvantitativt numeriskt svar, bra för korrelationer Ej bedömarberoende Snabbare svar Billigare Potentiellt bra vid: M-komponent? IgM kloner? MS? Borrelia?

10 Nackdelar KFLC Cut off med hög sensitivitet ger fler falskt positiva Lambdakloner? Kappa/lambdakvot bättre? M-komponet av lätta kedjor? (Vid stabil nivå ok?) Iatrogen ak behandling, lätta kedjor i preparationen? Njursvikt? (Ok om stabil?) Andra okända felkällor

11 Hur beräkna? Beräkning: Csv KFLC Csv/P KFLC kvot Csv/P KFLC index Csv KFLC IF (intratekal fraktion) Missar potentiellt Metodskillnad, lotvariationer, Plasmanivå, BBB skada, molekylstorlek, ålder BBB skada, molekylstorlek, (ålder?) Molekylstorlek, (ålder?) (ålder?)

12 Normal nivå, KFLC lim Presslauer et al 2016 MSJ Motsvarar ungefär y=1,75x

13 KFLC IF 2016 MSJ Presslauer et al

14 CSF/P KFLC kvot (log) KFLC förstudie KUL (minnesmottagningar = äldre) 10,000 OCB neg OCB pos 1,000 KFLCLim Original Presslauer (3 SD) motsvarar 0 KFLC IF 0,100 0,010 Egen omräkning motsvarar original * 0,67 (motsvarar ~-0,5 KFLC IF) 0,001 0,0000 0,0050 0,0100 0,0150 0,0200 CSF/P ALB kvot

15 Hur vi svarar ut KFLC IF : Resultat KFLC Svar: IF: 0,00 till 1,00 Csv-KFLC IF (0,00 till 1,00) förenligt med intratekal immunglobulinproduktion. Bedöms i samråd med neurolog. Ej validerad <18 års ålder. 0,00 till -0,50 Csv-KFLC IF i gråzon (0,00 till -0,50). Intratekal immunglobulinproduktion kan inte uteslutas. Bedöms i samråd med neurolog. Ej validerad <18 års ålder. < -0,50 Csv-KFLC IF < -0,50 talar emot intratekal immunglobulinproduktion. Bedöms i samråd med neurolog. Ej validerad <18 års ålder. 15 KFLC

16 Csv KFLC IF beställningsbar hos KUL från maj 2017

17 Pilotprojekt tillsammans med neurologkliniken Initierades hösten Från neurologens biobank erhölls plasma och spinalvätska (n = 73) från patienter indelade i åtta olika grupper: Patient group Short description n Diagnoses 1 Healthy controls 10 OCB-negative healthy volunteers. 2 OCB-, neurological symptoms 10 These patients did not have MS but presented with at least one of following symptoms: paresthesia, hypoesthesia, numbness, polyneuropathy, migraine, Bell s palsy and/or backpain. 3 OCB-, MS 9 These patients had an MS diagnosis made on the basis of symptoms and MRI 4 OCB+, neurological symptoms 9 Meningitis, encephalitis, encephalomyelitis, tension headache, pain syndrome and/or memory deficit. 5 OCB+, MS with low IgG-index 10 These patients had an MS diagnosis with an IgG-index below 0,7. 6 OCB+, MS with high IgG-index 10 These patients had an MS diagnosis with an IgG-index above 0,7. 7 OCB+, MS with Tysabritreatment 6 These patients had an MS diagnosis and had been treated with natalizumab (Tysabri ). 8 OCB few/unsure, different diagnoses 9 These patients had samples where OCB status had been difficult to decide. The diagnoses were MS (5), CIS (2), hearing loss (1) and SLE (1). På dessa prover analyserades albumin, IgG och KFLC och LFLC. 17 KFLC

18 Sensitivity (%) Vilken parameter urskiljer bäst? 100 OCB neg. vs. OCB pos IgG-index ckflc CSF-KFLC/P-KFLC CSF-KFLC/CSF-LFLC KFLC-index KFLC IF % - Specificity (%) 18 KFLC

19 Sensitivity (%) Vilken parameter urskiljer bäst? forts. HC vs. CIS/MS OCB IgG-index ckflc CSF-KFLC/P-KFLC CSF-KFLC/CSF-LFLC KFLC-index KFLC IF % - Specificity (%) 19 KFLC

20 20 KFLC

21 Resultat forts. AUC - HC vs. CIS/MS 1,00 0,98 0,96 0,94 0,92 0,90 0,88 0,86 OCB ( 2 bands) ckflc KFLC-index KFLC IF 21 KFLC

22 Resultat forts. KFLC IF in different cohorts KFLC IF OCB-, healthy OCB-, neurological symptoms OCB-, MS OCB+, neurological symptoms OCB+, MS, high IgG-index OCB+, MS, low IgG-index OCB+, MS with Tysabri treatm. 22 KFLC

23 Resultat forts. KFLC IF in different cohorts KFLC IF OCB-, healthy OCB-, neurological symptoms OCB-, MS OCB+, neurological symptoms OCB+, MS, high IgG-index OCB+, MS, low IgG-index OCB+, MS with Tysabri treatm. 23 KFLC

24 Prospektiv studie Sedan augusti 2017 beställer neurologkliniken KFLC IF på patienter med misstänkt neuroinflammation. Resultaten ska sammanställas senare i vår. 24 KFLC